细胞培养课件
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（一）获取小鼠胚胎
1.将8周龄的昆白♀鼠和12周龄的昆白♂按1:1比例合笼。次日晨10:00前观察 ♀鼠阴道口，有乳白色或蛋黄色胶冻状物（阴道栓）即定为怀孕0.5天； 2.断颈处死孕13.5天的母鼠，置于蜡盘上。75％酒精消毒后，用普通剪刀和镊 子剪开下腹皮肤，并用两把弯头止血钳夹住切口处的皮肤向头尾两侧牵拉即剥 皮。用眼科弯镊和眼科弯剪打开腹腔，暴露出子宫。用眼科弯镊夹住一侧子宫， 分离子宫系膜，眼科弯剪剪断子宫角和子宫颈，将整个子宫分离下来（注意勿 使子宫滑落到腹腔外，避免污染）。将子宫置于无菌滤纸上去除血迹。 3.在超净台内将子宫移入预先盛有PBS的平皿中，洗涤数次。将子宫移入另一 盛有PBS的平皿中，用眼科弯剪沿子宫系膜打开子宫，取出带有胎膜的胎鼠， 并用两把眼科镊子剔除胎膜，取出胎鼠（一般有12只）。将胎鼠移入另一盛有 PBS的平皿中，用眼科剪和眼科镊去除胎鼠的头、四肢和内脏，得鼠胚躯干。 将鼠胚躯干移至另一盛有PBS的平皿中，用PBS洗涤两次至无肉眼可见的血色。
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
（二）分散细胞
1.将干净的鼠胚躯干移至干净的培养皿内（一般6个鼠胚躯干装1皿，视大小而 定），用眼科直剪充分剪碎，剪成约1mm3以下的碎块。 2.用1ml的移液器每皿加入3ml的PBS，混匀，静置30sec，用移液器吸去上清液； 向装有鼠胚碎块的培养皿内加入1ml0.25%胰蛋白酶—0.02%EDTA混合消化液， 用1ml移液器轻轻吹吸30秒，可见组织块变得较为粘稠，缓慢摇动培养皿25min后利用倒置显微镜观察组织块变透明，并有单细胞脱离时即可进行组织块 半消化的原代培养； 3.留小部分鼠胚碎块于培养皿中用于组织块半消化原代培养，其余移至一尖底 离心管中，置37℃水浴摇动消化15-20min，用于细胞计数及细胞冻存实验； 4.培养皿中立即加入1ml含50%新生牛血清的PBS，吹打混匀，以终止酶的作用； 离心管消化结束后，静置5min，用移液器小心将上清液转移到另一离心管中， 并加入1ml含50%新生牛血清的PBS中，吹打混匀，以终止酶的作用， 1000rpm 离心5min，弃上清，沉淀即为分散的鼠胚成纤维细胞
超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱 动空气通过高效滤器除去空气中的尘埃颗 粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过 工作台面，使工作台内构成无菌环境。
解剖显微镜
倒置显Βιβλιοθήκη Baidu镜
2.细胞培养的主要实验设备 2.细胞培养的主要实验设备
3.细胞培养的主要试剂（培养基）
基础培养基（人工合成）：干粉培养基DMEM 、α-MEM、RPMI1640 血清（天然成分）： 水：高纯度的去离子水 抗菌素：通常是青霉素和链霉素联合使用，使用浓度为100U/ml 消化液：常用0.25％胰蛋白酶，使细胞脱离组织或容器壁， 用含血清培养液中止其活性
血清质量好坏是实验成败的关键。 常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、马血清等， 其中以胎牛血清质量最好。 优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体病毒污 染。 血清的灭活（消除补体活性）：56 ℃ ，30 分钟 血清的消毒：过滤除菌 血清的使用浓度为5％～20％
4.细胞培养用器皿的清洗和消毒
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
（三）接种培养
