大肠杆菌的基因型 Takara公司
大肠杆菌DH5a使用说明
E.coli Competent CellsDH5α使 用 说 明 书Takara Code : D9057A 包 装 量 Competent Cells DH5α 100 μl × 10 支 Control DNA （pUC19，0.1 ng/μl ） 10 μl × 1 支 保 存 : -80℃ 制品说明 感受态细胞（Competent Cells ）是一种具有摄入外源DNA 能力的受容菌，它可以摄取外源的质粒DNA 等。
在进行基因重组实验时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。
在制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因含量十分低的情况时，使用高效的感受态细胞显得十分重要。
Takara 公司在Hanahan 方法的基础上进行了改良，制备出了高效的感受态细胞（都为EK1系列的宿主大肠杆菌）。
Genotype F -,φ80d lac Z △M15, △(lacZYA-argF )U169, deoR , recA 1, endA 1, hsdR 17(r k -,m k + ), phoA , supE 44, λ-, thi -1, gyrA 96, relA 1 细胞种类 α-互补性选择宿主 E.coli DH5α E.coli DH5α在使用pUC 系列质粒载体进行DNA 转化时，由于载体DNA 产生的LacZ α多肽和DH5α编码的lacZ △M15相结合，从而显示β-半乳糖苷酶活性（α-互补性）。
利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。
DH5α可以用于制作基因库、进行亚克隆等，由于DH5α具有decR 变异，可以作为较大质粒的宿主菌使用。
细胞浓度 : 1～2×109 Bacteria/ml 质量标准 1. 使用1 ng 的质粒DNA 进行转化时： 100 μl Competent Cells DH5α/1 ng pUC19 Plasmid 进行转化时产生的菌落＞1×108 transformants/1 μg pUC19 Plasmid 2. β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认 对E.coli Competent Cells DH5α使用pUC19 DNA 进行转化后，在含有100 μg/ml 的Ampicillin 、40 μg/ml 的X-Gal 的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。
常用大肠杆菌 (K-12株来源) 的基因型
supE44,hsdR17,recA1,endA1,gyrA96,thi-1,relA1
DH5α
supE44, ΔlacU169 (φ80lacZΔM15), hsdR17,recA1,endA1,gyrA96,thi-1,relA1
DP50supF
supE44,supF58,hsdS3 (rB-mB-) ,dapD8,lacY1,glnV44, Δ (gal-uvrB) 47,tyrT58,gyrA29,tonA53, Δ (thyA57)
常用大肠杆菌(K-12株来源)的基因型
Strain
Genotype
BB4
supF58,supE44,hsdR514,galK2,galT22 ,trpR55,metB1,tonA, ΔlacU169/F' [proAB+,lac Iq,lacZΔM15 Tn10(tetr) ]
BL21(DE3)
F-,ompT,hsdSB(rB-mB-) , gal (λc I857,ind1,Sam7,nin5,lacUV5-T7gene1) ,dcm(DE3)（B株来源）
K803
F-,lacY1 or Δ (lac Iq-Y) 6 (lac-3) ,supE44,galK2,galT22,mcrA, rfbD,metB1,mcrB1,hsdR3
LE392
supE44,supF58,hsdR514,galK2,galT22,metB1,trpR55,lacY1
MC1061
hsdR, mcrB,araD139, Δ (araABCห้องสมุดไป่ตู้leu) 7679, ΔlacX74,galU, galK, rpsL, thi
MV1184
TAKARA实验室常规试剂配制方法
TAKARA实验室常规试剂配制方法TAKARA实验室是一家提供生命科学研究和临床诊断解决方案的公司。
其产品线包括分子生物学试剂、细胞培养耗材、蛋白质研究试剂和临床诊断试剂等。
在TAKARA实验室产品的使用过程中，常规试剂的配制方法是非常重要的一部分。
