细菌标本片的制备及染色方法ppt课件
细菌标本片的制备及染色方法PPT精选文档
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实训目标
能利用不同的材料进行细菌标本片的制备 掌握常规的染色方法，并认识细菌的不同染色特性
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仪器材料
酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、美 蓝染色液、革兰氏染色液、瑞氏染色液、染色缸、 染色架、洗瓶、显微镜、香柏油、乙醇乙醚、擦镜 纸、细菌培养物（大肠杆菌、葡萄球菌等）、细菌 病料、无菌镊子和剪刀、特种铅笔等
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（2）组织抹片的制作 待检尸体经无菌手术切开胸腹腔后，用经火焰灭菌的 镊子夹起组织，用灭菌剪刀剪下小块组织，将组织切 面在载玻片上等距离轻压几下，使其留有组织切面的 压迹。
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（二）常用的细菌染色方法
1．美蓝染色法 2．革兰氏染色法 3．瑞氏染色法
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1．美蓝染色法
在已固定好的抹片 上，滴加适量美蓝染色 液覆盖涂面，染色2～ 3 min， 水 洗 ， 吸 水 纸 轻压吸干或晾干和镜检， 结果菌体呈蓝色。
（2）卢戈氏碘液 碘1g、碘化钾2g、蒸馏水300ml。将碘化钾放入研钵 中，加入少量蒸馏水，使其溶解，再放入已磨散的碘片，徐徐加 水，同时充分磨匀，待碘片完全溶解后，把余下的蒸馏水倒入， 再装入瓶中。
（3）石炭酸复红稀释液 取碱性复红酒精饱和溶液（碱性复红10g溶于 95%酒精100ml中）1ml和5%石炭酸水溶液9ml混合，即为石炭酸 复红原液。再取原液10ml和90ml蒸馏水混合，即成石炭复红稀释 液。
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3．瑞氏染色法
细菌抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于涂片 上以固定标本，1～3min后，再滴加与染色液 等量的磷酸缓冲液或中性蒸馏水于玻片上，轻 轻摇晃使与染色液混和均匀，5min左右水洗， 干后镜检，结果菌体呈蓝色，组织细胞等物呈 其他颜色。
细菌标本片的制备及染色法.
细菌病料触片及美兰染色
1 触片 2 干燥 3 固定 4 美兰染色
• 镊子、剪刀在酒精灯火焰上烧灼灭菌，用镊子夹持、剪刀剪取小块 病料组织，以其新鲜切面在玻片上轻触3~5个压迹。
细菌病料触片及美兰染色
1 触片 2 干燥 3 固定 4 美兰染色
• 室温下自然干燥或将标本片 的涂面向上，置酒及瑞士染色
1 推片 2 干燥 3 瑞氏染色
• 滴加瑞氏染色液于涂片上 以固定标本，1～3min后， 再滴加与染色液等量的磷 酸缓冲液或中性蒸馏水于 玻片上，轻轻摇晃使与染 色液混和均匀，5min左右 水洗，干后镜检
• 注：瑞氏染液含甲醇，无需另 行固定
瑞氏染色镜检结果
细菌（蓝色） 细胞
(2)液体培养物 可直接用灭菌接种环钩
取细菌培养液1～2环，在玻片上作 直径1cm的涂面
