qs2632al阿拉伯呋喃糖苷酶试剂盒说明书
呋喃妥因检测卡说明书(完整版)
呋喃妥因快速检测试纸条使用说明书本产品用于快速检测水产(鱼、虾)组织中的呋喃妥因代谢物残留,整个检测过程需要2小时左右,适用于各类企业及检测机构。
本产品检测限为 1.0 μg/kg。
1、检测原理呋喃妥因代谢物快速检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理,样本中的呋喃妥因代谢物在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合,抑制了抗体和NC膜检测线上呋喃妥因代谢物-BSA偶联物的结合。
如果样本中呋喃妥因代谢物含量大于1.0 μg/kg,检测线T比质控线C浅或者T线不显色,结果为阳性。
反之,检测线T显色与质控线C线相当或者比C线深,结果为阴性。
2、产品组成3、样品收集及处理鱼、虾等水产收集于干净的容器或自封袋中;若不能及时送检,样本应该去除脂肪,用剪刀剪碎或者用绞肉机搅碎后,分装保存于-20℃下,忌反复冻融。
样本处理⑴取一定的组织(鱼、虾)去除脂肪后,用剪刀剪碎或者用绞肉机搅碎;⑵取2 g已处理待测样品于50 mL离心管中,依次加入4 mL去离子水,0.5 mL 1M盐酸,0.2 mL衍生化试剂,震荡混匀3分钟;⑶60℃水浴条件下孵育1小时;⑷取出后,依次加入5 mL提取剂,0.4 mL 1M氢氧化钠,1瓶萃取剂,震荡混匀1分钟;⑸4000转离心5分钟,取上层液3 mL至10 mL离心管中,于60 ℃下,利用氮气或空气将溶液吹干;⑹加入1 mL正己烷,震荡混匀1分钟,再移液器准确加入500 µL样品复溶液震荡混匀1分钟;⑺4000转离心1分钟(如果分层不明显可延长离心时间至5分钟)或静置至明显分层,下层液待测。
4、操作步骤以及结果判读⑴测试前将未开封的检测卡及待检样品溶液恢复至室温;⑵从原包装铝箔袋中取出检测卡和酶标孔,在半小时内使用;⑶用移液器吸取待检样品溶液100 μL于酶标孔,反复吹打至孔内红色物质完全溶解,等待反应5分钟;⑷将检测卡平放,吸取孔内所有溶液滴加到加样孔中,加样后开始计时;⑸反应5-8分钟根据示意图判断结果,其它时间判读无效;阴性结果: T线比C线深,或一样深,表示样品呋喃妥因代谢物浓度低于其灵敏度;阳性结果: T线比C线淡,表示样品呋喃妥因代谢物浓度高于其灵敏度;无效反应: 如果测试结果C线未出现,表示此试剂已失效。
植物 β-淀粉酶(β-amylase,β-AL)试剂盒说明书
货号:QS3402 规格:50管/24样植物β-淀粉酶(β-amylase,β-AL)试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:淀粉酶负责水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。
β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
测定原理:还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。
α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐热。
根据上述特性,钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。
自备实验用品和仪器:可见分光光度计、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:试剂一:50mL×1瓶,常温保存,若有黄色晶体析出,需90℃加热溶解后再用;试剂二:40mL×1瓶,4℃保存,若有沉淀析出,需70℃加热后再用。
粗酶液提取:组织:称取0.1~0.2g样本(建议称取约0.1g样本),加入1mL蒸馏水,研磨匀浆;将匀浆倒入离心管中,提取液在室温下放置提取15min,每5min振荡1次,使其充分提取;3000g,25℃离心10min,取上清液加蒸馏水定容至10 mL,摇匀,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液1mL,加入4mL蒸馏水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉酶总活力的测定。
血清(浆)等液体样本:(1)直接检测α-淀粉酶。
(2)吸取淀粉酶原液1mL,加入4mL 蒸馏水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉酶总活力的测定。
测定步骤:1、分光光度计预热30min以上,调节波长到540 nm,蒸馏水调零。
2、试剂一和试剂二40℃预热10min。
、A3和A4。
第1页,共2页酶活性计算:1、标准条件下测定回归曲线为y=3.7215x -0.1778; x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
2、α-淀粉酶活性(1)按照样本质量计算单位定义:每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
Lenti-Pac HIVqRT-PCR Titration Kits 产品说明书
1.IDENTIFICATION OF THE SUBSTRANCE/PREPARATION AND THECOMPANY/UNDERTAKINGPOSITION/INFORMATION ON INGREDIENTS3.HAZARDS IDENTIFICATIONMaterial Safety Data SheetRevision Date:February 23,2018Product code LT005,LT006Product name Lenti-Pac™HIV qRT-PCR Titration KitsContact manufacturer GeneCopoeia,Inc.9620Medical Center Drive,Suite 101Rockville,MD 20850USAPhone:301-762-0888Toll free:1-866-360-9531Fax:301-762-3888Chemical Name CAS-No Weight %Phenol108-95-230-60Guanidine isothiocyanate 593-84-015-40Ammonium thiocyanate 1762-95-47-13Glycerol56-81-540-70Contact with acids or bleach liberates toxic gases.DO NOT ADD acids or bleach to any liquid wastes containing this product.We recommend handling all chemicals with caution.GHS –Classification Signal Word DANGERHealth HazardsAcute oral toxicity Category 4Acute dermal toxicityCategory 4Acute Inhalation Toxicity -Vapors Category 4Skin corrosion/irritationCategory 1B Serious eye damage/eye irritationCategory 1Specific target organ systemic toxicity (single exposure)Category 3Specific target organ systemic toxicity(repeated exposure)Category3Mutagenicity Mutagenic category2Physical hazardsNot hazardousHazard StatementsH314-Causes severe skin burns and eye damageH341-Suspected of causing genetic defectsH373-May cause damage to organs through prolonged or repeated exposureH412-Harmful to aquatic life with long lasting effectsH302-Harmful if swallowedH312-Harmful in contact with skinH332-Harmful if inhaledH335-May cause respiratory irritationPrecautionary StatementsP301+P312-IF SWALLOWED:Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwellP304+P340-IF INHALED:Remove victim to fresh air and keep at rest in a position comfortable for breathingP301+P330+P331-IF SWALLOWED:rinse mouth.Do NOT induce