结合态淀粉合成酶(Granule-bound starch synthase,GBSS)试剂盒说明书
大米淀粉结合蛋白研究进展
大米淀粉结合蛋白研究进展陈兰煊;任思;易翠平【摘要】淀粉结合蛋白(starch granule-associated proteins,SGAPs)是指紧密结合于淀粉表面及内部具有显著特征的一类蛋白质,在大米中的质量分数为0.2％～0.5％,不同于普通蛋白,其更多以酶的形式存在于淀粉颗粒中决定淀粉颗粒的结构及形态,对淀粉颗粒的生理生化特性有着重要作用.本文综述了目前国内外关于大米淀粉结合粒蛋白(SGAPs)的研究进展,介绍了几种较为典型的淀粉结合蛋白的分布、分离与纯化方法及其对淀粉的理化特性产生的影响,旨在对大米淀粉深入研究及大米淀粉工业提供一定理论研究基础.%The Starch Granule-Associated Proteins (SGAPs,Containing 0.2％～ 0.5 ％ protein) is a kind of protein which is closely combined with the surface and interior of starch.Different from the common proteins,it is more in the form of enzymes in starch granules,determine the structure and morphology of starch particles,and plays an important role in the physiological and biochemical characteristics of starch granules.This paper reviewed the current domestic and foreign research progress on rice SGAPs,introduced the influence of several typical distribution,method of isolation and purification and physicochemical properties of starch which aims to provide a theoretical basis for further research on rice starch and rice starch industry.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2018(033)002【总页数】5页(P142-146)【关键词】大米;淀粉结合蛋白;淀粉合成酶【作者】陈兰煊;任思;易翠平【作者单位】长沙理工大学化学与生物工程学院健康谷物制品研究所,长沙410114;长沙理工大学化学与生物工程学院健康谷物制品研究所,长沙410114;长沙理工大学化学与生物工程学院健康谷物制品研究所,长沙410114【正文语种】中文【中图分类】TS231淀粉结合蛋白(starch granule-associated proteins，SGAPs)是和植物淀粉粒表面或内部紧密结合的蛋白质，蛋白质量分数为0.2%～0.5%[1]。
杂交水稻骨干亲本Wx基因第一内含子+1位碱基多态性分析
杂交水稻骨干亲本Wx基因第一内含子+1位碱基多态性分析作者：连玲潘丽燕朱永生许惠滨郑燕梅何炜罗曦王颖妲蔡秋华谢华安张建福来源：《福建农业学报》2019年第12期摘要：[目的]直链淀粉含量是影响稻米品质的重要因素，而编码颗粒结合型淀粉合成酶（granule-boundstarchsynthetase，GBSS）的蜡质基因（Wx）是影响直链淀粉含量的主效基因。
本研究拟分析120份杂交水稻亲本的Wx基因第一内含子+1位碱基的多态性，以期研究其对内含子的剪接效率及Wx的表达的影响，为亲本育种筛选提供理论参考。
[方法]选取120份水稻亲本材料，采用CTAB法提取基因组DNA，并以此为模版PCR扩增Wx基因片段;采用限制性内切酶AccI对PCR产物进行酶切分析，根据琼脂糖电泳结果分析Wx基因第一内含子+1位碱基类型;同时测定其中19份亲本的直链淀粉含量、胶稠度和碱消值。
[结果]PCR扩增结果显示所有材料中均可扩增出清晰且单一的目的条带;PCR产物的AccI酶切分析结果显示，其中81份亲本的Wx基因第一内含子+1位碱基是T，即为T型，占总数的67.5%，38份亲本为G 型，占总数的31.67%，而仅有1份亲本为杂合型，即GT型，占总数的0.83%。
19份亲本的直链淀粉含量测定结果表明，7份G型亲本的直链淀粉含量比12份T型亲本的高，且其中6个G型亲本的直链淀粉含量平均值均超过20%。
另外，测定结果表明T型亲本和G型亲本的胶稠度和碱消值差别不明显。
[结论]120份杂交水稻骨干亲本的Wx基因第一内含子+1位碱基类型测定结果表明，与T型亲本相比，G型亲本的直链淀粉含量明显较高，而胶稠度和碱消值没有明显差别。
关键词：Wx基因;第一内含子;碱基多态性;直链淀粉含量中图分类号：S511文献标志码：A 文章编号：1008-0384（2019）12-1355-090 引言[研究意义]随着人们对稻米品质要求的提高，水稻育种在注重提高产量的同时也越来越重视稻米品质的改良。
