可溶性淀粉合成酶试剂盒使用说明
糖化酶(Glucoamylase) 试剂盒说明书
货号:MS2625 规格:100管/48样糖化酶(Glucoamylase) 试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:糖化酶,即葡萄糖淀粉酶(EC3.2.1.3),又称γ-淀粉酶,是一种外切型糖苷酶,它从淀粉的非还原性末端水解α-1,4糖苷键和α-1,6糖苷键,将淀粉完全水解为葡萄糖,因此广泛的应用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸,甘油,淀粉糖等工业中,是我国重要的工业酶制剂之一。
测定原理:糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖,与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色化合物,在540nm 处有最大光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比,可测定计算得糖化酶的活力。
自备实验用品及仪器:天平、低温离心机、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
酶液提取:1.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
3.培养液或其它液体:直接检测。
酶活性计算公式:标准曲线:y = 0.2164x - 0.0182,R2 = 0.9992第1页,共3页a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下1. 按照蛋白含量计算酶活性定义:在40℃,pH4.6条件下,每毫克蛋白每分钟分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
MEGAZYME直链淀粉试剂盒说明书
前言:谷类淀粉的许多特性决定其最终用途,这些取决于直链淀粉/支链淀粉的比率。
这些特性包括糊化和凝胶化,溶解度,抗性淀粉的形成以及整颗大米的烹饪和构造特性。
因此,淀粉中直链淀粉含量的测定是淀粉加工的一个重要的质量参数。
最常用的测定谷物淀粉中直链淀粉含量的方法是利用电势,电流测定或直链淀粉的碘结合能力比色测定直链淀粉-碘色合配合物。
然而,这些方法具有不确定性。
支链淀粉-碘复合物也可以形成,这样降低了利用非比色法测定的游离碘离子的浓度,并且用比色法测量时,该复合物可能和直链淀粉-碘复合物吸收相同波长的光。
这种复合物致使直链淀粉的测定含量超过实际含量,需要进行校正。
Gibson等详细列举了使用这些方法所遇到的许多其他问题。
支链淀粉结合ConA的特殊复合物为淀粉中直链淀粉的测定提供了一种替代方法,而且不存在不确定性问题。
在指定pH值,温度和离子强度的条件下,ConA特异性结合分支多糖并形成沉淀,这种结合以多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基单位为基础。
因此,ConA可以有效结合淀粉中的支链淀粉成分,但是不能结合线性为主的直链淀粉成分。
此方法是Yun和Matheson改进的ConA方法。
分析之前用乙醇预处理去除脂质。
原理:淀粉样品通过加热完全地溶解在二甲基亚砜(DMSO)里。
用乙醇沉淀淀粉去除其中的脂质,回收沉淀的淀粉。
用醋酸/盐溶液溶解沉淀的样品,加入ConA,特异性沉淀支链淀粉,离心去除沉淀。
单位体积上清液中的直链淀粉用酶水解为D-葡萄糖,然后用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂进行测定。
另外一份单位体积醋酸/盐溶液中的总淀粉同样用酶水解为D-葡萄糖,然后加入葡萄糖氧化酶/过氧化物酶,用比色法测定。
根据ConA沉淀样品的上清液和与总淀粉样品中的GOPOD在510 nm处的吸光光度值之比判断直链淀粉在总淀粉中的含量。
该方法适用于所有的纯淀粉和谷物粉。
精确性样品如为纯淀粉,相对标准偏差为<5%。
α-淀粉酶检测试剂盒(速率法)产品说明书
α-淀粉酶检测试剂盒(速率法)说明书[产品名称] 通用名称:α-淀粉酶检测试剂盒(速率法)英文名称:α-Amylase Aassay Kit(α-Amy)[包装规格] R:2×20ml;R:3×20ml;R:6×20ml;R:6×60ml;R:4×25ml。
[预期用途] 用于体外定量检测人血清中的α-淀粉酶的活力。
[检验原理]α-AMYGal-G2-α-CNP Gal-G2 + CNPCNP(2-氯-4-硝基苯酚)的生成在波长405nm处吸光度上升,上升的速率与α-AMY活力成正比。
[主要组成成份]由试剂R组成。
试剂R:2-氯-4-硝基苯-α-半乳糖-麦芽糖苷(Gal-G2-α-CNP)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液。
[储存条件及有效期] 试剂盒在2℃~8℃、无腐蚀性气体条件下避光储存,有效期为12个月,开瓶后2℃~8℃条件下保质期30天。
备注:生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。
[适用仪器]日立7170、奥林巴斯AU640、贝克曼LX-20全自动生化分析仪。
[样本要求]使用新鲜的非溶血血清。
[检验方法](1)单试剂无需配制,直接使用。
(2)试验条件:样本(S):5 µl 试剂 (R) :250 µl 温度:37 ℃测定类型:速率法主波长:405 nm 副波长:660nm 反应方向:上升方法:先将样本与R1混合,37 ℃测定2分钟至4分钟之△A/min 。
0 2 4 10 (反应时间:10min)37℃样本:5 µlR:250 µl(3)校准程序:每天进行试剂空白测试。
(4)质量控制程序:选用适当的质控品进行质量控制。
各实验室建立各自的质控频率和可接受范围值。
当测定结果超出可接受范围时,有必要采取相应措施。
(5)计算△A / min × Vt × 1000 △A/ min × 0.255 × 1000α-AMY(U/L)= ————————————— = ———————————————— Lp ×ε× Vs 1.0 × 13.4 × 0.005= △A / min × 3806Vt:反应总体积 0.255 mlVs:样品体积 0.005 mlε:摩尔吸光系数13.41000:将 U/ml 转换成了U/LLp:比色光径(1.0 cm)[参考区间] 血清:< 220 U/L (建议各实验室建立自己的正常参考范围。
淀粉含量检测试剂盒说明书__ 微量法UPLC-MS-4133
淀粉含量检测试剂盒说明书微量法UPLC-MS-4133100T/96S试剂名称规格保存条件试剂一液体65mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体65mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制:1、标准品:临用前加入1mL 蒸馏水使其溶解,制备10mg/mL 葡萄糖标准液,2-8℃保存两周。
2、工作液的配制:临用前取1瓶试剂三加入2.625mL 蒸馏水后,缓慢加入14.875mL 浓硫酸,不断搅拌,充分溶解,待用,用不完的试剂可以2-8℃保存一周。
淀粉是植物中糖的主要储存形式,其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义。
利用80%乙醇可以把样本中可溶性糖与淀粉分开,进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖,采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量,即可计算淀粉含量。
StarchH 2SO 4Glucose H 2SO 45-Hdroxymethylfurfural AnthroneFurfural Derivatives最低检出限:0.0074mg/mL 线性范围:0.008-0.7mg/mL注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿或者96孔板、研钵、冰、浓硫酸(不允许快递)、蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、称取约0.03g 样本于研钵中研碎,加入0.6mL 试剂一,充分匀浆后转移到EP 管中,80℃水浴提取30min ,3000g ,常温离心5min ,弃上清,留沉淀。
