荧光抗体稀释液(Kolmers法)
二抗及酶联物稀释液
Zeus(优仕) EB VCA IgG ELISAEB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是Epstein和Barr于1964年首次成功地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，故名。
一、生物学性状EB病毒的形态与其他疱疹病毒相似，园形、直径180nm，基本结构含核样物、衣壳和囊膜三部分。
核样物为直径45nm的致密物，主要含双股线性DNA，其长度随不同毒株而异平均为17.5×104 bp分子量108。
衣壳为20面体立体对称，由162个壳微粒组成。
囊膜由感染细胞的核膜组成，其上有病毒编码的膜糖蛋白，有识别淋巴细胞上的EB病毒受体，及与细胞融合等功能。
此外在囊膜与衣壳之间还有一层蛋白被膜。
EB病毒仅能在B淋巴细胞中增殖，可使其转化，能长期传代。
被病毒感染的细胞具有EBV的基因组，并可产生各种抗原，已确定的有：EBV核抗原（EBNA），早期抗原（EA），膜抗原（MA），衣壳抗原（VCA），淋巴细胞识别膜抗原（LYDMA）。
除LYDMA 外，鼻咽癌患者EBNA、MA、VCA、EA均产生相应的lgG和LgA抗体，研究这些抗原及其抗体，对阐明EBV与鼻咽癌关系及早期诊断均有重要意义。
EB病毒长期潜伏在淋巴细胞内，以环状DNA形式游离在胞浆中，并整合天染色体内。
二、致病性EB病毒在人群中广泛感染，根据血清学调查，我国3～5岁儿童EB病毒VCA-lgG抗体阳性率达90%以上，幼儿感染后多数无明显症状，或引起轻症咽炎和上呼吸道感染。
青年期发生原发感染，约有50%出现传染性单核细胞增多症。
主要通过唾液传播，也可经输血传染。
EB病毒在口咽部上皮细胞内增殖，然后感染B淋巴细胞，这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染。
并可长期潜伏在人体淋巴组织中，当机体免疫功能低下时，潜伏的EB病毒活化形成得复发感染。
由EBV感染引起或与EBV感染有关疾病主要有三种：（一）传染性单核细胞增多症是一种急性淋巴组织增生性疾病。
ELISA稀释液配制
/techniquezones/66抗体稀释液和ELISA相关溶液的配制1、抗体或免疫球蛋白稀释液0.01mol/L pH7.2PBS NaH2PO4·2H2O0.39克Na2HPO4 1.27克NaCl0.85克NaN3200mgH2O（蒸馏水）至1000ml 2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液pH7.4，PBST NaCl 2.0克KH2PO40.2克Na2HPO4·12H2O 2.9克KCl0.2克NaN30.2克H2O至1000ml 吐温（Tween）200.5ml4°C保存备用3、包被液（简称CB）pH9.6Na2CO3 1.59克NaHCO3 2.93克NaN30.2克H2O至1000ml 密封盖好，4°C存放备用4、ELISA底物液（可溶性底物）磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.00.1mol/L柠檬酸（21.014克/100ml)24.3ml 0.2mol/L Na2 HPO4（28.4克/1000ml)25.7ml H2O50ml 4°C存放备用5、DAB底物液（不溶性底物，组化病理等）0.05mol/L pH7.6Tris-HCLTris 6.05克HCL(36%) 3.15克（约2.7ml浓HCL）H2O至1000mlDAB为3´，3´二氧基联苯胺，不溶性底物，呈棕红色6、DAB溶液配制：（组化及Western blot 显色）称DAB30mg，用0.05mol/L pH7.6Trs-HCL缓冲液100ml溶解,如有沉淀，过滤后使用，一般新鲜配制使用。
用前加入1%H2O2 1-1.5ml,H2O2浓度为0.01%，混均后使用。
7、3´，3´，5´，5´，-四甲基联苯胺（TMB）溶液配制：用二甲基甲酰胺（dimethylformamide，DMF)或无水乙醇，将TMB配成1%浓度，4°C保存半年以内使用。
荧光抗体稀释液(Evans Blue法)
北京雷根生物技术有限公司
荧光抗体稀释液(Kolmers 法)
简介：
荧光抗体稀释液用于荧光染色时一抗(primary antibody)、二抗(secondary antibody)的稀释和配制。