细菌培养物涂片及革兰氏染色
1 涂片 2 干燥 3 固定 4 革兰氏染色
• 室温下自然干燥或 将标本片的涂面向 上，置酒精灯火焰 高处微烤加热干燥。
细菌培养物涂片及革兰氏染色
1 涂片 2 干燥 3 固定 4 革兰氏染色
水洗 水洗 水洗
革兰氏染色镜检结果
葡萄球菌（G+菌，蓝紫色）
大肠杆菌（G-菌，红色）
血涂片及瑞士染色
1 推片 2 干燥 3 瑞氏染色
45°
• 取一张边缘整齐的载玻片，用其一端醮取血 液等液体材料少许，在另一张洁净的玻片上， 以45°角均匀推成一薄层的涂面。
血涂片及瑞士染色
1 推片 2 干燥 3 瑞氏染色
– 组织病料（肝脏）：触片及美兰染色 – 固体细菌培养物（大肠杆菌、葡萄球菌）：涂片及革
兰氏染色 – 液体病料：血涂片及瑞士染色
3. 镜检结果 4. 注意事项
技能训练2 细菌标本片的制备和染色法
技能训练2 细菌标本片的制备和染色法一、目的要求：正确掌握细菌培养物涂片的制作和常用染色法二、设备材料病料、细菌培养物、接种环、玻片、酒精灯、染色缸、染色架、染色液等。
三、操作方法细菌标本片制作的基本步骤为：涂片或触片→干燥→固定→染色→镜检。
(一)细菌涂片的制备1．液体培养物及液体病料(1)涂片用接种环取一滴培养液或液体病料，于玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层。
(2)干燥一般采用自然干燥，天气较冷时也可于酒精灯火焰上方30～40cm处适当加热干燥。
(3)固定分为火焰固定和化学固定两种。
火焰固定时，将干燥好的玻片涂面朝上，以其背面在酒精灯火焰上来回通过数次，略作加热，以不烫手背为度；化学固定时，可将干燥好的玻片浸入甲醇中2～3min后取出晾干，或在涂片上滴加数滴甲醇使其作用2～3min后自然挥发干燥。
此外，丙酮和酒精也可用作化学固定剂；作瑞特氏染色的涂片不需固定，因染色液中含有甲醇，有固定作用。
(4)染色根据不同的材料和菌种选择不同的染色法。
2．固体培养物用接种环取一滴生理盐水于玻片的中央→用接种环挑取一个菌落于生理盐水中混合→均匀地涂布成适当大小的薄层→干燥→固定→染色。
(二)细菌触片的制备将固体病料(病变组织)作无菌切开→用切面在玻片的中央接触一下或稍用力印压成一薄层→干燥→固定→染色。
(三)细菌的染色法1．单染色法又称简单染色法，即只应用一种染料进行染色的方法。
(1)美蓝染色法在已干燥、固定好的涂片或触片上滴加适量的美蓝染色液1—2min后，水洗，干燥(吸水纸吸干或自然干燥)，镜检。
(2)瑞特氏染色法在已干燥、固定好的涂片或触片上滴加瑞特氏染色液，为避免干燥，可适当多加一些，或视情况补充滴加，1—3min后再加与染液等量的中性蒸馏水或缓冲液，轻轻晃动玻片，使之与染色液混合均匀，再经3—5min后，直接用水冲洗，吸干或烘干后镜检。
也可在玻片上的涂抹处盖一适当大小的滤纸，然后再在滤纸上轻轻滴加瑞特氏染色液，至略浸过滤纸，视情况补充滴加，维持不干，3—5min后直接用水冲洗，吸干或烘干后镜检。
细菌标本片的制备及染色方法
细菌标本片的制备及染色方法1.材料准备-细菌培养物：选择代表性的细菌培养物，如液体培养物、固体培养物、接种物等。
-玻片：选择无痕的玻片，经高温消毒或与有机溶剂清洗后晾干备用。
-液体固定剂：如95%乙醇、甲醛等。
-染色剂：如碘酒、靛蓝溶液、絮状靛蓝等。
-水：经蒸馏水或高纯水处理。
2.细菌标本片制备(1)涂薄法：采取适量的培养物，滴于玻片上，使用无菌铁环将培养物涂匀于玻片表面，待溶液蒸发，自然晾干。
