企业诊断-感染性疾病病原体快速诊断 精品
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
和蛋白的复合物，细菌 死亡或自溶后释放
▪进入机体将会出现发 热、血压降低、寒颤、 引起DIC、内毒素败血 症等一系列临床反应。
Wenen LIU
26
Wenen LIU
27
细菌内毒素检测
动态浊度法
原理：仪器检测试管内反应物的光密度OD值，取当OD 上升到0.02的点的时间作为反应时间，该点在反应曲线 上的位置为浊度开始快速变化的时期，该取值能够快速、 稳定的获得反应时间，从而判断内毒素的含量
13
PCT动力学
Wenen LIU
▪ 2-3h开始增加； 6-8h快速升高；
▪ 12h-48到达峰值； 2-3d 正常
▪ 血浆浓度在＜ 0.05ng/ml1000ng/ml
▪ 半衰为15-20h左 右,且不受肾功能 影响
14
PCT检测方法
➢快速半定量法（PCT-Q） ➢全自动快速定量法（VIDAS)
因为上述感染治疗方法不同
Wenen LIU
5
感染标志物
细菌感染标志物
▪ 白细胞计数与分类 ▪ 血沉 ▪ C-反应蛋白（CRP） ▪ 白介素-6 ▪ 降钙素元 ▪ 内毒素 真菌感染标志物:G试验、GM试验 结核感染证据：夹层杯、T-SPOT
Wenen LIU
6
内容提要
1 临床常见细菌感染快速诊断技术 2 结核分枝杆菌的快速诊断技术 3 临床常见真菌的快速诊断技术
➢ 样本：200µl血清/血浆 ➢ 结果：30min
合物呈红色带，颜色深浅与样品中 的PCT浓度成正比例，未结合的示 踪物扩散到对照区，结合并产生了
红色的对照带。
Wenen LIU
16
全自动快速定量法
▪ 仪器：法国梅里埃公司VIDAS
全自动酶联荧光分析仪及配套 试剂
▪ 标本要求：静脉抗凝血
▪ 注意无菌操作，使用新鲜标本， 如果4小时内不使用，应将标
▪ PCT含量的变化稳定，并出现在疾病的 早期（3-4h）。短半衰期(24h)
▪ 国外把 PCT作为最敏感的感染标志。
▪ 正常血清水平:10W0en-en1L5IU0pg/ml
9
降钙素原 PCT : 分子结构
血清降钙素(CT)的前 肽物质
分子量：14.5 kDa 由116个氨基酸组成
的糖蛋白质 无激素活性
▪ 慢性疾病长期卧床、免疫力低下患者
▪ 急诊及ICU病房收治W的enen生LIU 命体征不稳定的患 32
分子诊断技术检测致病 菌
PCR技术扩增16srRNA基因鉴定常见致病菌
PCR扩增耐药 基因特异性基因 革兰阳性球菌
革兰阴性杆菌
碳青霉烯 mecA基因 VanA/VanB基因 PBP2b基因 ESBLs基因 AmpC基因 酶基因
AB-antibiotics
F. Stüber, University Bonn, Lecture at ISICEM, Brussels 2001
Wenen LIU
20
抗生素有效管理
PCT浓度（ng/ml）临床意义
＜0.05
无细菌感染
0.05-0.1
非细菌感染
0.1-0.25 0.25-0.5
可能是局部细菌感染，不建议使用 抗生素，6-24小时内复查
危重病人：临床表现、WBC+DC 不典型
Wenen LIU
3
感染的分类
按病原学分类
1. 细菌感染（包括结核） 2. 真菌感染 3. 病毒感染 4. 支原体、衣原体 按部位分类
1. 局部感染 2. 全身感染
Wenen LIU
4
临床希望第一时间知道的信 息
▪ 感染或非感染 ▪ 细菌感染或非细菌感染 ▪ 是结核感染或普通细菌感染 ▪ 酵母样真菌感染或丝状真菌感染 ▪ 白色假丝酵母或其他念珠菌感染 ▪ 曲菌感染或毛霉菌感染
