有一种癌细胞,缺乏抗癌基因p53

问题：有一种癌细胞，缺乏抗癌基因p53，想杀掉这种细胞，很好的办法就是让这种细胞重新表达p53。如何在这个细胞表达p53?

答：要让这种细胞重新表达p53，需要让细胞获得抗癌基因p53，需要使用基因拼接技术。

使其获得p53基因的基因拼接技术步骤如下：

1.从细胞中分离出DNA：

准备好含有p53基因的新鲜材料

破碎细胞，使内容物释放（降低温度，改变pH和盐的浓度，或添加核酸酶抑制剂，使其保持完整）

●核酸分离、纯化（去垢剂溶解蛋白质和脂肪，分离核酸）

❍沉淀或吸附核酸，并除去杂质（使用低温离心技术）

⏹核酸溶解在适量缓冲液中，

2.提取目的基因：使用基因的“剪刀”──限制性核酸内切酶（限制酶）识别特定的

p53基因核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。可使用PCR技术或化学合成方法扩增提取出来的p53基因，为后面的实验准备实验材料。

3.目的基因与运载体结合：用同种限制性核酸内切酶切割质粒基因，使其获得相互匹

配的粘性末端，用DNA连接酶将提取出来的p53基因与基因载体质粒的粘性末端结合。

4.目的基因导入受体细胞：用显微注射法将与p53基因粘合的质粒导入受体细胞。

5.目的基因的表达与检测：通过基因水平和蛋白质水平两个方向检验，基因水平有限

制性核酸内切酶图谱、PCR、DNA杂交/基因芯片、基因测序；蛋白质水平有Western-blot、质谱分析