08基地班蛋白质与酶工程复习思考题
酶工程思考题(附答案)
酶工程思考题汇总第一章P251．何谓酶工程?试述其主要内容和任务.酶的生产，改性与应用的技术过程称为酶工程。
主要内容：微生物细胞发酵产酶，动植物细胞培养产酶，酶的提取与分离纯化，酶分子修饰，酶、细胞、原生质体固定化，酶非水相催化，酶定向进化，酶反应器和酶的应用等。
主要任务：经过预先设计，通过人工操作获得人们所需的酶，并通过各种方法使酶的催化特性得以改进，充分发挥其催化功能。
2．酶有哪些显著的催化特性？专一性强（绝对专一性——钥匙学说、相对专一性——诱导契合学说）、催化效率高、作用条件温和3．简述影响酶催化作用的主要因素.底物浓度、酶浓度、温度、pH、激活剂浓度、抑制剂浓度等诸多因素第二章P635．酶的生物合成有哪几种模式？生长偶联型（同步合成型、中期合成型）、部分生长偶联型（延续合成型）非生长偶联型（滞后合成型）7．提高酶产量的措施主要有哪些？a.添加诱导物（酶的作用底物、酶的催化反应物、作用底物的类似物）b.控制阻遏物的浓度c.添加表面活性剂d.添加产酶促进剂11．固定化微生物原生质体发酵产酶有何特点？1.提高产酶率2.可以反复使用或连续使用较长时间3.基因工程菌的质粒稳定，不易丢失4.发酵稳定性好5.缩短发酵周期，提高设备利用率6.产品容易分离纯化7.适用于胞外酶等细胞产物的生产第三章P843．植物细胞培养产酶有何特点？1.提高产率2.缩短周期3.易于管理，减轻劳动强度4.提高产品质量5.其他4．简述植物细胞培养产酶的工艺过程。
外植体细胞的获取细胞培养分离纯化产物6．动物细胞培养过程中要注意控制哪些工艺条件？1.培养基的组成成分2.培养基的配制3.温度的控制4.ph的控制5.渗透压的控制6.溶解氧的控制第四章P1351．细胞破碎的方法主要有哪些？各有何特点？机械破碎法：通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎（捣碎法，研磨法，匀浆法）物理破碎法：通过物理因素的作用（温度差破碎法，压力差破碎法，超声波破碎法）化学破碎法：通过化学试剂对细胞膜的作用（添加有机溶剂，添加表面活性剂）酶促破碎法：通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏（自溶法，外加酶制剂法）2．试述酶提取的主要方法。
蛋白质化学复习思考题.doc
一、蛋白质化学部分复习思考题一、判断题1、（A ）具有四级结构的蛋白质都是寡聚蛋白质。
2、（x ）溶液的pH值等于7吋，蛋口质不带电荷。
3、（ a ）蛋口质的三级结构主要是由它的氨基酸顺序决定的。
4、（ X ）各种氨基酸的等电点（pl）是它们所有可解离基团的算术平均值。
5、（X ）蛋白质的变性是蛋白质立体结构的破坏，因此常涉及到肽键的断裂。
6、（x ）蛋白质的四级结构指的是如何由多条肽链通过共价键连接成一个完整分子。
7、（X ）凡有相同氨基酸组成的蛋片质即有相同的空间结构。
8、（ A ）由于所有的a-氨基酸都能与即三酮反应，因此即三酮常用來作为氨基酸的显色剂。
二、单项选择题1、（b）组成蛋白质的元素主要有A.C、H、O、N、PB. C、H、O、N、S C・ C、H、0、P、S D.以上都不对2、（A ）下列氨基酸屮有乙醛酸反应的是______ oA. Trp B・ Arg C. Lys D・ His3、（C ）对蛋白质三级结构的形成影响最人。
A.氢键B.二硫键C.疏水键D.盐键4、（C ）苛三酮b辅氨酸反应时，在滤纸层析谱上呈现色。
A.蓝紫B.红C.黄D.绿5、（B ）下列氨基酸中有坂口反应的是oA. TrpB. ArgC. LysD. His6、（B ）蛋白质所形成的胶体颗粒，在下列哪种条件不下稳定_______ oA.溶液pH大于PIB.溶液pH等于PIC.溶液pH小于PID.溶液pH等于7.4（）7、（D ）蛋口质变性是由于_______ oA. 一级结构的改变B.辅基的脱落C.蛋口质分解D.空间结构的改变8、（B ）维持蛋白质分子a ■螺旋结构的化学键是______ oA.肽键B.肽链原了间的氢键C.侧链间的氢键盘D.二硫键和盐键A9、血清蛋白（PI=4.7）在下列哪种pH溶液中带正电荷？A. pH4.0B. pH5.0C. pH 6.0D. pH 8.0alO、盐析法沉淀蛋口质的原理是______ oA.中和电荷B.与蛋白质结合成不溶性蛋白盐C.降低蛋白质溶液的介电常数D.使蛋白质溶液成为P1C11、变性蛋白质的主耍特征是________ oA.不易被蛋口酶水解B.溶解度增加C.丧失原有生物活性D.颜色反应减弱B12、变性蛋口质最主要特征是原有牛•物活性的丧失，这是由于____ oA.蛋白质一级结构改变B.蛋白质空间结构改变C.蛋白质亚基的解聚D.蛋白质水解为氨基酸D13、将蛋白质溶液的PH值调到等电点时_____ oA.能使蛋口质的稳定性增加B.能使蛋口质表而的静电荷不变C.能使蛋口质表面的静电荷增加D.能时蛋口质稳定性降低，易于沉淀析出B14、可用于蛋白质多肽链N■末端分析的方法是____ oA.即三酣法B.二硝基氟苯法C.双缩尿法D.紫外吸收法D15、关于蛋白质三级结构的叙述，正确的是________ oA.稳定蛋口质三级结构最主要的键是氮键B.貝有三级结构的多肽链都有牛:物学活性C.具有三级结构的多肽链都无生物学活性D.指整条多肽链屮全部原子的空间排布E.每条具有三级结构的多肽链在多聚体蛋白质小称为亚基，所有亚基内均含有结构域A16、有关变性的错误描述为____________________ 。
10生物技术蛋白质与酶工程复习题与答案
一. 名词解释1．生物酶工程又称高级酶工程它是酶学与现代分子生物学技术相结合的产物。
2．蛋白质工程蛋白质工程就是运用蛋白质结构功能和分子遗传学知识，从改变或合成基因入手，定向地改造天然蛋白质或设计制造新的蛋白质。