马铃薯块茎淀粉合成相关基因在脱落酸和蔗糖诱导下的表达分析
引文格式：李晨晓, 艾菊, 杨梅宏, 等. 马铃薯块茎淀粉合成相关基因在脱落酸和蔗糖诱导下的表达分析[J]. 云南农业大学学报(自然科学), 2023, 38(3): 361−367. DOI: 10.12101/j.issn.1004-390X(n).202207034马铃薯块茎淀粉合成相关基因在脱落酸和蔗糖诱导下的表达分析*李晨晓， 艾 菊， 杨梅宏， 高冬丽 **(云南师范大学，云南省生物质能与环境生物技术重点实验室，云南 昆明 650500)摘要: 【目的】在马铃薯块茎中确定能够促进淀粉合成基因表达的脱落酸(abscisic acid ，ABA)和蔗糖处理体系。
【方法】利用不同的溶液和条件，对马铃薯幼嫩块茎进行ABA 、蔗糖和ABA+蔗糖处理；采用实时荧光定量PCR 检测处理块茎中直链淀粉合成关键酶(granule-bound starch synthase Ⅰ，GBSS Ⅰ)基因、支链淀粉合成关键酶(starch branching enzyme Ⅲ，SBE3)基因和淀粉合成限速酶大亚基(ADP-glucose pyrophosphorylase large subunit 3，APL3)基因的表达，确定处理体系能否诱导基因表达；确定处理体系后，进一步检测其他9个淀粉合成基因的表达。
【结果】实时荧光定量PCR 检测表明：当处理溶液中包含氯化钙、琥珀酸钠和氯霉素等试剂，且马铃薯块茎置于处理溶液中28 ℃黑暗处理36 h 时，与对照相比，ABA 或蔗糖处理可明显升高GBSS Ⅰ和APL3的表达。
对其他9个淀粉合成相关基因表达的检测结果显示：大部分合成基因正向响应ABA 或蔗糖处理。
【结论】本研究利用马铃薯块茎确定了能够促进淀粉合成基因表达的ABA 和蔗糖处理体系，研究结果为进一步解析淀粉合成基因的转录调控机制奠定了基础。
关键词: 马铃薯；淀粉合成基因；脱落酸；蔗糖；表达中图分类号: S532.01 文献标志码: A 文章编号: 1004–390X (2023) 03−0361−07Expression Analysis of Starch Synthesis-related Genes Induced byAbscisic Acid and Sucrose in Potato TubersLI Chenxiao ，AI Ju ，YANG Meihong ，GAO Dongli(Key Laboratory of Yunnan Province for Biomass Energy and Environmental Biotechnology,Yunnan Normal University, Kunming 650500, China)Abstract: ［Purpose ］To define the effective abscisic acid (ABA) and sucrose treatments that could induce the expression of starch synthesis-related genes in potato tubers. ［Methods ］Young tubers were subjected to ABA, sucrose, and ABA+sucrose treatments using different solutions and condi-tions, and the expression levels of three genes including granule-bound starch synthase Ⅰ (GBSS Ⅰ),starch branching enzyme Ⅲ (SBE3) and ADP-glucose pyrophosphorylase large subunit 3 (APL3)were examined by quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR). After defining the effec-tive treatment, the expression levels of other nine starch synthesis-related genes were examined.［Results ］RT-qPCR result showed that when the treatment solutions contained CaCl 2, sodium suc-云南农业大学学报（自然科学），2023，38(3)：361−367Journal of Yunnan Agricultural University (Natural Science)E-mail: ********************收稿日期：2022-07-22 修回日期：2023-03-23 网络首发日期：2023-04-28*基金项目：国家自然科学基金地区基金项目(32060684)；云南省院士工作站(202105AF150028)。
山西育成小麦品种Wxay蛋白缺失体的筛选与鉴定
