番茄红素原料标准

食品添加剂番茄红素（合成）

1 生产工艺

由用于食品的其他类胡萝卜素生产中常用的合成中间体，经过维蒂希聚合反应制备而成的合成番茄红素。商业上用于食品的配方型番茄红素制剂，是将其配制成悬浮于食用油中的乳液或水溶型的粉末。

2 性状

番茄红素晶体为红色，几乎不溶于水，溶于氯仿等有机溶剂，对热、光、空气和湿度均敏感，容易氧化。

3 技术要求

附录 A

检验方法

A.1 总番茄红素含量和全－反式－番茄红素的含量的测定

A.1.1 方法原理

用高效液相色谱法在下列条件下测定总番茄红素含量和全－反式－番茄红素的含量

A.1.2 试剂和材料(注意：所有溶剂均应为色谱级)

A.1.2.1 正己烷。

A.1.2.2 用0.025%特丁基对苯二酚（BHT）稳定的四氢呋喃。

A.1.2.3 n-乙基－二异丙胺。

A.1.2.4 番茄红素标准品纯度≥95％。

A.1.3 仪器和设备

A.1.3.1紫外/可见分光光度计，配备1cm吸收池。

A.1.3.2 高效液相色谱系统，配备合适的泵、进样器、色谱柱恒温箱和积分仪。

A.1.3.3 色谱柱：2根相连的不锈钢柱（250x4.0 mm）。

A.1.3.4 固定相：Nucleosil 300-5，5 m

A.1.3.5 HPLC条件

流速：0.8 mL/min

进样量：20 µL

柱温：20℃

检测波长：470 nm

流动相：0.15% n-乙基－二异丙胺的正己烷溶液（V/V）

A.1.3.6 HPLC测定用标准溶液：

精密称取番茄红素标准品5.5-6.5mg，置100mL量瓶中，加入特丁基对苯二酚（BHT）稳定的四氢呋喃5ml使溶解，用正己烷稀释至刻度。作为HPLC测定用标准品溶液。

A.1.3.7 分光光度测定用标准溶液：

精密量取上述HPLC测定用标准溶液5.0mL，置100mL量瓶中，用正己烷稀释至刻度。作为分光光度测定用标准溶液。

A.1.3.8 样品溶液

精密称取本品4.5-5.5mg，置100mL量瓶中，加入特丁基对苯二酚（BHT）稳定的四氢呋喃5mL 使溶解，用正己烷稀释至刻度。

A.1.4 分析步骤与结果计算 A.1.4.1 分光光度法测定番茄红素： A.1.4.1.1 分析步骤

用1cm 吸收池，以正己烷为空白，在最大吸收波长处（大约470nm ）测定上述分光光度测定用标准溶液的吸收值。 A.1.4.1.2 结果计算：

…………………………………………(A.1)

式中：

Cst —分光光度测定用标准溶液中番茄红素的浓度（mg/L ）； A —最大吸收波长处的吸收度；

3450—全－反式－番茄红素在正己烷中的吸收系数A %1cm

1； 10000—稀释系数。 A.1.4.2 HPLC 分析测定： A.1.4.2.1 分析步骤

重复进样20 LHPLC 测定用标准溶液，记录测定出的番茄红素异构体的总峰面积（除去溶剂峰），从重复进样中计算峰面积平均值，并按下式计算番茄红素响应因子(RF):

……………………………………………………(A.2)

式中：

RF —番茄红素的响应因子（AU x L/mg ）； Ast —番茄红素总峰面积的平均值（AU ）；

Cst —分光光度测定用标准溶液中番茄红素的浓度（mg/L ）；

20—由分光光度测定用标准溶液制备HPLC 测定用标准溶液的稀释系数；

取样品溶液进样，并记录所有番茄红素异构体的峰面积。 A.1.4.2.2 结果计算 保留时间：

*相对于全-反式-番茄红素

按下式计算总番茄红素的含量：

总番茄红素(%)= (Atrans+A5cis+A9cis+A13cis+Axcis) ×0.1 ×100………… (A.3)

RF ×Ws

式中：

Atrans—全-反式-番茄红素峰面积(AU)；

A5cis,A9cis,和A13cis—5顺式－，9顺式－和13顺式－番茄红素的峰面积(AU)；

Axcis—如检测到其它顺式异构体的峰面积(AU)；

0.1—样品溶解的体积(L)；

RF—番茄红素的响应因子(AUxl/mg)；

Ws—样品取样量(mg)。

按下式计算全-反式-番茄红素的含量：

全-反式-番茄红素（％）＝Atrans × 0.1 ×100

RF×Ws

A.2 阿朴-12’-番茄红素醛的测定

A.2.1 方法原理

高效液相色谱法

A.2.2 试剂(注意：所有溶剂均应为色谱级)

A.2.2.1 正己烷。

A.2.2.2 三乙胺（TEA）。

A.2.2.3 四氢呋喃（THF）。

A.2.2.4 用特丁基对苯二酚（BHT）稳定的甲苯（0.5g特丁基对苯二酚（BHT）溶于1000mL甲苯中）。

A.2.2.5 阿朴-12’-番茄红素醛（也叫番茄红素C25-醛）标准品。

A.2.3 仪器和设备

A.2.3.1 高效液相色谱系统，配备合适的泵、进样器和积分仪

A.2.3.2 色谱柱：不锈钢柱（200x4.0mm）

A.2.3.3 固定相：硅胶Nucleosil Si 100 3μm

A.2.3.4 检测器：紫外/可见分光光度计，或可见分光光度计

A.2.3.5 HPLC条件：

流速： 2.0 mL/min

进样量： 5.0 μL

检测波长：435nm