3.多核糖体把细胞放在极其温和的条件下处理，就能得到几个到几十个核糖体在一条mRNA上结合起来的形态4.固定化酶水溶性酶经物理或化学方法处理后，成为不溶于水的但仍具有酶活性的一种酶的衍生物。
在催化反应中以固相状态作用于底物5.酶反应器以酶或固定化酶为催化剂进行酶促反应的装置。
6．酶工程又叫酶技术，是酶制剂的大规模生产和应用的技术7.生物传感器对生物物质敏感并将其浓度转换为电信号进行检测的仪器。
8. motif (模体)指的是蛋白质分子结构中介于二级结构与三级结构之间的一个结构层次，又称超二级结构9. domain功能域生物大分子中具有特异结构和独立功能的区域,特别指蛋白质中这样的区域10.PDB蛋白质数据库（Protein Data Bank,PDB）是一个生物大分子，11. DNA shuffling体外同源重组技术。
通过改变单个基因原有的核苷酸序列创造新基因，并赋予产物以新功能。
12.生物催化剂是指生物反指应过程中起催化作用的游离或固定化细胞各游离或固定化酶的总称13.必需基团有的基团既在结合中起作用，又在催化中起作用，所以常将活性部位的功能基团统称为必需基团(essential group)14.活性中心。
酶的活性中心是酶与底物结合并发挥其催化作用的部位。
15.有性PCR dna改组16.DNA改组通过改变单个基因原有的核苷酸序列创造新基因，并赋予产物以新功能。
17.免疫传感器偶联抗原/抗体分子的生物敏感膜与信号转换器组成的，基于抗原抗体特异性免疫反应的一种生物传感器。
18.易错PCR是从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应，使扩增得到的基因出现碱基配对错误，从而引起基因突变的技术过程。
蛋白质思考题总汇
蛋白质思考题总汇蛋白质化学思考题总汇绪论基因组，蛋白质组，功能基因组为什么从基因组到蛋白质组是一个十分复杂而漫长的过程？蛋白质一级结构1、各种氨基酸的三字母符合和单字母符合。
2、名词概念：同源蛋白质、趋异突变、趋同、变异、蛋白质家族、蛋白质超家族、蛋白质、亚家族、单位进化周期、中性突变、蛋白质的一级结构。
3、各种氨基酸的性质与蛋白质空间结构的关系.蛋白质的空间结构1、名词及符号：蛋白质构象、蛋白质二级结构、超二级结构、三级结构、四级结构、结构域、连接条带、无规卷曲、无序结构、α-螺旋、β-折叠、β-转角、EF-手、3.613螺旋、HTH、HLH、b-Zip、motif、Zn指、domain、2、稳定球蛋白构象有哪些的化学键.3、二级结构的类型有哪些？4、举例说明5种motif的结构特征。
蛋白质的分离纯化1.透析、超滤、盐溶、盐析、亲和层析、电泳。
2.如何理解分子筛分离pr的原理。
3.有机溶剂分级分离pr的基本原理。
4.据支持物不同，电泳可分为哪几种类型？5.常用的选择性吸附剂有哪几种？6.哪些物质可作用蛋白质亲和层析的配体？7.测定pr分子量有哪些方法？8.如何理解蛋白质电泳中的浓缩效应，电荷效应及分子筛效应。
9.聚焦法测定pr、pI的基本原理。
10.可用哪些方法来分要蛋白质的N-末端和C-末端AA。
蛋白质转运和修饰1、名词及符号：翻译同步转运、翻译后转运、信号肽、易位子、SRP、I、II型膜蛋白、内部信号序列、分子伴侣、hsp70、内体、靶向序列、靶向班块、网格蛋白、包被体、停靠蛋白、PDI、ARF、COP、内质网分拣信号（KDEL）、核定位信号（PKKKRKV）、过氧化体分拣信号（SKF）、线粒体基质信号（N-端15-35AA形成两亲a螺旋或b折叠）、溶酶体分拣信号（M6P）、泛蛋白。
2、蛋白质的修饰包括哪些内容。
3、决定蛋白质半衰期的因素及泛素化作用。
4、受体介导的内化的生物学意义。
5、简述翻译同步转运和翻译后转运的基本内容。
蛋白质工程思考题汇总.
蛋白质工程：通过对蛋白质己知结构和功能的了解，借助计算机辅助设计，利用基因定点诱变等技术，特异性地对蛋白质结构基因进行改造，产生具有新的特性的蛋白质的技术，并由此深入研究蛋白质的结构与功能的关系。
蛋白质工程的研究内容有哪些？答：利用己知蛋白质一级结构的信息作为应用研究；从混杂变异体库中筛选和选择具有一定结构——功能关系的蛋白质；定量蛋白质结构与功能关系的研究；根据己知结构——功能的关系人工改造蛋白质。
蛋白质工程的基本程序：举例说明蛋白质工程的应用？答：1、研究蛋白质结构与功能的关系；2、改变蛋白质的特性；3、生产蛋白质和多肽类活性物质（提高酶的产量和创建新型酶；设计和研制新型抗体；设计和研制多肽及蛋白质类药物）；4、设计合成全新蛋白质。
前胰岛素原如何变成胰岛素？答：人胰岛素初合成时是一条由110个氨基酸残基组成的前胰岛素原肽链，经内质网膜上的信号肽酶作用，剪切掉N一端24个氨基酸残基的信号队序列，形成含有86个氨基酸残基组成的胰岛素原，并在相应位置上形成3个二硫键。
当其在高尔基器包装成为颗粒时，再经胰蛋白酶和类羧肽酶B的催化，切除中间33个氨基酸残基的C肽后，才能转变成具有生物活性的胰岛素。
分子病：由于基因突变而导致蛋白质一级结构改变后表现出生理功能异常，使机体出现病态现象，叫～～酶的空间结构与催化功能的关系如何？P17基因克隆的基本程序：①制备目的基因；②连接目的基因与载体形成重组体(重组子)；③将重组体转入宿主细胞；④重组体的筛选和鉴定；⑤重组体的扩增和表达。
定点诱变(site—directed mutagenesis)：在体外通过碱基取代、插入或缺失的方法，使基因DNA序列中任何一个特定的碱基发生改变。
试述M13DNA寡核苷酸诱变的过程。
答：1、正链DNA的合成；2、突变引物的合成；3、异源双链DNA分子的制备；4、闭环异源双链DNA分子的富集和转化；5、突变体的筛选；6、突变基因的鉴定。
08基地班蛋白质与酶工程复习思考题
蛋白质工程与酶工程复习思考题（08基地班整理，答案仅供参考）第一部分蛋白质工程1.怎样理解蛋白质工程？以蛋白质的结构和功能为基础，通过基因修饰或基因合成而改造现存蛋白质或组建新型蛋白质的现代生物技术。