vomitingP303+P361+P353-IF ON SKIN(or hair):Remove/Take off immediately all contaminated clothing.Rinse skin withwater/showerP305+P351+P338-IF IN EYES:Rinse cautiously with water for several minutes.Remove contact lenses,if present and easy to do.Continue rinsingP310-Immediately call a POISON CENTER or doctor/physicianP308+P313-IF exposed or concerned:Get medical advice/attentionP273-Avoid release to the environmentP280-Wear protective gloves/protective clothing/eye protection/face protectionPrinciple Routes of ExposurePotential Health EffectsEyes Causes burns.Risk of serious damage to eyes.Corrosive to the eyesand may cause severe damage including blindness.Skin Causes burns.Possible risk of irreversible effects.Harmful in contactwith skin.Irritating to skin and mucous membranes.Inhalation Harmful by inhalation.Ingestion Harmful if swallowed.Ingestion causes burns of the upper digestive andrespiratory tracts.Ingestion may cause gastrointestinal irritation,nausea,vomiting and diarrhea.Specific effectsCarcinogenic effects Phenol has been classified by the International Agency for Research onCancer(IARC)as not classifiable as to carcinogenicity to humans(Group3).Mutagenic effects Not ApplicableReproductive toxicity Not ApplicableSensitization Not ApplicableTarget Organ Effects SkinLungsLiverSpleenKidney4.FIRST AID MEASURES5.FIRE-FIGHTING MEASURES6.ACCIDENTAL RELEASE MEASURES7.HANDLING AND STORAGEHMISHealth 3*Chronic HazardFlammability 1ReactivitySkin contact Wash off immediately with soap and plenty of water while removing all contaminated clothes and shoes.Call a physician immediately.Eye contactIF IN EYES:Rinse cautiously with water for several minutes.Remove contact lenses,if present and easy to do.Continue rinsing.Rinseimmediately with plenty of water,also under the eyelids,for at least 15minutes.Call a physician immediately.Ingestion Call a physician or poison control center immediately.Rinse mouth.Do not induce vomiting without medical advice.Never give anything by mouth to an unconscious person.InhalationRemove to fresh air.Call a physician or poison control center immediately.Notes to physicianTreat symptomatically.Suitable extinguishing media Dry chemical.Carbon dioxide (CO2).Water spray.Foam.Special protective equipment for firefightersWear self-contained breathing apparatus and protective suit.Australia HazChem Code2XPersonal precautionsELIMINATE all ignition sources (no smoking,flares,sparks or flames in immediate area).Use personal protection equipment.Avoid contact with skin,eyes or clothing.Ensure adequate ventilation.Keep people away from and upwind of spill/leak.Evacuate personnel to safe areas.Methods for cleaning upPrevent product from entering drains.Soak up with inert absorbentmaterial.Neutralize spill with slaked lime,sodium bicarbonate or crushed limestone.Collect powdered material and deposit in sealed containers and dispose of phenol as hazardous waste.Isolate area and deny entry.Environmental precautionsPrevent further leakage or spillage if safe to do so.Prevent product from entering drains.Do not allow material to contaminate ground water system.See Section 12for more information8.EXPOSURE CONTROLS /PERSONAL PROTECTIONHandling Always wear recommended Personal Protective Equipment.Avoid contact with skin,eyes or clothing.Remove all sources of ignition.StorageKeep containers tightly closed in a cool,well-ventilated place.Keep away from heat,sparks,flame and other sources of ignition (i.e.,pilot lights,electric motors and static electricity).Protect from sunlight.Exposure limitsChemical name OSHA PELOSHA PEL (Ceiling)ACGIH OEL (TWA)ACGIH OEL (STEL)Phenol5ppm 19mg/m 3None 5ppm None Guanidine isothiocyanate None None None None Ammonium thiocyanate 5mg/m 3None None None Glycerol15mg/m 3None10mg/m 3NoneEngineering measures Use in a chemical fume hoodPersonal protective equipmentPersonal Protective Equipment requirements are dependent on the user institution's risk assessment and are specific to the risk assessment for each laboratory where this material may be used.Respiratory protection In case of insufficient ventilation wear suitable respiratory equipment RespiratorUp to 50ppmRecommendations,National Institute of Occupational Safety and Health,U.S.