本文将介绍一些TAKARA实验室常规试剂的配制方法。
1. Tris缓冲液的配制方法Tris缓冲液可用于蛋白质电泳，DNA和RNA电泳等实验中。
配制方法如下：1）将Tris酸粉末称取至容器中。
2）加入蒸馏水溶解，并调节pH至所需值（一般为8.0）。
3）使用0.22μm的滤器进行过滤。
2.PBS缓冲液的配制方法PBS缓冲液是一种常用的生理盐水缓冲液，在细胞培养和免疫染色实验中经常使用。
配制方法如下：1）将NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4按指定比例称取至容器中。
2）加入蒸馏水溶解，并调节pH至所需值（一般为7.4）。
3）使用0.22μm的滤器进行过滤。
3.LB培养基的配制方法LB培养基是一种常用的大肠杆菌培养基，在分子生物学实验中经常使用。
配制方法如下：1）将Tryptone、Yeast Extract和NaCl按指定比例称取至容器中。
2）加入蒸馏水溶解，并使用自动调pH仪调节pH至所需值（一般为7.0）。
3）将容器密封，并在121℃高压灭菌器中高压灭菌15-20分钟。
4. RNase-Free水的制备方法RNase-Free水在RNA实验中非常重要，保证实验的可靠性和准确性。
制备方法如下：1）将蒸馏水倒入洁净的玻璃烧杯中。
2）放入微波炉中加热，每隔一段时间取出搅拌一次，直至水沸腾。
3）冷却后，使用0.22μm的滤器进行过滤。
4）将过滤后的水贮存在RNase-Free的容器中。
5.甲醛溶液的配制方法甲醛溶液可用于细胞固定和染色实验。
配制方法如下：1）将甲醛溶液称取至容器中。
2）加入蒸馏水溶解，使浓度达到所需值（一般为4%）。
3）使用0.22μm的滤器进行过滤。
大肠杆菌基因组DNA的提取方式
大肠杆菌基因组DNA的提取方式一、传统法提取大肠杆菌基因组DNA。
1、实验原理提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠（SDS）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
SDS的作用机理是由于其能结合蛋白，中和蛋白的电性，使蛋白质的非共价键受到破坏，失去二级结构，从而变形失活，蛋白酶K或链霉蛋白酶E均为光谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在的情况下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可通过失活蛋白破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白和DNA分离；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。
用酚、酚/氯仿抽提除去蛋白质，最后用无水乙醇沉淀DNA。
为获得高纯度DNA，操作过程中常加入RNaseA除去RNA。
CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定的程度（0.3mol/LNaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖物质分开。
最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。
2、实验试剂与仪器1）实验材料：大肠杆菌2）实验试剂：LB液体培养基，TE溶液，10%SDS，蛋白酶K，5mol/LNaCl，CTAB/NaCl 溶液，酚/氯仿/异戊醇，异丙醇，70%乙醇3）实验仪器：恒温摇床、低温离心机、微量移液器、水浴锅3、溶液配制1）LB液体培养基：细菌培养用胶化蛋白胨10g/L，细菌培养用酵母提取物5g/L，NaCl10g/L，去离子水。
(搅拌溶解后，用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容100ml，用20/50ml摇瓶分装5瓶，包扎好，在121℃，1.034×105pa高压下蒸汽灭菌20min.)2）TE缓冲液：1MTris溶液（取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解）1Mtris-HClpH8.0溶液（取1MTris溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0（需浓盐酸约8.5ml），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用）TE缓冲液（10mMTris-HCl1MmEDTApH=8.0，1MTris-HClBufferPH=8.05ml0.5MEDTAPH=8.01ml向烧杯中加入约400mlddH2O均匀混合;将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌，室温保存）3）蛋白酶K：（20mg蛋白酶K溶于1ml无菌双蒸水，-20℃备用）4）CTAB/NaCl溶液：（5%w/v，5gCTAB溶于100ml0.5MNaCl溶液中，需加热到65℃使之溶解，然后室温保存）4、实验方法步骤1、将大肠杆菌接种到灭菌好的LB培养基中，一级培养过夜，以10%的接种量进行二级培养，培养至对数期（4-6h）。