2、沉淀中加入0.3mL 双蒸水,放入沸水浴中糊化15min (盖紧,以防止水分散失)。
3、冷却后,加入0.6mL 试剂二,放入沸水浴中提取15min ,振荡3-5次。
4、冷却后,8000g ,常温离心15min ,取上清液待测。
可溶性淀粉合成酶(Soluble starch synthase,SSS)试剂盒说明书
货号:QS3404-50 规格:50管/48样可溶性淀粉合成酶(Soluble starch synthase,SSS)试剂盒说明书紫外分光光度法正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:SSS(EC 2.4.1.21)通常以游离态存在于质体基质中,催化淀粉链延长,主要负责支链淀粉的合成。
测定原理:SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比,340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
自备实验用品及仪器:紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;液体一:7mL×2瓶,4℃保存;液体二:4mL×2瓶,4℃保存;液体三:8mL×2瓶,4℃保存;粉剂一:2支,4℃保存;粉剂二:2支,4℃保存;粉剂三:2支,-20℃保存;粉剂四:2支,4℃保存;粉剂五:2支,4℃保存;粉剂六:2支,-20℃保存;粉剂七:2支,-20℃保存;粉剂八:2支,4℃保存;粉剂九:2支,4℃保存;粉剂十:2支,-20℃保存;试剂一:液体×1支,-20℃保存;临用前加入500μL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂二:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入500μL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
反应液Ⅰ的配制:临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支,依次把粉剂一、粉剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
反应液Ⅱ的配制:临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支,依次把粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
植物可溶性糖含量试剂盒(分光光度法)使用说明
植物可溶性糖含量试剂盒(分光光度法)使用说明货号:BC0030规格:50T/48S产品简介:糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
检测原理为蒽酮比色法。
可用于可溶性单糖、寡糖和多糖的含量测定,具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、浓硫酸、研钵和蒸馏水。
产品内容:试剂一:粉剂×1瓶,4℃避光保存;试剂二:10ml×1瓶,4℃保存;操作步骤:一、样品中可溶性糖的提取:称取约0.1~0.2g样本,加入1ml蒸馏水研磨成匀浆,倒入有盖离心管中,沸水浴10 min(盖紧,以防止水分散失),冷却后,8000g,常温离心10min,取上清液于10ml试管中,用蒸馏水定容至10ml,摇匀备用。
二、测定操作表:分光光度计预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零。
调节水浴锅至95℃。
工作液的配制:在试剂一中加入5ml试剂二,充分溶解后使用,如较难溶解,可加热搅拌。
加样表(在EP管中反应):试剂(μl)空白管测定管样本200蒸馏水400200工作液100100浓硫酸10001000混匀,置95℃水浴中10min(盖紧,以防止水分散失),冷却至室温后,于620nm处,分别读取空白管和测定管吸光值,ΔA=A测定管-A空白管。
注意:空白管只要做一管。
如果ΔA大于1,需要将样本用蒸馏水稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。
由于浓硫酸具有强腐蚀性,请谨慎操作。
可溶性糖含量计算:1、标准条件下测定的回归方程为y=8.55x-0.07;x为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值。
2、按样本鲜重计算:可溶性糖(mg/g鲜重)=〔(ΔA+0.07)÷8.55×V1〕÷(W×V1÷V2)=1.17×(ΔA+0.07)÷W3、按样本蛋白浓度计算:可溶性糖(mg/mg prot)=〔(ΔA+0.07)÷8.55×V1〕÷(V1×Cpr)=0.117×(ΔA+0.07)÷CprV1:加入样本体积,0.2mL;V2:加入提取液体积,10mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本鲜重,g。
ELISA 检测试剂盒 说明书
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断小鼠小鼠((MouseMouse))肿瘤坏死因子可溶性受体肿瘤坏死因子可溶性受体ⅠⅠ(TNFsR-TNFsR-ⅠⅠ)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
直链 支链 总淀粉含量(酶法)试剂盒说明书
直链/支链/总淀粉含量(酶法)试剂盒说明书(货号:G0548F分光法48样)一、产品简介:常用直链淀粉测定方法有电位测定法、旋光分析法或碘与直链淀粉结合力的比色法,然而这些方法存在不确定性。
因为支链淀粉-碘复合物在此过程中同样会形成,导致直链淀粉含量的高估,因此需要修正。
本试剂盒利用伴刀豆球蛋白A只与支链淀粉结合而不与直链淀粉结合的特性,使其分离,再用仅水解淀粉的酶复合物使淀粉水解为葡萄糖,通过检测葡萄糖含量得到直链、支链和总淀粉的含量。
二、试剂盒的组成和配制:试剂名称规格保存要求备注试剂一粉体g×1瓶4℃保存用前加100mL蒸馏水溶解,并用50%的乙酸(1mL 蒸馏水+1mL冰乙酸)逐滴加入约40μL,务必核定PH为6.4,(不能低于6.4,否则重新配置)试剂一稀释液:30mL试剂一+70mL蒸馏水混匀试剂二粉剂mg×1瓶-20℃保存用前甩几下使试剂落入底部,再加5.5mL的试剂一稀释液溶解备用。
试剂三液体50mL×1瓶4℃保存试剂四粉剂mg×1瓶-20℃保存用前甩几下使试剂落入底部,再加5.5mL的试剂三溶解备用。
试剂五粉剂mg×瓶-20℃保存用前甩几下使试剂落入底部,再加8.2mL的蒸馏水溶解备用。
试剂六液体56mL×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存用前甩几下使试剂落入底部,再加2mL的试剂三溶解,即为1mg/mL葡萄糖。
三、所需的仪器和用品:可见分光光度计、1mL玻璃比色皿(光径1cm)、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰、二甲基亚砜(DMSO)、乙醇、乙酸和蒸馏水。
四、淀粉含量测定:建议正式实验前选取2个样本做预测定,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!1、样本制备:①取1-5g样本烘干(50℃)至恒重,磨碎并过筛(如0.5mm筛)得到待检均匀粉末样本;取10mg粉末样本至2mL的EP管中,加入0.5mL的DMSO并涡旋振荡使样本分散悬浮于液体中(勿沉积于管底或块状悬浮)。
α-淀粉酶(α-AL)活性检测试剂盒说明书