蛋白质工程正在形成以改造现有蛋白质和制造新型蛋白质为中心的第二代遗传工程。
2.肽键是什么？氨基酸之间脱水后形成的键为肽键，也为酰胺键3.一级结构与空间构象、功能之间的关系？蛋白质的一级结构(primary structure)指它的蛋白质分子中各个氨基酸残基的排列顺序。
蛋白质的一级结构决定了空间构象，空间构象决定了蛋白质的生物学功能，参与功能部位的残基或处于特定构象关键部位的残基对蛋白质的生物学功能往往起定性作用；一级结构相似的蛋白质，其折叠后的空间构象以及功能往往相似，一级结构的变化引起功能的变化。
4.天然蛋白质中主要的二级结构的类型有哪些？蛋白质的二级结构：指蛋白质多肽链本身的折叠与盘绕方式,。
类型包括：α—螺旋、β—折叠、β—转角、自由回转等。
5.常见氨基酸的结构通式，20种常见氨基酸中有无不符合此通式的氨基酸？除脯氨酸外，脯氨酸(Pro)的侧链R-基与主链N原子共价结合，形成一个环状的亚氨基酸，其他均具有如下结构通式。
R|H2N－C－C00H|H6.什么是变性、复性？变性：天然蛋白质因受到物理和化学的因素影响，使蛋白质严格的空间结构受到破坏，（但不包括肽键的裂解），从而引起蛋白质若干理化性质和生物学性质的改变，这种现象称为蛋白质变性作用。
复性：变性的蛋白质恢复其天然活性的现象称为复性7.常见的氢键发生在哪些基团间？氢键: 由同一条肽链内每个氨基酸残基的两个肽键衍生而来，即每个氨基酸残基的N－H 与前面每隔3个氨基酸残基的C=O形成的。
8.常见氨基酸的旋光性如何？除甘氨酸外，都具有旋光性。
从蛋白质水解得到的α--氨基酸均为L--型氨基酸9.分子伴侣定义及其功能？分子伴侣：是进化上十分保守的蛋白质家族，广泛存在于多种生物体内，其主要作用是与新生肽或部分折叠的蛋白质的疏水表面结合，加速其折叠或组装成天然构象的进程，并防止其相互聚集和错误折叠。
酶工程思考题有答案
一、什么是生物工程？简述现代生物工程的体系组成。
生物工程（B i oe n g i n e e ri ng ）又称生物技术或生物工艺学，是20 世纪70 年代发展起来的一门新的综合性应用科学,是基于分子生物学和细胞生物学的新兴技术领域。
通常把生物技术分为发酵工程、酶工程、基因工程、细胞工程四个分科，它们相互依存，相互促进。
其中，酶工程是生物工程的重要组成成分。
二、什么是酶工程？研究酶与酶工程的意义？酶工程是随着酶学研究迅速发展，特别是酶的应用推广使酶学与工程学相互渗透结合，发展而成的新的技术科学，是酶学、微生物学的基本原理与化学工程有机结合而产生的边缘科学技术。
它是从应用的目的出发研究酶，是在一定生物反应装置中利用酶的催化性质，将相应原料转化为有用物质的技术。
酶工程包括下列主要内容（酶的产生酶的制备酶和细胞固定化酶分子改造有机介质中的酶反应酶反应器抗体酶酶传感器酶技术应用）酶与酶工程研究的重要意义:1研究酶的理化性质及其作用机理，尤其是从酶分子水平去探讨酶与生命活动、代谢调节、疾病、生长发育的关系，具有重大科学意义。
2酶是分子生物学研究的重要工具，限制性内切酶H in d Ⅱ的发现使核酸序列测定有了突破，促进了DN A 重组技术的诞生，推动了基因工程的发展3酶的高效率、专一性及不需要高温高压或强酸强碱的反应条件，对普通的化学催化反应产生了决定性的飞跃。
它丰富充实了现代化学中的催化理论4酶在工、农、医各方面都应用已久。
现在，从与人们生活休戚相关的衣食住行到各行各业的高技术革命，几乎都与酶有关。
三、酶作为生物催化剂的显著特点是什么？影响酶活性的因素有哪些？催化效率高；高专一性；易失活；调节性。
（1．酶浓度的调节 2. 激素调节 3. 共价修饰调节 4. 限制性蛋白水解作用与酶活力调控 5. 抑制剂的调节 6. 反馈调节 7. 金属离子和其他小分子化合物的调节）？除[E]、[S]外，外界因素：温度、pH、激活剂、抑制剂？四、解释典型的（米氏）酶动力学曲线，K m、K s、V max和k cat的定义是什么？说明这些常数之间的关系？K m：反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。
蛋白质和酶工程复习材料
2012-2013上《蛋白质工程与酶工程》复习题一、蛋白质工程部分1.何为肽键？一个氨基酸的α氨基与另一个氨基酸的α羧基缩合脱去一分子水，可以形成一个共价酰胺键或称肽键。
2.超二级结构的定义。
（刘佳）超二级结构(supersecondary structure) ：是指若干相邻的二级结构中的构象单元彼此相互作用，形成有规则的，在空间上能辨认的二级结构组合体，通常有βαβ，βββ，αα，ββ。
3.二硫键的形成。
（刘佳）二硫键：由肽链中相应部位上两个半胱氨酸残基脱氢连接而成的4.天然蛋白质中主要的二级结构有哪些类型。
天然蛋白质中主要的二级结构包括α—螺旋、β—折叠、回折、环肽链、无规则卷曲等。
5.维持蛋白质三级结构的主要作用力：疏水作用力6.蛋白质变性。
蛋白质变性：天然蛋白质因受到物理和化学的因素影响，使蛋白质严格的空间结构受到破坏，（但不包括肽键的裂解），从而引起蛋白质若干理化性质和生物学性质的改变，这种现象称为蛋白质变性作用。
7.蛋白质按照形状、结构及溶解度分为哪几类？纤维状蛋白质（如胶原蛋白、角蛋白）、球状蛋白（如酶类）、膜蛋白（膜内、膜锚定蛋白）。
8.在设计转角时常选择的残基是哪些？Pro-Asn残基对。
P53（鸿秋）9.设计α螺旋时，其电荷应如何分布。
P63（鸿秋）带正电的氨基酸残基靠近C端，带负点的残基靠近N端。
10.设计α螺旋时，采用哪些氨基酸能使螺旋终结。
P63（鸿秋）Pro、Gly中断α螺旋11.何为定点突变。
定点突变是依据酶蛋白的一级结构及编码序列，并根据蛋白质空间结构知识来设计突变位点来引入变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。
12.蛋白质化学修饰的定义。