1. 用移液器吸去培养皿中的多余液体加入适量含20%新生牛血清的DMEM 培养液，将组织块转移至新的培养皿（瓶）中，并均匀分布在培养皿 （瓶）的底部，做好标记（日期、名称、编号），放入37℃，5％CO2， 100％相对湿度的培养箱中培养。 2. 细胞沉淀用适量含20%新生牛血清的DMEM培养液重新悬浮；利用血球 计数板计数，调节细胞密度为105个/ml，计算细胞的存活率（具体实 验步骤见“细胞计数与活力检测”部分）；剩余细胞悬液用于细胞冻 存实验（具体见“细胞的冷冻保存”部分） 3. 第2-3天可以观察，组织块半消化原代培养可见组织碎块附着于培养 瓶（皿）底部，周围细胞呈放射状生长，此时可见有多种细胞类型， 有的是呈梭形的成纤维细胞，有的是呈圆形的上皮细胞。
细胞培养的基本概念
培养细胞的类型
贴附型
成纤维样细胞型 上皮样细胞型
悬浮型
培养的骨髓瘤细胞 培养人真皮成纤维细胞
培养人口腔上皮细胞
细胞培养的基本概念
贴附型细胞的生长特性 细胞的贴壁生长 接触抑制 细胞的生长曲线
细胞贴壁延展过程(模式图) 细胞的接触抑制现象 细胞贴壁延展过程(模式图)
细胞数增大极限点， 出现接触抑制
指数生长期是最佳实验期 !
细胞指数生 长极限点 细 胞 数 量 平台期 退化死亡
潜伏期
指数生长期
0
24
48
72
96
120
小时
正常培养细胞的生长曲线
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
原代培养的一般流程
实验准备 取材、 取材、分离细胞 原代培养 维护培养
操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手， 操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手， 着装 然后用1 新洁尔灭浸泡消毒5 然后用1‰ 新洁尔灭浸泡消毒5分钟
细胞培养技术主要参考资料
组织培养和分子细胞学技术. 鄂征 主编. 北京出版社, 1995年8月出版 细胞培养 司徒镇强 主编. 世界图书出版 公司, 1996年出版 体外培养的原理和技术. 薛庆善 主编. 科 学出版社, 2001年1月出版 动物细胞培养——基本技术指南(中译).章 静波 等译. 科学出版社, 2004年10月出版. Human Cell Culture Protocols (2nd Ed). Joanna Picot. Humana Press, October 2004. Basic Cell Culture Protocols (3rd Ed). CD Helgason, CL Miller. Humana Press, October 2004
一般玻璃器皿的清洗分为四个步骤：
1、自来水浸泡 2、洗涤剂刷洗(如有必要进行超声处理） 3、泡酸（浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水） 4、流水冲洗过夜，依次用蒸馏水、三蒸水漂洗，最 后烘干备用
常用消毒方法：
1、湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌），15磅，15～20min 2、过滤除菌(如：血清的除菌）
细胞培养的基本概念
原代培养(primary culture)，或 称为初代培养，就是从供体取下组 织细胞后在体外进行的首次培养， 中途不分割培养物。常用的原代培 养方法有组织块培养法和消化培养 法。
细胞培养的基本概念
传代培养 （Secondly Culture） Culture）
传代培养(secondly culture) (secondly culture)，在 原代培养物铺展为单细胞层后，将 原代培养细胞分开接种到两个或多 个新的培养瓶中继续培养增殖。
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
原代培养的一般流程
实验准备 取材、 取材、分离细胞 原代培养 维护培养
原代培养方法
组织块培养法
消化法
单细胞法
半消化法
原代培养流程图： 原代培养流程图：组织块法
取材
漂洗
剪碎
涂布接种
加液
沉降洗涤
接种组织块
原代培养流程图： 原代培养流程图：组织块法
移入培养箱中（注 移入培养箱中（ 意贴有组织块的一 面朝上）， 面朝上），
潜伏期
指数生长期
0
24
48
72
96
120
小时
每一代培养细胞的生长过程分期
细胞的传代培养： 细胞的传代培养：贴附型
吸去旧液 PBS洗 涤 1~2次 加入消化液 解离细胞约5min 在倒置显微镜下观 察，细胞呈圆粒状