严重细菌感染或脓毒症的检 测（鉴别诊断） 疾病或治疗反应的监测
局部与全身性感染 脓毒症的诊断和监测 新生儿脓毒症的检测
Wenen LIU
22
PCT水平增加但没有系统细菌感染的几种 情况
▪< 48hr的新生儿 -> 生理性一过性峰值
▪创伤后炎症综合症: 多发性创伤, 大面积 烧伤, 大手术后 (心脏, 移植, 腹部)
Wenen LIU
7
临床常见细菌感染快速诊断 技术
降钙素原检测 内毒素检测
分子诊断
Wenen LIU
8
降钙素原(Procalcitonin PCT)
▪ 降钙素原是正常人血清中存在的含116个
氨基酸组成的糖蛋白，最初由甲状腺细 胞产生，血清水平很低。
▪ 在非感染或病毒性感染疾病时保持非常 低的血清水平，在细菌性感染时含量升 高，并与感染程度和预后呈正相关。
Wenen LIU
28
仪器和试剂
▪ BET-24A细菌内 毒素分析仪
▪ MB-80微生物快 速动态监测系统
Wenen LIU
29
标本要求
患者早上尚未进行药物静脉治疗时:
▪ MB-80：“无热源真空采血管”,静脉抗凝血 ， 采血量2-4ml ，30min内送检
▪ BET-24A：抽取1mL静脉抗凝血，配1mL1号处 理液
mecA：耐甲氧西林葡萄球菌属（MRS）特异性基因 Van A VanB ：耐万古霉素肠球菌（VRA）特异性基因 PBP2b ：青霉素不敏感肺炎链球菌（pNSSp）特异性基因 ESBLs基因：主要包括TEM、SHV、CTX-M、OXA AmpC基因包括质粒介导型和染色体诱导型。其中前者主要包括MOX、 CMY、DHA、ACC、ACT、FOX等亚型，后者主要包括： ADC。 碳青霉烯酶基因：A类酶，以KPC为代表；金属酶，以IMP、VIM、 NDM为代表；D类酶，以OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-48为主。
Wenen LIU
wenku.baidu.com15
快速半定量法（PCT-Q）
同胶体金免疫层析法，即在标准品 上结合有胶体金的小鼠单克隆抗降 钙素抗体和绵羊多克隆抗降钙素抗 体，待检标本加上后，示踪元素即 与标本中的PCT结合，形成一个 “三明治式”的复合物，然后通过 发光比色判断PCT浓度
当PCT浓度≥0.5μg/ml时，夹心复
Linscheid P, et al Crit Care Med 04; 32: 1715-21
WEnednoecnriLnoIUlogy 03; 144: 5578-84 & 05; 146: 2699-708
11
细菌感染后PCT快速升高
Kinetics of procalcitonin in iatrogenic sepsis Brunkhorst F.M et al, Intens Care Med 1998,24:888-892
Wenen LIU
24
对PCT检测的影响
➢受以下因素影响
* 甲状腺功能
是功能性甲状腺髓样癌的肿瘤标志物
* 肾功能
严重肾功能受损者中水平较高
➢不受以下因素影响
* 类固醇药物
* 自身免疫性疾病
* 年龄、性別
* 免疫功能低下状态:肝硬化、HIV感染
Wenen LIU
25
细菌内毒素
▪革兰氏阴性菌细胞壁 上的一种脂多糖（LPS）
局部细菌感染，建议使用抗生素
0.5-2.0 2.0-10.0 ＞10.0
严重细菌感染、脓毒症 重症脓毒症 重度脓毒症、脓毒性休克或MODS
Wenen LIU
21