当荧光抗体的染色如果背景较高，可以用Leagene 荧光抗体稀释液(Kolmers 法)稀释至临界浓度，使特异性染色呈阳性而非特异性染色呈阴性。
Leagene 荧光抗体稀释液(Kolmers 法)由伊文思蓝、盐等组成，为蓝色液体，减少非特异性荧光，宜做常规应用。
组成：
自备材料：
1、 载玻片
2、 盖玻片
3、 荧光显微镜
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。
2、 稀释抗体后应4℃避光保持。
注意事项：
1、 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
2、 在使用荧光抗体稀释液的情况下，虽然可减缓淬灭，仍需尽量避光。
有效期： 12个月有效。
编号 名称 IH0347 IH0347 Storage 荧光抗体稀释液(Evans Blue 法) 50ml 100ml 4℃ 避光 使用说明书 1份。
ELISA试剂配制及实验流程
ELISA试剂配制及实验流程ELISA(酶联免疫吸附实验)是一种常用的免疫学实验技术，用于检测抗体或抗原的存在与浓度。
ELISA试剂是ELISA实验中的关键组成部分，正确配制试剂和正确的实验流程对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
一、ELISA试剂的配制1. 背景缓冲液（Coat buffer）：该缓冲液用于包被酶标板上的抗原或抗体，并且用于洗涤步骤中的洗板缓冲液。
配制方法：将10 mL Tris缓冲液（100 mM，pH 9.6）加入0.15 g NaCl，搅拌溶解，最后加入一滴Tween-20或其他润湿剂。
2. 试样稀释液（Sample buffer）：该缓冲液用于稀释试样，使其适应ELISA实验的测量范围。
配制方法：根据试样的含量和要求进行合适的稀释，一般可选择PBS （含0.05% Tween-20) 来稀释。
3. 标准品（Standard）：该物质用于建立标准曲线，以根据样品的读数来确定样品中目标物的浓度。
配制方法：首先通过相关实验确定标准品的初始浓度，使用稀释液进行逐步的2倍稀释，以获得不同浓度的标准溶液。
4. 酶标抗体（Enzyme labeled antibody）：该抗体与目标物结合，可与酶底物发生反应产生荧光或颜色。
配制方法：根据抗体的浓度和信号放大的要求，将抗体稀释在稀释液中。
5. 底物液（Substrate solution）：在酶底物的作用下产生颜色，用于测定目标物的浓度。
配制方法：根据酶底物的要求和实验条件，按照相应的方法配制底物液。
二、ELISA实验流程1.包被抗原或抗体：加入适量的抗原或抗体至酶标板孔中，在4°C 下静置一夜或在37°C下孵育数小时，使其吸附到酶标板表面。
吸附后，将酶标板孔洗涤干净以去除未结合的物质。
2.阻断：将阻断液加入酶标板孔中，避免非特异性结合，阻断剂一般为牛血清蛋白、鱼胶蛋白等。
孵育一段时间后，洗涤酶标板孔以去除阻断液。
免疫荧光染色二抗稀释液使用说明书
温馨提示 为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。
储存温度 2~8℃保存。
包装清单 货号
HCY066
品名 免疫荧光染色二抗稀释液
说明书
包装 100mL 1份
1
按照每个二抗稀释10ml计算一个包装的免疫荧光染色二抗稀释液可以稀释10个或10使用说明参考所用的荧光标记二抗的使用说明以及一抗的质量和样品中目的蛋白的含量按照适当比例例如1
杭州昊鑫生物科技股份有限公司
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免疫荧光染色二抗稀释液
免疫荧光染色二抗稀释液 免疫荧光染色二抗稀释液可用于免疫荧光染色时荧光标记二抗的稀释。经稀释的荧光标记
二抗可以在 4℃保存和使用，可以反复多次用于免疫荧光染色，节约您宝贵的抗体。 按照每个二抗稀释 10mL 计算，一个包装的免疫荧光染色二抗稀释液可以稀释 10 个或 10
次二抗。
使用说明 参考所用的荧光标记二抗的使用说明，以及一抗的质量和样品中目的蛋白的含量，按照适当比 例例如 1:1000、1:500 等比例稀释二抗。荧光标记二抗稀释后即可直接用于免疫荧光染色。免 疫荧光染色结束后，可以回收稀释的二抗，4℃保存，以用于下次的免疫荧光染色。
免疫荧光组织(细胞)化学染色方法：补体法原理和操作指南
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：补体法原理和操作指南一、原理与意义免疫荧光组织（细胞）化学染色方法——补体法，是一种荧光抗体染色法。