大肠杆菌特殊基因型
大肠杆菌特殊基因型
hsdR 有利于非甲基化DNA（如PCR扩增产物）的有效转化。
mcrA 有利于甲基化DNA（如基因组）的有效转化。
acZΔM15 用于蓝白斑筛选。
endA1 无Endonuclease I 酶活性，有利于质粒的纯化。
recA1 减少克隆DNA的非特异性重组。
DE3 编码T7 RNA聚合酶，用于诱导T7-启动的表达系统的表达。
DeoR 可以高效吸收大片段DNA，有利于文库的构建。
Tn10 含有四环素抗性的转座子。
OmpT 表明大肠杆菌缺乏外膜蛋白酶。
缺乏外膜蛋白酶的菌株可以降低表达的外源蛋白在细菌中被降解的程度，有利于获得完整的重组蛋白。
PLys 含编码T7溶菌酶的质粒；通过抑制T7 RNA聚合酶基础表达水平来降低T7启动的表达体系的基础表达水平。
ArgF 由于突变细菌不能利用arginine。
F’一个低拷贝可移动的质粒，当被M13噬菌体侵染时，可产生单链DNA。
LacI 编码lac抑制子，用于蓝白斑筛选时需加入IPTG，才可启动表达β-gal。
dam/dcm 消除了内源腺苷和鸟苷的甲基化。
在此种细菌中繁殖的DNA不被甲基化。
大肠杆菌的基因型-概述说明以及解释
大肠杆菌的基因型-概述说明以及解释1.引言1.1 概述大肠杆菌是一种常见的革兰氏阴性杆菌，属于肠道菌群中的重要成员。
它在自然界和人体内广泛存在，并且具有广泛的基因型多样性。
这使得大肠杆菌成为了微生物遗传学和进化生物学领域的研究模型。
在大肠杆菌中，基因型是指该菌株拥有的基因组合和基因的分布情况。
大肠杆菌的基因型可以通过不同的方法进行分类和鉴定。
目前主要的分类方法包括单核苷酸多态性分析、基因片段分析和全基因组测序等。
通过这些方法，我们可以更全面地了解大肠杆菌的基因型组成和种群结构。
大肠杆菌的基因型在其功能和特点方面具有重要意义。
大肠杆菌是一种典型的益生菌，它在人体内具有多种有益作用，包括帮助消化吸收、维持肠道稳定性和参与免疫调节等。
不同基因型的大肠杆菌可能具有不同的功能特点，比如某些基因型可能携带耐药基因或致病因子，导致感染和疾病的发生。
因此，对大肠杆菌基因型的研究有助于我们深入了解其功能机制和生态适应能力。
总之，大肠杆菌作为一种常见的菌株，其基因型具有多样性和重要性。
通过研究大肠杆菌的基因型，我们可以深入探索其功能特点和生态适应能力，进一步促进微生物遗传学和进化生物学的研究。
未来，我们可以通过结合多样的研究方法和技术，进一步挖掘和解析大肠杆菌基因型的奥秘，并探索其在人体健康和疾病中的作用。
文章结构是指文章部分之间的逻辑关系和组织，它有助于读者理解文章的内容和思路。
本文的结构如下：1. 引言1.1 概述1.2 文章结构1.3 目的2. 正文2.1 大肠杆菌的基因型分类2.2 大肠杆菌基因型的功能和特点3. 结论3.1 大肠杆菌基因型的重要性3.2 未来研究的方向文章结构部分是为了描述本文的组织结构，它有助于读者了解文章的内容安排和逻辑关系。
在本文中，我们首先介绍引言部分，包括概述、文章结构和目的。
在概述中，我们简要介绍了大肠杆菌的基因型。
在文章结构中，我们明确了本文的结构和章节安排，帮助读者理解文章的整体框架。
常见大肠杆菌菌株的基因型
常见大肠杆菌菌株的基因型1：DH5a菌株常用于质粒克隆的菌株。
使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk )，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB ，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU ，galK ，rps，(Strr) endA1，nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-17：Top10F'菌株带lacIq，需加IPTG诱导表达克隆于lac启动子后的外源基因，用于蓝白斑筛选时，需加入IPTG和X-Gal。
大肠杆菌克隆菌株TOP10和DH5α的比较