α-淀粉酶(α-AL )活性检测试剂盒说明书微量法注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0615规格:100T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体20 mL×1瓶常温保存试剂二液体5 mL×2瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2支2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制:1、试剂一:若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用;2、试剂二:临用前取1支试剂三加入1瓶试剂二中,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解,用不完的试剂2-8℃保存4周;3、标准品:10 mg 无水葡萄糖。
临用前加1 mL 蒸馏水,配成10 mg/mL 葡萄糖标准液,2-8℃保存两周。
产品说明:淀粉水解酶,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质,在540nm 有吸收峰;通过测定540nm 吸光度增加速率,计算淀粉酶活性。
α-AL 耐热,但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min 。
因此粗酶液经过70℃钝化15min ,就只有α-AL 能够催化淀粉水解。
Reducing Sugar3-Amino-5-Nitrosalicylate (540nm)注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)称取约0.1g 样本,加0.8mL 蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取15min ,每隔5min 振荡1次,使其充分提取;6000g ,室温离心10min ,吸取上清液并且加蒸馏水定容至10mL ,摇匀,即为淀粉酶原液。
植物淀粉酶(Amylase)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断植物(Plant)淀粉酶(Amylase)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被淀粉酶(Amylase)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的淀粉酶(Amylase)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本:请1000x g离心20分钟,取上清即可检测。
4.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、250、500、1000、2000、4000U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种常用的免疫学实验方法,用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。
它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势,被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。
本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南,包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。
一、实验准备1.阅读检测项目的说明书:在使用试剂盒前,仔细阅读说明书,了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。
2.样本准备:根据实验要求,准备样本。
如果需要检测血清中的抗体水平,可以采集血液样本,离心分离血清;如果需要检测细胞培养上清中的分子,将上清收集,并使其清晰,避免细胞或杂质的污染。
3.样本预处理:根据实验需求,对样本进行必要的预处理。
例如,可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本,以改变样本组分和浓度。
4.准备品质控制样品:制备阳性和阴性控制样品,用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。
5.实验器材准备:准备所需实验器材,如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。
确保器材的干净和完整,并按照说明书要求对其进行预处理。
二、试剂使用步骤1.试剂准备:根据说明书要求,将试剂从冰箱中取出,并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。
确保试剂瓶盖紧闭,并避免暴露在直接阳光下。
2.实验操作:按照说明书的要求,将试剂加入到酶标板中,并根据实验设计进行标准曲线的设置。
标准曲线用于测量未知样品的数量,并计算出浓度。
3.孵育:根据试剂盒的要求,将酶标板放入孵育箱中进行孵育。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
4.洗涤:使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。
洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。
5.补液:在洗涤完成后,加入辣根过氧化物酶标况稀释液,促进酶标物与特异性结合物的反应。
6.孵育:根据试剂盒的要求,将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。
7.反应停止:根据试剂盒的要求,加入相应的停止液,停止酶反应。
可溶性淀粉合成酶(SSS)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
可溶性淀粉合成酶(SSS)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1850规格:50T/48S产品内容:提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体40mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存。
试剂四:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每支加入5mL试剂一。
试剂五:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每支加入8mL试剂一。
试剂六:粉剂×2支,-20℃保存;临用前每支加入416μL双蒸水,充分溶解备用,用不完的试剂4℃保存。
试剂七:液体250μL×3支,-20℃保存,可分装后-20℃保存,不可反复冻融。
试剂八:液体12.5μL×2瓶,4℃保存;每支临用前加入溶解好的4mL试剂四。
反应液Ⅰ的配制:临用前在试剂二中加入7mL试剂一,缓慢加热,逐渐升温使其溶解,冷却后加入试剂三混合溶解。
这样可以分两批配制并且测定。
产品说明:SSS(EC 2.4.1.21)通常以游离态存在于质体基质中,催化淀粉链延长,主要负责支链淀粉的合成。
SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比,340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
需自备的的仪器和用品:紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液制备称取约0.1g组织加入1mL提取液,冰浴中匀浆。
10000g,4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
快速连接试剂盒使用说明