山西育成小麦品种Wxay蛋白缺失体的筛选与鉴定王曙光;孙黛珍;王慧慧;曹亚萍;贾寿山;史雨刚;彭锁堂【摘要】Wx蛋白即颗粒结合型淀粉合酶,由Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1三个亚基组成,其中任意一个亚基的缺失都影响着小麦籽粒中直链淀粉的含量,为了解山西育成小麦品种Wx蛋白缺失类型,用SDS-PAGE和分子标记技术分别在蛋白质和DNA水平上对175份山西育成的小麦品种资源进行了分析,共检测到1份Wx-A1亚基缺失材料临优2018,6份Wx-B1亚基缺失材料——临汾98-1017、晋麦54、晋农76、长6154、太麦703和太麦8003,没有发现缺失Wx-D1亚基、同时缺失两个亚基和三个亚基全缺失的材料.%Wx protein, granule - bound starch synthase, is composed of Wx - Al、 Wx - B1 and Wx -Dlsubunits,deficiency of which will make starch content of wheat grains decrease. In order to discover more Wxay protein deficiency mutants, 175 wheat varieties bredin Shanxi were identified at the nucleotide and protein levels u-sing SDS -PAGE and molecular markers. The result indicated that 1variety,Linyou2018 were the null of Wx - Al types,6,Linfen98 -1017,Jinmai54,Jinnong76,Chang6154,Taimai703,Taimai8003 were the nullof Wx-B1 types, the null of Wx - D1 and the null of any 2 or 3 submits were not detected.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2012(027)007【总页数】6页(P6-11)【关键词】小麦;Wxay蛋白;SDS-PAGE;分子标记【作者】王曙光;孙黛珍;王慧慧;曹亚萍;贾寿山;史雨刚;彭锁堂【作者单位】山西农业大学农学院,太谷030801;山西农业大学农学院,太谷030801;山西农业大学农学院,太谷030801;山西省农业科学院小麦研究所,临汾041000;山西农业大学农学院,太谷030801;山西农业大学农学院,太谷030801;山西农业大学农学院,太谷030801【正文语种】中文【中图分类】S512.1;S336在普通小麦直链淀粉合成过程中起主要作用的颗粒结合淀粉合成酶(GBSSⅠ)也称Waxy蛋白［1］。
水稻淀粉合成相关基因研究
式
Xunchao Xiang Southwest University of Science and Technology
15
SSSⅢ 与SSSⅡ相比，更倾向于合成长的B1和B2 链 (DP=25～35)(Edwards等，1999)。只在一个分
支簇内出现的B链称B1链，连接2和3个分支簇的B 链分别称B2和B3链。
决定口感的好坏。
5/22/2012
Xunchao Xiang Southwest University of Science and Technology
2
外观品质鉴定相对简单； 蒸煮食味品质(eating and cooking qualities, ECQs)包括
直链淀粉含量(Amylose Content, AC)、胶稠度(gel consistency, GC)和糊化温度(gelatinization temperature, GT)，ECQs是稻米品质中最重要也是最复杂的指标， 传统鉴定方法相对繁杂。 优质稻米一般具有适中的表观直链淀粉含量 (Apparent Amylase Content，AAC)，高的GC和低的 GT。
The boxes represent exon regions: shaded regions are translated, and nonshaded regions are transcribed but not translated. Lines connecting boxes correspond to intron regions. The sizes of the gene and sequenced region are indicated above the boxes. The numbers 1, 2 and 3 indicate the locations of single nucleotide polymorphisms (SNPs) 1, 2 and 3 analyzed for phenotypic associations. Bold italic sequences indicate codons with nonsynonymous mutations.