大肠杆菌克隆菌株TOP10和DH5α的比较大肠杆菌克隆菌株是一种经过基因工程改造的细菌，可以用于转化和扩增外源DNA，如质粒、文库或表达载体。
不同的克隆菌株具有不同的特性，如转化效率、抗性、突变、表达水平等。
本文将比较两种常见的大肠杆菌克隆菌株：TOP10和DH5α，分析它们的优缺点和价格。
TOP10的优缺点TOP10是一种来源于大肠杆菌K12的菌株，具有mcr/mrr突变，可以克隆甲基化的DNA，如真核基因组DNA。
它的基因型如下：•Top10：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupGTOP10的优点主要有以下几个方面：•高转化效率：TOP10具有高达10^9 cfu/µg DNA的转化效率，这意味着它可以获得更多的重组菌株，提高克隆的成功率。
•低突变率：TOP10具有recA1突变，可以抑制同源重组，保持质粒的序列完整性。
•高稳定性：TOP10具有endA1突变，可以阻断内切核酸酶的表达，减少质粒DNA的降解。
它还可以在不含抗生素的培养基中维持质粒的复制。
•广泛的耐药性：TOP10具有多种抗性基因，如rpsL (StrR)、nupG等，可以使用多种抗生素进行筛选。
•高数据一致性：TOP10具有高度的基因组稳定性和质粒保留性，可以保证实验的可重复性和可靠性。
TOP10的缺点主要有以下几个方面：•高成本：TOP10的价格相对较高，可能超出一些实验室的预算。
•低表达水平：TOP10不适合用于蛋白表达，因为它缺乏一些必要的表达因子，如DE3溶原菌、T7 RNA聚合酶等。
•低兼容性：TOP10不适合用于一些特殊的载体，如含有重复序列的慢病毒载体和其它逆转录病毒载体，因为它可能会发生质粒的重组或缺失。
DH5α的优缺点DH5α是一种由Messing在1975年从大肠杆菌K12菌株中构建而成的菌株，具有mcr/mrr突变，可以克隆甲基化的DNA，如真核基因组DNA。
大肠杆菌基因型及遗传符号说明
大肠杆菌基因型及遗传符号说明前言：实验室的一般大肠杆菌拥有4288条基因，每条基因的长度约为950bp，基因间的平均间隔为118bp（基因Ⅷ）。
E.coli基因组中还包含有许多插入序列，如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的，由此表明了基因组具有它的可塑造性。
利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基因发生突变或缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型(Phenotype)，把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型（Genotype）。
具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。
分子克隆中常用的大肠杆菌及其遗传标记按Demerec等1966年提出的命名原则，采用的菌株所有的基因都假定处于野生型状态，除非在基因型上另外注明。
大肠杆菌基因型的表示方法（Demerec, et, al. 1966）：一、一般规则：1、根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成3个小写斜体字母来表示。
例如：DNA Adenine Methylase→dam。
2、不同的基因座，其中任何一个突变所产生的表型变化可能相同，其表示方法是在3个小写斜体字母后加上一个斜体大写字母来表示区别。
例如：Recombination→recA、recB、recC。
3、突变位点应通过在突变基因符号后加不同数字表示。
如supE44（sup基因座E的44位突变）。
如果不知道几个等位基因中哪一/几个发生了功能性突变，则用连字符“-”代替大写字母，如trp-31。
4、细菌的基因型中应该包含关于其携带的质粒或附加体的的信息。
这些符号包括菌株携带的质粒或附加体、质粒或附加体上的突变基因座和突变位点。
其基因符号应与基因座的表示符号明显区别，符号的第一个字母大写、不斜体并位于括号内；质粒或附加体上的突变基因座和突变位点的基因符号的表示方法与染色体上突变基因座、突变位点的符号相同。
大肠杆菌遗传物质形态
大肠杆菌遗传物质形态
一、染色体DNA
大肠杆菌的遗传物质主要是由一个大型环状的染色体DNA组成的。
这个染色体DNA包含了细菌的全部基因信息，控制着细菌的生长、繁殖和代谢等生命活动。
二、质粒DNA
除了染色体DNA外，大肠杆菌还含有一些质粒DNA。
质粒是一种独立于细菌染色体之外并能够自主复制的环状DNA分子。
它们通常携带着一些特定的基因，这些基因可以赋予细菌一些特殊的生物学特性，如对抗生素的抗性、代谢特殊底物的能力等。
三、RNA