培养细胞 的观察
在培养瓶中加入 适量含血清培养液
分装接种，置于CO2 培养箱中继续培养
静止2 静止2～3小时，然 小时， 后将细胞培养瓶轻 轻翻转， 轻翻转，继续静止 培养。 培养。
原代培养流程图： 原代培养流程图：消化法
取材 漂洗 剪碎
计数接种 酶解 (单细胞)
离心洗涤 加液
原代培养流程图： 原代培养流程图：半消化法
取材
漂洗
剪碎
接种 酶解
沉降洗涤
加液
(部分酶解)
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
培养细胞 的观察
在培养瓶中加入 适量含血清培养液
分装接种，置于CO2 培养箱中继续培养
调整细胞密度
吹打悬浮细胞
细胞的传代培养： 细胞的传代培养：悬浮型
直立瓶
去旧液
加新液
加新液
分瓶接种
小鼠胚胎成纤维细胞原代培养
细胞的传代培养
将原代培养物分割后重新接种到两 个或多个培养瓶内进行培养，这一 操作称为传代培养,传代比例为1:3 至1:6，依细胞种类而异. 细胞传代培养的意义 传代时机的把握 传代培养的代数限制；少数细胞可 出现永生化
细胞数增大极限点， 出现接触抑制
细胞指数生长 极限点 细 胞 数 量 （MI、细胞群 体倍增时间） 平台期 退化死亡
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
原代培养的一般流程
实验准备 取材、 取材、分离细胞 原代培养 维护培养
将小白鼠断颈处死，然后用 将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或 用眼科剪和镊，将肾外膜剪破， 用眼科剪和镊，将肾外膜剪破，并 剪碎组织 酒精或 将小白鼠置超净工作台上， 将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔 1‰ 新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。 新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。 将其剥向肾门， 将其剥向肾门，去肾外膜及脂肪
细胞培养 （Cell Culture） Culture）
细胞培养(cell culture)是指细胞的离 体培养，是在无菌条件下，把动物或植 物的细胞从机体中分离出来，置于培养 皿中，并在一个合适的环境中，给以营 养物质，使之继续生存和繁殖的方法。
细胞培养的基本概念
原代培养 （Primary Culture） Culture）
调整细胞密度
吹打悬浮细胞
细胞的传代培养： 细胞的传代培养：贴附型
培养液颜色、 培养液颜色、是否清亮
培养细胞 的观察
培养细胞的状态
细胞的传代培养： 细胞的传代培养：贴附型
吸去旧液 PBS洗 涤 1~2次 加入消化液 解离细胞约5min 在倒置显微镜下观 察，细胞呈圆粒状
培养细胞 的观察
在培养瓶中加入 适量含血清培养液
分装接种，置于CO2 培养箱中继续培养
调整细胞密度
吹打悬浮细胞
胰酶消化数分钟
细胞脱离器壁， 细胞脱离器壁，呈圆粒状
细胞的传代培养： 细胞的传代培养：贴附型
中止消化、吹散细胞 细胞计数，调节密度 按比例分割，接种至新培养瓶 中止消化、离心，收集细胞 离心， 细胞计数， 按比例分割， PBS洗 涤 1~2次 加入消化液 解离细胞约5min 在倒置显微镜下观 察，细胞呈圆粒状 吸去旧液
细胞培养前的实验准备
离心机 实 验 台 橱柜
1.细胞培养室设置
显 微 镜
实验台
缓冲间
衣 柜 冰箱
无菌操作室
递物窗 培养箱 试剂柜
超 净 工 作 台 实 验 仪 器 台
冰 箱
实 验 台
实 验 台
实 验 台
实 验 台
准备室
水 池
无菌操作室
上风口
下风口
超净工作台和CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题： ①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以 保证通气。 ②保持培养箱内空气干净。定期消毒 ③箱内蒸馏水槽中预留灭菌蒸馏水，以保持箱 2.细胞培养的主要实验设备 2.细胞培养的主要实验设备 内湿度，避免培养液蒸发。