（刘佳）蛋白质的化学修饰：通过活性基团的引入或去除使蛋白质化学(一级)结构发生改变的过程。
13.目前常用的体外翻译系统有哪些？（侯宇）1）兔网织红细胞系统2）麦胚提取物系统3）原核体外翻译系统(E．Coli S30 )（补充：体外翻译系统又称无细胞蛋白质合成系统，是一种相对胞内表达系统而言的开放表达体系。
蛋白质和酶思考题
1. 培养基包括哪五大要素？ 水、碳源、氮源、无机盐、生长因子
2. 酶生物合成模式有哪几种，各有什么特点，其示意图是怎样的？ (1)同步和成型（生长偶联型）：其生物合成伴随着细胞的生长而开始，在细胞进入旺盛生
长期时。酶大量生成，当细胞生长进入平衡期后，酶的合成随着停止。 特点：酶的生物合成可以诱导，不受分解代谢物阻遏和反应产物阻遏；当除去诱导物或细胞 进入平衡期后，酶的合成立即停止；酶所对应的 mRNA 很不稳定。
（4）负染 28. 酶的竞争性抑制剂的动力学特点有哪些？
I 与 S 分子结构相似 b、 Vmax 不变，表观 Km 增大；c、抑制程度取决于 I 与 E 的亲和 力，以及[I]和[S] 的相对浓度比例。 29. 表达蛋白质组学与差异蛋白质组学的概念。
表达蛋白质组学：即把细胞、组织中的蛋白，建立蛋白定量表达图谱，或扫描 EST 图， 试图比较细胞在不同生理或病理条件下蛋白质表达的异同，对相关蛋白质进行分类和鉴定。
（1）考马斯亮兰（Coomassie stain） 考马斯亮蓝检测范围 30-100ng，灵敏度较低，但染色过程简单，所需试剂少，操作简 便，无毒性，染色后背景及对比度好，与下游质谱兼容，线性程度好。胶体考马斯亮蓝染色 的检测灵敏度为 8-10ng，但染色时间较长（24-48 小时），染色过程给下游质谱检测带来较 多不便。 （2）银染（Silver Stain ） 银染的检测灵敏度很高，可达到 200pg，但其线性很差。普通的银染过程中因醛类的特 异反应，而与下游质谱不兼容。快速银染法，可与下游质谱兼容，但其检测灵敏度较低，并 伴有很深的背景干扰。 （3）荧光染色（SYPRO Ruby protein gel stain）
33. 双水相萃取的概念及原理。 双水相萃取就是利用样品中各组分的在两种互不相容的双水相中液层中分配系数的不
生物化学复习思考题答案08级
生物化学复习思考题一、是非题1. 一种氨基酸在水溶液中或固体状态时都是以两性离子形式存在的。
对2. 亮氨酸的非极性比丙氨酸大。
对，由侧链基团决定3. 肽键能自由旋转。
错，肽键有部分双键性质4. 蛋白质表面氢原子之间形成氢键。
错，氢键一般保藏在蛋白质的非极性内部5. 从热力学上讲，蛋白质最稳定的构象是最低自由能时的结构。
对6. 用凝胶过滤柱层析分离蛋白质时总是分子量小的先下来，分子量大的后下来。
错，相反7. 变性后的蛋白质分子量发生改变。
错，只是高级结构改变一级结构不变8. 同工酶是一组功能与结构相同的酶。
功能相同但结构不同9. 酶分子中形成活性中心的氨基酸残基在一级结构上位置并不相近，而在空间结构上却处于相近位置。
对10. Km值随着酶浓度的变化而变化。
错11. 酶的最适温度是酶的特征常数。
错，不是酶的特性常数12. 核苷中碱基和糖的连接一般是C——C连接的糖苷键。
错，C-N连接13. 在DNA变性过程中，总是G——C对丰富区先融解分开，形成小泡。
错，是A-T对先分开14. 核酸变性时，紫外吸收值明显增加。
对，增色效应15. tRNA上的反密码子与mRNA上相应的密码子是一样的。
错，是互补配对的16. 双链DNA中的每条链的（G+C）%含量与双链的（G+C）%含量相等。
对17. 对于生物体来说，核酸不是它的主要能源分子。
对，核酸是信息分子18. 降解代谢首先是将复杂的大分子化合物分解为小分子化合物。
对19. 磷酸己糖旁路能产生A TP，所以可以代替三羧酸循环，作为生物体供能的主要途径。
错，其主要功能是产生NADPH和5-磷酸核糖20. 酶的竞争性抑制剂可增加Km值而不影响Vm。
对21. 在糖的有氧氧化中，只有一步属于底物磷酸化。
错，三步22. 糖的有氧氧化是在线粒体中进行的。
错，胞液和线粒体23. 只有偶数碳原子的脂肪酸才能在氧化降解时产生乙酰CoA。
错，奇数的也行24. 在有解偶链联剂存在时，从电子传递中产生的能量将以热的形式被散失。
2008级《酶工程》复习大纲
2008级生物技术专业《酶工程》复习大纲试题题型：成对名词解释，判断题，填空题，简答题，论述题，实验设计题。
A、B卷第一章酶工程基础一、名词解释酶，酶工程；转换数，催化周期；酶活力，比活力；酶活国际单位IU，催量kat。
二、问答题1、酶催化的特点有哪些？2、影响酶催化作用的因素有哪些？3、试述米氏方程和米氏常数K m的意义。
第二章酶的发酵工程一、名词解释组成酶，诱导酶；协同诱导，顺序诱导；终产物阻遏，分解代谢物阻遏；葡萄糖效应。
二、问答题1、常见的产酶微生物有哪些？2、对产酶菌种有哪些要求？3、从微生物产酶的上中游阶段调控来分析，可通过哪些措施来提高产酶量？4、结合酶生物合成的四种模式，试述如何提高酶的合成量。
5、如果要筛选酸性蛋白酶高产菌株，请制定筛选方案（策略）。
第三章酶的分离工程一、名词解释盐析，盐溶；双水相，反胶束；超滤，透析。
二、问答题1、试述机械、物理、化学和生物酶法破碎细胞的优缺点（可采用表格归类总结）。
2、酶的提取方法有哪些？在酶的提取过程中应注意哪些问题？3、评价酶分离纯化方法优劣的指标有哪些，各自能反映什么问题？4、试述盐析、等电点和有机溶剂沉淀的原理及各自的优缺点（可采用表格归类总结）。
5、试述凝胶层析、离子交换层析和亲和层析各自的分离原理及操作特性。
6、现在分离得到一株脂肪酶高产菌株，经鉴定为黑曲霉。
利用所学知识，试设计一套从黑曲霉发酵液中分离纯化脂肪酶的实验方案。
已知，黑曲霉所产脂肪酶为胞外酶。
第四章固定化酶与细胞一、名词解释固定化酶，固定化细胞；构象效应，屏蔽效应；微扰效应，分配效应；外扩散限制，内扩散限制。