植物组织特异性启动子的研究进展
植物组织特异性启动子的研究进展摘要：组织特异性启动子也称器官特异性启动子(organ specific promoter)，可调控基因只在某些特定的部位或器官中表达，并往往表现出发育调节的特性。
本文介绍了植物组织特异性启动子中的花、果实、种子及叶特异性启动子，并对植物组织特异性启动子研究中问题进行了讨论和展望。
关键词：植物组织特异性启动子，研究进展启动子(promoter)是RNA聚合酶能够识别并与之结合从而起始基因转录的DNA序列，是重要的顺式作用元件，位于结构基因5’端上游区的DNA序列，能指导全酶与模版的正确结合，活化RNA聚合酶，并使之具有起始特异性转录的形式，决定转录的方向和效率以及所使用的RNA聚合酶类型，是转录调控的中心。
目前，植物基因工程中常用的启动子为组成型表达启动子(Constitutive promoter)。
组织特异性启动子也称器官特异性启动子(organ specific promoter)，可调控基因只在某些特定的部位或器官中表达，并往往表现出发育调节的特性。
外源基因在细胞中表达是基因工程研究的关键，而组织特异性启动子不仅能使目的基因的表达产物在一定器官或组织部位积累，增加区域表达量，同时也可以避免植物营养的不必要浪费。
因此，组织特异性启动子一直都是植物基因工程中研究的重点和难点，研究者在植物的分生组织、维管束组织、薄壁组织、花粉、种子和胚乳等几乎各种组织中都发现有组织特异性驱动基因表达的启动子[1]，尤其在根、维管束和韧皮部特异表达启动子研究中取得了很大进展。
1 植物生殖器官表达的组织特异性启动子1.1 花特异启动子高等植物发育过程中花器官的形成是一个十分复杂的过程，它包括一系列器官分化及严格控制的细胞及生化变化，同时伴随大量基因的协同表达。
植物花特异表达启动子只在植物开花的时期启动基因的表达，它的分离克隆为花卉的品质改良提供了重要的顺式调控元件。
人们克隆了许多花药特异表达的基因，如在花药绒毡层特异表达的TA29[2]和A9[3]以及在花粉壁特异表达的Bp4A[4]基因等，这些基因都是在花药营养细胞中表达，与生殖细胞的分化无关。
CRISPRCas9技术编辑Wx基因创制新型糯稻种质
植物遗传资源学报2021,22 ( 3 ): 789-799Journal of Plant Genetic Resources DOI： 10.13430/ki.jpgr.20210104003 CRISPR/Cas9技术编辑奶:基因创制新型襦稻种质黄李春1>2,顾正文'，谈红艳、赵微\肖颖1，储睿、范晓磊张昌泉U2,李钱峰“2,刘巧泉(1植物功能基因组学教育部重点实验室/江苏省作物基因组学和分子育种重点实验室，扬州225009;2江苏省粮食作物现代产业技术协同创新中心/江苏省作物遗传生理重点实验室，扬州225009 >摘要：控制水稻胚乳直链淀粉合成的奶:基因是决定稻米蒸煮食味品质的主效基因.适当降低稻米的直链淀粉含量可显著提高稻米蒸煮食味品质:，编辑W x■基因编码的G B S S I蛋白C末端非关键位点有望微调其酶活性和胚乳直链淀粉含量，进 而改良稻米蒸煮食味品质3在未检测到关键结构域和位点的阶基因3'端设计靶位点T1和T2(分别位于阶基因第12和 第13外显子），利用CRISPR/Cas9技术进行编辑。
通过P C R和测序筛选获得纯合突变株系，用表观直链淀粉含量测定、凝股 渗透色谱、Western B lo t和qRT-P C R等技术分析其对水稻胚乳直链淀粉合成和阶基因表达的影响共获得8种保留GBSS1主要结构域的纯合突变系C1~C8。
其中，C2和C3中推测翻译的G B S S I蛋白仅有第518〜550/551位密码子发生移码；C1、C4~C8中推测翻译的G B S S I蛋白分别从第551位和第517/518位密码子开始移码..C1~C8米粉中表观直链淀粉含量显著降低，从野生型的16.79%下降到3.69%〜4.44%，但均稍高于含自然突变w x基因的糯稻近等基因系的2.92%。
G P C结果显 示，突变系中无直链淀粉合成，但其支链淀粉中长链（Ap2 )的链长均长于糯稻近等基因系wx。
面粉的热处理技术
本文采用湿热处理的方法探求改善硬质小麦加工适应性的效果，分析该处理过程中水分、温度、处理时间等物理参数对硬质小麦面粉加工适应性参 数的影响。本文研究了湿热处理条件与加工适应性各参数之间的关系，并初步得出湿热处理改善加工适应性的最佳条件，为建立湿热处理改善硬质小麦 加工适应性的工艺流程提供了理论基础与参考方法。
2.Mg2+浓度对GBSS的解离有影响。较高的Mg2+浓度能够抑制GBSS与淀粉的解离，当Mg2+浓度超过50mmol/L时，GBSS解离量仅为不加任何离子时的 47.4％，当Mg2+浓度降至2.5mmol/L时GBSS解离量升至不加任何离子时的94.4％，但当Mg2+浓度降为1.75mmol/L时GBSS解离量比不加任何离子时高 7.3％，说明在一定范围内随Mg2+浓度的降低GBSS解离量逐渐升高。GBSS从淀粉颗粒上的解离受Mg2+浓度的影响，这一结果初步证实GBSS与淀粉粒是通过 非共价键结合的。
１热处理技术
面粉的热处理工艺和技术是近几 年欧、美等国家开发并应用在面粉的 后处理Ｔ艺上的一项目新技术，主要 是以瑞士布勒公司为主，１９９８年研制 成功，进入市场。国内目前还没有这项 技术。该技术是面粉加工工艺的一个 发展，该技术是从１９９０年开始的独特 性设计。主要是生产一种高黏度和低 细菌的面粉。
粮油
万方数据
面粉的热处理技术
籽用和肉用印度南瓜果实发育过程中淀粉合成途径相关基因的表达分析