除了DNA外，大肠杆菌的遗传物质还包括RNA。
RNA是细菌基因表达过程中的重要分子，它们参与了蛋白质的合成和转录后加工等过程。
在大肠杆菌中，RNA主要存在于核糖体中，负责翻译过程，将DNA中的遗传信息转化为蛋白质。
总之，大肠杆菌的遗传物质由染色体DNA、质粒DNA和RNA组成，这些分子共同控制着细菌的生命活动和生物学特性。
大肠杆菌DH5a使用说明
E.coli Competent CellsDH5α使 用 说 明 书Takara Code : D9057A 包 装 量 Competent Cells DH5α 100 μl × 10 支 Control DNA （pUC19，0.1 ng/μl ） 10 μl × 1 支 保 存 : -80℃ 制品说明 感受态细胞（Competent Cells ）是一种具有摄入外源DNA 能力的受容菌，它可以摄取外源的质粒DNA 等。
在进行基因重组实验时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。
在制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因含量十分低的情况时，使用高效的感受态细胞显得十分重要。
Takara 公司在Hanahan 方法的基础上进行了改良，制备出了高效的感受态细胞（都为EK1系列的宿主大肠杆菌）。
Genotype F -,φ80d lac Z △M15, △(lacZYA-argF )U169, deoR , recA 1, endA 1, hsdR 17(r k -,m k + ), phoA , supE 44, λ-, thi -1, gyrA 96, relA 1 细胞种类 α-互补性选择宿主 E.coli DH5α E.coli DH5α在使用pUC 系列质粒载体进行DNA 转化时，由于载体DNA 产生的LacZ α多肽和DH5α编码的lacZ △M15相结合，从而显示β-半乳糖苷酶活性（α-互补性）。
利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。
DH5α可以用于制作基因库、进行亚克隆等，由于DH5α具有decR 变异，可以作为较大质粒的宿主菌使用。
细胞浓度 : 1～2×109 Bacteria/ml 质量标准 1. 使用1 ng 的质粒DNA 进行转化时： 100 μl Competent Cells DH5α/1 ng pUC19 Plasmid 进行转化时产生的菌落＞1×108 transformants/1 μg pUC19 Plasmid 2. β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认 对E.coli Competent Cells DH5α使用pUC19 DNA 进行转化后，在含有100 μg/ml 的Ampicillin 、40 μg/ml 的X-Gal 的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。
Takara 感受态制备试剂盒说明书
TaKaRa Code：D406Competent Cell Preparation Kit次（200量）宝生物工程(大连)有限公司目录内 容 页 码●制品说明 1●制品内容 1●制品保存 1●使用注意 1●感受态细胞的制备方法 1●感受态细胞的DNA转化 2●实验例 2●相关试剂及培养基的制备方法 3■Ampicillin 3■IPTG 3■X-Gal 3■LB培养基 3■LB/Amp培养基 3■SOB培养基 3■SOC培养基 4■φb×broth 4■LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 4●制品说明大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA（Plasmid DNA、Phage DNA等），处于这种状态的细胞称为感受态细胞（Competent Cell）。
在基因工程实验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。
实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种：一种是购买商品化的感受态细胞，但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难（超低温）；另一种是自己制备感受态细胞，实验人员自己制作感受态细胞时，往往受到各种试剂及实验条件等限制，制备的感受态细胞效率低，达不到实验要求。
TaKaRa Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。