二、问答题1、固定化酶具有什么优点？2、试述常见固定化酶的方法、原理及其优缺点（可采用表格归类总结）。
3、评价固定化酶固定效果的参数有哪些？4、固定化酶活力降低的可能原因有哪些？5、固定化对酶反应体系产生了哪些影响（效应）？6、固定化酶的表观米氏常数K m’受哪些因素的影响？第五章化学酶工程一、名词解释酶分子改造，酶分子修饰；模拟酶，肽酶；抗体酶，印迹酶。
酶工程思考题汇总
酶工程思考题第一章绪论1、酶工程的主要任务是什么？2、简述酶工程的主要内容。
3、简述影响酶催化作用的因素。
4、简述酶活力测定步骤。
5、为什么要对酶的特性进行改良？如何改良？6、两大类酶分类与命名的基础是什么？分类与命名的原则是否相同？7、酶的比活力、酶的转换数与催化周期、酶结合效率与活力回收率、相对酶活力这些概念分别有什么作用？第二章微生物发酵产酶1、简述用于酶的生产的细胞应具备的条件。
2、原核生物酶生物合成调节控制模式的实质分别是什么？在酶的发酵生产中如何运用？3、在DNA分子中，与酶的生物合成有密切关系的基因是什么？它们有什么特点和作用？4、在酶的发酵生产中，为什么应尽量控制溶氧速度等于或稍高于耗氧速度？5、在酶的发酵生产中，如何提高酶产量？6、在酶的发酵生产中，为什么延续合成型是最理想的合成模式？对于其它合成模式的酶，如何使它们接近延续合成型？7、什么是生长和产酶动力学？二者的基本动力学方程是什么？8、绘出微生物发酵产酶的一般工艺流程图。
9、在碳源的选择和使用上，如何注意酶生物合成的调节作用？第三章动植物细胞培养产酶1、简述植物细胞的特性。
2、简述植物细胞培养的特点。
3、简述动物细胞的特性。
4、简述动物细胞培养的特点。
第四章酶的提取与分离纯化1、为什么要对细胞进行破碎？如何破碎？2、简述影响酶提的主要因素。
3、简述沉淀分离的主要方法和原理。
4、简述影响离心分离的主要因素。
5、简述层析分离的主要方法和原理。
6、在离子交换层析中，为什么要对离子交换剂进行处理？如何处理？7、在电泳分离中，颗粒的泳动速度受到哪些因素的影响？第五章酶分子修饰1、在限定位点进行修饰的方法有（）。
2、能探酶活性中心位置的方法有（）。
3、既是修饰方法，又是固定化方法有（）。
4、不改变酶的组成单位及其基团的修饰方法有（）。
5、采用定点突变技术的修饰方法有（）。
6、只适用于酶分子中含有金属离子的修饰方法有（）。
7、目前应用最广泛的修饰方法有（）。
酶工程思考题汇总
酶工程思考题第一章绪论1、酶工程的主要任务是什么？2、简述酶工程的主要内容。
3、简述影响酶催化作用的因素。
4、简述酶活力测定步骤。
5、为什么要对酶的特性进行改良？如何改良？6、两大类酶分类与命名的基础是什么？分类与命名的原则是否相同？7、酶的比活力、酶的转换数与催化周期、酶结合效率与活力回收率、相对酶活力这些概念分别有什么作用？第二章微生物发酵产酶1、简述用于酶的生产的细胞应具备的条件。
2、原核生物酶生物合成调节控制模式的实质分别是什么？在酶的发酵生产中如何运用？3、在DNA分子中，与酶的生物合成有密切关系的基因是什么？它们有什么特点和作用？4、在酶的发酵生产中，为什么应尽量控制溶氧速度等于或稍高于耗氧速度？5、在酶的发酵生产中，如何提高酶产量？6、在酶的发酵生产中，为什么延续合成型是最理想的合成模式？对于其它合成模式的酶，如何使它们接近延续合成型？7、什么是生长和产酶动力学？二者的基本动力学方程是什么？8、绘出微生物发酵产酶的一般工艺流程图。
9、在碳源的选择和使用上，如何注意酶生物合成的调节作用？第三章动植物细胞培养产酶1、简述植物细胞的特性。
2、简述植物细胞培养的特点。
3、简述动物细胞的特性。
4、简述动物细胞培养的特点。
第四章酶的提取与分离纯化1、为什么要对细胞进行破碎？如何破碎？2、简述影响酶提的主要因素。
3、简述沉淀分离的主要方法和原理。
4、简述影响离心分离的主要因素。
5、简述层析分离的主要方法和原理。
6、在离子交换层析中，为什么要对离子交换剂进行处理？如何处理？7、在电泳分离中，颗粒的泳动速度受到哪些因素的影响？第五章酶分子修饰1、在限定位点进行修饰的方法有（）。
2、能探酶活性中心位置的方法有（）。
3、既是修饰方法，又是固定化方法有（）。
4、不改变酶的组成单位及其基团的修饰方法有（）。
5、采用定点突变技术的修饰方法有（）。
6、只适用于酶分子中含有金属离子的修饰方法有（）。
7、目前应用最广泛的修饰方法有（）。
蛋白质与酶工程复习题
3.蛋白质的化学修饰：凡通过活性基团的引入或除去，而使蛋白质一级结构发生改变的过 程
4.基因融合技术：是将不同的基因连接起来从而表达具有复合功能的融合蛋白
5.报告基因：是指一组编码易被检测的蛋白质或酶的基因，将其与目的基因融合表达后， 可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。
6.蛋白质芯片：是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱分析，研究蛋
白质与蛋白质的相互作用，甚至DNA-蛋白质、RNA-蛋白质的相互作用，筛选药物作
用的蛋白靶点等。
7•噬菌体展示技术：是一种基因表达产物和亲和选择相结合的技术，以改构的噬菌体为载 体，把待选基因片段定向插入噬菌体外壳蛋白质基因区，使外源多肽或蛋白质表达并展示于
27蛋白质变性： 天然蛋白质分子受到某些物理因素或化学因素的影响时，会引起蛋白质天
然构象的破坏，导致生物活性的降低或完全丧失。
28蛋白质复性：当变性因素去除后，变性蛋白又可以恢复到天然构象。
29分子伴侣： 是一类相互之间有关系的蛋白， 它们的功能是帮助其他含多肽结构的物质在 体内进行非共价健的组装和卸装， 但不是这些结构在发挥其正常生物学功能的永久组成成分
4简述大肠杆菌表达外源基因的优势与不足。 优势：全基因组测序，遗传背景清楚；基因克隆表达系统成熟完善；繁殖迅速、培养简单、
