关于生物制药组实训实习报告及心得体会

生物制药组实训实习报告

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目录

一、实训主要内容： (4)

二、试剂的配制、培养基的配制 (5)

1. 试剂的配制 (5)

2. 培养基的配制 (5)

3. 醋酸钠-醋酸缓冲液pH (6)

4. 1%可溶性淀粉溶液 (6)

三、实验前的准备 (6)

1. 灭菌 (6)

2. 23号菌种的培养 (8)

3. 固体平板培养基的制备 (9)

四、实验内容及操作 (10)

1. 接种培养 (10)

2. 活菌数检测 (10)

3. 酶活检测 (13)

4. 菌液浊度检测 (16)

5. 酶蛋白的提取 (17)

6. 细菌的染色和镜检 (18)

五、数据分析 (19)

1. 活菌数随培养时间的变化 (19)

2. 酶活力随培养时间的变化 (20)

3. 菌液浊度随培养时间的变化 (20)

4. pH对提取的酶蛋白的变化 (21)

六、实验总结 (22)

实训主要内容：

活菌数的检测、酶活检测、菌液浊度的检测、酶蛋白的提取

表-1

根据实训时间，列出下列表格，以便后续的实验

表格1

注：红色标记为未检测项目。

试剂的配制、培养基的配制

试剂的配制

表格2

由于这些母液上个班配的还没用完，所以也就没再配。

培养基的配制

表格3

表格4

醋酸钠-醋酸缓冲液pH

表格5

1%可溶性淀粉溶液

称取1.24g可溶性淀粉，用约15ml冷的蒸馏水充分溶解混匀，取约70ml沸腾的蒸馏水，将已经混匀的淀粉悬浮液倒入沸水中，边倒边用玻璃棒搅拌，使淀粉溶解。冷却后，用冷的蒸馏水定容到100ml，备用。

实验前的准备

灭菌

将配好的发酵培养基分装于15个规格为100ml锥形瓶，9ml/瓶

250ml锥形瓶+150ml蒸馏水5瓶

将配好的营养琼脂培养基分装于规格为250ml锥形瓶，2瓶

置于高压蒸汽灭菌锅121℃，20min灭菌

图0-1

图0-2

23号菌种的培养

取23号菌种在超净工作台内进行接种，100ul/瓶，共3瓶，供后续实验菌种的来源。置于摇床中培养30℃，100rmp/min。

图0-3

图0-4

固体平板培养基的制备

取灭好菌的营养琼脂培养基，在超净工作台里倒入平板中，大约15ml/个。供后续检测活菌数使用。

图0-5

图0-6

注意事项：在配制营养琼脂培养基时，要先加少量水进行溶解搅拌，再加热水进行充分溶解，最后煮沸使琼脂全部溶解，否则琼脂没有溶解就分装，灭菌后就出现上图现象，有的培养基太硬，有的太软。

实验内容及操作

接种培养

根据表2时间表进行接种培养，100ul/瓶，置于摇床30℃，100rmp/min培养。

图0-1

活菌数检测

根据表2时间表进行操作，取菌液100ul+900ul无菌水于EP管中进行连续梯度稀释，然后取100ul在平板

活菌数随培养时间变化表

时间（hr）稀释倍数菌数平均值

0 108 1 1×108

3 1070

9×106 1069

6 108 2 2×108

7.5 1067

8.5×106 107 1

12 10624

1.8×108 1079

10853

16 107127

5.2×1010 108230

109133

18 10933

2.0×1010 10873

21 109106

6.3×1010 108210

24 10823

1.615×1010 10930

27 未检测30 未检测

表0-1

图0-2

图0-3

图0-4

图0-5（为6h失败平板）

注意事项:菌液稀释倍数要合理，在进行用涂布棒涂布的时候，涂布棒在酒精灯上灼烧后一定要冷却，否则会烫死菌种。涂布要均匀，多来回涂几次，否则就成上图6h失败平板

酶活检测

计算公式：酶活力（U）={[（A-空白）-（B-空白）-（对照-空白）]×V标/t反应}×D（倍数值）×103

根据表2时间表进行对应的时间段酶活的检测，,按照下表进行操作

步骤试剂空白对照 A B

1 发酵液上清0ml 0ml 100ul 100ul

2 H2O 100ul 100ul 0ml 0ml

3 醋酸钠-醋酸缓冲液400ul

4 H2O 1ml 0ml 0ml 1ml

5 1%可溶性淀粉溶液0ml 1ml 1ml 0ml

6 室温放置反应5min 5min

7 立即加2MNaOH 2ml

8 DNS溶液2ml

9 100℃加热显色6-8min

10 冰水冷却3min

11 补水定容 4.5ml

12 540nm检测

表0-2

根据上表进行操作得到以下数据

酶活力随培养时间变化

培养时间（h）A值（平均值）B值空白对照酶活力

3 0.335 0.108 0.107 0.229 10.5

6 0.649 0.374 0.108 0.233 150

7.5 0.962 0.630 0.107 0.235 204

12 0.892 0.573 0.107 0.214 212

16 0.832 0.549 0.106 0.207 182

18 0.809 0.498 0.107 0.229 18.9

21 0.660 0.362 0.107 0.229 17.6

24 0.606 0.305 0.106 0.268 13.9

27 未检测

30 未检测

表0-3

图0-6