(APF =10)Any air-purifying half-mask respirator with organic vaporcartridge(s)in combination with an N95,R95,or P95filter.The following filters may also be used:N99,R99,P99,N100,R100,P100.(APF =10)Any supplied-air respirator Up to 125ppm:(APF =25)Any supplied-air respirator operated in a continuous-flow mode.(APF =25)Any powered air-purifying respirator with an organic vapor cartridge in combination with a high-efficiency particulate filter.Up to 250ppm:(APF =50)Any air-purifying full-facepiece respirator equipped with organic vapor cartridge(s)in combination with an N100,R100,or P100filter.(APF =50)Any air-purifying,full-facepiece respirator (gas mask)with a chin-style,front-or back-mounted organic vapor canister having an N100,R100,or P100filter.(APF =50)Any powered,air-purifying respirator with a tight-fitting facepiece and organic vapor cartridge(s)in combination with a high-efficiency particulate filter.(APF =50)Any self-contained breathing apparatus with a full facepiece.(APF =50)Any supplied-air respirator with a full facepiece.Emergency or planned entry into unknown concentrations or IDLH conditions:(APF =10,000)Any self-contained breathing apparatus that has a full facepiece and is operated in a pressure-demand or other positive-pressure mode.9.PHYSICAL AND CHEMICAL PROPERTIES10.STABILITY AND REACTIVITY11.TOXICOLOGICAL INFORMATION(APF =10,000)Any supplied-air respirator that has a full facepiece and is operated in a pressure-demand or other positive-pressure mode in combination with an auxiliary self-contained positive-pressure breathing apparatus.Escape:(APF =50)Any air-purifying,full-facepiece respirator (gas mask)with a chin-style,front-or back-mounted organic vapor canister having an N100,R100,or P100filter./Any appropriate escape-type,self-contained breathing apparatus.Hand protectionImpervious gloves.S24-Avoid contact with skin.S36-Wear suitable protective clothing.Eye protectionTight sealing safety goggles.Skin and body protection Impervious clothing.Hygiene measuresContaminated work clothing should not be allowed out of the workplace.Avoid contact with skin,eyes or clothing.Handle in accordance with good industrial hygiene and safety practice.Environmental exposure ControlsPrevent product from entering drains.General information FormLiquid.Appearance Red,maroon.OdorMedicinal,sweet,tar-like.Boiling point/range °C No data available °F No data available Melting point/range °C No data available °F No data available Flash point°C No data available °F No data available Autoignition temperature °C No data available °F No data availableOxidizing properties No information available Water solubilitySolubleStabilityStable under normal conditions.Materials to avoidStrong oxidizing agents.Strong acids.Isocyanates.Heat.Nitriles,Nitrides.Alkaline earth metals.Strong oxidizers,alkali metals and alkaline earth metals may cause fires or explosions.Hazardous decomposition Toxic gas.Sulphur oxides.Hydrogen cyanide (hydrocyanic acid).Carbon oxides,ProductsNitrogen Oxides.PolymerizationHazardous polymerization does not occur.Acute toxicityChemical name LD50(oral,rat/mouse)LD50(dermal,rat/rabbit)LC50(inhalation,rat/mouse)Phenol=317mg/kg (Rat)No data available =316mg/m3(Rat)Guanidine isothiocyanate571mg/kg2000mg/kg5.319mg/L (4H)12.ECOLOGICAL INFORMATIONAmmonium thiocyanate =500mg/kg (Rat)No data available No data available Glycerol =12600mg/kg (Rat)No data available No data availablePrinciple Routes of Exposure Potential Health Effects Eyes Causes burns.Risk of serious damage to eyes Corrosive to the eyes and may cause severe damage including blindness.Skin Causes burns.Possible risk of irreversible effects Harmful in contact with skin.Irritating to skin and mucous membranes.Inhalation Harmful by inhalationIngestionHarmful if swallowed Ingestion causes burns of the upper digestive and respiratory tracts