PCT的临床应用
▪ 急诊 ▪ 住院病房 ▪ 外科手术 ▪ 血液科 ▪ 内科ICU ▪ 外科ICU
▪ 儿科急诊 ▪ 儿科病房 ▪ 儿科ICU ▪ 新生儿科
11号染色体上
的单拷贝基因
转录
降钙素原前体内源多肽酶
甲状腺滤泡细胞
降钙素原 PCT
正常We情nen况LIU下
分解
降
细胞内特殊 钙
蛋白酶
素
10
Bacterial Infection (e.g.Endotoxin)
IL-6
在病毒感染时，大量产生 的IFN-，将会抑制PCT的 激活及产生.因此，病毒感 染时，PCT的浓度将会保 持在较低的水平
结核感染T细胞检测技术
分子生物学技术
Wenen LIU
39
结核夹层杯技术
▪ 原理：通过专用消化灭活液消化组织细胞 和粘蛋白等，将结核杆菌裸露出来，并结 合高速震荡，使痰标本充分液化而有利于 其中的抗酸杆菌沉淀于特制彭氏杯底部的 菌膜上，在夹层杯中直接抗酸染色、干燥， 并用取片针顶出内底，经封片等步骤后， 镜下检测抗酸杆菌。
▪使用致炎细胞因子治疗后 (OKT3, 注射 TNFα, IL-2, 抗淋巴细胞球蛋白)
▪某些肿瘤 (甲状腺髓样细胞癌, 肺小细胞 癌和支气管癌)
▪长时间循环衰竭 (心源性休克, 出血性休
克, 热休克)
Wenen LIU
23
细菌感染而PCT不升高的情况
▪感染早期 (-> 6-12 小时后重复检测!) ▪亚急性心内膜炎 ▪局部感染
感染性疾病病原体快速诊断
概述
感染性疾病：由某种病原体所致，通过不同方 式引起人体发生感染并出现临床症状的疾病, 主要表现为发热。
病原体：细菌（含TB）、支原体、衣原体
病毒
真菌
原虫等
Wenen LIU
2
感染的诊断依据
▪ 临床表现：感染的全身中毒症状： 畏寒、发热、皮疹等
▪ 实验室常规检查：血常规：WBC、DC ▪ 影像学检查：X-RAY、B超 ▪ 病原学检查：染色、培养 ▪ 血清学检查：抗原或抗体检测
▪ 抗酸染色法是检测TB的传统方法，但存在
假阳性
Wenen LIU
35
结核感染现状
全球范围内结核病疫情急剧恶化
▪ 结核病与艾滋病同时流行
▪ 结核菌耐药现象益发严重
▪ 人口大规模流动
我国是世界上仅低于印度的第二结核病大国
▪ 结核菌感染率44.5%
▪ 新发活动性结核患者130万/年
▪ 死亡13万/年
早期快速诊断与治疗成为制约结核病控制的
本放置-20℃保存。
▪ 血浆中的PCT非常稳定，收集
标本24h后，PCT浓度在室温
下大约下降12％，在4℃W大ene约n LIU
17
PCT用于细菌感染和脓毒症诊断是一种 非常有价值的标志物
细菌感染/脓毒症诊断及严重程度判断 脓毒症治疗效果监测及预后评估 抗生素的有效管理
Wenen LIU
18
细菌感染诊断及严重程度判断
PCT的浓度随感 染的扩散和感 染严重程度的 加重而升高 脓毒性休克 严重脓毒症
系统性感染(脓毒症) 局部感染 正常值
Wenen LIU
19
脓毒症患者治疗效果及预后 监测
通过PCT不断在体内衰减，反映出抗生素治疗策略的成功
(n=109)
随着患者对抗生素治 疗的响应，引起了 PCT血中浓度水平的 典型变化过程
Wenen LIU
40
检测流程示意图
Wenen LIU
41
镜下比较
图1. 直接涂片法（传统方法）： 菌量少，背景不清晰
图2. 夹层杯法（新方 法）：
菌量多，背景清晰，易 于观察
Wenen LIU
42
夹层杯诊断技术的优点
夹层杯诊断 技术的优点
阳性率高 背景清晰，易于观察
易于标准化 检测速度快 生物安全性好
Wenen LIU
12
PCT来源
Wenen LIU