本法之荧光抗体不受免疫血清的动物种属的限制，因而一种荧光抗体可作更广泛的应用，敏感性亦较间接法高，效价低的免疫血清亦可应用，节省免疫血清，尤其是对检查形态小的如立克氏体、病毒颗粒等或浓度较低的抗原物质时甚为理想。
二、操作指南1、材料（1）免疫血清60℃灭活20min，用Kolmers盐水作2倍稀释成1：2，1：4，1：8……。
补体用 1：10稀释的新鲜豚鼠血清，抗补体荧光抗体等，按下述的补体法染色。
免疫血清补体结合的效价，如为1：32则免疫血清应作1：8稀释。
（2）补体用新鲜豚鼠血清一般作1：10稀释或按补体结合反应试管法所测定的结果，按2单位的比例，用 Kolmers盐水稀释备用。
Kolmers盐水配法：即在pH7.4、0.1mol/L的磷酸缓冲盐水中，溶解MgSO4的含量为0.01%浓度。
（3）抗补体荧光抗体：在免疫血清效价为1：4，补体为2单位的条件下，用补体染色法测定免疫豚鼠球蛋白荧光抗体的染色效价，然后按染色效价1：4的浓度用Kolmers盐水稀释备用。
2、操作步骤（1）涂片或切片固定。
（2）吸取经适当稀释之免疫血清及补体之等量混合液（此时免疫血清及补体又都稀释一倍）滴于切片上，37℃作用 30min，置于保持一定湿度的染色盒内。
（3）用缓冲盐水洗2次，搅拌，每次5min，吸干标本周围水液。
（4）滴加经过适当稀释之抗补体荧光抗体30min，37℃，水洗同（3）。
（5）蒸馏水洗1min，缓冲甘油封固。
3．对照染色（1）抗原对照。
（2）抗血清对照：用正常兔血清代替免疫血清。
（3）灭活补体对照：将补体经56℃ 30min处理后，按补体同样比例稀释，与免疫血清等量混合后，进行补体法染色。
Elisa溶液配制
Elisa溶液配制或封闭液（1 % BSA）：每100 mL的PBST中加入1 g牛血清白蛋白（BSA），4℃保存首先摸索PCV2抗原包被的最佳浓度，将PCV2抗原按照1/50、1/100、1/200、1/400、1/800、1/1600稀释，一抗用强阳性血清、弱阳性血清、阴性血清按照1/100稀释，于37 ℃孵育1.5 h，二抗用羊抗猪的酶标二抗，于37 ℃孵育1 h，加入TMB显色，测其OD450 nm值，选择阳性血清OD450 nm大于0.8，而阴性血清小于0.1的临界稀释度即为抗原的最佳包被浓度。
然后按照最佳的浓度包被96孔酶标板，每孔加入100 µL，于4℃包被过夜；次日用PBST（0.15M PBS＋0.05% Tween 20）洗涤3次，每次5 min 洗涤；用PBST溶解的1% BSA于37℃湿盒中封闭1-2 h，洗涤方法同上一步骤；然后向孔中加入起始浓度为300 μg/μL，按照1/5、1/10、1/20、1/40、1/80、1/160、1/320、1/640八个稀释梯度的VHHs，置于37 ℃湿盒中孵育2 h，此为反应的一抗；用PBST洗涤5次，每次5 min；加入100 µL抗His标签的HRP标记的鼠源单抗（1:2000稀释）作为反应的二抗，置于37℃湿盒中孵育1 h；再用PBST洗涤5次，每次5 min；最后每孔加入100 µL TMB显色液，室温避光显色10-15 min；显色结束后每孔加入50 μL 2 mol/L H2SO4终止显色，在A450 nm波长处读数。
同时用武汉科前生物有限公司提供的阳性血清（按照上述稀释梯度进行稀释）作为本实验的阳性对照，分别用BSA 和未接种病毒的PD3细胞裂解液包被酶标板，作为本实验的阴性对照1和2。
阳性对照组二抗反应时加入100 µL抗猪-HRP标记的酶标二抗，其余操作方法同上。
2xSYBR Green qPCR Mix使用说明书
2 x Sybr Green qPCR Mix使 用 说 明 书包 装 量：产品组成、储存、浓度：储存：－20 ℃ 避光保存至少6个月，使用前充分融解混匀。
短期使用可放在4 ℃，避免反复冻融。
制品说明：本制品本制品是采用SYBR® Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR 的专用试剂。
已经将热启动HotMaster Taq DNA聚合酶、dNTP 、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液、BSA 和SYBR® Green I 等试剂预混成一种适合Real Time PCR 反应检测用2×Premix Type 试剂，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。