(2)刮刀法：将细菌培养物取下适量，用棉签或刮刀将菌落刮到玻片上，制成薄层。
(3)叠片法：将细菌培养物滴于玻片上，然后使用另一片玻片压在上面，使培养物均匀分布在两片玻片之间。
然后慢慢滑动两片玻片，使液体薄层均匀分布。
3.细菌标本片固定(1)液体固定法：加入同等体积的液体固定剂于细菌标本片上，浸泡5-10分钟。
固定剂能使细菌细胞变硬，保持细胞原态形态。
(2)干燥法：将细菌标本片放置在室温下，自然晾干，使细菌固定在玻片上。
此方法适用于脆性细菌。
4.细菌标本片染色(1)碘酒染色：取适量碘酒滴于细菌标本片上，置于室温下静置10-20秒。
然后用水冲洗，使过多的碘酒洗掉。
(2)靛蓝溶液染色：取适量靛蓝溶液滴于细菌标本片上，置于室温下静置10-20秒。
然后用水冲洗，使过多的靛蓝洗掉。
5.透明化处理(1)絮状靛蓝法：将细菌标本片在300倍以下的低倍率镜下观察，确定细菌形态无误后，将玻片倾斜，滴入絮状靛蓝液。
待颜色由淡到重，停在合适的颜色时，用水冲洗玻片上多余的靛蓝。
(2)水透明化法：可使用蒸馏水或高纯水将细菌标本片浸泡5-10分钟，然后取出晾干。
透明化后，细菌会变得透明，观察细胞内部结构会更清晰。
6.滴水封片在制备完成的细菌标本片上滴一滴蒸馏水或高纯水，将盖片平放在上面。
用纸巾或吸水纸轻轻按压玻片两侧，使水均匀分布。
然后将封片剂滴于玻片四周，使玻片与盖片紧密结合，定期晾干即可。
细菌染色技术ppt课件
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五、临床意义
➢ 鉴别细菌：
•
用革兰氏染色法可将所有细菌分为阳性与阴性两类，可初步识别细菌，
以利进一步鉴定。
➢ 选择药物：
•
可根据革兰氏染色性的不同，供临床初步选择用药方向。
➢ 与致病性相关：
•
大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致
病物质为内毒素。由此，可采取有针对性的治疗方案。
➢ 基本形态
球菌 杆菌 弧菌
➢ 特殊结构
芽孢：枯草杆菌、破伤风梭菌 荚膜：肺炎链球菌 鞭毛：变形杆菌
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标本处理
➢痰液：用无菌棉签挑取干酪样或脓性痰部分0.05-0.1ml，
涂于载物玻片右2/3 处，均匀涂抹成卵圆形痰膜（约2cm长),
每张玻片只涂一份标本。
➢脓液： 同痰涂片法。
➢病灶组织或干酪块等：先用组织研磨器磨碎后再
行涂片。大小、厚度同痰涂片。
➢体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉
渣涂片。大小、厚度同痰涂片。
➢脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。
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标本处理注意事项
➢标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避 免标本涂布不均影响结果判读，或使染 色不均造成阴阳不定。
➢标本涂布不能过厚，影响染色效果。
于结核病、麻风病等
• 荧光染色：敏感性强、效率高、易观察；
用于结核分枝杆菌等
• 其它：鞭毛染色鞭毛有无、位置、数量；
•
异染颗粒染色白喉棒状杆菌；
• 荚膜染色
.