1.将8周龄的昆白♀鼠和12周龄的昆白♂按1:1比例合笼。次日晨10:00前观察 ♀鼠阴道口，有乳白色或蛋黄色胶冻状物（阴道栓）即定为怀孕0.5天； 2.断颈处死孕13.5天的母鼠，置于蜡盘上。75％酒精消毒后，用普通剪刀和镊 子剪开下腹皮肤，并用两把弯头止血钳夹住切口处的皮肤向头尾两侧牵拉即剥 皮。用眼科弯镊和眼科弯剪打开腹腔，暴露出子宫。用眼科弯镊夹住一侧子宫， 分离子宫系膜，眼科弯剪剪断子宫角和子宫颈，将整个子宫分离下来（注意勿 使子宫滑落到腹腔外，避免污染）。将子宫置于无菌滤纸上去除血迹。 3.在超净台内将子宫移入预先盛有PBS的平皿中，洗涤数次。将子宫移入另一 盛有PBS的平皿中，用眼科弯剪沿子宫系膜打开子宫，取出带有胎膜的胎鼠， 并用两把眼科镊子剔除胎膜，取出胎鼠（一般有12只）。将胎鼠移入另一盛有 PBS的平皿中，用眼科剪和眼科镊去除胎鼠的头、四肢和内脏，得鼠胚躯干。 将鼠胚躯干移至另一盛有PBS的平皿中，用PBS洗涤两次至无肉眼可见的血色。
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
（二）分散细胞
1.将干净的鼠胚躯干移至干净的培养皿内（一般6个鼠胚躯干装1皿，视大小而 定），用眼科直剪充分剪碎，剪成约1mm3以下的碎块。 2.用1ml的移液器每皿加入3ml的PBS，混匀，静置30sec，用移液器吸去上清液； 向装有鼠胚碎块的培养皿内加入1ml0.25%胰蛋白酶—0.02%EDTA混合消化液， 用1ml移液器轻轻吹吸30秒，可见组织块变得较为粘稠，缓慢摇动培养皿25min后利用倒置显微镜观察组织块变透明，并有单细胞脱离时即可进行组织块 半消化的原代培养； 3.留小部分鼠胚碎块于培养皿中用于组织块半消化原代培养，其余移至一尖底 离心管中，置37℃水浴摇动消化15-20min，用于细胞计数及细胞冻存实验； 4.培养皿中立即加入1ml含50%新生牛血清的PBS，吹打混匀，以终止酶的作用； 离心管消化结束后，静置5min，用移液器小心将上清液转移到另一离心管中， 并加入1ml含50%新生牛血清的PBS中，吹打混匀，以终止酶的作用， 1000rpm 离心5min，弃上清，沉淀即为分散的鼠胚成纤维细胞
超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱 动空气通过高效滤器除去空气中的尘埃颗 粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过 工作台面，使工作台内构成无菌环境。
解剖显微镜
倒置显Βιβλιοθήκη Baidu镜
2.细胞培养的主要实验设备 2.细胞培养的主要实验设备
3.细胞培养的主要试剂（培养基）
基础培养基（人工合成）：干粉培养基DMEM 、α-MEM、RPMI1640 血清（天然成分）： 水：高纯度的去离子水 抗菌素：通常是青霉素和链霉素联合使用，使用浓度为100U/ml 消化液：常用0.25％胰蛋白酶，使细胞脱离组织或容器壁， 用含血清培养液中止其活性
血清质量好坏是实验成败的关键。 常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、马血清等， 其中以胎牛血清质量最好。 优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体病毒污 染。 血清的灭活（消除补体活性）：56 ℃ ，30 分钟 血清的消毒：过滤除菌 血清的使用浓度为5％～20％
4.细胞培养用器皿的清洗和消毒
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
（三）接种培养
1. 用移液器吸去培养皿中的多余液体加入适量含20%新生牛血清的DMEM 培养液，将组织块转移至新的培养皿（瓶）中，并均匀分布在培养皿 （瓶）的底部，做好标记（日期、名称、编号），放入37℃，5％CO2， 100％相对湿度的培养箱中培养。 2. 细胞沉淀用适量含20%新生牛血清的DMEM培养液重新悬浮；利用血球 计数板计数，调节细胞密度为105个/ml，计算细胞的存活率（具体实 验步骤见“细胞计数与活力检测”部分）；剩余细胞悬液用于细胞冻 存实验（具体见“细胞的冷冻保存”部分） 3. 第2-3天可以观察，组织块半消化原代培养可见组织碎块附着于培养 瓶（皿）底部，周围细胞呈放射状生长，此时可见有多种细胞类型， 有的是呈梭形的成纤维细胞，有的是呈圆形的上皮细胞。