Left Lane:正常组, 在不 存在感染的情况下，甲 状腺外CALCI表达被抑 制，而主要局限于甲状 腺和肺的神经内分泌细 胞有一定程度的表达
Right Lane: 脓毒症组,
在细菌感染时可诱导全
身各种组织多种类型细
胞CALCI表达和PCT连
续性释放
Wenen LIU
43
结核夹层杯技术
标本要求： （1）痰液要求新鲜，留取清晨深咳出的第一口
痰液，留痰时，患者以清水漱口３次，然后 用力咳出气管深处的痰 （2）用氢氧化钠处理完全。
临床应用：用于结核分枝杆菌的初筛
Wenen LIU
44
结核感染T细胞检测技 术
▪ 是以ELISPOT技术 检测结核感染的新
Wenen LIU
33
16S rRNA具有多拷贝多信息的特点
Wenen LIU
34
结核分枝杆菌的快速诊 断
▪ 是引起结核病的病原菌。它可侵犯全身各 器官，但以肺结核为最多见。
▪ 结核病至今仍为重要的传染病。估计世界 人口中1/3感染结核分枝杆菌。
▪ 结核分枝杆菌生长缓慢，一般需2-4周长成 肉眼可见的落菌。
关键
Wenen LIU
36
全球结核疫情
Wenen LIU
37
结核检测方法
一、现有实验室常规检测技术 细菌学诊断 ─ 涂片、培养 免疫学诊断 ─ 抗原、抗体胶体金 分子生物学诊断 ─ PCR 二、其它检测技术 PPD（TST）实验 影像学检查
Wenen LIU
38
结核分枝杆菌的快速诊断
结核夹层杯技术
▪ 其它体液如脑脊液﹑胸腹水与血标本要求相 同。
Wenen LIU
30
内毒素活性定量检测意义
▪ G-所致脓毒症早期鉴别诊断
▪ 指导抗生素正确使用
▪ 判定抗感染治疗效果
▪ 帮助判断患者的预后
Wenen LIU
31
内毒素定量检测的适应 症
▪ 各种急、慢性病理性发热患者
▪ 各种类型“中重度感染、肝病、休克、肠 道疾病、脏器功能衰竭、大手术术后”患 者
▪进入机体将会出现发 热、血压降低、寒颤、 引起DIC、内毒素败血 症等一系列临床反应。
Wenen LIU
26
Wenen LIU
27
细菌内毒素检测
动态浊度法
原理：仪器检测试管内反应物的光密度OD值，取当OD 上升到0.02的点的时间作为反应时间，该点在反应曲线 上的位置为浊度开始快速变化的时期，该取值能够快速、 稳定的获得反应时间，从而判断内毒素的含量
13
PCT动力学
Wenen LIU
▪ 2-3h开始增加； 6-8h快速升高；
▪ 12h-48到达峰值； 2-3d 正常
▪ 血浆浓度在＜ 0.05ng/ml1000ng/ml
▪ 半衰为15-20h左 右,且不受肾功能 影响
14
PCT检测方法
➢快速半定量法（PCT-Q） ➢全自动快速定量法（VIDAS)
因为上述感染治疗方法不同
Wenen LIU
5
感染标志物
细菌感染标志物
▪ 白细胞计数与分类 ▪ 血沉 ▪ C-反应蛋白（CRP） ▪ 白介素-6 ▪ 降钙素元 ▪ 内毒素 真菌感染标志物:G试验、GM试验 结核感染证据：夹层杯、T-SPOT
Wenen LIU
6
内容提要
1 临床常见细菌感染快速诊断技术 2 结核分枝杆菌的快速诊断技术 3 临床常见真菌的快速诊断技术
➢ 样本：200µl血清/血浆 ➢ 结果：30min
合物呈红色带，颜色深浅与样品中 的PCT浓度成正比例，未结合的示 踪物扩散到对照区，结合并产生了
红色的对照带。
Wenen LIU
16
全自动快速定量法
▪ 仪器：法国梅里埃公司VIDAS
全自动酶联荧光分析仪及配套 试剂
▪ 标本要求：静脉抗凝血
▪ 注意无菌操作，使用新鲜标本， 如果4小时内不使用，应将标