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常用燃料
• 碱性染料 带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。常用的染
料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。
《细菌染色技术》课件
复染的目的是使染色后的细菌更加清晰可见，常用的复染液有稀释复红、稀释结晶 紫等。
干燥与镜检
干燥与镜检是细菌染色技术的最 后步骤，需要将染色完成的载玻 片干燥后进行显微镜检查，以便
观察染色效果和细菌形态。
干燥过程中需要注意避免过度加 热或干燥，以免影响染色效果。
01
02
03
04
简单染色法
利用单一染料对细菌进行染色 。
复染色法
利用两种或多种染料对细菌进 行染色，以便区分不同的细胞
结构。
荧光染色法
利用荧光染料对细菌进行染色 ，通过荧光显微镜观察。
特殊染色法
针对某些特殊性质或结构的细 菌，采用特殊的染色方法。
染色过程中的物理和化学变化
物理变化
染色过程中染料分子与细菌细胞 之间的相互作用，如吸附、渗透 等。
勤洗手
操作后应立即用肥皂和水彻底 清洗双手，确保个人卫生。
废弃物处理
使用过的培养物、染料和其他 废弃物应按照实验室规定进行
安全处理。
染色技术的优缺点和未来发展方向
优点
细菌染色技术是一种简单、快速、有效的细菌检测方法，能够直观地观察细菌的形态和结 构，有助于初步鉴定细菌种类。
缺点
染色技术需要人工操作，容易受到操作者主观因素的影响，且无法对细菌进行深入的分子 生物学鉴定。
《细菌染色技术》 ppt课件
REPORTING
目录
• 引言 • 细菌染色技术的基本原理 • 细菌染色技术的操作步骤 • 细菌染色技术的结果分析 • 细菌染色技术的注意事项和问题解决
PART 01
引言
REPORTING
细菌标本片的制备及染色
一、细菌标本片的制备1.抹片（1）固体培养物：取洁净的玻片一张，把接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌后，取1-2环无菌生理盐水，放于载玻片的中央，再将接种环灭菌，冷却后，从固体培养基上挑取菌落或菌苔少许，与水混匀，作成直径1cm的涂面。
接种环用后需要灭菌。
（2）液体培养物：可直接用灭菌接种环钩取细菌培养液1-2环，在玻片上作直径1cm涂面。
（3）液体病料（血液，渗出液，腹水）：取一张边缘整齐的载玻片，用一端蘸取血液等液体材料少许，在另一张洁净的玻片上，一45°角均匀推成一薄层的涂面。
（4）组织病料：以无菌剪刀、镊子剪去被检组织一小块，以其新鲜切面在玻片上做3-5个压印或涂抹成适当大小的一薄层。
无论何种方法，切忌涂抹太厚，否则不利于染色和观察2.干燥涂片应在室温下自然干燥，必要时将涂片涂面向上，置于火焰高处微加热干燥。
3.固定（1）火焰固定。
是常用的方法，将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上来回通过数次（4-6次），以手背触及玻片微烫手为宜。
（2）化学固定。
有的血片，组织触片用姬姆萨染色时，要用甲醇固定3-5min二、常用的细菌染色法1.美蓝染色法：在经火焰固定的涂片上，滴加适量美蓝染色液覆盖涂面，染色2-3min，水洗，晾干或吸水纸轻压吸干镜检，结果，菌体呈蓝色2.革兰氏染色法。
（1）在固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，染1-3min，水洗（2）加革兰氏碘液媒染，作用1-2min，水洗（3）加95%酒精脱色约30s至1min，水洗（4）加稀释石碳酸复红或沙黄水溶液复染30s左右，水洗，吸干后镜检3.瑞士染色法细菌抹片自然干燥后，滴加瑞士染色液于涂片上以固定标本，1-3min后，再滴加与染色液等量的磷酸盐缓冲液或中性蒸馏水与玻片上，轻轻摇晃使染色液混合均匀，5min左右水洗，干后镜检，菌体呈蓝色，组织细胞的胞浆呈红色，细胞核呈蓝色4.姬姆萨染色法。