Ingestion may cause gastrointestinal irritation,nausea,vomiting and diarrheaCarcinogenic effects Phenol has been classified by the International Agency for Research on Cancer (IARC)as not classifiable as to carcinogenicity to humans (Group 3).Mutagenic effects No information available.Reproductive toxicity No information available.SensitizationNo information available.Target organ effectsSkin.Lungs.Liver.Spleen.Kidney.EcotoxicityHarmful to aquatic organisms,may cause long-term adverse effects in the aquatic environment.Chronic aquatic toxicity Category 3MobilitySee log PowBiodegradation Inherently biodegradable Bioaccumulation No information availableChemical name Freshwater algae data Water flea data Freshwater fish species dataMicrotox dataLog Pow PhenolDesmodesmusDaphnia magna =316mg/m3(Rat)logPow1.subspicatus EC50187EC5047-279mg/L (72h) 4.24-10.7mg/L Pseudokirchneriella (48subcapitata EC50h)Daphnia 46.42mg/L (96h)magnaEC5010.2-15.5mg/L (48h)13.DISPOSAL CONSIDERATIONS14.TRANSPORT INFORMATION15.REGULATARY INFORMATIONGlycerolDaphnia magna EC50>500mg/L (24h)logPow1.76Dispose of contents/containers in accordance with local regulations.IATAProper shipping name Corrosive liquid,n.o.s.(guanidine thiocyanate-phenol solution).Hazard Class 8Subsidiary class None Packing group II UN-No 1760ERG Code153ComponentTSCA Phenol,108-95-2(30-60)Listed Guanidine isothiocyanate,593-84-0(15-40)Listed Ammonium thiocyanate 1762-95-4(7-13)Listed Glycerol,56-81-5(40-70)ListedUS Federal Regulations SARA 313This product contains the following toxic chemical(s)subject to the notification requirements of section 313of Title III of the Superfund Amendments and Reauthorization Act of 1986.This law requires certain manufacturers to report on annual emissions of specified chemicals and chemical categories.Please note that if you repackage,or otherwise redistribute,this product to industrial customers,a notice similar to this one should be sent to those customers:Chemical name CAS-No.Weight %SARA 313-Threshold values Phenol108-95-230-60 1.0Ammonium thiocyanate1762-95-47-131.0Clean Air Act,Section 112Hazardous Air Pollutants (HAPs)(see 40CFR 61)This product contains the following HAPs:Component CAS-No.Weight %HAPS data Phenol108-95-230-60PresentAmmonium thiocyanate1762-95-47-13Present (XCN where X=H or any16.OTHER INFORMATIONother group where a formal dissociation may occur.For example KCN or Ca[CN]2)US state regulations Chemical name Massachusetts -RTK New Jersey-RTK Pennsylvania-RTK Illinois-RTK Rhode Island-RTK PhenolListed Listed Listed Listed Listed Guanidine isothiocyanate -----Ammonium thiocyanate Listed -Listed Listed Listed GlycerolListed-Listed-ListedCalifornia Proposition 65This product does not contain any Proposition 65chemicals.WHMIS Hazard Class D1A -Very toxic materials E -Corrosive materialThis product has been classified in accordance with the hazard criteria of the Controlled Products Regulations (CPR)and the MSDS contains all the information required by the CPR.Reason for revision Not Applicable.SDS sections updated.For research use only."The above information was acquired by diligent search and/or investigation and the recommendations are based on prudent application of professional judgment.The information shall not be taken as being all inclusive and is to be used only as a guide.All materials and mixtures may present unknown hazards and should be used withcaution.Since the Company cannot control the actual methods,volumes,or conditions of use,the Company shall not be held liable for any damages or losses resulting from the handling or from contact with the product as described herein.THE INFORMATION IN THIS SDS DOES NOT CONSTITUTE A WARRENTY,EXPRESSED OR IMPLIED,INCLUDING ANY IMPLIED WARRANTY OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR ANY PARTICULAR PUPOSE"End of Safety Data Sheet。
呋喃西林检测试剂盒说明书
呋喃西林检测试剂盒说明书一、概要硝基呋喃类药物因有非常好的抗菌作用和药动力学的特性,曾经被广泛应用,作为禽类、水产和猪促生长的添加剂。
但在长时间的实验研究过程中发现,硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变,正因为如此才导致此类药物禁止在治疗和饲料中使用用来检测呋喃西林代谢物的最常用方法是LC-UV,LC-MS和LC-MS/MS。
