两种防霉剂抑制黄曲霉菌及禾谷镰刀菌的生长和饲料防霉效果研究

２．１对禾谷镰刀菌（Ｆ．０７０５）的抑制作用（见表１）
将黄曲霉菌和禾谷镰刀菌分别划线接种到ＰＤＡ 斜面培养基七，２８ ｏＣ培养４８—７２ ｈ，待斜面长满霉菌 后，按相同方法划线接种到干净的ＰＤＡ斜【白ｆ培养基 上，２８℃培养４８～７２ ｈ，使其充分活化。将活化２代后
表１ 不同处理条件下４８ ｈ时禾谷镰刀菌ｒＦ．０７０５）的直径（ｍｍ）
饲料的防霉是从根本上解决霉菌毒素产生的有 效途径。除严格控制饲料水分。尽量缩短储藏期等措 施外，添加防霉剂是防止饲料霉变的重要措施之一。 目前，市场上存在的防霉剂主要有丙酸盐类、苯甲酸 及其盐、山梨酸及其盐、富马酸及其酯等。一般情况 下，丙酸盐和一些复合型防霉剂是首先考虑的品种。
万方数据
蓬。塑整堕兰
压力蒸汽灭菌器（ＹＸＱ—ＬＳ—Ｓ ｌＩ，上海生产）、平ＩＩＩＬ（直径 ４０℃，相对湿度８５％以上）培养，放置一定天数后检
９０ ｍｍ，上海五一仪器厂生产）、电子天平（感量０．０００ １ ｇ）、 测霉菌总数。本次试验在存放５、９和１３ ｄ后取样，并
冰箱、游标卡尺（精确度０．０２ ｍｍ，桂林生产）。
按照ＧＢ／ＴＩ ３０９２－－２００６方法测定霉菌总数１６１。
养的方式考察了两种防霉剂对黄曲霉菌和镰刀菌的 抑制效果，并且又以饲料为防霉抑菌试验基质，研究 了饲料破坏性试验条件下两种防霉剂的防霉效果。 ｌ材料与方法
理３个重复。
１．２．３杯碟法一防霉剂对黄曲霉菌的抑制作用 杯碟法测定防毒剂对黄曲霉菌的抑制作用：先将
两种防霉剂用火菌蒸馏水分别配制成０．１咖１的储
１，１试验材料
、较常用的防霉剂品种。
型防霉剂平板。用直径为６ ｍｍ的打孔器，接种禾谷
目前，饲料防霉剂防霉效果的评估没有图家或行 镰刀菌（Ｆ．０７０５）于已制备好的平皿中心上，２８℃培养
业标准，业内常用的评估方法有多种，主要是平皿抑 ４８ｈ，用游标卡尺测量禾谷镰刀菌（Ｆ．０７０５）的直径，每
菌法、杯碟法和饲料破坏性试验法。本研究以体外培 种防霉剂设５００ ｍｇ／ｌ和１ ０００ ｍ卯两个处理，每个处
ｌｅｓｓ ｔｏｔａｌ ｆｕｎｇｉ．Ｏｖｅｒａｌｌ，ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｍｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｓ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｏ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ
ｃａｌｃｉｕｍ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ｃａｌｃｉｕｍ ｍｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｍｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ； ｆｅｅｄ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｔｅｓｔｉｎｇ；ｃｙｌｉｎｄｅｒ ｐｌａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ
。 将两种防霉剂用灭菌蒸馏水分别配制成０．１ ｇ／ｍｌ
由表１可知，当ＰＤＡ培养基中两种防霉剂的浓
万方数据
鱼丝墨釜；亟壁堕窒型塑剑董塑奎董垄查坌堡翌董塑圭丝垄塑整堕壅塾墨堑壅
塑型堕墨ｉ
度均为５００ ｍｇ／ｌ时，４８ ｈ后，针对禾谷镰刀菌的直径， 两种防霉剂处理组与对照组相比均差异极显著（Ｐ＜ ０．０１），而丙酸钙复合型与高效复合型防霉剂相比差异 不显著（Ｐ＞０．０５）。当ＰＤＡ培养基中两种防霉剂的浓度 均为１ ０００ ｍｇ，ｌ时，４８ ｈ后，禾谷镰刀菌的直径与对 照组相比，丙酸钙复合型防霉剂与对照组相比差异不 显著（Ｐ＞０．０５），高效复合型防霉剂与对照组相比差异 极显著（Ｐ＜０．０１）。结果表明：与空白对照相比，两种防 霉剂对禾谷镰刀菌（Ｆ．０７０５）均有抑制作用，总体来看， 高效复合型防霉剂的抑制效果优于丙酸钙复合型。 ２．２对黄曲霉菌的抑制作用（见表２）
项目
堡茎堡堕堡型鲨！望
５００ｍｇ／ｌ
１ ０００ｍｅ，／ｌ
的黄曲霉菌和镰刀菌分别划线接种于ＰＤＡ平板上，
２８℃培养４８ ｈ，待菌落生长均匀，备用。 １．２．２平皿抑菌法——防霉剂对禾谷镰刀菌（Ｆ．０７０５） 的抑制作用
注：同列数据肩标ｌ｝ｌ不同小、大写’≯母表示差异显著（Ｐ＜Ｏ．０５） 和檄显著（Ｐ＜０．０１）。相同字母表示差异不显著（Ｐ＞Ｏ．０５）。下表同。
表３ 不同处理条件下饲料中霉菌总数（ｃ嗽）
婴旦 全！！型型 丙酸钙复合
型堕堡型
商效复合
犁防每刹
鎏生 ！坐！！Ｑ１ １ ｉｆ！！盟 ！！坐！！盟
Ｑ ：Ｑ：！Ｑ主兰：！！：堑：垄圭！：丝兰！ｉ：业主！：Ｑ！：
ｏｄｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ａｎｔｉ－ｆｕｎｇｕｓ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ Ｆ．０７０５ ａｎｄ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）ａｎｄ ｆｅｅｄ
ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｔｅｓｔｉｎｇ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ：Ｔｈｅ ｔｗｏ ｍｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｗｏｒｋｅｄ ｗｅｌｌ Ｏｆｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎ－
鱼丝叁釜！叠壁堕窒型塑型董塑壅堕垄查釜堡盈堕鲍圭益查塑盐堕茎垫墨堑窒
丙酸钙是酸性防霉剂，具有较广的抗菌谱，对霉菌、真 的储备液。往溶化后降温至６０℃的ＰＤＡ培养基中加
菌、酵母菌等都有一定的抑制作用，其毒性很低，是动 入一定浓度的丙酸钙复合型防霉剂，配制成含丙酸钙
物正常代谢的中间产物，各种动物均町使用，是饲料 复合型防霉剂的浓度为５００ ｍｇ，ｌ和ｌ ０００ ｍｇ，ｑ的
饲料的安全与卫生越来越受到人们的重视，防止 饲料霉变已成为饲料工业普遍关注的问题。据联合国 粮农组织（ＦＡＯ）估算，目前世界上至少有２５％的谷物 被霉菌毒素污染，每年所造成的经济损失高达数千亿 美元【１１。我国霉菌毒素的污染状况更是不容乐观，霉菌 毒素的污染率高达９０％，其中严重污染而应当禁用 的达１５％～２５％，在气候温湿的南方地区情况尤为严
黄曲霉菌均有抑制作用（除了丙酸钙复合型０．０２５咖１），
而且随着防霉剂浓度的增加，抑菌圈直径增大。高效 复合型防霉剂与丙酸钙复合型防霉剂相比，前者的抑 制效果明显优于后者。 ２．３饲料破坏性试验（见表３）
在试验第９和１３ ｄ采样时，两种防霉剂处理过 的饲料霉菌总数极显著低于空白对照组（Ｐ＜Ｏ．０１），而 且添加的防霉剂浓度越大，饲料中霉菌总数越少；其 中，高效复合型防霉剂的抑制效果优于－丙酸钙复合 型。但是在第５ ｄ采样时，丙酸钙复合型防霉剂处理 过的饲料中霉菌总数高于空白对照组，差异显著 （Ｐ＜Ｏ．０５）；高效复合型防霉剂处理过的饲料中霉菌 总数略微低于空白对照组，其中１．５ ｋｇ／ｔ浓度处理组 差异显著（Ｐ＜０．０５）。
Ｂａｏ ＨｏｎｇｄＵＯ，Ｗａｎｇ Ｒａｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｍａｉｎ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｉｌｄｅｗ ｐｒｏｏｆ ｂｅｔｗｅｅｎ
ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ｃａｌｃｉｕｍ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｍｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｔｗｏ ｍｅｔｈ·
１．１．３培养基
１．２．５数据处理
马铃薯—葡萄糖培养基ｆＰＤＡ帔常规方法制备１５Ｊ。高
所有试验数据采用平均数±标准差表示。采用
盐察氏培养基购自青岛海博生物技术有限公司，按其 ＳＰＳＳＩ ６．０软件对数据进行方差分析，Ｄｕｎｃａｎ，ｓ法进行
产品说明配制。
多重比较。
１．２方法
２结果与分析
１．２．１菌种活化
备液，然后冉稀释成不同浓度的标准上作液。制备孢子
１．１．１防霉剂和霉菌
数ｌ×１０６个／ｍｌ的黄曲霉菌菌悬液，取１００斗ｌ悬液涂
防霉剂共２种：丙酸钙复合型（主要成分：丙酸 ＰＤＡ平板，待平板晾干后，放置牛津杯，每个牛津杯加
钙）和高效复合型（主要成分：内酸、乙酸和苯甲酸 入２００ ｌｘｌ的防霉剂溶液。２８℃培养４８ ｈ，测量防霉剂
ｔｈｅ ｎｉｎｔｈ ａｎｄ ｔｈｉｒｔｅｅｎｔｈ ｄａｙｓ，ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｕｎｇｉ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｅｄ ｔｈａｔ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｔｈｅ ｍｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉ－
ｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０ １），ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｒｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｆｅｅｄ，ｔｈｅ