血片或组织触片自然干燥后，用甲醇固定3-5min，干燥后在其上滴加足量染色液或将抹片浸入盛有染色液的缸里，染色30min，或者染色数小时或24h，取出水洗，吸干或烘干，镜检。
细菌标本片的制备及染色
细菌标本片的制备及染色同学们，大家好！今天我们要学习的内容是--《细菌标本片的制备及染色》。
我们这节课要用到的仪器和材料有酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、革兰氏染色液、洗瓶、显微镜、香柏油、擦镜纸、细菌培养物、细菌病料、无菌镊子和剪刀、铅笔等。
（实物照片或网上图片）本次实验的基本流程是：制片—干燥—固定—染色好，我们开始今天的实验:（一）玻片准备：选择干净、清晰、透明、无油渍的载玻片，滴上水后能均匀展开。
（学生演示）（二）细菌标本片的制作过程，根据所用材料不同，制片的方法有差异，这节课我们以制作葡萄球菌标本片为例，给大家做个示范。
1. 先用灭菌接种环取1~2环无菌生理盐水，置于玻片中央，再将接种环灭菌，冷却后挑取少量葡萄球菌，与水混合，涂布成适当大小的薄层。
接种环用后需再次灭菌。
（学生演示）在涂布时切忌涂抹过厚，否则不利于染色和观察。
2.干燥：将涂面向上置火焰高处微烤加热干燥（学生演示）3.固定：将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上来回通过数次（一般4~6次），以手背触及玻片微烫手为宜。
（学生演示）固定的目的是使菌体蛋白质凝固，形态固定，易于着色，并且经固定的菌体牢固黏附在玻片上，水洗时不易冲掉。
（三）革兰氏染色法：1.初染：在固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1~2min，水洗。
2.媒染：加革兰氏碘液媒染，作用1~3min，水洗。
3.脱色：加95%酒精脱色0.5~1min，水洗。
4.复染：加稀释石碳酸复红复染30s左右，水洗，吸干后镜检。
（动画展示或学生演示）结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
因葡萄球菌为革兰氏阳性菌，所以称蓝紫色。
（四）镜检观察应用拓展：革兰氏染色液的配制课后练习：同学们根据今天所学的细菌标本片的制备及染色方法，练习大肠杆菌的标本制片及染色。
实验二细菌涂片的制备和染色镜检
革兰阳性菌 革兰阴性菌
革兰氏 染 色法
革兰氏染 色法动画
实验报告：
1、细菌抹片或涂片革兰氏染色的显微镜观察结果。 2、革兰氏染色法的具体程序和注意事项。
细菌的单染色
涂片
干燥
固定
镜检
水洗、吸干
染色1~2min
细菌抗酸染色
1. 初染:用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰 高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发 减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用 水冲洗。
2. 脱色: 3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。
3.复染：用碱性美兰溶液复染1分钟，水镜检
目的要求：1、掌握细菌抹片的制备方法和常用染色方法。 2、认识革兰氏染色和抗酸性染色的反应特性。
实验内容：
1、 细菌抹片的制备：
玻片准备：透明、洁净、无油渍。
细菌抹片 的制备
抹片：液体材料、非液体材料、组织脏器材料的抹片方法讲解、示范。
干燥固定：火焰固定和化学固定的示范。讲解其目的及注意事项。
5.复染：用复红液复染约2分钟，水洗。 6. 镜检：用滤纸吸水，干燥后，显微镜油镜观察。
革兰氏染色法原理：