酶联免疫方法结合了色谱技术,采用SEM衍生物的特异性抗体,具有很高的精确度和灵敏度,较低的操作技术要求和短暂的检测时间,检测样品量大等特点在检测中很好的表现出来。
本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品,能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被呋喃西林代谢物抗原,样品残留的呋喃西林代谢物和微孔条上预包被的抗原竞争抗呋喃西林代谢物抗体,加入酶标二抗后,经TMB底物显色,样品吸光度值与其残留物呋喃西林代谢物呈负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中呋喃西林代谢物的含量。
三、适用范围可定性、定量检测动物组织(鸡、猪),蜂蜜样品中的呋喃西林代谢物的残留量。
四、交叉反应率呋喃西林代谢物…………………………………… 100%呋喃它酮代谢物…………………………………小于 0.1%呋喃妥因代谢物…………………………………小于 0.1%呋喃唑酮代谢物………………………………………小于0.1%五、检测步骤测定前应须知:1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20~25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA 测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
操作步骤:1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
试剂盒使用说明书
大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
1使用目的:本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织(如鸡、牛肉和猪肉),药物、血清和尿样中大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)残留的定量检测。
2实验原理本试剂盒采用竞争ELISA方法,在微孔板包被有大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)偶联抗原,加入大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)标准品或样品,游离大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)与微孔条上预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)偶联抗原互相竞争抗大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)抗体酶标记物,用TMB底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在450nm波长下进行检测,吸光值与样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)含量成反比,通过标准曲线计算样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)的含量。
3试剂盒组成3.1预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)偶联抗原的可拆酶标板:1块(12孔×8条)。
3.2大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)标准品:6瓶(1ml/瓶),含量分别是:0ug/ml, 0.1ug/ml,0.3ug/ml,0.9ug/ml,2.7ug/ml,8.1ug/ml3.3抗大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)抗体酶结合物:1瓶(6ml)。
3.4显色液A:1瓶(6ml)。
3.5显色液B:1瓶(6ml)。
3.6终止液:1瓶(6ml),2M硫酸。
3.7样本稀释液:1瓶(10×,6ml),用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。
3.9说明书一份。
4需要而未提供的材料4.1设备4.1.1波长450nm酶标仪。
食品药品检验试剂盒说明书50 多项
【检测原理】胆碱酯酶催化显色剂显色,蔬菜水果中的有机磷及氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶活性起抑制作用,所以在渗滤卡上农药的浓度与反应结果颜色成反比,阴性结果呈现蓝色,阳性则为浅黄色。
【检测种类】水果、蔬菜【技术指标】检测下限:2mg/kg【操作步骤】1、试剂配制取出胆碱酯酶酶瓶,用2mL缓冲液充分溶解,制备成胆碱酯酶液;取出农残(有机磷)检测渗滤卡,用0.25mL吸管滴加一滴显色剂于中心白片上,晾干,制成显色卡;2、样品检测样品提取:称取0.5g待测物(叶菜取叶片、水果取皮等)于5mL离心管中,用1mL吸管加入2mL缓冲液,振摇2分钟,静置分层,上清为提取液;抑制反应:用0.25mL吸管取上述提取液滴加3滴于1.5mL离心管中,再用0.25mL吸管加入3滴胆碱酯酶液,混匀,室温反应15分钟;显色反应:用0.25mL吸管取上述抑制反应液滴加3滴于显色卡中,室温10分钟观察颜色,对照色卡,读取数值。
【注意事项】显色剂容易挥发,用完应尽快密封;由于酶的显色反应跟温度有很大的关系,当温度偏差过大时,应做阴性对照;阴性对照:用0.25mL吸管取3滴缓冲液于1.5mL离心管中,再用0.25mL吸管加入3滴胆碱酯酶液,混匀,用0.25mL吸管取3滴上述抑制反应液点于显色卡中(记录时间t1),对比色卡,当显色结果与色卡中阴性颜色相符时(记录时间t2),t2-t1为该次实验的显色反应时间,代替显色反应的10分钟观察颜色;【保存条件】将试剂盒中的胆碱酯酶粉置于冰箱冷冻保存(12个月),其他试剂置于冷藏即可;溶解后的胆碱酯酶液与试剂盒一起置于冰箱冷藏保存即可(胆碱酯酶液两周之内用完);若无冰箱,试剂盒于阴凉通风处保存,有效期2个月,溶解后的胆碱酯酶液置于常温1天酶活性变化不大,1天后建议不再使用。
【试剂盒装箱单】CT【简 介】氯氰菊酯、甲氰菊酯是常用的两种菊酯类农药,属中等毒类,本试剂盒采用竞争法免疫胶体金技术进行检测,加之简单的前处理,即可达到快速检测的目的。
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af)试剂盒说明书(改)
货号:QS2632 规格:50管/24样α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af)试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:α-L-Af 是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类,使细胞壁阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖不断解离,促进果胶的增溶和降解。
由于果实成熟过程中常常伴随着阿拉伯糖的丧失,该酶活性在果实成熟软化中的研究具有重大意义。
测定原理:α-L-Af分解对硝基酚阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算α-L-Af活性。
自备实验用品及仪器:可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入5mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体50mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。
15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:1、分光光度计预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
充分混匀,400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定-A对照。
BCA蛋白浓度测定试剂盒完整版
1•总共需要的WR的体积可以通过以下公式计算出来:
(标准液+未知液)X(平行数目)X(每个样品中加入的WR体积)=总共所需 的WR体积
例如:标准的试管程序有三个未知液,每个样品做两组重复:
(标准液9mL+未知液3mL)X(平行数目2)X(2mL)二总共所需的WR体积48mL注意:试管程序中每个样品管加2.0ml WR
4、冷却到室温
5、用酶标仪测量在562nm或接近562nm的读数
注意:1)这种方法中波长在540-590nm的范围内都能被成功的测量
2因为读板器使用的光线长度比分光光度计的比色皿要短,所以微型板程序需 要使用样品比例比较大的工作试剂去获得与标准试管程序相同的灵敏度。如果需 要高于562nm的测量,要将培养时间增加到2h.
