标准缓冲溶液配制
标准缓冲液的配制
5℃
10℃
15℃
20℃
25℃
30℃
35℃
40℃
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3.56
3.55
3.55
3.55
不同温度时的pH值(pH in different temperatures)
45℃
50℃
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70℃
80℃
90℃
95℃
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3.55
3.55
3.55
3.56
3.58
3.61
3.65
3.67
-
苯二甲酸氢盐标准缓冲溶液
-
磷酸盐标准缓冲溶液
分别称取在(115.0±5.0)℃干燥2～3h的磷酸氢二钠（Na2HPO4）(3．53±0．01)g和磷酸二氢钾（KH2PO4） (3．39±0．01)g，溶于预先煮沸过15～30min并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml（注：可用于酸度计校准）
不同温度时的pH值(pH in different temperatures)
50℃
55℃
60℃
70℃
80℃
90℃
95℃
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11.84
11.71
11.57
11.45
-
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-
-
注：为保证pH值的准确度，上述标准缓冲溶液必须使用pH基准试剂配制。
45℃
50℃
55℃
60℃
70℃
80℃
90℃
95℃
-
1.70
1.71
1.72
1.72
1.74
1.77
1.79
1.81
-
酒石酸盐标准缓冲溶液
PH标准缓冲液配置
标准缓冲溶液(均用pH标准缓冲物质配制)1.1 苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液：c(KHC8H4O4)=0.05 mol/L(25℃时，pHs=4.003)。
苯二甲酸氢钾的pH标准缓冲物质，有小塑料袋和瓶装两种，配制方法如下：a)袋装配制法：在250 mL(或500 mL)量瓶中(根据袋中标准缓冲物质量，选择量瓶大小)，按袋上的说明配制成所需的浓度。
保存于聚乙烯瓶中。
b)瓶装配制法：称取5.10 g苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4预先在115℃±5℃，烘2～3 h，于干燥器中冷却)，溶于水并稀释至500 mL，混匀。
保存于聚乙烯瓶中。
1.2 0.025 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.025 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)混合标准缓冲溶液(25℃时，pHs=6.864)：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠的pH标准缓冲物质，有小塑料袋装(混合磷酸盐)和瓶装(两种pH标准缓冲物质分别包装)两种。
配制方法如下：a)袋装配制法：在量瓶(根据袋上说明确定量瓶大小)中按袋上说明配制成所需浓度后，保存于聚乙烯瓶中。
b)瓶装配制法：迅速称取3.40 g磷酸二氢钾(KH2PO4)和3.55 g磷酸氢二钠(Na2HPO4)(均预先在115±5℃烘2～3 h，于干燥器中冷却)溶于蒸馏水，转入1 000 mL量瓶中，加水至标线，混匀。
1.3 0.008 695 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.030 43 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)标准混合缓冲溶液(25℃时，pH=7.413)：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠两种pH标准缓冲物质分别用瓶包装，配制方法如下：迅速称取1.18 g磷酸二氢钾和4.31 g磷酸氢二钠(均预先在115℃±5℃烘2～3 h，于干燥器中冷却)，溶于水，全量移入1 000 mL量瓶中，加水至标线，混匀。