快速连接试剂盒使用说明货号:QL0010规格:20T保存:-20℃保存。
产品内容:T4DNALigase20ul(4U/ul)2×Quick Ligation Buffer200ul产品简介:快速连接试剂盒所带T4DNA Ligase能催化dsDNA、dsRNA或DNA/RNA的5’-磷酸末端和3’-羟基末端形成磷酸二酯键。
该酶不仅能催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接,还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口,在2×Quick Ligation Buffer中,室温(25℃)下反应5分钟即可完成连接反应,反应液可直接用于转化,使用方便、快捷,极大地缩短了试验时间。
本试剂盒可应用于DNA片段克隆入载体、文库构建、TA克隆、Linker连接以及线性DNA的再环化等试验。
单位定义:在2ul连接反应体系、0.12uM(300ug/ml)的5’-末端浓度条件下,16℃反应30分钟,能使50﹪Hind III消化的λDNA片段连接上所需的酶量定义为一个活性单位。
使用方法:1、按下面配制反应体系2×Quick Ligation Buffer10ul载体50ng插入片段50-150ngT4DNA Ligase1uldd H2O up to20ul2、室温下反应5分钟,反应产物冰上冷却,然后直接用于转化或冻存于-20℃。
注意不要热失活,热失活会急剧降低转化效率。
当插入片段超过1.5kb时,延长反应时间至15-30分钟。
注意事项:1、2×Quick Ligation Buffer用前应彻底混匀,避免反复冻融,可适当分装成小份以保证质量。
2、为保证有效连接,总的载体DNA与插入片段的总浓度应在1-10ug 之间。
对单插入来说,插入片段:载体比例在1:2-1:6之间最好,低于2:1会降低连接效率,高于6:1会产生重复插入。
3、如果是做电转化,请将连接产物纯化后再进行电转化。
淀粉酶,人ELISA试剂盒说明书 人淀粉酶(Amylase)ELISA试剂盒使用说明书
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淀粉酶,人ELISA试剂盒说明书人淀粉酶(Amylase)ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆上海乔羽生物供应使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本淀粉酶(Amylase)含量。
试验原理:Amylase试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知Amylase浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将Amylase和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中Amylase的浓度呈比例关系。
淀粉酶试剂盒,elisa试剂盒说明书,ELISA试剂盒,ELISA检测试剂盒,人elisa试剂盒说明书试剂盒内容及其配制试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品:80ng/ml 1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素标记的抗Amylase抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀释底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型自备材料1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
可溶性胶原酶测定试剂盒MET-5016 96次测定说明书
Product ManualSoluble Collagen Assay KitCatalog NumberMET-5016 96 assaysFOR RESEARCH USE ONLYNot for use in diagnostic proceduresIntroductionCollagen serves as the major structural component of animal connective tissues. Collagen is found in fibrous tissues such as skin and ligaments, but is also found in large amounts in bone, cartilage, and cornea. When hydrolyzed, collagen forms gelatin which is used in the food industry as well as medically to treat bone and skin disorders. Collagen makes up about 30% of the total protein content in animals, making it the most abundant animal protein. Hydroxyproline, a modified form of proline, is found almost exclusively in the protein collagen, in the Y position of the repeating tripeptide Gly-X-Y. By allowing sharp twisting of the collagen helix, hydroxyproline helps to stabilize the structure of collagen.Collagen plays an important structural role in the heart. The cardiac extracellular matrix, which is made up mostly of fibrillar collagen, preserves myocardial integrity, allows for heart force transmission, and contributes to myocyte orientation. Any interruption of the finely balanced regulation of collagen synthesis, post-synthetic assembly, post-translational modification and degradation may have large effects on myocardial function. In addition, collagen has several clinical uses. Collagen has been used extensively in cosmetic surgery to aid in the healing process for burn patients. Collagen has also been used to reconstruct bone in dental, orthopedic, and other surgical scenarios. Collagen is used for bone grafts because of its triple helical structure which makes it a very strong molecule. It is also optimal for use in bones because it does not compromise the structural integrity of the skeleton. Finally, both human and bovine collagen has been used as dermal fillers to