使用时只需加入模板和引物和水，便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对目的基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。
本品采用全新的Hotmaster Taq DNA 聚合酶，该酶不同于一般Hot-start 酶之处在于，一般的Hot-start 酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性，而Hotmaster Taq DNA 聚合酶是利用抑制剂通过温度调节方式封闭Hotmaster Taq DNA 聚合酶的底物结合位点，温度低于40℃时，形成非活性的酶-抑制剂复合物，当温度升高至引物特异性的退火温度时，结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动，因此最大限度的减少PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物产生，大大提高了荧光定量PCR 反应的精确性。
注意事项：1. 本制品不含参比染料ROX ，客户并根据qPCR 仪器技术指导决定是否需要加ROX 参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，配套ROX 产品货号为1538 Rox Reference Dye 。
2. 本制品含SYBR® Green I 强光下易分解，降低敏感度，使用时避免长时间强光照射本制品。
3. 建议在冰上配制PCR 反应液，再放入PCR 仪器中扩增。
【高中生物】荧光抗体的制备
【高中生物】荧光抗体的制备（一）免疫球蛋白的提取（二）荧光素1．荧光色素的基本条件（1）具有化学活性基团，如异硫氰基（-ncs）等，易与免疫球蛋白结合形成共价键。
（2）对免疫球蛋白无毒性，不影响抗体活性。
（3）荧光效应高，与蛋白结合需要量少。
（4）荧光素性能平衡，结合物性能平衡，难储藏。
（5）结合物的颜色必须与背景组织有良好的反衬作用，易于观察判定。
至目前为止，基本合乎上述建议的荧光素只有异硫氰酸荧光素（fitc），丽丝胺罗丹明b200（rb200）。
2．常用的荧光色素（1）异硫氰酸荧光素：又称异硫氰酸荧光徐，纯品为橙黄色粉末。
棕斑结晶型与粉末型两种,结晶型荧光强度小、平衡、强于粉末型。
分子式c21h11o2n5、分子量389，溶水，易溶于ph8-9.5碳酸盐缓冲液中。
最小稀释波长为495nm。
最小升空波长520nm。
异硫氰酸荧光徐性质平衡，于低温下可以留存二年以上，但久置标记抗体能力强，荧光亮度高，故应使用新产品。
异硫氰酸荧光素借助异硫氰基与蛋白中氨基酸（主要是赖氨酸）的氨基结合。
一个igg分子有86个氨基酸残基，一般最多能标记16～20个荧光素分子。
（2）丽丝胺罗丹明：为褐色粉末，不溶水、易溶于酒精和丙酮。
荧光为桔红色。
性质平衡，可以长期留存。
分子式c23h29o7nas2，分子量为580，最小稀释波长570nm，最小升空波长为600nm。
由于丽丝胺罗丹明荧光效能较低，一般不单独使用，多用于与fitc标记抗体的反衬染色或双标记配合使用。
此染料不能直接与蛋白质结合，必须先用五氯化磷（pcl5）处理，使染料的-so3na基变为-so3cl基后，才能在碱性条件下与赖氨酸的氨基结合，形成稳定的硫氨键。
（三）标记方法异硫氰酸荧光素常用的标记法有以下两种：1．烘烤法（1）取一定量的纯igg液，用0.5mol/lph9.5碳酸盐缓冲液稀释至20mg/ml。
（2）按荧光素与蛋白质比1?20～1?100（通常用1?100）称取异硫氰酸荧光素，用ph9.5碳酸盐缓冲液熔化。
抗体PE荧光素标记操作流程记录
1.目的
规范单克隆抗体标记荧光PE (快速标记法）标准操作程序
2.适用范围
适用于本公司抗体标记荧光PE (快速标记法）操作
3.术语和定义
藻红蛋白，简称“PE”。
相对分子质量较大，约为240kD，最大吸收峰为564nm。
4.职责和权限
实验员负责实施本规范，主管负责人监督执行。
5.实验试剂.
5.1溶液配制
5.2其他试剂
6.操作流程
6.1抗体活化
将抗体用0.01mol/L PBS稀释为1mg/mL，加入mL 活化液(体积比为抗体溶液：反应活化液=10:1），旋涡振荡器混匀后，室温避光反应10min。
6.2与PE反应形成共轭物
将抗体混合液（步骤6.1）加入mg PE荧光素中（加入量：抗体与荧光素质量比为1:1），在室温条件下避光反应3小时，反应开始时间：至结束时间：；（或2-8度条件下避光过夜）。