保存于聚乙烯瓶中。
1.4 硼砂标准缓中溶液：c(Na2B4O7·10H2O)=0.010 mol/L(25℃时，pHs=9.182)。
常见缓冲溶液配制方法
常见缓冲溶液配制方法1.醋酸钠/醋酸酸性缓冲液醋酸钠/醋酸酸性缓冲液适用于pH范围为4.0-6.0的实验。
配制方法如下：- 准备质量浓度为0.1mol/L的醋酸钠溶液和0.1mol/L的醋酸溶液。
-根据所需pH值，按照相应的比例混合醋酸钠溶液和醋酸溶液即可。
2.磷酸/盐酸性缓冲液磷酸/盐酸性缓冲液适用于pH范围为1.0-3.0的实验。
配制方法如下：- 准备0.2mol/L的盐酸溶液。
- 准备分别为0.2mol/L和0.1mol/L的磷酸溶液。
-具体配制时，根据所需pH值，按照相应的比例混合盐酸溶液和磷酸溶液即可。
3.磷酸/氢磷酸二盐酸性缓冲液磷酸/氢磷酸二盐酸性缓冲液适用于pH范围为2.0-7.0的实验。
配制方法如下：- 准备0.2mol/L的盐酸溶液。
- 准备分别为0.2mol/L、0.1mol/L和0.05mol/L的氢磷酸二盐溶液。
-具体配制时，根据所需pH值，按照相应的比例混合盐酸溶液和氢磷酸二盐溶液即可。
4.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液适用于pH范围为5.0-8.0的实验。
配制方法如下：- 准备分别为0.2mol/L的梯度磷酸盐溶液。
-根据所需pH值，按照相应的比例混合相应浓度的磷酸盐溶液即可。
5.三氯乙酸/三氯乙酸钠酸性缓冲液三氯乙酸/三氯乙酸钠酸性缓冲液适用于pH范围为3.0-4.6的实验。
配制方法如下：- 准备质量浓度为0.2mol/L的三氯乙酸钠溶液和0.2mol/L的三氯乙酸溶液。
-根据所需pH值，按照相应的比例混合三氯乙酸钠溶液和三氯乙酸溶液即可。
以上是一些常见的缓冲溶液配制方法，具体的配制过程可能会因实验需求和具体试剂而略有不同。
在配制缓冲溶液时，一定要注意使用高纯度的试剂，并按照配制方法进行准确的实验操作。
缓冲溶液的配制
1、磷酸缓冲液（pH5.7-8.0）[1]
甲液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液（NaH2PO4·2H2O），1000mL中含31.2g。
乙液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（Na2HPO4·2H2O），1000mL中含53.7g。
根据所需pH，按照下表，分别吸取甲液和乙液，混合均匀即得。
2、醋酸缓冲液（pH3.6-5.6）[1]
甲液：0.2mol/L醋酸钠溶液，1000mL中含11.55g。
乙液：0.2mol/L醋酸溶液，1000mL中含10.40g
根据所需pH，按照下表，分别吸取甲液和乙液，混合均匀即得
3、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（pH2.6-7.0）[1]
甲液：0.1mol/L柠檬酸溶液，1000mL中含21.01g。
乙液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（NaH2PO4·2H2O），1000mL中含53.7g。
根据所需pH，按照下表，分别吸取甲液和乙液，混合均匀后，加水稀释到100mL
4、Tris缓冲液（pH7.2-9.0）[1]
甲液：0.2mol/LTris溶液，1000mL中含24.4g三羟甲基氨基甲烷。
乙液：0.2mol/LHCl
取25mL甲液，根据所需pH，按照下表，吸取乙液，混合后，加水稀释到100mL
5、PBS缓冲液（pH7.4）
NaCl 8g，KCl 0.2g，KH2PO4 0.2g，Na2HPO4 1.15g。
定容至1000mL。
参考资料
[1]王国惠环境工程微生物学实验北京化学工业出版社2011 附录2。
常见缓冲液的配制