treat wrinkling and skin aging.Cell Biolabs’ Soluble Collagen Assay Kit provides a convenient colorimetric method for the detection of soluble collagen from cell or tissue samples. First, the unknown samples or collagen standards are added to a 96 well plate and dried down overnight. Then, a Sirius Red reagent is added to stain the [Gly-x-y] triple helix structure of collagen. Finally, the stained collagen is washed with an Acidic Reagent, eluted from the plate with a Basic Reagent, transferred to a new 96 well plate and measured by a plate spectrophotometer. The amount of collagen in the unknown samples is determined by comparing with a predetermined collagen standard curve. The provided reagents are sufficient for the evaluation of 96 assays including standards and unknown samples.Related Products1.MET-5151: S-Adenosylhomocysteine (SAH) ELISA Kit2.MET-5152: S-Adenosylmethionine (SAM) ELISA Kit3.STA-675: Hydroxyproline Assay Kit (Total Collagen Assay)4.STA-670: Homocysteine ELISA KitKit Components1.Collagen Standard (Part No. 50161B): One 500 µL vial containing 3 mg/mL Type I Collagen.2.Sirius Red Reagent (Part No. 50162A): One 15 mL bottle.3.Extraction Solution (Part No. 50164A): One 15 mL bottle.4.10X PBS (Part No. 50166A): One 10 mL bottle.Materials Not Supplied1.Distilled water2.Phosphate Buffered Saline (PBS)3.Orbital shaker4.96 well ELISA strips or 96 well microtiter plate5.0.6 mL or 1.5 mL microcentrifuge tubes6.10 µL to 1000 µL adjustable single channel micropipettes with disposable tips7.50 µL to 300 µL adjustable multichannel micropipette with disposable tips8.Multichannel micropipette reservoir9.Microplate reader capable of reading at 540-560 nm10.Pepsin11.2.5% and 5% (v/v) Acetic Acid12.2 N NaOHStorageUpon receipt, store the Sirius Red Reagent at room temperature and store the rest of the kit at 4ºC.Preparation of Standard CurvePrepare a dilution series of Collagen standards in the concentration range of 0 to 500 µg/mL by diluting the Collagen Standard in cold PBS (Table 1).Standard Tubes 3 mg/mL CollagenStandard (µL) Cold PBS (µL)Collagen(µg/mL)1 100 500 5002 250 of Tube #1 250 2503 250 of Tube #2 250 1254 250 of Tube #3 250 62.55 250 of Tube #4 250 31.26 250 of Tube #5 250 15.67 250 of Tube #6 250 7.88 0 250 0 Table 1. Preparation of Collagen Standards.Preparation of SamplesThe following recommendations are only guidelines and may be altered to optimize or complement the user’s experimental design.•Cells: Resuspend 1-2 x 107 cells in 1 mL of 2.5% Acetic Acid containing 0.1 mg/mL Pepsin according to ref. 6 (see p. 7). Disrupt cells on ice by dounce homogenization. Sonicate thehomogenate on ice with a probe sonicator. Centrifuge the homogenate at 12,000 x g for 10minutes. Recover the supernatant and transfer to a new tube. Determine the protein concentration by protein assay. Neutralize the pH of the sample in two steps. First add 2N NaOH solution 1:6 directly into the sample. Then add 10X PBS 1:10 directly to the sample to a final concentration of 1X PBS (for example, add 100 µL of 2N NaOH solution to 500 µL of sample, and then add 67 µL of 10X PBS to the sample). Store unused final sample at -80°C.