籽用和肉用印度南瓜果实发育过程中淀粉合成途径相关基因的表达分析王超杰;王云莉;徐文龙;韩宏宇;王志超;崔崇士;屈淑平【摘要】以籽用印度南瓜自交系98-2及肉用印度南瓜自交系312-1为试材,对印度南瓜果实淀粉含量及淀粉代谢相关基因的表达模式进行研究.结果表明:312-1和98-2果实中的总淀粉和支链淀粉积累模式存在明显差异,312-1中总淀粉和支链淀粉积累模式相似,都是随着果实发育逐渐积累,在授粉后40 d时达到高峰,随后略有下降,而98-2中总淀粉和支链淀粉含量一直维持在果实发育初期(授粉后5 d)水平,没有显著积累的过程;在果实发育的各个时期312-1中总淀粉和支链淀粉含量均极显著高于98-2.2份材料中直链淀粉的积累模式大致相同,都维持在果实发育初期的积累水平,但在果实发育的各个时期312-1中直链淀粉含量均显著或极显著高于98-2.在淀粉组成上,2份材料均是以支链淀粉为主.淀粉合成途径关键酶基因除ISAⅢ、SSSⅡ和SBEⅡ基因外,GPT、AATP、PGM、AGPaseL、GBSSⅠ、SSSⅢ和SBEⅠ基因在2份材料果实发育过程中的表达趋势相似,其表达量在2份材料中存在较大差异,结合2份材料果实中直链淀粉和支链淀粉含量,推测GPT、AATP、AGPaseL、GBSSⅠ、SSSⅡ、SSSⅢ、SBEⅠ和SBEⅡ基因是调控印度南瓜果实中淀粉积累的关键酶基因.【期刊名称】《中国蔬菜》【年(卷),期】2019(000)007【总页数】7页(P36-42)【关键词】印度;南瓜;直链淀粉;支链淀粉;果实发育;基因表达【作者】王超杰;王云莉;徐文龙;韩宏宇;王志超;崔崇士;屈淑平【作者单位】东北农业大学园艺园林学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学园艺园林学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学园艺园林学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学园艺园林学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学园艺园林学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学园艺园林学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学园艺园林学院,黑龙江哈尔滨 150030【正文语种】中文在高等植物中淀粉主要由两种不同的葡聚糖聚合物组成：直链淀粉和支链淀粉。
利用HRM功能标记检测黑龙江省水稻种质资源Wx和fgr的基因型分布
利用HRM功能标记检测黑龙江省水稻种质资源Wx和fgr的基因型分布郭震华;罗文龙;黄翠红;陈志强;黄晓群;刘传雪;张兰民【摘要】水稻直链淀粉含量与香味作为水稻重要的品质性状,一直是水稻研究热点.HRM(高分辨率熔解曲线)技术作为近年来新兴的PCR分析技术,拥有简便、快速及分辨率高等特点,备受关注.为明确黑龙江省种质资源中Wx及雪基因的分布情况,利用HRM功能标记Wx-a/b和fgr-E7FNP,在67份部分黑龙江省主栽品种及优异种质资源中进行基因分型,结果表明,67份种质均含有纯合Wxb基因;4份种质含有纯合的fgr基因,分别为哈99352、龙粳香1号、中龙香粳1号及龙交103970,其余63份种质含纯合野生型BAD2基因.【期刊名称】《农业图书情报学刊》【年(卷),期】2016(028)010【总页数】5页(P21-25)【关键词】水稻;高分辨率熔解曲线;Wx基因;fgr基因;基因分型【作者】郭震华;罗文龙;黄翠红;陈志强;黄晓群;刘传雪;张兰民【作者单位】黑龙江省农业科学院佳木斯水稻研究所,黑龙江佳木斯154026;国家植物航天育种工程技术研究中心,广东广州510642;国家植物航天育种工程技术研究中心,广东广州510642;国家植物航天育种工程技术研究中心,广东广州510642;国家植物航天育种工程技术研究中心,广东广州510642;黑龙江省农业科学院佳木斯水稻研究所,黑龙江佳木斯154026;黑龙江省农业科学院佳木斯水稻研究所,黑龙江佳木斯154026;黑龙江省农业科学院佳木斯水稻研究所,黑龙江佳木斯154026【正文语种】中文【中图分类】S331黑龙江省作为北方稻区第一水稻大省，水稻面积和总产均占全国10%左右，占北方稻区50%以上，商品率超过70%，是全国主要的商品粮基地。
水稻胚乳中的淀粉含量直接影响稻米多项品质，特别是直链淀粉含量，是稻米食用口感重要影响因素之一。
Waxy（Wx）基因是在糯稻突变体中鉴别出来的。
利用分子标记鉴定水稻品种的Wx等位基因及其与直链淀粉含量的关系
V ol 131,N o 14pp 1420-424 Apr 1,2005作 物 学 报ACT A AG RONOMICA SI NICA第31卷第4期2005年4月 420～424页利用分子标记鉴定水稻品种的Wx 等位基因及其与直链淀粉含量的关系张建勇 陈德全 李仕贵3 马玉清 王玉平Ξ(四川农业大学水稻研究所,四川温江611130)摘 要:应用Wx 基因的微卫星标记484Π485和PCR 2Acc Ⅰ分子标记对93份籼、粳水稻品种(系)的Wx 基因的多态性进行了研究,并探讨了不同基因型与直链淀粉含量的关系。
484Π485扩增结果表明,该微卫星标记表现为3种基因型,即Wx 1Wx 1、Wx 2Wx 2和Wx 3Wx 3,其中籼稻以Wx 1Wx 1和Wx 3Wx 3为主,粳稻以Wx 2Wx 2为主,具有Wx 1Wx 1和Wx 2Wx 2的品种(系)直链淀粉含量低,具有Wx 3Wx 3的品种(系)直链淀粉含量高。
PCR 2Acc Ⅰ分子标记检测到两种基因型,即GG 和TT 型,其中GG 型水稻品种的直链淀粉含量较高,TT 型水稻品种的直链淀粉含量较低。