6.3荧光淬灭
向共轭物（步骤6.2）中加入mL 淬灭剂（淬灭剂添加量按抗体体积：淬灭剂体积=10:1添加）。
混匀后，室温孵育30分钟，去除游离的荧光素的荧光效应。
淬灭开始时间：至结束时间：。
6.4层析
将共轭物（步骤6.3）层析柱分离，进一步去除游离的荧光素或抗体。
6.5保存
收集得到的标记抗体（步骤6.4），上机测试后根据效价，用Storage Buffer 按比例稀释后，4℃避光保存，有效期一年。
荧光素FITC标记抗体的方法
a．蛋白溶液：含量Amg／m1；容积Bml。
b．总蛋白量(AXB)＝Crag。
c．C／20～C／10＝Dmg(如蛋白含量低于20mg／ml，用C／10；如高于20mg／ml，用C／20)。
④透析和柱层析方法同Marsshall法。
3．改良法
(1)试剂和材料①0．01mol／L(pH7．2)PBS配法中，校定pH至7．2。NaCi18g、Na2HP04 1．15g，溶于2000ml蒸馏水
②0．5mol／L(pH9．0)碳酸盐缓冲液配法取0．5mol／LNazCOs(5．3％)10ml加入0．5mol／LNaHC03(4．2％)9荧光素FITC的量：(1／50～2／100)XC＝Emg。
e．巳0．5mol／L(pH9．5)碳酸盐缓冲液D／10＝Fml。
f．PBS量D-(B+F)=Gml。
注：A为蛋白含量，mg／ml；B为蛋白质溶液的容积；C为蛋白总量，mg；D为常数，mg；正为荧光素的量，mg；F为碳酸盐缓冲液的容积，ml；G为PBS的容积，ml。
FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质→FITC-NS-C-N-H2-蛋白质
常用Marsshall(1958)法标记荧光抗体，也可以根据条件采用Chadwick等标记法或Clark等(1963)的透析标记法。
1．Marsshall法
(1)材料抗体球蛋白溶液、0．5mol／L(pH9．0)碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光
③结合(或标记)边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入球蛋白溶液中，避免将荧光素粘于烧瓶壁(大约在5—10min内加完)，加完后，继续避光搅拌12h左右。结合期间应保持蛋白溶液于4℃左右，故需将烧杯和搅拌器一起移人4℃冰箱中。
荧光抗体稀释液
北京索莱宝科技有限公司
荧光抗体稀释液
货号：A1840
规格：10ml/100ml
保存：-20℃保存，有效期为2年。
短期可2-8℃保存。
产品说明：
本免疫荧光抗体稀释液(Immunofluorescence Staining Antibody Dilution Buffer)可以用于免疫荧光实验时荧光标记抗体的稀释和配制。
产品添加了抗体保护剂、稳定剂等成分，有效增加了稀释后荧光抗体的稳定性。
用此稀释液稀释后的抗体可在2-8℃环境下稳定保存半年。
使用方法：
按照荧光抗体推荐效价（或个人优化条件），将适量抗体加入抗体稀释液即可。
例如，效价为1：1000时，可将1ul抗体加入到1ml抗体稀释液中，充分混匀后即可使用。
抗体最好现用现稀释，稀释后的抗体可2-8℃保存。
注意事项：
如需抗体回收再利用，建议在2-8℃进行抗体的结合反应，以减缓抗体效价的衰减速度。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
第1页共1页。
GelRed说明书中文版GelRed10,000215;水溶液说明GelRed核酸染料特点无毒性Ge
GelRed说明书中文版GelRed（10,000× 水溶液）说明 GelRed 核酸染料特点● 无毒性： GelRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验结果也说明，该染料的诱变性远远小于 EB。
● 灵敏度高：适用于各类大小片段的电泳染色，对核酸迁移的阻碍小于 SYBR Green I。
● 稳固性高：适用于利用微波或其它加热方式制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极为稳固，耐光性强。
● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
●操作简单：EB 一样，与在预制胶和电泳进程中染料不降解；而电泳后染色进程也只需 30 分钟且无需脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪观看。