使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要，并且适用于几乎所有常用的大肠杆菌，例如：E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71-18mut S等，转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上（转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异）。
使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。
●制品内容（200次量）Solution A 20 mlSolution B 20 ml●制品保存：4℃保存。
●使用注意1.制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。
Takara基因组抽提试剂盒说明书
1% Agarose 凝胶电泳图 M1 ： λ-Hind III digest DNA Marker
1 ： 纯化的基因组 DNA 2 ： PCR 扩增片段（约 1,500 bp） M2 ： DL2,000 DNA Marker
图 2.基因组 DNA 及其 PCR 扩增结果电泳图 -3-
注）请确认 Rinse B 中已经加入了指定体积的 100%乙醇。 15. 重复操作步骤 14，然后从负压装置上取下 Spin Column，将其安置于试剂盒中的 Collection Tube
上。 16. 12, 000 rpm 离心 1 分钟。 17. 将 Spin Column 安置于新的 1.5 ml 的离心管上，在 Spin Column 膜的中央处加入 60 μl 的灭菌
Q1. 基因组 DNA 的收率较低或无基因组 DNA，为什么？ A1. 一般正常情况下，1～4 ml 的过夜培养大肠杆菌中，可以提取约 3 μg 的基因组 DNA。基因组 DNA
收量较低时，可以从以下几个方面考虑： ① DNA 未充分释放。保证在 SP Buffer 中充分悬浮菌体，注意不要残留菌块；加入 Solution A
否则将阻碍 DNA 结合到 DNA 制备膜上。 5. 部分试剂中含刺激性化合物，在步骤 7 以后的操作中请戴上乳胶手套和眼镜，并应尽量在通风橱中
进行。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水冲洗，必要时应寻求医疗咨询。 6. 基因组 DNA 需长期保存时，建议在 Elution Buffer 中保存。
●Q&A
11. 弃 Filter Cup，在滤液中加入 450 μl 的 DB Buffer， 混合均匀。
12. 将试剂盒中的 Spin Column 安置于 Collection Tube 上。
大肠杆菌基因型
大肠杆菌基因型
大肠杆菌的基因型是由其基因决定的，野生的大肠杆菌具有大约4700kbp的DNA分子，大约2800个基因。
这些基因在特定的条件下可能会发生突变或缺失，从而引起大肠杆菌表现型的改变。
通常来说，不同菌株的大肠杆菌会有不同的特性，这是由它们的基因型决定的。
在分子克隆中，为了表示这些不同特性的大肠杆菌，通常会使用一些特定的命名规则或者符号来表示。
例如，根据第一个字母缩写成3个小写斜体字母来表示基因产物或其作用产物的英文名称；不同的基因座，其中任何一个突变所产生的表型变化可能相同，其表示方法是在3个小写斜体字母后加上一个斜体大写字母来表示区别；突变位点应通过在突变基因符号后加不同数字表示，如supE44(sup基因座E的44位突变)。
Takara
DNA芯片制作中心
• 拥有40多位专业技术人员。
• 拥有多台Affymetrix 417 Arrayer 和Generation Ⅲ 点样仪、Affymetrix 428 Scanner扫描仪等仪器。 • 已成功生产了数十种DNA表达谱系列芯片。 • 提供DNA芯片的制作、杂交、分析等
TaKaRa指针：立足科研开发，崇尚 技术创新，追求无限可能！ 我们将努力：为全球生物工程领域的 科研工作者提供最优质的产品和最完 善的服务！
企业生存发展的核心
生产能力 经营理念 改革创新
生产和开发生物工程研究领域 的各种产品。 立足科研开发，崇尚技术创新， 追求无限可能。 改革创新是企业发展、不断进 步的原动力。
核心部门
Manufacturing Center
DNA Chip Center
R&D Center
DNA/RNA Synthesis Center
Gene Analysis Center
制造部门
限制酶制造部门
• 100多种DNA限制性内切酶。