两种分子标记检测结合分析,具有Wx 2Wx 2的品种(系)为TT 型,Wx 3Wx 3的品种(系)为GG 型;Wx 1Wx 1的品种(系)既有TT 型又有GG 型,但GG 型品种的直链淀粉含量显著高于TT 型品种。
统计分析表明,利用微卫星标记和PCR 2Acc Ⅰ分子标记检测93个水稻品种(系)中Wx基因与直链淀粉含量的相关系数分别为0.86733和0.88133,Wx 基因的遗传变异可解释这些品种(系)直链淀粉含量变异的75%以上;因此,在水稻育种中,利用上述分子标记对辅助选择改良稻米的直链淀粉含量,提高育种效率具有重要意义。
关键词:水稻;蜡质基因;直链淀粉含量;PCR 2Acc Ⅰ中图分类号:S511The G enotype of Waxy G ene and Their R elationship to Amylose Content in Indica and J aponica Rice (Oryza sativa L.)ZH ANGJian 2Y ong ,CHE N De 2Quan ,LI Shi 2G ui 3,M A Y u 2Qing ,W ANG Y u 2Ping(Rice Research Institute ,Sichuan Agricultural Univer sity ,Wenjiang 611130,Sichuan ,China )Abstract :Wx gene were highly linked with m icrosatellite marker named 484Π485and C APs marker named PCR 2Acc Ⅰ.In order to estimate the different Wx genotypes and the relationships between Wx genotype and amylose content (AC ),these tw o kinds of m olecular marker were used to am plify polym orphisms of 93rice lines including indica and japonica subspecies.The polym orphism of 484Π485am plification produced three genotypes ,Wx 1Wx 1,Wx 2Wx 2and Wx 3Wx 3.Wx 1Wx 1and Wx 3Wx 3genotypes were mainly found in indica lines ,and Wx 2Wx 2were mainly found in japonica lines.The correlation coefficient between Wx genotype and AC was 0.86733and reached a very significant level.Wx 1Wx 1and Wx 2Wx 2genotypes showed significantly lower amylose content and Wx 3Wx 3genotype higher amylose content.A PCR 2Acc Ⅰm olecular marker was used to determ ine whether the first nucleotide of splice donor site of waxy intron 1was Gor T in 93rice cultivars 1lines collected from different areas.M ost Wx 1Wx 1and Wx 2Wx 2genotypes were TT genotype and m ost Wx 3Wx 3genotypes were GG genotype.The correlation coefficient between Wx genotype and PCR 2Acc Ⅰgenotype was 0188133with very significant level.75%of AC difference am ong the 93lines could be explained by the variation of the Wx genotypes.All the results indicated that marker 2assisted selection (M AS )is a highly efficient way for AC selection in rice quality breeding.K ey w ords :Rice (Oryza sativa L.);Waxy gene ;Amylose content (AC );PCR 2Acc Ⅰ 品质育种已成为我国水稻育种的重要目标之一,用分子标记选择优良米质的基因型,是重要的品质改良方法。
宁夏春小麦种质资源Wx基因分子鉴定及其分布
doi ：107606/jissn1009-104120210303麦类作物学报 2021 41(3)：281—286JournalofTriticeaeCrops 网络出版时间：2021-03-12网络出版地址:https ://kns . cnki. net/kcms/detail/61. 1359. S. 20210311. 1630. 006. html宁夏春小麦种质资源皿基因分子鉴定及其分布亢玲】，李瑞博2,王小亮】，张维军】，何进尚】，陈东升1(1.宁夏农林科学院农作物研究所，宁夏银川750004； 2.西北农林科技大学农学院,陕西杨凌712100)摘 要：为明确宁夏春小麦种质资源Waxy 基因的分布情况，利用 Wx-Al Wx-Bl 和 Wx-Dl 位点的6个STS 标记(PA1、PA2、PB1、PB2、PD1、PD2),对299个宁夏春小麦种质资源进行等位变异检测。