•Tissue: Homogenize 100 mg of tissue in 1 mL of 2.5% Acetic Acid containing 0.1 mg/mL Pepsin according to ref. 6 (see p. 6). Disrupt tissue on ice by dounce homogenization. Sonicate thehomogenate on ice with a probe sonicator. Centrifuge the homogenate at 12,000 x g for 10minutes. Recover the supernatant and transfer to a new tube. Determine the protein concentration by protein assay. Neutralize the pH of the sample in two steps. First add 2N NaOH solution 1:6 directly into the sample. Then add 10X PBS 1:10 directly to the sample to a final concentration of 1X PBS (for example, add 100 µL of 2N NaOH solution to 500 µL of sample, and then add 67 µL of 10X PBS to the sample). Store unused final sample at -80°C.Note: This kit is not recommended for serum, plasma, or urine samples. Perform acid hydrolysis and measure the collagen marker hydroxyproline using Cell Biolabs' Hydroxyproline Assay Kit (STA-675).Assay Protocol1.Prepare and mix all reagents thoroughly before use. Each sample, unknown and standard shouldbe assayed in duplicate.2.Add 100 µL of collagen standards or unknown samples to a 96 well microplate.3.Evaporate to dryness overnight in a 37ºC oven for 16 hours.4.Wash the wells 3 times with 200 µL of distilled water with aspiration between each wash. Afterthe last wash, empty wells and tap microwell strips on absorbent pad or paper towel to remove excess water.5.Add 150 µL of the Sirius Red Reagent to each well.6.Incubate for 60 minutes at room temperature on an orbital shaker.7.Wash the wells 4 times with 200 µL of 5% Acetic Acid with aspiration between each wash. Afterthe last wash, empty wells and tap microwell strips on absorbent pad or paper towel to remove excess Acidic Reagent.8.Add 150 µL of Extraction Solution to each well.9.Incubate 30 minutes at room temperature on an orbital shaker.10.Transfer 100 µL to the wells of a new plate.11.Read absorbance of each well on a microplate reader using 540-560 nm as the primary wavelength. Example of ResultsThe following figures demonstrate typical Soluble Collagen Assay Kit results. One should use the data below for reference only. This data should not be used to interpret actual results.Figure 2: Soluble Collagen Standard Curve.Figure 3: Detection of Soluble Collagen in Chicken Liver. Chicken liver was homogenized in2.5% Acetic Acid containing 0.1 mg/mL Pepsin, pH neutralized, and diluted into PBS according to the Preparation of Samples Section. Samples were tested according to the Assay Protocol. References1.Di Lullo GA.; Sweeney SM.; Körkkö J; Ala-Kokko L and San Antonio JD. (2002). J. Biol. Chem.277: 4223–42312.Gorres K.L and Raines RT. (2010) Crit Rev Biochem Mol Biol. 45: 106-1243.Cunniffe, G and O'Brien F (2011). J.Minerals Metals and Mater. Soc. 63: 66–734.Oliveira S, Ringshia R, Legeros R, Clark E, Terracio L, Teixeira C, and Yost M (2009). J.Biomed. Mater.94: 371–379.5.Horn MA and Trafford AW (2015). J Mol. Cell Cardiol. Epub ahead of print.6.Chan D., Lamande R, Cole WG, and Bateman JF (1990). Biochem J. 269: 175-181.Recent Product Citations1.Alqahtani, M.S. et al. (2020). Wound-healing potential of curcumin loaded lignin nanoparticles. JDrug Deliv Sci Technol. doi: 10.1016/j.jddst.2020.102020.2.Sears, V. et al. (2020). Harnessing mesenchymal stem cell secretome: effect of extracellularmatrices on pro-angiogenic signaling. Biotechnol Bioeng. doi: 10.1002/bit.27272.3.MacKnight, H.P. et al. (2019). The interaction of ceramide 1-phosphate with group IVA cytosolicphospholipase A2 coordinates acute wound healing and repair. Sci Signal. 12(610). pii: eaav5918.doi: 10.1126/scisignal.aav5918.4.Imai, J. et al. (2019). Flagellin-mediated activation of IL-33-ST2 signaling by a pathobiontpromotes intestinal fibrosis. Mucosal Immunol. 