革兰氏染色法将细菌分为G＋和G- ，这由两类细菌细胞壁的结构和组成 的不同而决定。用结晶紫初染后，所有的细菌都染上蓝紫色。碘作为媒染 剂能与结晶紫结合形成结晶紫-碘的复合物，增强了染料与菌体的结合力。 用乙醇脱色处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。G＋细菌的细胞壁主 要由肽聚糖形成的网状结构组成，且壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色时使 细胞壁脱水、网状结构孔径缩小，通透性降低，使得结晶紫—碘的复合物 不易被洗脱而保留在细胞内。虽经洗脱和复染仍然保持初染剂的蓝紫色。 G-细菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄，类脂含量高，所以在脱色处 理时，类脂被乙醇溶解，细胞壁的通透性增大，使结晶紫—碘的复合物比 较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的颜色。
免疫学实验课件：实验二细菌抹片制备及染色、培养基的制作、
固定： 做好的涂片染色前必须先固定。目的是杀死细菌，
同时增加细菌对染料的亲和力。固定方法有两种：
1、火焰固定：将干燥好的抹片，使其抹面向上，以 其背面 在酒精灯外焰上略做加热。
2、化学固定：将以干燥的抹片浸入甲醇中2-3分钟， 自然挥发干燥。
做好的抹片就可以进行各种染色方法了。
2.染色方法
几种常用的染色方法：美蓝染色法，瑞士染色法染色法， 抗酸染色法，革兰氏染色法。重点介绍革兰氏染色法。
五 、方法和步骤
培养基的配方
1.普通肉汤培养基，琼脂培养基的制备 100ml肉汤 牛肉膏粉 0.5克 蛋白胨 1克 氯化钠 0.5克
普通琼脂：1.取50ml肉汤分装试管10支／4-5ml 2.取50ml肉汤+1.5~1.8克（琼脂粉2-3%） 用电磁炉加热熔化琼脂（需要完全融化） 10支／4-5ml
革兰氏染色法的原理：
革兰氏阳性菌细胞壁所含脂类少，肽聚糖多，经95%酒 精脱色时其细胞壁孔隙缩小到不易让结晶紫与碘形成的紫 色染料复合物洗出细胞壁外，而被染成紫色。
❖ 革兰氏阴性菌的细胞壁。其脂类含量较多，当以95%酒
精脱色时，脂类被溶去，使得细胞壁空隙变大，尽管95% 酒精处理能使肽聚糖空隙缩小，但因其肽聚糖含量较少， 细胞壁缩小有限，故让结晶紫与碘形成的紫色染料复合物 被95%酒精洗脱出细胞壁之外，而被后来红色的复染剂染 成红色。
制备方法与步骤：
• 1.准确称量 • 2.混合加热溶解调pH值至7.6 • 3.加热煮沸维持5分钟（注意补充体积） • 4.过滤 • 5.分装：4-5mL/管 • 5.灭菌15p 15-20min (103.41kpa 15磅压力） • 6.营养琼脂趁热摆斜面，完全凝固后，放置
37℃培养箱进行无菌检查，18-24小时后放4 ℃冰箱备用。
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1．美蓝染色法
在已固定好的抹片 上，滴加适量美蓝染色 液覆盖涂面，染色2～ 3 min， 水 洗 ， 吸 水 纸 轻压吸干或晾干和镜检， 结果菌体呈蓝色。
细菌标本片的制备及染色方法
2．革兰氏染色法
（1）在固定好的抹片上，滴加草酸 铵结晶紫染色液，作用1～ 3min，水洗。
细菌标本片的制备及染色方法
2．革兰氏染色液
（1）草酸铵结晶紫溶液 甲液：结晶紫2g、95%酒精20ml； 乙液：草酸铵0.8g、蒸馏水80ml 将结晶紫放入研钵中，加酒精研磨均匀制成甲液，然后将完全溶 解的乙液与甲液混合即成。
（2）卢戈氏碘液 碘1g、碘化钾2g、蒸馏水300ml。将碘化钾放入研钵 中，加入少量蒸馏水，使其溶解，再放入已磨散的碘片，徐徐加 水，同时充分磨匀，待碘片完全溶解后，把余下的蒸馏水倒入， 再装入瓶中。
细菌标本片的制备及染色方法
（三）常用染色液的配制
1．碱性美蓝染色液 2．革兰氏染色液 3．瑞氏染色液
细菌标本片的制备及染色方法
1．碱性美蓝染色液
• 甲液：美蓝0.3g、95%酒精30mL； • 乙液：0.01%苛性钾溶液100mL • 先配甲液，将美蓝放入研钵中，徐徐加入酒精