结果表明，供试小麦种质的 Waxy 基因组成以野生型(Wx-Aa/Wx-Ba/Wx-Da )为主，占参试材料总数的88 3 %。
在Wx-Al W-1和 W-1 基因位点上，发现 Wx-Alb-. W-Bb 和 Wx-Dlb 突变型材料分别有2、32和2个，分别占材料总数的0. 7%、10. 7%和0. 7% ；其中，有1个材料为 Wx-Alb/Wx-Blb 突变型，占材料总数的0.3%。
宁夏春小麦种质资源中W-B J 基因缺失类型的分布频率相对较高，在新品种和高代品系中该类型逐步增加。
该研究有助于了解宁夏优质面粉小麦品种的生产现状，为该区和我国其他相关春麦区优质面条小麦的选育奠定基础。
关键词：春小麦；Wx 基因；分子鉴定中图分类号：S512.1；S330文献标识码：A文章编号= 1009-1041(2021)03-0281-06Molecular Identification and Distribution of Wx Genes inNingxia Spring Wheat Germplasm ResourcesKANG Ling ,LI Ruibo 2, WANG Xiaoliang 1 , ZHANG Weijun 1 ,HE Jinshang 1 ,CHEN Dongsheng 1(1. Crop Research Insttute , Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences , Yinchuan , Ningxia 750004 ,China ；2 Co l egeofAgronomy NorthwestAgricultureandForestry University Yangling Shaanxi712100 China )Abstract : In order to clarify the distribution of Waxy genes in Ningxia spring wheat germplasm re sources , six STS markers(PA1 ,PA2 ,PB1 ,PB2 ,PD1 and PD2) at Wx-Al , Wx-Bl and Wx-Dl loci were usedtodetectthepresenceandabsenceofthree Waxyproteinsin299 Ningxiaspring wheatgerm plasm. The results showed that waxy gene composition of wheat germplasm tested was dominated bythe wild type( Wx-A I a /Wxla /Wx-Dla ) ,accounting for 88. 3%. At the Wx-Al , Wx-Bl and Wx-Dlloci , varieties with Wx-Alb , Wx-Blb and Wx-Dlb genotype are 2,32 and 2 , accounting for 0. 7% , 10. 7% and 0. 7% , respectively . There is one variety with Wx-Alb /Wx-Blb genotype, accounting for0.3%. The frequency of Wx-Bl gene nu ll type is relatively high in Ningxia spring wheat germplasmresourcesandisgradua l yincreasinginnewvarietiesandhighgenerationlineswithprogressofwheat qualitybreeding These results wi l contribute to understand the status of high-quality noodle wheat inNingxiaandotherrelevantspringwheatregionsKey words ：Spring wheat ；Wx gene ；Molecular identification收稿日期:2020-07-01 修回日期:2020-09-23基金项目庁夏回族自治区农业科技自主创新专项(NKYJ-18-13)；宁夏回族自治区育种专项(NXNYYZ201302-01)；宁夏回族自治区农业科技自主创新专项(N K YJ-20-05)第一作者 E-mail ： kanglingl005@163. com 通讯作者:陈东升(E-mail ： cdsnky @163. com )-282-麦类作物学报第41卷颗粒结合淀粉合成酶(granule-bound starch synthese,GBSS)是直链淀粉合成途径中的关键酶,又称为Waxy蛋白(简称Wx蛋白)。
莲藕GBSS基因cDNA全长的克隆与序列分析