常见缓冲液的配制附溶液配制方法：pH7.2 0.01mol/L PBSKH2PO40.38gNa2HPO4 1.02g(或Na2HPO4·12H2O2.58g) NaCl8.0g蒸馏水加至1000mLpH7.4 PBS/TNaCl8.0gKH2PO40.2gNa2HPO4·12H2O(或Na2HPO4·7H2O) 2.89g（或2.16g）KCl0.2g吐温200.5mL蒸馏水加至1000mLpH9.6碳酸盐缓冲液Na2CO3 1.59gNaHCO3 2.93g蒸馏水加至1000mL0.075mol/L氯化钾低渗液氯化钾0.559g，蒸馏水100ml甲醇冰醋酸（3:1）固定液甲醇3份冰醋（乙）酸1份姬姆萨染液Giemsa原液1ml1/15mol/L磷酸缓冲液（pH6.8或7.4）10ml2.3% 柠檬酸钠溶液柠檬酸钠（Na C H O ·2H O）2.3g蒸馏水100ml明胶显影液明胶粉0.2g三蒸水10ml甲酸0.1ml1% 醋酸冰醋（乙）酸1ml蒸馏水99mlH"o"33342-若丹明123染液H"o"33342（Hoechst 33342）0.25μg 若丹明123（Rhodamine 123）1.0μg PBS 1mlDPH贮备液DPH（1.6-Dipnenyl-1,3, 5hexatriene, 4.65mg）四氢呋喃10mlDPH工作液(2×10-6mol/L)DPH贮备液0.1mlPBS 100mlFDA贮备液二醋酸脂荧光素(Fluorescein diacetate,FDA) 5.0mg丙酮1mlFDA工作液FDA贮备液0.1mlPBS 100mlM-缓冲液（pH7.2）咪唑50mmol/L 3.404g氯化钾50mmol/L 3.7g氯化镁（MgCl ·6H O）0.5mol/L 101.65mgEGTA(乙二醇双（a-氨基乙基）醚四乙酸) 1mmol/L 380.35mg EDTA(乙二胺四乙酸) 0.1mmol/L 29.22mg疏基乙醇1mmol 0.07ml4mol/L甘油292ml蒸馏水加至1000ml1% TritonX-100液Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚）1mlM-缓冲液99ml3% 戊二醛液戊二醛25% 3mlPBS 液（pH7.2）97ml0.2% 考马斯亮蓝R250染液考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）0.2g 甲醇46.5ml冰醋（乙）酸7ml蒸馏水46.5ml生理盐水(0.85%氯化钠)氯化钠8.5g三蒸水1000ml0.25mol/L蔗糖水溶液（含0.003mol/L氯华钙）蔗糖85.5g无水氯华钙0.33g蒸馏水1000ml0.17mol/L氯化铵液氯化铵4.574g蒸馏水500ml0.17mol/L硝酸钠液硝酸钠7.224g 蒸馏水500ml0.12mol/L硫酸钠液硫酸钠（Na SO ·H O）19.333g蒸馏水500ml0.12mol/L草酸铵液草酸铵（（NH ）C o ·H O）8.527g蒸馏水500ml0.17mol/L醋酸铵液醋酸铵6.552g蒸馏水500ml0.32mol/L葡萄糖液葡萄糖28.83g蒸馏水500ml0.32mol/L甘油液甘油（C H (OH) ·1.26g/ml) 11.7ml蒸馏水500ml0.32mol/L乙醇液无水乙醇9.33ml蒸馏水500ml0.32mol/L丙醇液正丙醇（比重0.803）11.976ml蒸馏水500ml化学名：2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid 中文名：羟乙基哌嗪乙硫磺酸分子式：C8H18N2O4SHEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力。
缓冲溶液及其配制方法
缓冲溶液及其配制方法
以下是一些常见的缓冲溶液及其配制方法：
1.甲酸钠缓冲液(pH3.3)：取2mol/L甲酸溶液25mL，加酚酞
指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75mL，用水稀释至200mL，调节pH值至
3.25～3.30即可。