▪ PCT含量的变化稳定，并出现在疾病的 早期（3-4h）。短半衰期(24h)
▪ 国外把 PCT作为最敏感的感染标志。
▪ 正常血清水平:10W0en-en1L5IU0pg/ml
9
降钙素原 PCT : 分子结构
血清降钙素(CT)的前 肽物质
分子量：14.5 kDa 由116个氨基酸组成
的糖蛋白质 无激素活性
▪ 慢性疾病长期卧床、免疫力低下患者
▪ 急诊及ICU病房收治W的enen生LIU 命体征不稳定的患 32
分子诊断技术检测致病 菌
PCR技术扩增16srRNA基因鉴定常见致病菌
PCR扩增耐药 基因特异性基因 革兰阳性球菌
革兰阴性杆菌
碳青霉烯 mecA基因 VanA/VanB基因 PBP2b基因 ESBLs基因 AmpC基因 酶基因
AB-antibiotics
F. Stüber, University Bonn, Lecture at ISICEM, Brussels 2001
Wenen LIU
20
抗生素有效管理
PCT浓度（ng/ml）临床意义
＜0.05
无细菌感染
0.05-0.1
非细菌感染
0.1-0.25 0.25-0.5
可能是局部细菌感染，不建议使用 抗生素，6-24小时内复查
危重病人：临床表现、WBC+DC 不典型
Wenen LIU
3
感染的分类
按病原学分类
1. 细菌感染（包括结核） 2. 真菌感染 3. 病毒感染 4. 支原体、衣原体 按部位分类
1. 局部感染 2. 全身感染
Wenen LIU
4
临床希望第一时间知道的信 息
▪ 感染或非感染 ▪ 细菌感染或非细菌感染 ▪ 是结核感染或普通细菌感染 ▪ 酵母样真菌感染或丝状真菌感染 ▪ 白色假丝酵母或其他念珠菌感染 ▪ 曲菌感染或毛霉菌感染
严重细菌感染或脓毒症的检 测（鉴别诊断） 疾病或治疗反应的监测
局部与全身性感染 脓毒症的诊断和监测 新生儿脓毒症的检测
Wenen LIU
22
PCT水平增加但没有系统细菌感染的几种 情况
▪< 48hr的新生儿 -> 生理性一过性峰值
▪创伤后炎症综合症: 多发性创伤, 大面积 烧伤, 大手术后 (心脏, 移植, 腹部)
Wenen LIU
7
临床常见细菌感染快速诊断 技术
降钙素原检测 内毒素检测
分子诊断
Wenen LIU
8
降钙素原(Procalcitonin PCT)
▪ 降钙素原是正常人血清中存在的含116个
氨基酸组成的糖蛋白，最初由甲状腺细 胞产生，血清水平很低。
▪ 在非感染或病毒性感染疾病时保持非常 低的血清水平，在细菌性感染时含量升 高，并与感染程度和预后呈正相关。
Wenen LIU
28
仪器和试剂
▪ BET-24A细菌内 毒素分析仪
▪ MB-80微生物快 速动态监测系统
Wenen LIU
29
标本要求
患者早上尚未进行药物静脉治疗时:
▪ MB-80：“无热源真空采血管”,静脉抗凝血 ， 采血量2-4ml ，30min内送检
▪ BET-24A：抽取1mL静脉抗凝血，配1mL1号处 理液
mecA：耐甲氧西林葡萄球菌属（MRS）特异性基因 Van A VanB ：耐万古霉素肠球菌（VRA）特异性基因 PBP2b ：青霉素不敏感肺炎链球菌（pNSSp）特异性基因 ESBLs基因：主要包括TEM、SHV、CTX-M、OXA AmpC基因包括质粒介导型和染色体诱导型。其中前者主要包括MOX、 CMY、DHA、ACC、ACT、FOX等亚型，后者主要包括： ADC。 碳青霉烯酶基因：A类酶，以KPC为代表；金属酶，以IMP、VIM、 NDM为代表；D类酶，以OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-48为主。