修饰酶制造部门
• 50多种DNA修饰酶。
基因操作试剂盒制造部门
TaKaRa Bio Group 是世界生物工程试剂制品三 大厂商之一，同时还提供DNA/RNA合成、DNA 解析以及各种基因工程受托业务等全方位服务。
大连TaKaRa生产基地
√ 员工500名 √ 占地39,909.67 m2 √ 建筑面积24,207.03 m2
大连TaKaRa公司发展历程
1993.08 1994.10 1997.10 2000.12 2002.08 2005.08 2008.02 取得营业执照（公司成立） 公司一期工程竣工，正式投产 开始中国市场销售业务 公司二期工程竣工，成立基因芯片中心 新购场地约2万平方米 TaKaRa收购美国Clontech公司 三期工程竣工， 扩大生产规模
Takara基因组抽提试剂盒说明书
16. 重复操作步骤 15。 17. 将 Spin Column 安置于 Collection Tube 上，12,000 rpm 离心 1 分钟。 18. 将 Spin Column 安置于新的 1.5 ml 的离心管上，在 Spin Column 膜的中央处加入 60 μl 的灭菌
2. RNase A1 为混浊溶液，首次使用本试剂盒时，请把 RNase A1 溶液全量加入至 SP Buffer 中，均 匀混合后供实验使用。加入 RNase A1 溶液后的 SP Buffer 请于 4℃保存。
3. 准备 65℃水浴。 4. Solution A、Solution B 若出现沉淀，请于 65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 5. Rinse B 在首次使用前，请添加 56 ml 的 100%乙醇。 6. 洗脱结合于 DNA 制备膜上的基因组 DNA 时，把 Elution Buffer 或灭菌蒸馏水加热至 65℃使用将
② 菌体本身富含 DNA 酶活性。可以增加一次 Rinse A 的洗净操作。
Q3. 提取的基因组 DNA 中有 RNA 污染，为什么？ A3. ① 请确认在首次实验前是否把 RNase A1 加入至 SP Buffer 中。
② RNase A1 可能失活。RNase A1 须在-20℃下保存，加入了 RNase A1 的 SP Buffer，请于 4℃下保存。RNase A1 比较稳定，一般不易失活。
Takara+rTaq+聚合酶说明书
TaKaRa TaqTM使 用 说 明 书TaKaRa Code：DR100A●包装量：250 U●制品说明本制品是94 kDa 的耐热性DNA 聚合酶。
是把Thermus aquaticus DNA Polymerase 的基因经过克隆转化到大肠杆菌中进行表达后，分离提取而得到的。
它与天然Taq DNA 聚合酶具有相同的功能。
使用本制品扩增得到的PCR 产物的3′端附有一个“A”碱基，因此可直接克隆于T-Vector 中。
●制品内容TaKaRa Taq （5 U/μl）50 μl10×PCR Buffer（Mg 2+ Plus）1 ml 1） 以λDNA 为模板，可以很好地扩增8 kbp 的DNA 片段。
6×Loading Buffer*1 ml* ① 电泳时，请按每5 μl PCR 反应液中加入1 μl 本制品的比例添加混合后进行电泳。
② 6×Loading Buffer 详细说明请见TaKaRa 商品目录。
●保 存：-20℃●10×PCR Buffer 的组成10×PCR Buffer（Mg 2+Plus）Tris-HCl（pH8.3） 100 mM KCl 500 mM MgCl 215 mM●活性定义用活性化的大马哈鱼精子DNA 作为模板/引物，在74℃，30分钟内，摄入10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
●纯 度1）10 U 的本酶和0.6 μg 的λ-Hin d III 在74℃下反应1小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。
2）10 U 的本酶和0.6 μg 的SupercoiledpBR322 DNA 在74℃下反应1小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。
3）10 U 的本酶和0.6 μg 的λDNA 在74℃下反应1小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。
●用 途1） PCR 法扩增DNA。
2） DNA 序列测定。
Takara 感受态制备试剂盒说明书