2.邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)：取邻苯二甲酸氢钾10g，加
水900mL，搅拌使溶解，用氢氧化钠试液（必要时用稀盐酸）调节pH值至5.6，加水稀释至1000mL，混匀即可。
3.氨-氯化铵缓冲液(pH8.0)：取氯化铵1.07g，加水使溶解成
100mL，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至8.0即可。
4.氨-氯化铵缓冲液(pH10.0)：取氯化铵
5.4g，加水20mL溶
解后，加浓氯溶液35mL，再加水稀释至100mL即可。
5.硼砂-碳酸钠缓冲液(pH10.8～11.2)：取无水碳酸钠5.30g，
加水使溶解成1000mL；另取硼砂 1.91g，加水使溶解成100mL。
标准缓冲溶液的配制
标准缓冲溶液的配制缓冲溶液是生物化学和分子生物学实验中常用的一种重要试剂，它可以帮助维持溶液的酸碱度，使得实验条件更加稳定。
在实验室中，我们通常会根据需要配制不同 pH 值的缓冲溶液来满足实验的要求。
本文将详细介绍标准缓冲溶液的配制方法，希望能对您的实验工作有所帮助。
首先，我们需要准备一些基本的实验室试剂，包括pH 试纸或pH 仪、蒸馏水、酸和碱等。
在配制缓冲溶液之前，我们需要明确所需的 pH 值和缓冲物质的种类，这将有助于我们选择合适的配方和操作步骤。
接下来，我们将以磷酸盐缓冲溶液为例，介绍其配制方法。
磷酸盐缓冲溶液是一种常用的缓冲溶液，适用于多种生物化学实验。
其配方包括磷酸盐二氢根（KH2PO4）、磷酸盐氢根（Na2HPO4）、蒸馏水等。
首先，在一个干净的容器中称取适量的磷酸盐二氢根和磷酸盐氢根，按照所需的pH 值和配方比例进行称取。
然后，将它们加入到一定量的蒸馏水中，搅拌均匀，直至完全溶解。
在溶解的过程中，我们可以使用 pH 试纸或 pH 仪来检测溶液的 pH 值，必要时可以通过加入酸或碱来调节 pH 值至所需的范围内。
在配制好的缓冲溶液中，我们还可以添加一些其他的试剂，如EDTA、甘油等，以满足实验的具体需求。
在实验过程中，我们需要注意缓冲溶液的保存条件，通常建议将其保存在 4°C 的冰箱中，避免阳光直射和高温。
除了磷酸盐缓冲溶液外，实验室中还常用 Tris 缓冲溶液、乙酸缓冲溶液等。
它们的配制方法类似，只是配方中的化学物质和比例略有不同。
在实际操作中，我们需要根据实验的具体要求选择合适的缓冲溶液，并按照相应的配方和操作步骤进行配制。
总之，标准缓冲溶液的配制是实验室工作中常见的操作之一，掌握好配制方法对于保证实验结果的准确性和可重复性至关重要。
希望本文所介绍的内容能够对您在实验工作中有所帮助，也希望您能在实验操作中严格按照标准操作流程进行，确保实验结果的可靠性和准确性。
常用缓冲溶液的配置
缓冲液组成
pKa
缓冲液pH
缓冲液配制方法
氨基乙酸—HCl
2.35
pKa1
2.3
取氨基乙酸150g溶于500mL水中后，加浓HCl 80mL,水稀释至1L
H3PO4—枸橼酸盐
2.5
取Na2HPO4·12H2O113g溶于200mL水后，加枸橼酸387g,溶解，过滤后，稀释至1L
一氯乙酸—NaOH
2.86
2.8
取200g一氯乙酸溶于200mL水中，加NaOH40g溶解后，稀释至1L
邻苯二甲酸氢钾—HCl
2.95
pKa1
2.9
取500g邻苯二甲酸氢钾溶于500mL水中，加浓HCl 80mL，稀释至1L
NH4Ac—HAc
4.5
取NH4Ac77g溶于200mL水中，加冰HAc 59mL，稀释至1L
NaAc—HAc
4.74
4.7
取无水NaAc83g溶于水中，加冰HAc 60mL，稀释至1L
NaAc—MAc
4.74
5.0
取无水NaAc160g溶于水中，加冰HAc 60mL，稀释至1L
NH4Ac—HAc
5.0
取NH4Ac250g溶于水中，加冰HAc 25mL，稀释至1L
六次甲基四胺—HAc
5.15
8.21
8.2
取25gTris试剂溶于水中，加浓HCl 8mL，稀释至1L
NH3—NH4Cl
9.26
9.2
取NH4Cl54g溶于水中，加浓氨水63mL,稀释至1L
NH3—NH4Cl
9.26
9.5
取NH4Cl54g溶于水中，加浓氨水126mL,稀释至1L