Wenen LIU
wenku.baidu.com15
快速半定量法（PCT-Q）
同胶体金免疫层析法，即在标准品 上结合有胶体金的小鼠单克隆抗降 钙素抗体和绵羊多克隆抗降钙素抗 体，待检标本加上后，示踪元素即 与标本中的PCT结合，形成一个 “三明治式”的复合物，然后通过 发光比色判断PCT浓度
当PCT浓度≥0.5μg/ml时，夹心复
Linscheid P, et al Crit Care Med 04; 32: 1715-21
WEnednoecnriLnoIUlogy 03; 144: 5578-84 & 05; 146: 2699-708
11
细菌感染后PCT快速升高
Kinetics of procalcitonin in iatrogenic sepsis Brunkhorst F.M et al, Intens Care Med 1998,24:888-892
Wenen LIU
24
对PCT检测的影响
➢受以下因素影响
* 甲状腺功能
是功能性甲状腺髓样癌的肿瘤标志物
* 肾功能
严重肾功能受损者中水平较高
➢不受以下因素影响
* 类固醇药物
* 自身免疫性疾病
* 年龄、性別
* 免疫功能低下状态:肝硬化、HIV感染
Wenen LIU
25
细菌内毒素
▪革兰氏阴性菌细胞壁 上的一种脂多糖（LPS）
局部细菌感染，建议使用抗生素
0.5-2.0 2.0-10.0 ＞10.0
严重细菌感染、脓毒症 重症脓毒症 重度脓毒症、脓毒性休克或MODS
Wenen LIU
21
PCT的临床应用
▪ 急诊 ▪ 住院病房 ▪ 外科手术 ▪ 血液科 ▪ 内科ICU ▪ 外科ICU
▪ 儿科急诊 ▪ 儿科病房 ▪ 儿科ICU ▪ 新生儿科
11号染色体上
的单拷贝基因
转录
降钙素原前体内源多肽酶
甲状腺滤泡细胞
降钙素原 PCT
正常We情nen况LIU下
分解
降
细胞内特殊 钙
蛋白酶
素
10
Bacterial Infection (e.g.Endotoxin)
IL-6
在病毒感染时，大量产生 的IFN-，将会抑制PCT的 激活及产生.因此，病毒感 染时，PCT的浓度将会保 持在较低的水平
结核感染T细胞检测技术
分子生物学技术
Wenen LIU
39
结核夹层杯技术
▪ 原理：通过专用消化灭活液消化组织细胞 和粘蛋白等，将结核杆菌裸露出来，并结 合高速震荡，使痰标本充分液化而有利于 其中的抗酸杆菌沉淀于特制彭氏杯底部的 菌膜上，在夹层杯中直接抗酸染色、干燥， 并用取片针顶出内底，经封片等步骤后， 镜下检测抗酸杆菌。
▪使用致炎细胞因子治疗后 (OKT3, 注射 TNFα, IL-2, 抗淋巴细胞球蛋白)
▪某些肿瘤 (甲状腺髓样细胞癌, 肺小细胞 癌和支气管癌)
▪长时间循环衰竭 (心源性休克, 出血性休
克, 热休克)
Wenen LIU
23
细菌感染而PCT不升高的情况
▪感染早期 (-> 6-12 小时后重复检测!) ▪亚急性心内膜炎 ▪局部感染
感染性疾病病原体快速诊断
概述
感染性疾病：由某种病原体所致，通过不同方 式引起人体发生感染并出现临床症状的疾病, 主要表现为发热。
病原体：细菌（含TB）、支原体、衣原体
病毒
真菌
原虫等
Wenen LIU
2
感染的诊断依据
▪ 临床表现：感染的全身中毒症状： 畏寒、发热、皮疹等
▪ 实验室常规检查：血常规：WBC、DC ▪ 影像学检查：X-RAY、B超 ▪ 病原学检查：染色、培养 ▪ 血清学检查：抗原或抗体检测