大分子结构的蛋白质,肽键的数量和存在的四个特定氨基酸(半胱氨酸,胱氨酸,色 氨酸和酪氨酸)据说是与BCA形成颜色产物的原因。因此,蛋白浓度的测量通常要 参照标准的一个常见的蛋白质如牛血清白蛋白。一系列已知浓度的蛋白质稀释液 是为与之相近的未知蛋白质浓度测定准备的。因为每一个未知浓度的测定都需要 基于标准曲线。如果需要将一个未知蛋白精确定量,选择一个与未知蛋白特性相 似的标准蛋白是可取的。例如,当测定免疫球蛋白时牛血清丙种球蛋白可以被当 做标准蛋白。以下给出了两种检测过程:
光度就不会引进明显的误差。
6、所有的单个标准品与所测的样品重复在562nm测得的吸光度都要减去在562nm测得
的所有空白标准品的吸光度平均值。
微型板程序(样品:WR=1:8)
1、用移液管移取25ul的WR到每一个标准品与未知样品所在的微型板中
(worki ng ran ge=20-2000ug/ml)
α-淀粉酶(α-AL)活性检测试剂盒说明书
α-淀粉酶(α-AL )活性检测试剂盒说明书微量法注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0615规格:100T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体20 mL×1瓶常温保存试剂二液体5 mL×2瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2支2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制:1、试剂一:若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用;2、试剂二:临用前取1支试剂三加入1瓶试剂二中,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解,用不完的试剂2-8℃保存4周;3、标准品:10 mg 无水葡萄糖。
临用前加1 mL 蒸馏水,配成10 mg/mL 葡萄糖标准液,2-8℃保存两周。
产品说明:淀粉水解酶,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质,在540nm 有吸收峰;通过测定540nm 吸光度增加速率,计算淀粉酶活性。
α-AL 耐热,但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min 。
因此粗酶液经过70℃钝化15min ,就只有α-AL 能够催化淀粉水解。
Reducing Sugar3-Amino-5-Nitrosalicylate (540nm)注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)称取约0.1g 样本,加0.8mL 蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取15min ,每隔5min 振荡1次,使其充分提取;6000g ,室温离心10min ,吸取上清液并且加蒸馏水定容至10mL ,摇匀,即为淀粉酶原液。
呋喃妥因代谢物(AHD)ELISA检测试剂盒说明书
呋喃妥因代谢物(AHD)ELISA检测试剂盒说明书一、概要用来检测呋喃妥因代谢物的最常用方法是LC-UV,LC-MS和LC-MS/MS。
酶联免疫方法结合了色谱技术,采用AHD衍生物的特异性抗体,具有很高的精确度和灵敏度,较低的操作技术要求和短暂的检测时间,检测样本量大等特点在检测中很好的表现出来。
二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物的AHD经衍生化后和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃妥因代谢物的衍生物抗体,加入酶标二抗后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物AHD代谢物的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出样本中呋喃妥因代谢物的残留量。
三、适用范围可定性、定量检测动物组织、牛奶和蜂蜜中呋喃妥因代谢物的残留量。
四、交叉反应率呋喃妥因代谢物…………………………………………100%呋喃唑酮代谢物…………………………………小于%呋喃它酮代谢物…………………………………小于%硝基糠腙代谢物…………………小于%呋喃唑酮………………………………………………小于1%呋喃它酮………………………………………………小于1%呋喃妥因………………………………………………13%呋喃西林…………………………………………小于1%五、使用单位需自备的设备及试剂设备:┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置┅┅均质器┅┅振荡器┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅天平:感量┅┅刻度移液管:10ml┅┅洗耳球┅┅容量瓶:100ml、1L┅┅玻璃试管:10ml┅┅聚苯乙烯离心管:50ml┅┅微量移液器:单道20ml~200ml、100ml~1000ml 多道250ml试剂:┅┅乙酸乙酯(分析纯)┅┅正己烷(分析纯)┅┅三水合磷酸氢二钾(分析纯)┅┅甲醇(分析纯)┅┅二水合亚硝基铁氰化钠┅┅七水合硫酸锌(ZnSO4·7H2O)(分析纯)┅┅浓盐酸┅┅氢氧化钠(分析纯)┅┅去离子水六、提供的材料与试剂1、96孔酶标板×1块2、标准液×6瓶:0ppb,,,,,3、高浓度标准品:100ppb4、酶标二抗12ml……………………红色帽5、抗体工作液7ml……………………绿色帽6、底物液A液7ml……………………白色帽7、底物液B液7ml……………………红色帽8、终止液7ml……………………黄色帽9、20×浓缩洗涤液40ml………………………透明帽10、2×浓缩复溶液50ml………………………蓝色帽11、2-硝基苯甲醛……………………黑色帽七、溶液的配制配液1:衍生化试剂向装有2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加甲醇溶解定容至10ml。
1,3-二磷酸甘油酸ELISA检测试剂盒说明书
1,25-二羟基维生素D3检测试剂盒说明书上海西格生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用检测范围:1.5ng/mL~48ng/mL1,3-二磷酸甘油酸 elisa检测试剂盒主要用于定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其他相关生物液体中的含量。
特色服务:1,3-二磷酸甘油酸 ELISA检测试剂盒使用说明书免费代测可上门取样,可免费申领24T 免费试用装elisa试剂盒检测范围:人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪、其它动物细胞因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、自身抗体科研elisa检测试剂盒。
产品保存:2-8℃、有效期6个月,我司1,3-二磷酸甘油酸 ELISA检测试剂盒使用说明书均为最新批次,您可放心选购。
规格:48T/96T性状:液体运输方式:快递发货有效期:6个月品特点:灵敏性高,高效性,吸附均匀,吸附性好,回收利用率高,是一款可以让您放心选购的1,3-二磷酸甘油酸 ELISA检测试剂盒使用说明书产品。
使用范围:此产品供科研实验使用,不得用于临床。
用途:用于测定人血清、血浆、组织及相关液体样本中的含量或活性。
1,3-二磷酸甘油酸 ELISA检测试剂盒使用说明书特点1.专一性强。