● 适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
● 与 EB 有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观看装置：标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用，利用与观看 EB 相同的一般紫外凝胶透射仪观看即可，在 300nm 紫外光周围可取得最正确激发。
可是GelRed 不能被 488 nm 氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发，因此不推荐利用此类激发装置的成像系统。
美国 Biotium 公司是一家在荧光技术领域独树一帜的生物技术公司，公司位于美国加利福尼亚的 BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。
该公司一直致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其它特殊生化产品。
其产品被普遍应用于细胞生物学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模挑选等众多领域. GelRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳固于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。
其水溶染色剂通过美国环保局平安认定，废弃物可直接倒入下水道，而可不能造成任何环境污染。
荧光抗体稀释液(Evans Blue法)
北京雷根生物技术有限公司
荧光抗体稀释液(Kolmers 法)
简介：
荧光抗体稀释液用于荧光染色时一抗(primary antibody)、二抗(secondary antibody)的稀释和配制。
当荧光抗体的染色如果背景较高，可以用Leagene 荧光抗体稀释液(Kolmers 法)稀释至临界浓度，使特异性染色呈阳性而非特异性染色呈阴性。
Leagene 荧光抗体稀释液(Kolmers 法)由伊文思蓝、盐等组成，为蓝色液体，减少非特异性荧光，宜做常规应用。
组成：
自备材料：
1、 载玻片
2、 盖玻片
3、 荧光显微镜
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。
2、 稀释抗体后应4℃避光保持。
注意事项：
1、 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
2、 在使用荧光抗体稀释液的情况下，虽然可减缓淬灭，仍需尽量避光。
有效期： 12个月有效。
编号 名称 IH0347 IH0347 Storage 荧光抗体稀释液(Evans Blue 法) 50ml 100ml 4℃ 避光 使用说明书 1份。
快速测定杆状病毒滴度步骤
杆状病毒滴度测定步骤（利用工程细胞系Tn5ET终点稀释法快速测定杆状病毒滴度）1）用培养基（Grace’s 改良培养基JYT-M0042+10%FBS，下文中所有的培养基均为此培养基）稀释Tn5ET细胞悬液至细胞浓度约5×104个/ml，将Tn5ET&P细胞悬液滴加在96孔细胞培养板中，每孔100µl（即5×103cell/well）。
2）27℃培养箱培养，为了防止脱水，用封口膜将培养板四周封上，然后套上自封袋，将培养板置于培养箱内培养。
培养24h后细胞的汇合度约为30%~50%，此密度适合接种病毒。
3）在离心管中用培养基（将Bacmid病毒液连续作10倍梯度稀释，从10-1至10-6、10-7、10-8、10-9 、10-10、10-11、10-12。
4）取稀释好的Bacmid病毒液50 µl接种到含有100 µl Tn5ET细胞悬液的96孔微量培养板中，每一稀释度接种一行共12孔。
留一行作为阴性孔，每孔加入50 µl培养基。
5）27℃培养箱培养，为了防止脱水，用封口膜将培养板四周封上，然后套上自封袋，将培养板置于培养箱内培养。
培养72h后即可在荧光显微镜下观察到绿色荧光细胞，连续观察2~3天记录结果，直至不再有新的感染孔出现。
6）检测每孔的病毒复制情况，在荧光显微镜能检测到荧光信号的即为感染阳性。
不同稀释度条件下的病毒感染情况，则为该梯度下所有阳性感染数之和。