操作方便、遗传稳定；被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物。劣势：缺乏对真核生物
蛋白质的复性功能； 缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统； 内源性蛋白酶降解空间构象不 正确的异源蛋白；细胞质内含有种类繁多的内毒素。
3．蛋白质侧链上的巯基在进行烷基化修饰时，常用的烷基化试剂是：（）
蛋白质思考题答案
蛋白质思考题及答案1.鱼肉是否适合冷冻保藏？为什么？答：不适合。
因为鱼蛋白是以疏水相互作用为主要稳定键力的蛋白质，疏水相互作用在低温下不稳定，所以冷冻会使鱼蛋白变性，导致鱼蛋白的持水力下降，使鱼肉变干、变硬，韧性增加。
2.简单叙述高温短时灭菌（HTST）的原理。
答：普通的化学反应，温度每提高10℃，反应速度提高2-3倍。
而蛋白质当加热温度在变性温度以上时，每提高10℃，变性速度提高600倍。
所以采用高温短时灭菌，由于加热时间很短，不会损害食品中的营养物质，但是却可以使蛋白质变性，可以杀灭食品中的大部分微生物以及酶类。
3.肉制品中加入聚磷酸盐有何作用？答：肉制品中加入聚磷酸盐有助于改变肉中的蛋白质与水之间的作用，提高肉的保水性，使肉的口感变嫩。
4.食用牛肉是否越新鲜越好？为什么？答：不是。
刚屠宰的牛肉风味物质没有形成；僵直期的牛肉，由于pH值接近于肌肉中蛋白质的等电点，此时蛋白质的持水力最差，导致肉的持水性、嫩度下降。
所以，此时的牛肉是不适宜食用的，僵直后期的牛肉才适宜食用。
5.形成蛋白质凝胶的途径有哪些？并举例说明。
答：加热，蛋白。
加热后冷却，皮冻。
加热并加入二价金属离子，豆腐。
不加热经酶部分水解或调整pH值，干酪。
6.小麦粉为何适于制作面包？答：面筋蛋白对于面团的形成起着决定性作用。
因为：(1)面筋蛋白的可离解氨基酸含量低，使面筋蛋白质不溶于中性水溶液。
(2) 面筋中含有约30％非极性氨基酸，这些疏水性氨基酸残基能通过分子间疏水相互作用，形成蛋白质聚集体，增加面团的内聚力，形成粘着性，并能结合脂类物质和其它非极性物质。
(3)面筋蛋白富含谷氨酰胺( 33％以上)和含羟基的氨基酸，因而易形成氢键，使得面筋蛋白具有较好的吸水能力（面筋蛋白吸水量为干蛋白质的180-200%）和粘着性质。
(4)半胱氨酸和胱氨酸约占面筋蛋白总量的2％～3％，可形成许多二硫键，这有利于蛋白质分子在面团中的紧密连接，使其具有韧性。
蛋白质思考题答案
蛋白质思考题答案《蛋白质》思考题二、判断题1、蛋白质主要是由C、H、O和N四种元素组成。
√2、蛋白质元素组成的特点是含氮量比较接近，平均为6．25%。
3、氨基酸有D型和L型两种构型，故组成蛋白质的氨基酸也有D 型和L型。
4、丙氨酸和苯丙氨酸各自都有一个氨基和一个羧基，所以它们的等电点是相同的。
5、组成蛋白质的所有氨基酸都含有手性碳原子。
６、维持蛋白质二级结构的主要次级键是二硫键。
７、组成蛋白质的氨基酸只有20种。
8、所有α-氨基酸都与茚三酮发生反应呈蓝紫色。
9、蛋白质的四级结构是指各亚基间以共价键相连聚合而成,有一定空间结构的聚合体。
10、蛋白质的分子结构决定它的生物学活性。
√11、蛋白质都具有四级结构。
12、蛋白质的等电点可以有很多个，而等离子点只有一个。
√13、蛋白质分子净电荷为零时的溶液pH值是该蛋白质的等电点。
√14、人体体液中很多蛋白质的等电点在pH=5、0左右，所以这些蛋白质在体液中主要以负离子形式存在。
√15、分子量相同的蛋白质在电场中泳动的速度也相同。
16、蛋白质溶液稳定的主要因素是蛋白质分子表面可以形成水化膜，并在偏离等电点时带有相同电荷。
√17、用透析方法可以分离提纯蛋白质，其原理是蛋白质分子可以透过半透膜。
18、蛋白质都能发生双缩脲反应. √19、蛋白质变性后会沉淀，沉淀的蛋白质也一定已变性。
20、食物蛋白经加热变性后，一级结构被破坏，肽键断裂，故而更易被人体所吸收。
三、填空题1、组成蛋白质的编码氨基酸主要有20 种，它们除甘氨酸外都是L 型α-氨基酸。
其中酸性氨基酸有 Glu 和 Asp ，碱性氨基酸有 Lys 、Arg 和 His 。
2、测得某生物样品含蛋白质12、5g该样品中含氮 2 g。
3、组成蛋白质的氨基酸中含有巯基的氨基酸是 Cys 。
4、肽键是蛋白质一级结构的主键，维持蛋白质空间结构的副键有离子键、氢键、范德华力、疏水键、二硫键。
5、蛋白质二级结构主要有α- 螺旋和β- 折叠两种形状，维持其稳定结构的副键是氢键。
蛋白质与酶的重点知识及其习题 (1)
生化重点知识及其习题（部分难题）：一．氨基酸与蛋白质1、构成蛋白质的基本单位是2、蛋白质在酸、碱或酶的作用下，可逐步降解为氨基酸，组成蛋白质的氨基酸常见的有20种，成千上万的不同蛋白质实际上就是氨基酸的种类、数目及排列顺序不同。
3、构成蛋白质的20种氨基酸均为α—氨基酸，每个氨基酸的α—碳原子上都连接一个羧基和一个氨基。
20种氨基酸结构的差别就在于它们的R基团结构的不同（会写结构通式）。
4、根据20种氨基酸侧链R基团的极性，可将其分为四大类：非极性R基氨基酸（8种）；不带电荷的极性R基氨基酸（7种），带负电荷的R基氨基酸（2种）；带正电荷的R基氨基酸（3种）。
5、氨基酸的性质：①氨基酸的两性解离性质及等电点（由于氨基酸含有酸性的羧基和碱性的氨基，所以既是酸又是碱，是两性电解质。
有些氨基酸的侧链还含有可解离的基团，其带电状况取决于它们的解离常数—pk值。
由于不同氨基酸所带的可解离基团不同，所以等电点不同。
氨基酸在水溶液中是以兼性离子状态—偶极离子存在的，在不同的PH溶液中带不同的电荷。
）②氨基酸的立体异构（除甘氨酸外，其他氨基酸都有不对称碳原子，所以具有D—型和L—型两种构型，具有旋光性。
天然蛋白质中存在的氨基酸都是L—型。