▪ 抗酸染色法是检测TB的传统方法，但存在
假阳性
Wenen LIU
35
结核感染现状
全球范围内结核病疫情急剧恶化
▪ 结核病与艾滋病同时流行
▪ 结核菌耐药现象益发严重
▪ 人口大规模流动
我国是世界上仅低于印度的第二结核病大国
▪ 结核菌感染率44.5%
▪ 新发活动性结核患者130万/年
▪ 死亡13万/年
早期快速诊断与治疗成为制约结核病控制的
本放置-20℃保存。
▪ 血浆中的PCT非常稳定，收集
标本24h后，PCT浓度在室温
下大约下降12％，在4℃W大ene约n LIU
17
PCT用于细菌感染和脓毒症诊断是一种 非常有价值的标志物
细菌感染/脓毒症诊断及严重程度判断 脓毒症治疗效果监测及预后评估 抗生素的有效管理
Wenen LIU
18
细菌感染诊断及严重程度判断
PCT的浓度随感 染的扩散和感 染严重程度的 加重而升高 脓毒性休克 严重脓毒症
系统性感染(脓毒症) 局部感染 正常值
Wenen LIU
19
脓毒症患者治疗效果及预后 监测
通过PCT不断在体内衰减，反映出抗生素治疗策略的成功
(n=109)
随着患者对抗生素治 疗的响应，引起了 PCT血中浓度水平的 典型变化过程
Wenen LIU
40
检测流程示意图
Wenen LIU
41
镜下比较
图1. 直接涂片法（传统方法）： 菌量少，背景不清晰
图2. 夹层杯法（新方 法）：
菌量多，背景清晰，易 于观察
Wenen LIU
42
夹层杯诊断技术的优点
夹层杯诊断 技术的优点
阳性率高 背景清晰，易于观察
易于标准化 检测速度快 生物安全性好
Wenen LIU
12
PCT来源
Wenen LIU
Left Lane:正常组, 在不 存在感染的情况下，甲 状腺外CALCI表达被抑 制，而主要局限于甲状 腺和肺的神经内分泌细 胞有一定程度的表达
Right Lane: 脓毒症组,
在细菌感染时可诱导全
身各种组织多种类型细
胞CALCI表达和PCT连
续性释放
Wenen LIU
43
结核夹层杯技术
标本要求： （1）痰液要求新鲜，留取清晨深咳出的第一口
痰液，留痰时，患者以清水漱口３次，然后 用力咳出气管深处的痰 （2）用氢氧化钠处理完全。
临床应用：用于结核分枝杆菌的初筛
Wenen LIU
44
结核感染T细胞检测技 术
▪ 是以ELISPOT技术 检测结核感染的新
Wenen LIU
33
16S rRNA具有多拷贝多信息的特点
Wenen LIU
34
结核分枝杆菌的快速诊 断
▪ 是引起结核病的病原菌。它可侵犯全身各 器官，但以肺结核为最多见。
▪ 结核病至今仍为重要的传染病。估计世界 人口中1/3感染结核分枝杆菌。
▪ 结核分枝杆菌生长缓慢，一般需2-4周长成 肉眼可见的落菌。
关键
Wenen LIU
36
全球结核疫情
Wenen LIU
37
结核检测方法
一、现有实验室常规检测技术 细菌学诊断 ─ 涂片、培养 免疫学诊断 ─ 抗原、抗体胶体金 分子生物学诊断 ─ PCR 二、其它检测技术 PPD（TST）实验 影像学检查
Wenen LIU
38
结核分枝杆菌的快速诊断
结核夹层杯技术
▪ 其它体液如脑脊液﹑胸腹水与血标本要求相 同。
Wenen LIU
30
内毒素活性定量检测意义
▪ G-所致脓毒症早期鉴别诊断
▪ 指导抗生素正确使用
▪ 判定抗感染治疗效果
▪ 帮助判断患者的预后
Wenen LIU
31
内毒素定量检测的适应 症
▪ 各种急、慢性病理性发热患者
▪ 各种类型“中重度感染、肝病、休克、肠 道疾病、脏器功能衰竭、大手术术后”患 者