抗原与抗体的免疫反应是专一反应,而免疫酶技术以免疫反应为基础,所检测的对象是抗原(或抗体),使用的抗体除标记了酶以外,与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。
2.灵敏度高。
由于抗体联结上了酶,因此,借助于酶与底物的显色反应,显示抗原与抗体的结合,大大提高了检测的灵敏性,使检测水平接近放射免疫测定法。
3.样品易保存。
经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定,因此有利于样品的保存。
4.结果易观察。
对检测结果即可用肉眼观察,又可用显微镜观察,也可以用分光光度计进行比色测定,还可用显微镜观察。
这是因为某些酶反应产物能使电子密度发生改变,从而引起被检测物的显示。
5.可以定量测定。
可溶性果胶含量试剂盒说明书(分光光度法)
货号: QS2635 规格:50管/24样可溶性果胶(WSP)含量试剂盒说明书可见分光光度法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。
果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,是许多高等植物细胞壁中含量最丰富的多糖成分,其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。
果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联,通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶,如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。
测定原理:利用酸溶液提取得到(WSP)可溶性果胶,采用咔唑比色法测定果胶含量。
果胶水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应,生成物质在530 nm处有最大吸收峰。
自备实验用品及仪器:可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:试剂一:液体50mL× 1瓶,4℃保存。
试剂二:液体50mL× 1瓶,4℃保存。
试剂三:标准液1mL× 1支,4℃保存。
试剂四:液体5 mL× 1瓶,4℃保存;样品的前处理:1、细胞壁的提取:取约0.3g样本,加入1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴20min,冷却至室温,4000g 25℃离心10min,弃上清。
沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡2min左右,4000g 25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1mL 试剂一(去除淀粉)浸泡15小时,4000g 25℃离心10min,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM)。
2、WSP的提取:称取烘干的CWM 3mg,加入1mL试剂二,充分匀浆。
8000g 4℃离心10min,取上清液待测。
10呋喃妥因快速检测试剂盒说明书
2010-01版呋喃妥因代谢物(AHD)快速检测试剂盒说明书一、原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的AHD,在微孔条上预包被上偶联抗原,利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的,样本中的AHD和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃妥因代谢物的衍生物抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样品中的AHD 含量与样品的吸光度值呈反比,与标准曲线比较即可得出呋喃妥因代谢物含量。
二、试剂盒技术指标:试剂盒灵敏度:0.05ppb样本检测下限:组织(鸡/鸭/猪/牛/羊/鱼/虾肉)—---——0.1ppb肝脏(鸡/鸭/猪/牛/羊肝脏)-------———0.1ppb 蜂蜜、牛奶、肠衣--------------------------—0.1ppb鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰,检测下限为0.15ppb交叉反应率:呋喃妥因代谢物———————————100% 呋喃唑酮代谢物———————————<0.1% 呋喃它酮代谢物———————————<0.1% 呋喃西林代谢物———————————<0.1% 回收率:组织、肝脏………………………………90%±15% 蜂蜜、牛奶、肠衣………………………80%±15%三、试剂盒组成1、微量测试孔:每条8孔,一板12条2、标准液X6瓶:(1ml/瓶)0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb3、酶标记物12m l…………………红色帽4、抗体工作液7m l……………………蓝色帽5、底物A液7m l……………………白色帽6、底物B液7m l……………………黑色帽7、终止液7 m l …………………黄色帽8、20X浓缩洗涤液40 m l…………………白色帽9、2X浓缩复溶液50 m l…………………透明帽10、衍生化试剂10ml………………………白色帽四、所用仪器、试剂具备的仪器:微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)微量移液器:单道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道250µl试剂:氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾(所有样本使用)亚硝基铁氰化钾(K2Fe(CN)5·NO·3H2O)、ZnSO4·7H2O(奶样专用)五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时,都必须注意:(a)本试剂盒所检测的组织样本包括:动物组织、禽类和水产组织。
试剂盒使用说明书
牛气肿疽(symptoinatic anthrax)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定牛血清,血浆及相关液体样本中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)水平。
用纯化的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入牛气肿疽(symptoinatic anthrax),再与HRP标记的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)浓度。
试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品:1800pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存样本处理及要求:1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Af)检测
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Af)检测