NH3—NH4Cl
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标准缓冲溶液(均用pH标准缓冲物质配制)
1.1 苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液：c(KHC8H4O4)=0.05 mol/L(25℃时，pHs=4.003)。
苯二甲酸氢钾的pH标准缓冲物质，有小塑料袋和瓶装两种，配制方法如下：
a)袋装配制法：
在250 mL(或500 mL)量瓶中(根据袋中标准缓冲物质量，选择量瓶大小)，按袋上的说明配制成所需的浓度。
保存于聚乙烯瓶中。
b)瓶装配制法：
称取5.10 g苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4预先在115℃±5℃，烘2～3 h，于干燥器中冷却)，溶于水并稀释至500 mL，混匀。
保存于聚乙烯瓶中。
1.2 0.025 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.025 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)混合标准缓冲溶液(25℃时，pHs=6.864)：
磷酸二氢钾和磷酸氢二钠的pH标准缓冲物质，有小塑料袋装(混合磷酸盐)和瓶装(两种pH标准缓冲物质分别包装)两种。
配制方法如下：
a)袋装配制法：
在量瓶(根据袋上说明确定量瓶大小)中按袋上说明配制成所需浓度后，保存于聚乙烯瓶中。
b)瓶装配制法：
迅速称取3.40 g磷酸二氢钾(KH2PO4)和3.55 g磷酸氢二钠(Na2HPO4)(均预先在115±5℃烘2～3 h，于干燥器中冷却)溶于蒸馏水，转入1 000 mL量瓶中，加水至标线，混匀。
1.3 0.008 695 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.030 43 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)标准混合缓冲溶液(25℃时，pH=7.413)：
磷酸二氢钾和磷酸氢二钠两种pH标准缓冲物质分别用瓶包装，配制方法如下：
迅速称取1.18 g磷酸二氢钾和4.31 g磷酸氢二钠(均预先在115℃±5℃烘2～3 h，于干燥器中冷却)，溶于水，全量移入1 000 mL量瓶中，加水至标线，混匀。
保存于聚乙烯瓶中。
1.4 硼砂标准缓中溶液：c(Na2B4O7·10H2O)=0.010 mol/L(25℃时，pHs=9.182)。
硼砂的pH标准缓冲物质也有塑料袋装和瓶装两种，配制方法如下：
a)袋装配制法：
在500 mL量瓶中，按袋上说明配制成所需浓度后，分装于5个100 mL聚乙烯瓶中，瓶口用石蜡熔封。
b)瓶装配制法：
称取1.91 g硼砂(预先在盛有蔗糖饱和溶液的干燥器中平衡两昼夜)，溶于刚煮沸冷却的蒸馏水，全量转入500 mL量瓶中，加水至标线，混匀。
分装于5个100 mL聚乙烯瓶中，瓶口用石蜡熔封，有效期为三个月，经常使用的缓冲溶液，每周更换一次。
各种标准缓冲溶液的pH值随温度的变化而变化。
0～45℃的pH值列于表21中。
27.1.3.2 饱和氯化钾溶液：
称取40 g氯化钾(KCl)，加100 mL水，充分搅拌后盛于试剂瓶中(此溶液应与氯化钾固体共存)。
表21 0～45℃标准缓冲物质的pH值
温度，℃苯二甲酸氢钾(27.1.3.1.1) 混合磷酸盐(27.1.3.1.2) 磷酸盐(27.1.3.1.3) 硼砂(27.1.3.1.4)
0 4.006 6.981 7.534 9.458
5 3.999 6.949 7.500 9.391
10 3.996 6.921 7.472 9.330
20 3.998 6.879 7.429 9.226
25 4.003 6.864 7.413 9.182 30 4.010 6.852 7.400 9.142 35 4.019 6.844 7.389 9.105 40 4.029 6.838 7.380 9.072 45 4.042 6.834 7.373 9.042。