细胞培养的基本概念
培养细胞的类型
贴附型
成纤维样细胞型 上皮样细胞型
悬浮型
培养的骨髓瘤细胞 培养人真皮成纤维细胞
培养人口腔上皮细胞
细胞培养的基本概念
贴附型细胞的生长特性 细胞的贴壁生长 接触抑制 细胞的生长曲线
细胞贴壁延展过程(模式图) 细胞的接触抑制现象 细胞贴壁延展过程(模式图)
细胞数增大极限点， 出现接触抑制
指数生长期是最佳实验期 !
细胞指数生 长极限点 细 胞 数 量 平台期 退化死亡
潜伏期
指数生长期
0
24
48
72
96
120
小时
正常培养细胞的生长曲线
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
原代培养的一般流程
实验准备 取材、 取材、分离细胞 原代培养 维护培养
操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手， 操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手， 着装 然后用1 新洁尔灭浸泡消毒5 然后用1‰ 新洁尔灭浸泡消毒5分钟
细胞培养技术主要参考资料
组织培养和分子细胞学技术. 鄂征 主编. 北京出版社, 1995年8月出版 细胞培养 司徒镇强 主编. 世界图书出版 公司, 1996年出版 体外培养的原理和技术. 薛庆善 主编. 科 学出版社, 2001年1月出版 动物细胞培养——基本技术指南(中译).章 静波 等译. 科学出版社, 2004年10月出版. Human Cell Culture Protocols (2nd Ed). Joanna Picot. Humana Press, October 2004. Basic Cell Culture Protocols (3rd Ed). CD Helgason, CL Miller. Humana Press, October 2004
一般玻璃器皿的清洗分为四个步骤：
1、自来水浸泡 2、洗涤剂刷洗(如有必要进行超声处理） 3、泡酸（浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水） 4、流水冲洗过夜，依次用蒸馏水、三蒸水漂洗，最 后烘干备用
常用消毒方法：
1、湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌），15磅，15～20min 2、过滤除菌(如：血清的除菌）
细胞培养的基本概念
原代培养(primary culture)，或 称为初代培养，就是从供体取下组 织细胞后在体外进行的首次培养， 中途不分割培养物。常用的原代培 养方法有组织块培养法和消化培养 法。
细胞培养的基本概念
传代培养 （Secondly Culture） Culture）
传代培养(secondly culture) (secondly culture)，在 原代培养物铺展为单细胞层后，将 原代培养细胞分开接种到两个或多 个新的培养瓶中继续培养增殖。
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
原代培养的一般流程
实验准备 取材、 取材、分离细胞 原代培养 维护培养
原代培养方法
组织块培养法
消化法
单细胞法
半消化法
原代培养流程图： 原代培养流程图：组织块法
取材
漂洗
剪碎
涂布接种
加液
沉降洗涤
接种组织块
原代培养流程图： 原代培养流程图：组织块法
移入培养箱中（注 移入培养箱中（ 意贴有组织块的一 面朝上）， 面朝上），
潜伏期
指数生长期
0
24
48
72
96
120
小时
每一代培养细胞的生长过程分期
细胞的传代培养： 细胞的传代培养：贴附型
吸去旧液 PBS洗 涤 1~2次 加入消化液 解离细胞约5min 在倒置显微镜下观 察，细胞呈圆粒状
培养细胞 的观察
在培养瓶中加入 适量含血清培养液