12(3):632-643. doi: 10.1038/s41385-019-0138-4. WarrantyThese products are warranted to perform as described in their labeling and in Cell Biolabs literature when used in accordance with their instructions. THERE ARE NO WARRANTIES THAT EXTEND BEYOND THIS EXPRESSED WARRANTY AND CELL BIOLABS DISCLAIMS ANY IMPLIED WARRANTY OF MERCHANTABILITY OR WARRANTY OF FITNESS FOR PARTICULAR PURPOSE. CELL BIOLABS’sole obligation and purchaser’s exclusive remedy for breach of this warranty shall be, at the option of CELL BIOLABS, to repair or replace the products. In no event shall CELL BIOLABS be liable for any proximate, incidental or consequential damages in connection with the products.Contact InformationCell Biolabs, Inc.7758 Arjons DriveSan Diego, CA 92126Worldwide: +1 858-271-6500USA Toll-Free: 1-888-CBL-0505E-mail: ********************©2016-2021: Cell Biolabs, Inc. - All rights reserved. No part of these works may be reproduced in any form without permissions in writing.。
淀粉总量检测试剂盒
Megazyme淀粉总量检测试剂盒产品编号:K-TSTA(100次)(淀粉葡糖苷酶/α-淀粉酶方法)AOAC法996.11 /AACC法76.13改进版1.简介淀粉测定方法分为酸水解法和酶分析法。
酸水解只能应用于纯淀粉样品。
酶分析方法在前处理步骤,淀粉凝胶化、液化和糊化,糊精水解成葡萄糖、葡萄糖测定步骤等方面存在不同。
AACC 76-11法采用淀粉在高压蒸汽灭菌锅中及含水的条件下凝胶化,并用淀粉葡糖苷酶将淀粉转化为葡萄糖,再测定葡萄糖含量。
采用AACC 76-11法会导致许多样品和材料中(包括高直链淀粉玉米淀粉和谷物制品)淀粉含量检测结果偏低。
目前,许多方法采用在淀粉凝胶化结束后立即加入耐热α-淀粉酶处理。
对于难以凝胶化的样品如高直链淀粉玉米淀粉,用氢氧化钠或DMSO处理。
在膳食纤维的测定方法中为确保淀粉完全溶解,Englyst和Cumming(1988)加入了淀粉脱支化酶,普鲁兰酶。
为了满足极端样品中总淀粉含量定量测定的需要,Megazyme公司研发出一种使用耐热α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶的淀粉总量检测试剂盒。
该方法已被AOAC和AACC采用。
近来,我们将检测方法进行了改进,使耐热α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶可以在相同的pH(pH 5.0)下进行孵育,这样简化了测定步骤,并将麦芽酮糖生成的可能性降到最低。
Megazyme淀粉总量试剂盒可测定大部分食品、饲料、植物和谷物制品(天然或加工过的)。
对于大部分样品(如小麦粉),样品中的淀粉在孵育中(大约100℃,并加入耐热α-淀粉酶)会完全溶解。
含有大量抗性淀粉的样品(如高直链玉米淀粉),需用2M KOH或热DMSO进行预溶解。
含有可溶性淀粉或麦芽糊精的样品,不需要用耐热α-淀粉酶处理。
2.产品性能●特异性:可用于测定α-葡聚糖(包括淀粉、糖原、植物糖原和非抗性麦芽糊精)。
●灵敏度:最小吸光度差异为0.10吸光度单位。
这相当于当样品体积为1.00 mL时,D-葡萄糖的浓度为1.0mg/L或淀粉浓度为0.9 mg/L。
Megazyme-破损淀粉试剂盒说明书
简介:小麦磨粉引起小麦粉中一定比例淀粉颗粒的物理损坏。
淀粉损伤程度直接影响吸水和面团混合性能,因而具有重要的技术意义。
此外,受损的颗粒迅速水合并被α-和β-淀粉酶被水解产生可发酵的糖。
在传统长期发酵过程的后期,当面粉中的天然糖被酵母发酵完后,破损淀粉酶解产生的麦芽糖进一步提供发酵底物。
当这种传统可发酵糖缺乏时,出现产气不足,所生产的面包体积小硬度大。
用于测量破损淀粉的方法大致可分为四大类,提取法(“蓝值”),染料染色法,近红外法和酶消化法。
酶消化法通常在这些方法中优先选择。
酶消化法利用α-淀粉酶,β-淀粉酶或这些酶的组合。
谷物和真菌α-淀粉酶制剂已被用作粗麦芽提取或粗发酵液。
传统上一直使用的非特异性还原糖法测定水解程度,如铁氰化钾滴定法,或与二硝基水杨酸(DNS)反应法来测定。
原理:在本方法中,利用真菌α-淀粉酶小心地处理使受损的淀粉颗粒经水合和水解成麦芽糖加和α-极限糊精。
真菌α-淀粉酶处理的目的是使受损的淀粉颗粒完全溶解而完好颗粒分解极少。
通过加稀硫酸终止反应,试样经过量的纯化淀粉葡糖苷酶处理,而使淀粉衍生的糊精完全降解为葡萄糖。
用高纯度葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂混合物进行测定葡萄糖含量。
测定值表示为淀粉(损坏)占面粉原样重量的百分比。
精度:我们实验内通常能得到±3%的标准误。
实验室间测试的汇总于这本小册子的7-8页。
试剂盒:Megazyme 公司的试剂盒可测试淀粉破损值200次。
试剂盒包括测试方法和以下内容:瓶1:真菌α-淀粉酶(10mL,,pH6.0和40℃时分析Ceralpha试剂是1000U/mL)硫酸铵溶液。
4℃可存放3年以上。
瓶2:淀粉葡糖苷酶(4mL,pH4.5和40℃时分析可溶性淀粉是200 U / mL的可溶性淀粉在pH4.5和40℃)。
硫酸铵溶液。
4℃可存放3年以上。
瓶3:GOPOD试剂缓冲液。
缓冲液(48mL,pH值7.4),对羟基苯甲酸和叠氮化钠(0.4%w/v)。
抗性淀粉试剂盒说明书
抗性淀粉检测试剂盒K-RSTAR(100次分析)前言抗性淀粉(RS)是指在人小肠内不能被酶解的淀粉,在大肠部分或完全发酵。
RS是总膳食纤维的组分之一。
原理(AOAC法 ;AACC法32-40)抗性淀粉的测定方法:样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶(AMG)37℃振荡水浴孵育16小时,在这期间,通过两种酶的联合作用,非抗性淀粉被溶解,水解成D-葡萄糖,孵育结束后,加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精(IMS,变性乙醇)终止反应。
离心上述溶液,收集上清勿弃,底部残留絮状团即为样品中的RS,用含水的IMS或乙醇(50%v/v)洗涤絮状团,洗涤后离心,再重复一次洗涤离心,收集离心后获得的上清,与之前收集的上清混合。
小心倒出试管残留的液体,将絮状团置于冰水浴中,加入2M KOH溶解,溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。
用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性,用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。
D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂(GOPOD)测定,这也是对样品中RS含量的测定。
非抗性淀粉(可溶性淀粉)的测定可通过集中的上清液并定容至100mL,再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。
应用性和精确性这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。
如RS含量多于2% w/w,常规标准误差为+5%。
少于2% w/w RS的误差更高。
试剂盒瓶子1:淀粉葡糖苷酶AMG,12 mL,3300U/ mL,条件为,40℃下,底物为可溶性淀粉,[单位或为200U/mL,条件为,40℃下,底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷]。