）③氨基酸的紫外吸收特性：酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸具有紫外吸收特性，在280nm处有最大吸收值。
大多数蛋白质都具有这些氨基酸，所以蛋白质在280nm处也有特征吸收，这是紫外分光光度法定量测定蛋白质的基础。
④氨基酸的化学性质：较重要的化学反应有：茚三酮反应，除脯氨酸外，所有的α—氨基酸都能与茚三酮发生颜色反应，生成蓝紫色化合物，脯氨酸与茚三酮生成黄色化合物；α—氨基酸与2,4—二硝基氟苯作用；与苯异硫氰酸酯作用。
6、肽：肽、二肽的概念。
寡肽——少于10个氨基酸的肽；多肽——由10个以上氨基酸组成的肽。
7、肽的重要性质：含有两个以上肽键的化合物具有双缩脲反应。
多肽含有多个肽键，因此具有强烈的双缩脲反应。
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蛋白质工程与酶工程复习思考题（08基地班整理，答案仅供参考）第一部分蛋白质工程1.怎样理解蛋白质工程？以蛋白质的结构和功能为基础，通过基因修饰或基因合成而改造现存蛋白质或组建新型蛋白质的现代生物技术。
蛋白质工程正在形成以改造现有蛋白质和制造新型蛋白质为中心的第二代遗传工程。
2.肽键是什么？氨基酸之间脱水后形成的键为肽键，也为酰胺键3.一级结构与空间构象、功能之间的关系？蛋白质的一级结构(primary structure)指它的蛋白质分子中各个氨基酸残基的排列顺序。
蛋白质的一级结构决定了空间构象，空间构象决定了蛋白质的生物学功能，参与功能部位的残基或处于特定构象关键部位的残基对蛋白质的生物学功能往往起定性作用；一级结构相似的蛋白质，其折叠后的空间构象以及功能往往相似，一级结构的变化引起功能的变化。
4.天然蛋白质中主要的二级结构的类型有哪些？蛋白质的二级结构：指蛋白质多肽链本身的折叠与盘绕方式,。
类型包括：α—螺旋、β—折叠、β—转角、自由回转等。
5.常见氨基酸的结构通式，20种常见氨基酸中有无不符合此通式的氨基酸？除脯氨酸外，脯氨酸(Pro)的侧链R-基与主链N原子共价结合，形成一个环状的亚氨基酸，其他均具有如下结构通式。
R|H2N－C－C00H|H6.什么是变性、复性？变性：天然蛋白质因受到物理和化学的因素影响，使蛋白质严格的空间结构受到破坏，（但不包括肽键的裂解），从而引起蛋白质若干理化性质和生物学性质的改变，这种现象称为蛋白质变性作用。
复性：变性的蛋白质恢复其天然活性的现象称为复性7.常见的氢键发生在哪些基团间？氢键: 由同一条肽链内每个氨基酸残基的两个肽键衍生而来，即每个氨基酸残基的N－H 与前面每隔3个氨基酸残基的C=O形成的。
8.常见氨基酸的旋光性如何？除甘氨酸外，都具有旋光性。
从蛋白质水解得到的α--氨基酸均为L--型氨基酸9.分子伴侣定义及其功能？分子伴侣：是进化上十分保守的蛋白质家族，广泛存在于多种生物体内，其主要作用是与新生肽或部分折叠的蛋白质的疏水表面结合，加速其折叠或组装成天然构象的进程，并防止其相互聚集和错误折叠。
10.维持蛋白质空间构象的作用力有哪些？一级结构：肽键、二硫键（都属于共价键）二级结构：氢键（主链上—C=O—和N—H之间形成）三、四级结构：二硫键、次级键（氢键疏水键、疏水键、离子键、华力、配位键）11.设计的蛋白质二级结构如果是连续α螺旋时，要注意什么？设计α螺旋时，应选择象Leu、Glu等易于形成α螺旋的残基；12.维持蛋白质二级结构的主要作用力是什么？二级结构：氢键（主链上—C=O—和N—H之间形成）13.血红蛋白的结构与功能。
血红蛋白由四个亚基构成，分别为两个α亚基和两个β亚基，每个亚基由一条肽链和一个血红素分子构成。
血红蛋白一级结构变化而引起镰刀型贫血病。
血红蛋白的载氧气过程具有变构效应。
功能：血红蛋白的一级结构变化而引起镰刀型贫血病14.进行蛋白质分子设计时，需要选择哪种类型的氨基酸用作核心？(1)设计α螺旋时，应选择象Leu、Glu等易于形成α螺旋的残基；(2)设计全β结构时，应选择Val、Ile等易于形成β折叠片的残基；(3)而在设计转角时常选择Pro-Asn残基对。
（Pro、Gly中断α螺旋，Glu中断β折叠）15.蛋白质分子设计的分类？(1)定点突变或化学修饰法(2)拼接组装设计法(3)从头设计全新蛋白质16.17.亲和标记是什么？亲和标记：借助亲和作用对目的分子进行标记的方法，多用于对蛋白质(如酶、抗体等)的标记。
亲和性标记试剂是具有化学反应性的蛋白质分子的底物或配体的类似物，能与天然底物或配体竞争蛋白质分子的结合位点，这类试剂具有高度的位点专一性。
17.制造突变的主要分子生物学方法、原理？（1）定点突变：定点突变技术可以随心所欲地在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段。
几种寡核苷酸介导的基因突变方法：①Kunkel 突变法利用Kunkel 法以M13噬菌体DNA为载体进行寡核苷酸介导的位点特异性突变②基于抗生素抗性“回复”的突变方法③基于去除特定限制酶切位点的突变（2）蛋白质的体外分子定向进化①易错PCR（Error prone PCR）：通过改变PCR反应条件，如降低一种dNTP的量（降至5%-10%）、以dITP来代替被减少的dNTP、增加Mn2+和Mg2+的浓度或使用低保真度的DNA聚合酶等，使碱基在一定程度上随机错配而引入多点突变。
②DNA 搅乱重组（DNA shuffling）：将来源不同但功能相同的一组同源基因，用核酸酶Ⅰ消化成随机片段，由这些随机片段组成一个文库，使之互为引物和模板进行PCR扩增，当一个基因拷贝片段作为另一基因拷贝的引物时，引起模板互换，重组因而发生，导入体内后，选择正突变体作为新一轮的体外重组。
18.蛋白质分子中容易进行反应的侧链基团有哪些？巯基、氨基和羧基特别容易产生有用的取代。
19.内含肽的定义。
内含肽是一个蛋白质前体中的多肽序列，可以催化自身从蛋白质前体中断裂，使两侧的蛋白质外显子连接成成熟的蛋白质。