分装接种，置于CO2 培养箱中继续培养
静止2 静止2～3小时，然 小时， 后将细胞培养瓶轻 轻翻转， 轻翻转，继续静止 培养。 培养。
原代培养流程图： 原代培养流程图：消化法
取材 漂洗 剪碎
计数接种 酶解 (单细胞)
离心洗涤 加液
原代培养流程图： 原代培养流程图：半消化法
取材
漂洗
剪碎
接种 酶解
沉降洗涤
加液
(部分酶解)
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
培养细胞 的观察
在培养瓶中加入 适量含血清培养液
分装接种，置于CO2 培养箱中继续培养
调整细胞密度
吹打悬浮细胞
细胞的传代培养： 细胞的传代培养：悬浮型
直立瓶
去旧液
加新液
加新液
分瓶接种
小鼠胚胎成纤维细胞原代培养
细胞的传代培养
将原代培养物分割后重新接种到两 个或多个培养瓶内进行培养，这一 操作称为传代培养,传代比例为1:3 至1:6，依细胞种类而异. 细胞传代培养的意义 传代时机的把握 传代培养的代数限制；少数细胞可 出现永生化
细胞数增大极限点， 出现接触抑制
细胞指数生长 极限点 细 胞 数 量 （MI、细胞群 体倍增时间） 平台期 退化死亡
小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养
原代培养的一般流程
实验准备 取材、 取材、分离细胞 原代培养 维护培养
将小白鼠断颈处死，然后用 将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或 用眼科剪和镊，将肾外膜剪破， 用眼科剪和镊，将肾外膜剪破，并 剪碎组织 酒精或 将小白鼠置超净工作台上， 将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔 1‰ 新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。 新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。 将其剥向肾门， 将其剥向肾门，去肾外膜及脂肪
细胞培养 （Cell Culture） Culture）
细胞培养(cell culture)是指细胞的离 体培养，是在无菌条件下，把动物或植 物的细胞从机体中分离出来，置于培养 皿中，并在一个合适的环境中，给以营 养物质，使之继续生存和繁殖的方法。
细胞培养的基本概念
原代培养 （Primary Culture） Culture）
调整细胞密度
吹打悬浮细胞
细胞的传代培养： 细胞的传代培养：贴附型
培养液颜色、 培养液颜色、是否清亮
培养细胞 的观察
培养细胞的状态
细胞的传代培养： 细胞的传代培养：贴附型
吸去旧液 PBS洗 涤 1~2次 加入消化液 解离细胞约5min 在倒置显微镜下观 察，细胞呈圆粒状
培养细胞 的观察
在培养瓶中加入 适量含血清培养液
分装接种，置于CO2 培养箱中继续培养
调整细胞密度
吹打悬浮细胞
胰酶消化数分钟
细胞脱离器壁， 细胞脱离器壁，呈圆粒状
细胞的传代培养： 细胞的传代培养：贴附型
中止消化、吹散细胞 细胞计数，调节密度 按比例分割，接种至新培养瓶 中止消化、离心，收集细胞 离心， 细胞计数， 按比例分割， PBS洗 涤 1~2次 加入消化液 解离细胞约5min 在倒置显微镜下观 察，细胞呈圆粒状 吸去旧液
细胞培养前的实验准备
离心机 实 验 台 橱柜
1.细胞培养室设置
显 微 镜
实验台
缓冲间
衣 柜 冰箱
无菌操作室
递物窗 培养箱 试剂柜
超 净 工 作 台 实 验 仪 器 台
冰 箱
实 验 台
实 验 台
实 验 台
实 验 台
准备室
水 池
无菌操作室
上风口
下风口
超净工作台和CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题： ①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以 保证通气。 ②保持培养箱内空气干净。定期消毒 ③箱内蒸馏水槽中预留灭菌蒸馏水，以保持箱 2.细胞培养的主要实验设备 2.细胞培养的主要实验设备 内湿度，避免培养液蒸发。