AMG溶液应完全没有可检测到的游离D-葡萄糖。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子2:α-胰淀粉酶(胰酶,10g,3Ceralpha U/mg)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子3:GOPOD 试剂缓冲液。
磷酸钾缓冲液(1M,),对羟基苯甲酸(0.22M)和叠氮化钠(%W/V)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子4:GOPOD试剂酶。
葡糖氧化酶(>12,000U)加上过氧化物酶(>650U)和4-氨基安替比林(80mg)。
植物可溶性糖检测试剂盒(苯酚比色法)
版本:A4 修改日期:2024.01.05植物可溶性糖检测试剂盒(苯酚比色法)产品简介:植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖,植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质、性状,常以糖含量作为重要指标,植物为了适应逆境条件如干旱、低温等条件会主动积累一些可溶性糖,降低渗透势和冰点,以适应外界环境条件的变化,测定植物体内可溶性糖的方法有:蒽酮比色法、3,5-二硝基水杨酸比色法、苯酚比色法、斐林试剂比色法等化学方法。
Leagene 植物可溶性糖检测试剂盒(苯酚比色法)检测原理是还原糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糖醛或羟甲基糠醛,生成物可与苯酚反应生成橙红色化合物,在一定范围内颜色的深浅与还原糖的含量成正比,在485nm 处有最大吸收峰。
本法可以测定甲基化糖、戊糖(木糖、核糖、阿拉伯糖)、和多聚糖的测定,方法简单、试剂便宜、灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色可稳定160min 以上。
该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成:自备材料:1、 蒸馏水、浓硫酸2、 电子天平、剪刀、研钵或匀浆器、水浴锅或电磁炉、分光光度计、比色杯3、 50ml 烧杯或三角瓶、容量瓶、20ml 刻度试管或10ml 螺旋盖离心管操作步骤(仅供参考):1、 可溶性糖的提取:①称取新鲜的植物样品(干样品亦可)0.5~1g ,剪碎,加入蒸馏水约3ml 匀浆,转移至刻度试管中,用12ml 蒸馏水冲洗研磨器2~3次,洗出液也转移至该容器。
②塑料薄膜封口,于沸水浴中提取,待冷却后过滤,将滤液转入50ml 容量瓶。
③收集残渣再次匀浆、加水提取、合并滤液,定容。
2、 配制苯酚工作液:取1份苯酚溶液(10×),再加入9份蒸馏水,混匀即可,现用现配。
3、 稀释蔗糖标准:取1ml 蔗糖标准溶液(10mg/ml)加入100ml 容量瓶中,用蒸馏水定容编号名称TC0673 50T Storage试剂(A): 蔗糖标准溶液(10mg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): 苯酚溶液(10×) 6mlRT 避光 使用说明书1份至刻度,即为蔗糖标准(100ug/ml);取干净离心管或试管,按下表操作,依次获得系列质量的蔗糖标准。
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可溶性淀粉合成酶试剂盒使用说明
分光光度法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
货号:BC1850
规格:25管/24样
产品说明:
SSS(EC2.4.1.21)通常以游离态存在于质体基质中,催化淀粉链延长,主要负责支链淀粉的合成。
SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比,340nm下测定NADPH 增加量即可计算SSS活性。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
产品组成:
提取液:液体30mL×1瓶,4℃保存;
液体一:7mL×1瓶,4℃保存;
液体二:4mL×1瓶,4℃保存;
液体三:8mL×1瓶,4℃保存;
粉剂一:1支,4℃保存;
粉剂二:1支,4℃保存;
粉剂三:1支,-20℃保存;
粉剂四:1支,4℃保存;
粉剂五:1支,4℃保存;
粉剂六:1支,-20℃保存;
粉剂七:1支,-20℃保存;
粉剂八:1支,4℃保存;
粉剂九:1支,4℃保存;
粉剂十:1支,-20℃保存;
试剂一:液体×1支,-20℃保存;临用前加入250μL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂4℃保存;
试剂二:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入250μL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂4℃保存;
反应液Ⅰ的配制:临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支,依次把粉剂一、粉剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解。
反应液Ⅱ的配制:临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支,依次把粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解。
反应液Ⅲ的配制:临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支,依次把粉剂八、粉剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解。
操作步骤:
一、粗酶液制备
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。
10000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称(μL)测定管
样本150
反应液Ⅰ270
混匀,30℃保温20min,置沸水浴中1min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却
反应液Ⅱ150
混匀,30℃保温30min,置沸水浴中1min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却,10000g 25℃离心10min,取上清液
上清液450
反应液Ⅲ300
试剂一10
试剂二10
混匀后立即在340nm波长下记录初始吸光度A1和2min后的吸光度A2,计算Δ
A=A2-A1。
注意:反应液Ⅰ如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。
三、SSS活性计算
1、按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样)÷T×稀释倍数
=522×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性(nmol/min/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×W)÷
T×稀释倍数=522×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,5.7×10-4L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.15mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,2min;稀释倍数:1.71;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量。