20.表达载体的基本构成。
（１）复制起始点（２）选择性基因（３）强的、可诱导的启动子（４）强的转录终止序列（５）核糖体结合位点（６）合适的多克隆位点21.常用的蛋白质表达系统及优缺点。
（1）细菌表达系统培养方法简单、增殖快、生产成本低，但缺乏真核细胞特有的加工后处理，外源蛋白大量表达容易形成包涵体，而且在菌体中表达的外源蛋白，在原核细胞中不稳定，易被菌体蛋白酶破坏。
（2）酵母表达系统既具有原核细胞的增殖快、操作简单、成本低等优点，又可以象其他真核细胞一样完成对蛋白质转录和翻译后的修饰。
但它的蛋白水解酶类，可降解异体蛋白质，使产品产量降低。
（3）昆虫表达系统优点是能较高水平地表达不同动物来源的基因，能够有效地进行蛋白质翻译后的加工。
主要缺点是不能连续合成重组蛋白，因为重组病毒感染昆虫细胞或昆虫幼虫4-5天后，细胞就裂解，幼虫即死亡。
（4）哺乳动物细胞是生产哺乳动物蛋白质最好的场所，其表达真核基因比其他几种表达系统更优越，能对蛋白质进行各种类型的加工和修饰，还能表达有功能的膜蛋白及分泌性蛋白。
其缺点是组织细胞培养的技术要求高，培养和筛选细胞株的周期长，成本较高。
22.何谓报告分子？融合蛋白报告分子：将易于检测的蛋白质与目的分子融合表达，可显示目标分子的存在和定位，广泛应用于启动子分析、监控转基因及其表达、细胞的信号转导与药物的筛选，如绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein, GFP）23.测定蛋白质空间结构的主要方法？（1）X射线晶体衍射技术：要求蛋白质是晶体存在状态，而对一些柔性的、结构复杂的生物大分子蛋白质来说，比较难以得到所需的晶体结构。
（2）核磁共振技术：能测出溶液状态下分子量较小蛋白质的结构，但对分子量较大的蛋白质的数据处理显得比较复杂。
（3）现代光谱技术（4）三维电镜衍射技术（5）动力学全精研究技术24.在测定蛋白质结构时，核磁共振技术NMR法的特点有哪些？NMR可以方便地在溶液中研究分子结构并且是唯一可以使试样不经受任何破坏的结构分析方法。
NMR的非破坏性使得NMR谱图可以确定完整生物大分子中某成分的存在和浓度从而与X-Ray晶体衍射互为补充.缺点：分辨率不高。
能测出溶液状态下分子量较小蛋白质的结构，但对分子量较大的蛋白质的数据处理显得比较复杂。
25.世界上第一个用化学方法人工合成的蛋白质是什么？牛胰岛素26.蛋白质组的概念？一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的蛋白质称为蛋白质组.27.去污（垢）剂的作用？去垢剂用来溶解经过离液剂处理而暴露蛋白质的疏水基团，（常用的去垢剂有离子去污剂SDS、非离子去污剂Triton X-100和NP-40、两性离子去垢剂CHAPS、OBG等，其中CHAPS 应用最普遍）。
28.蛋白质进行质谱分析(MS)的简要过程？离子源轰击样品→带电荷的碎片离子→电场加速(zeU)→获得动能(mv2)→磁场分离→检测器记录其中，z为电荷数，e为电子电荷，U为加速电压，m为碎片质量，v为电子运动速度。
29.蛋白质的常用染色方法有哪些？考马斯亮兰（Coomassie stain）银染（Silver Stain ）荧光染色（SYPRO Ruby protein gel stain）负染30.离子交换层析的原理是什么？离子交换层析的原理：样品中待分离的溶质离子，与固定相上所结合的离子交换，不同的溶质离子与离子交换剂上离子化的基团的亲和力和结合条件不同，洗脱液流过时，样品中的离子按结合力的弱强先后洗脱，达到分离的目的。
蛋白质是由氨基酸聚合形成的聚合物，所以蛋白质也存在等电点（pI），蛋白质在溶液中带电状况同氨基酸相同，取决于所处溶液的pH 值。
当pI < pH时，蛋白质带净负电荷；而当pI > pH时，蛋白质带净正电荷。
阴离子交换剂本身带正电荷，阳离子交换剂本身带负电荷，因此蛋白质可以用阳离子交换剂或阴离子交换剂进行离子交换层析。
31.盐析的定义。
盐析：蛋白质在高浓度中性盐溶液中会沉淀析出，常用硫酸铵进行沉淀。
32.蛋白质分离纯化的一般步骤。
（一）材料制备1、选材2、破碎3、混合物的分离（二）粗分级盐析、有机溶剂分级沉淀、超速离心法、等电点沉淀法、透析——按照分子大小进行分离.分离取决于透析袋截留的分子量、超滤——除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质（三）细分级凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、电泳法33.分子筛层析（凝胶层析）分离纯化蛋白质的原理？凝胶层析原理：（1）分子量大的物质不能进入凝胶粒子内部，随洗脱液从凝胶粒子之间的空隙挤落下来，所以大分子物质迁移速度快；（2）小分子物质要通过凝胶网孔进入凝胶粒子内部，所以小分子物质迁移速度慢。
34.溶液pH值与蛋白质等电点的关系？等电点（pI）：蛋白质在溶液中带电状况同氨基酸相同，取决于所处溶液的pH 值。
当pI < pH时，蛋白质带净负电荷；而当pI > pH时，蛋白质带净正电荷。
35.圆二色谱（CD）的原理是什么？圆二色谱是利用不对称分子对左、右圆偏振光吸光率的不同来分析蛋白质的结构。
研究稀溶液中蛋白质结构的一种简单、快速而又较准确的方法。
36.双向电泳的第一向、第二向各是什么，分别根据什么原理？第一向：电聚焦电泳（IEF）根据蛋白质等电点的不同，将蛋白质加到含有不同pH值的两性电解质的聚丙烯酰胺凝胶中，蛋白质样品在此凝胶中移动到与其等电点相同的pH 梯度处后净电荷为零，在凝胶中不再移动，也就是相同等电点的蛋白质聚焦在相同pH梯度处，从而把不同等电点的蛋白质分开。
第二向：变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），根据分子量大小对蛋白进行分离。