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af)属于半纤维素酶系,是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类,可以水解细胞壁中阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖,促进果胶的增溶和降解。
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶可诱导果实成熟,在果实软化中起着十分重要的作用,且其活性受乙烯的调节。
迪信泰检测平台采用生化法,可高效、精准的检测α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的活性变化。
此外,我们还提供其他糖代谢类检测服务,以满足您的不同需求。
生化法测定α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶样本要求:
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期:2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告,报告包括:
1. 实验步骤(中英文)
2. 相关参数(中英文)
3. 图片
4. 原始数据
5. α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性信息。
微生物阿拉伯糖苷酶(ADase)ELISA 试剂盒使用说明书
微生物阿拉伯糖苷酶(ADase)ELISA试剂盒(ELISA) 使用说明书⚫本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中微生物阿拉伯糖苷酶(ADase)的含量。
⚫有效期:6个月⚫保存条件:2-8℃⚫本试剂盒仅供科研使用,不得用于临床诊断实验原理实验试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被微生物阿拉伯糖苷酶(ADase)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的微生物阿拉伯糖苷酶(ADase)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1)血清操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后1000×g 离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2)血浆EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000×g 离心30 分钟去除颗粒。
3)细胞上清液1000×g 离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆将组织加入适量生理盐水捣碎。
1000×g 离心10 分钟,取上清液5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。
尽可能的不要使用溶血或高血脂血。
如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。
不要在37℃或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材1. 酶标仪(450nm)2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱4. 蒸馏水或去离子水试剂盒组成备注:1. 标准品浓度依次为:80、40、20、10、5、2.5 U/L2. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。
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货号:QS2632规格:50管/24样
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase,α
-L-Af)试剂盒说明书
可见分光亮度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
α-L-Af是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类,使细胞壁阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖不断解离,促进果胶的增溶和降解。
由于果实成熟过程中常常伴随着阿拉伯糖的丧失,该酶活性在果实成熟软化中的研究具有重大意义。
测定原理:
α-L-Af分解对硝基酚阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算α-L-Af活性。
自备用品:
可见分光亮度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入5mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体50mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104
个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);15000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,
加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。
15000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光亮度计预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
充分混匀,400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定-A对照。
每个测定管需设一个对照管。
α-L-Af活性计算:
标准条件下测定的回归方程为y=0.32x-0.0027;x为标准品浓度(nmol/mL),y为吸光值。
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-L-Af活力(nmol/h/mgprot)=[(ΔA+0.0027)÷0.32×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=62.5×(ΔA+0.0027)÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-L-Af活力(nmol/h/g鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.32×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=62.5×(ΔA+0.0027)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-L-Af活力(nmol/h/104cell)=[(ΔA+0.0027)÷0.32×V反总]÷(500×V样÷V样总÷T
=0.125×(ΔA+0.0027)
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;V反总:反应体系总体积,0.5mL;V样:加入反应体系中
样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;500:细胞或细
菌总数,500万;T:反应时间,0.5h。