研磨均匀后，把甲、乙两液混合，过夜后用滤 纸过滤即成。新鲜配制的美蓝液染色不好，陈 旧的染色好。
细菌标本片的制备及染色方法
（3）固定涂片 干燥后，将涂面向上，在火焰上快速来回通过2～3次，其 温度以手背接触玻片底面感觉微烫手为宜。
细菌标本片的制备及染色方法
2．血液推片和组织抹片的制作
（1）血液推片的制作 取一张边缘整齐的载玻片，用其一端蘸取少许血液， 在另一张干净无油脂的载玻片上，以45°角度均匀地 推成一薄血涂片，以红细胞不重叠为宜。
（2）加革兰氏碘液，作用1～2min， 水洗。
（3）加95％酒精脱色约30s至1min， 水洗。
（4）加稀释石炭酸复红，复染30s左 右，水洗，吸干后镜检。
结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰 氏阴性菌呈红色。
细菌标本片的制备及染色方法
3．瑞氏染色法
细菌抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于涂片 上以固定标本，1～3min后，再滴加与染色液 等量的磷酸缓冲液或中性蒸馏水于玻片上，轻 轻摇晃使与染色液混和均匀，5min左右水洗， 干后镜检，结果菌体呈蓝色，组织细胞等物呈 其他颜色。
细菌标本片的制备及染色方法
方法步骤
（一）细菌标本片的制作 （二）常用的细菌染色方法 （三）常用染色液的配制
细菌标本片的制备及染色方法
（一）细菌标本片的制作
1．涂片标本的制作 （1）涂片 （2）干燥涂片 （3）固定涂片
2．血液推片和组织抹片的制作 （1）血液推片的制作 （2）组织抹片的制作
细菌标本片的制备及染色方法
（3）石炭酸复红稀释液 取碱性复红酒精饱和溶液（碱性复红10g溶于 95%酒精100ml中）1ml和5%石炭酸水溶液9ml混合，即为石炭酸 复红原液。再取原液10ml和90ml蒸馏水混合，即成石炭复红稀释 液。
细菌标本片的制备及染色方法
3．瑞氏染色液 • 取瑞氏染料0.1g，纯中性甘油1ml，在研钵中
细菌标本片的制备及染色方法
1．涂片标本的制作
（1）涂片 取清洁载玻片一块，用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中 央，再将接种环在火焰上灭菌，待冷后从固体培养基上挑 取少许菌落，置于玻片上的生理盐水中混均匀，并在玻片 上涂成直径约为1cm的涂面，要求薄而均匀。
细菌标本片的制备及染色方法
（2）干燥涂片 在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰上来回微 烤使其干燥。
技能训练5 细菌标本片的制备及染色方法
细菌标本片的制备及染色方法
实训目标
• 能利用不同的材料进行细菌标本片的制备 • 掌握常规的染色方法，并认识细菌的不同染色特性
细菌ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ本片的制备及染色方法
仪器材料
酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、美 蓝染色液、革兰氏染色液、瑞氏染色液、染色缸、 染色架、洗瓶、显微镜、香柏油、乙醇乙醚、擦镜 纸、细菌培养物（大肠杆菌、葡萄球菌等）、细菌 病料、无菌镊子和剪刀、特种铅笔等
细菌标本片的制备及染色方法
（2）组织抹片的制作 待检尸体经无菌手术切开胸腹腔后，用经火焰灭菌的 镊子夹起组织，用灭菌剪刀剪下小块组织，将组织切 面在载玻片上等距离轻压几下，使其留有组织切面的 压迹。
细菌标本片的制备及染色方法
（二）常用的细菌染色方法
1．美蓝染色法 2．革兰氏染色法 3．瑞氏染色法
混合研磨，再加入甲醇60ml，使其溶解，装 入中性瓶中过夜，次日过滤，盛入棕色瓶中， 保存于暗处。保存越久，染色越好。
细菌标本片的制备及染色方法
课后作业
1.写出实习报告； 2.掌握美兰染色的方法； 3.掌握革兰氏染色的方法
细菌标本片的制备及染色方法