统计方法如下：n+(10-5)=n(10-5)+n(10-6)+n(10-7)+n(10-8)+n(10-9)+···n+(10-6)=n(10-6)+n(10-7)+n(10-8)+n(10-9)+···n+(10-7) = n(10-7)+n(10-8)+n(10-9)+···n+(10-8) = n(10-8)+n(10-9)+···n+(10-9) = n(10-9)+···同理统计未感染病毒数，获得病毒在不同稀释梯度下的感染率，从而获得感染率大于和小于50 %最近的两个稀释度，即为病毒感染相关浓度。
常用的单克隆抗体检测方法
经常使用的单克隆抗体检测方法宇文皓月通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，在杂交瘤制备完成后，需要对抗体进行一个检测，本文介绍了几种经常使用的抗体检测的方法（1）免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。
由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。
①器材和试剂a、包被缓冲液：碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO38ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。
Tris-HCl缓冲液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml混合，加蒸馏水至1000ml。
b、洗涤缓冲液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。
c、稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA）0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。
d、酶反应终止液（2mol/L H2SO4）：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸（98%）21.7ml。
e、底物缓冲液（PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml，0.1ml/L柠檬酸24.3ml，再加50ml蒸馏水。
柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。
f、底物使用液：OPD底物使用液（测490nm的OD值）：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O20.15ml。
TMBS或TMB底物使用液（测450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml）1.0ml，底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。
ABTS底物使用液（测410nm的OD值）：ABTS 0.5mg，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。
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北京雷根生物技术有限公司
荧光抗体稀释液(Kolmers 法)
简介：
荧光抗体稀释液用于荧光染色时一抗(primary antibody)、二抗(secondary antibody)的稀释和配制。
当荧光抗体的染色如果背景较高，可以用Leagene 荧光抗体稀释液(Kolmers 法)稀释至临界浓度，使特异性染色呈阳性而非特异性染色呈阴性。
Leagene 荧光抗体稀释液(Kolmers 法)由Kolmers 盐等组成，为无色液体，减少非特异性荧光，宜做常规应用。
组成：
自备材料：
1、 载玻片
2、 盖玻片
3、 荧光显微镜
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作，稀释抗体后应4℃避光保存。
注意事项：
1、 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
2、 在使用荧光抗体稀释液的情况下，虽然可减缓淬灭，仍需尽量避光。
有效期： 12个月有效。
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