莲藕GBSS基因cDNA全长的克隆与序列分析陆叶;李良俊;梁国华;陈学好【摘要】采用RT-PCR结合RACE技术,扩增得到全长为2 265 bp的莲藕"美人红"品种的GBSS基因的cDNA序列(GenBank登录号EU938541),其中开放阅读框(ORF)长为1 848 bp,共编码615个氨基酸.用DNAman软件比对,莲藕GBSS基因cDNA与金鱼草(AJ006293)、马铃薯(EU403426)、大豆(EFl53101)、水稻(EU735072)Wx基因cDNA序列的同源性分别达61.2%、59.6%、64.2%、50.6%.对该基因编码的氨基酸序列进行Blastp分析发现.该序列与金鱼草的序列同源性最高,达到77%,与马铃薯、甘薯的同源性达到75%,与豆科植物的同源性在70%～75%,与禾本科植物的同源性在65%～70%.【期刊名称】《长江蔬菜》【年(卷),期】2010(000)014【总页数】5页(P19-23)【关键词】莲藕;GBSS基因;cDNA;克隆【作者】陆叶;李良俊;梁国华;陈学好【作者单位】扬州大学水生蔬菜研究室,扬州,225009;扬州大学教育部植物功能基因组学重点实验室;扬州大学水生蔬菜研究室,扬州,225009;扬州大学教育部植物功能基因组学重点实验室;扬州大学教育部植物功能基因组学重点实验室;扬州大学水生蔬菜研究室,扬州,225009【正文语种】中文莲藕（Nelumbo nucifera Gaertn）是睡莲科多年生水生草本植物，在我国南方普遍种植。
莲藕产品鲜藕、藕粉和莲籽是公认的滋补食品，含丰富的淀粉、蛋白质、多种维生素和矿质营养，是优良的特色蔬菜和副食佳品，具有很好的营养保健功能，深受消费者欢迎[1]。
随着我国加入WTO，莲藕加工产品盐渍藕、水煮藕及藕粉等远销日本、韩国及欧、美等国家和地区，已成为我国重要的出口创汇蔬菜之一。
但不同加工产品对莲藕品质的要求不一致，影响莲藕加工品质的是以淀粉为主的碳水化合物，其中直链淀粉含量对莲藕加工、食用品质有重要影响，而直链淀粉的合成由颗粒结合淀粉合成酶（Granule-bound starch synthase,简称GBSS）基因调控。
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货号：MS3405 规格：100管/96样结合态淀粉合成酶（Granule-bound starch synthase，GBSS）
试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。
测定原理：
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH 的增加量，可以计算GBSS活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100mL×2瓶，4℃保存；
试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入14mL试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入8mL试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂五：液体×1支，-20℃保存；临用前加入500μL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
粗酶液制备:
称取0.1~0.2g组织（建议称取约0.1g组织），加入1mL提取液，冰浴中匀浆。
10000g ，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混匀，置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2
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混匀，30℃保温20 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却
10000g 25℃
A=A2-A1。
注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
GBSS活性计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T×稀释倍数 =528×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T×稀释倍数=528×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，2.85×10-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.075 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.73；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T×稀释倍数 =1056×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T×稀释倍数 =1056×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，2.85×10-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.075 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.73；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
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