TaKaRa Code：D406Competent Cell Preparation Kit次（200量）宝生物工程(大连)有限公司目录内 容 页 码●制品说明 1●制品内容 1●制品保存 1●使用注意 1●感受态细胞的制备方法 1●感受态细胞的DNA转化 2●实验例 2●相关试剂及培养基的制备方法 3■Ampicillin 3■IPTG 3■X-Gal 3■LB培养基 3■LB/Amp培养基 3■SOB培养基 3■SOC培养基 4■φb×broth 4■LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 4●制品说明大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA（Plasmid DNA、Phage DNA等），处于这种状态的细胞称为感受态细胞（Competent Cell）。
在基因工程实验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。
实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种：一种是购买商品化的感受态细胞，但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难（超低温）；另一种是自己制备感受态细胞，实验人员自己制作感受态细胞时，往往受到各种试剂及实验条件等限制，制备的感受态细胞效率低，达不到实验要求。
TaKaRa Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。
使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要，并且适用于几乎所有常用的大肠杆菌，例如：E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71-18mut S等，转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上（转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异）。
使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。
●制品内容（200次量）Solution A 20 mlSolution B 20 ml●制品保存：4℃保存。
●使用注意1.制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。
TaKaRa LA Taq with GC Buffer 说明书
TaKaRa LA Taq ® with GC Buffer使 用 说 明 书TaKaRa Code：DRR20AG●包装量：125 U●制品说明本制品是应用LA PCR 原理研制的具有3′→5′Exonuclease 活性（Proof reading 活性）的耐热性DNA 聚合酶。
无论是扩增短链DNA 还是长链DNA，其效率都优于其它同类产品，尤其在扩增大于10 kbp 的DNA 片段方面，其优势更加明显，而且保真性能强。
当扩增具有复杂的二级结构（GC rich 等）的模板或具有重复序列的模板时，使用GC Buffer 进行PCR 扩增将非常有效。
使用本制品扩增得到的PCR 产物3′端附有一个“A”碱基，因此可直接克隆于T-Vector 中。
●制品内容TaKaRa LA Taq （5 U/μl）25 μl2×GC Buffer I（5 mM Mg 2+ Plus）*1 1.25 ml1） 以λDNA 为模板，可以很好地扩增35 kbp 的DNA 片段（使用2×GC Buffer I）。
2×GC Buffer II（5 mM Mg 2+ Plus）*1 1.25 ml 6×Loading Buffer*21 ml*1 请先使用Buffer I，当使用Buffer I 不能扩增时，再试用Buffer II。
*2 ① 电泳时，请按每5 μl PCR 反应液中加入1 μl 本制品的比例添加混合后进行电泳。
② 6×Loading Buffer 详细说明请见TaKaRa 商品目录。
●保 存：-20℃●活性定义用活性化的大马哈鱼精子DNA 作为模板/引物，在74℃，30分钟内，摄入10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
●纯 度1）10 U 的本酶和0.6 μg 的λ-Hin d III 在74℃下反应1小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。
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