先制作好水分为１８％的肉鸡全价料，称取一定质
１｜１．２仪器、设备
量已制作好的饲料，按设计的比例添加防霉剂，混合
医用型洁净Ｔ作台（ＳＷ—ＣＪ—ＩＦ，苏州生产）、恒温 均匀，制成终浓度为１ ｋｇ／ｔ和１．５ ｋｇ／ｔ。加入１ ０００ ｍｌ
恒湿培养箱（ＢＰＳ一１００ＣＬ，常州生产）、全自动立式电热 烧杯中并用保鲜膜封好口，置恒温恒湿培养箱（温度
总数越少。总体来看，高效复合型防霉剂的抑制效果优于丙酸钙复合型。
关键词：丙酸钙复合型防霉剂；高效复合型防霉剂；饲料破坏试验；杯碟法
中图分类号：￥８１６．３２
文献标识码：Ａ
文章编号：１００１—９９１Ｘ（２０１１）０６—００５３—０３
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｉｌｄｅｗ ｐｒｏｏｆ ｏｎ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ ａｎｄ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ
ｅａｒｕｍ（Ｆ．０７０５）ａｎｄ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ，ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｒｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆ ｍｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ｔｈｅ ｍｏｒｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｗａｓ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｆｅｅｄ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｔｅｓｔｉｎｇ，ｉｎ
等），由宜兴市天石饲料有限公司提供。禾谷镰刀菌（ 的抑菌圈直径，每种防霉剂设３个浓度，分别为
Ｆ．０７０５）和黄曲霉菌分别由江苏省农科院食检所毒素 ０．０２５、０．０５、０．１０ ｇ／ｍｌ，每个处理３个重复。
与分子生物技术研究室和农业投入品质量安全研究 １．２．４饲料破坏性试验
室馈赠。肉鸡全价料由本实验室动物房提供。
包红朵，江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所， ２１００１４，南京市玄武区钟灵街５０号江苏省农业科学院综合大 楼１０１ １室。
王冉（通讯作者），单位及通讯地址同第一作者。 收稿日期：２０１０—１ｌ一２９
重口Ｉ。其中危害较大的霉菌毒素有黄曲霉毒素、玉米赤 霉烯酮（Ｆ２毒素）、呕吐毒素和单端孢霉烯酮ｏｒ２毒素）。 黄曲霉毒素由黄曲霉菌产生，黄曲霉毒素能引起肝坏 死，降低生产效率，减少牛奶的产量，导致先天性缺 陷、肿瘤以及抑制免疫系统，在各种霉菌毒素中，黄曲 霉毒素是毒性最强、危害最大的，它是黄曲霉菌的产 物１３】；Ｆ２毒素、呕吐毒素和他毒素均南镰刀菌产生， 也都具有强烈的毒性，对动物和人体危害极大［４１。
表２不同处理条件下防霉剂的抑菌圈直径ｆｍｍ）
币目
．！
鹜至自２
丙酸钙复合型防霉剂０
堕生型堕鏖！碰竺１ ２
Ｑ：！垄
旦：！！
Ｑ：！Ｑ
０．００
７．６７±０．４８ １２．３６±１．４９
妾塾垒盒型堕垄型
Ｑ ！兰：ｉ！圭ｊ：！：！！：！：圭！：：２垄：２ｊ：！：兰！
从表２可知，两种防霉剂在浓度＞１０．０２５＃ｍｌ时对
《旦塑工些》：至Ｑ！！垂曼丝堂篓鱼墅
塑塑堕苎．翌
两种防霉剂抑制黄曲霉菌ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ禾谷镰刀菌的生长 和饲米耳防霉效果研究．
包红朵王冉
摘要：研究的主要目的是评估并比较丙酸钙复合型和高效复合型防霉剂抑制黄曲霉菌及禾谷
镰刀茵的生长和饲料防霉效果。研究采用体外抑菌（禾谷镰刀菌Ｆ．０７０５和黄曲霉菌）试验和饲料破坏
性试验两种方法进行。结果表明：两种防霉剂对禾谷镰刀菌（Ｆ．０７０５）和黄曲霉菌均有抑制作用，而且， 随着防霉剂浓度的增大，其抑菌效果增强；从饲料破坏性试验来看：在第９ ｄ和１３ ｄ采样时，两种防霉 剂处理过的饲料霉菌总数极显著低于空白对照组（Ｐ＜０．０１），而且添加的防霉剂浓度越犬，饲料中霉茵
中最常用的一种防霉剂。复合型防霉剂指将两种或两 ＰＤＡ培养基，混匀后，随即倒平皿，这样就制成了丙酸
种以上不同的防霉剂配伍组合而成，抗菌谱广，应用 钙复合型防霉剂平板，浓度分别为５００ ｍｇＡ和１ ０００ ｍ鲫。
范围大，防霉效果好且用量小，使用方便，也是饲料中 同理制备浓度为５００ ｍｇ，ｑ和１ ０００ ｍｇ／１的高效复合