PCR基因扩增仪培训课件
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简单的说，PCR仪就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外 或试管内的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶进行专一 性的连锁复制。目前常用的技术，可以将一段基因复制为原 来的一百亿至一千亿倍。
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第一节
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P工C作R基原因理扩增仪的 DT以为重过保链模加使形aNd模复程留又q板热模成模性成右AND板循，复可模D至板的T板)单，N：NP，环就制成A板9D双D链引为A模3聚N按变可链为N与链的℃后物反A板合A碱性获”下引D左双变，与与应D酶N基得，次-物右链性温模-N引原A退的配更而循A结解一或：度板物料火作经对多且环合离定经模降D的，-用加与的这的-N物P，时板至延退靶下热AC半“种模在D使间5伸火单序R，变5N保半新板之后三扩(℃链列A复性成，经增左的 留。为复每单互制完链补原成，序理一以列，个便配合循它对成环与结一需引合条2物；～新结4的分合， 与钟为模，下板2轮～D反3N小应A时链作就互准能补备将的待半扩保目留 复的制基链因扩增放大几百万倍
ABI 7500荧光定量PCR仪
MJ公司Chromo 4荧光定量PCR仪
Bio-rad公司 iCycler荧光定量 PCR仪
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第二节 PCR扩增仪的分 类与结构
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内容提要
1. PCR基因扩增仪的工作原理
• PCR技术的原理及发展
• PCR基因扩增仪的工作原理
2. PCR扩增仪的分类与结构
• 定性PCR扩增仪
• 实时荧光定量PCR扩增仪
3. PCR扩增仪的性能指标、操作规程
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第一节 PC当R之基处，因请联扩系本增人或网站删除。 仪的工作原理
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第二节 PC当R之扩处，增请联仪系本的人或网站删除。 分类与结构
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第一节 PCR基因扩增仪的 工作原理
二、PCR技术的原理 体外核酸扩增，加热使双链DNA解开螺旋，在退火温度条 件下引物同模板DNA杂交，在Taq DNA聚合酶，dNTPs(脱氧 核糖核苷三磷酸)，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引 物，重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25-40个循环， 呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
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第一节 PCR基因扩增仪的 工作原理
PCR基因扩增仪的工作关键 DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得 加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂 贵，制约了PCR技术的应用和发展。 从PCR反应基本原理可以看出，PCR基因扩增仪工 作关键是温度控制。
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第二节 PC当之R处扩，请增联系仪本人的或网站删除。 分类与结构
实时荧光定量PCR仪
金属板式实时定量PCR仪
离心式实时定量PCR仪
各孔独立控温的定量PCR仪
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1985年10月25日申请了PCR的专利，1987年7月28日批准（专利号4,683,202 ）， Mullis是第一发明人； 1985年12月20日在Science杂志上发表了第一篇PCR的学术论文，Mullis是共同 作者；
1986年5月，Mullis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开始学习PCR的方法。
第二节 PCR扩增仪的分类 与结构
金属板式实时定量PCR仪 可作为普通PCR仪使用 可带梯度功能 可容纳的样本量大，无需特殊耗材 温度均一性欠佳，有边缘效应，标准曲线的反应条 件难以做到与样品完全一致
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第二节 PCR当扩之增处，仪请联的系分本人类或与网站删除。 结构
第二节 PCR扩增仪的分类与 结构
荧光实时定量PCR（real-time quantitative PCR,RQ-PCR）技术 在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针 荧光信号的变化真实地反映了体系中模板的增加 通过检测荧光信号，从而实时监测整个PCR反应过 程 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析
–
PCR扩增仪的性能指标
• PCR扩增仪的操作规程
4. PCR扩增仪的应用
本文档所第提供一的信节息仅P当供C之参R处考基，之请用因联，系不扩能本作人为或科网学站依删据除，。请勿模仿。文档如有不 增仪的工作原理
一、PCR技术的聚合发酶展链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的
Khorana (1971)等分最最子大早生特提物点出学，核技是酸术能体，将外它微扩可量增看的的作D设N是A想生大：物幅“体增经外加D的。N特A因变殊此性D，，N无A与论复合是制适化，的石P引C中R物的的 杂交，用DNA聚合酶古延生伸物引、物历，史并人不物断的重残复骸该，过还程是便几可十合年成前t凶RN杀A案基中因凶。手”所遗留的 1985年，Kary M毛ull发is在、C皮e肤tus或公血司液工，作只期要间能，分发离明出了一P丁CR点。的MDuNlliAs要，合就成能D用NPAC引R物加 来进行测序工作，却以常放为大没，有进足行够比多对的。模这板也D是N“A而微烦量恼证。据”的威力之所在。 1983年4月的一个星期五晚上，他开车去乡下别墅的路上,猛然闪现出“多聚酶链 式反应”的想法。
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P工C作R基原因理扩增仪的 DT以为重过保链模加使形aNd模复程留又q板热模成模性成右AND板循，复可模D至板的T板)单，N：NP，环就制成A板9D双D链引为A模3聚N按变可链为N与链的℃后物反A板合A碱性获”下引D左双变，与与应D酶N基得，次-物右链性温模-N引原A退的配更而循A结解一或：度板物料火作经对多且环合离定经模降D的，-用加与的这的-N物P，时板至延退靶下热AC半“种模在D使间5伸火单序R，变5N保半新板之后三扩(℃链列A复性成，经增左的 留。为复每单互制完链补原成，序理一以列，个便配合循它对成环与结一需引合条2物；～新结4的分合， 与钟为模，下板2轮～D反3N小应A时链作就互准能补备将的待半扩保目留 复的制基链因扩增放大几百万倍
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内容提要
1. PCR基因扩增仪的工作原理
• PCR技术的原理及发展
• PCR基因扩增仪的工作原理
2. PCR扩增仪的分类与结构
• 定性PCR扩增仪
• 实时荧光定量PCR扩增仪
3. PCR扩增仪的性能指标、操作规程
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第一节 PCR基因扩增仪的 工作原理
二、PCR技术的原理 体外核酸扩增，加热使双链DNA解开螺旋，在退火温度条 件下引物同模板DNA杂交，在Taq DNA聚合酶，dNTPs(脱氧 核糖核苷三磷酸)，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引 物，重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25-40个循环， 呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
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第一节 PCR基因扩增仪的 工作原理
PCR基因扩增仪的工作关键 DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得 加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂 贵，制约了PCR技术的应用和发展。 从PCR反应基本原理可以看出，PCR基因扩增仪工 作关键是温度控制。
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿。文档如有不
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实时荧光定量PCR仪
金属板式实时定量PCR仪
离心式实时定量PCR仪
各孔独立控温的定量PCR仪
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿。文档如有不 当之处，请联系本人或网站删除。
1985年10月25日申请了PCR的专利，1987年7月28日批准（专利号4,683,202 ）， Mullis是第一发明人； 1985年12月20日在Science杂志上发表了第一篇PCR的学术论文，Mullis是共同 作者；
1986年5月，Mullis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开始学习PCR的方法。
第二节 PCR扩增仪的分类 与结构
金属板式实时定量PCR仪 可作为普通PCR仪使用 可带梯度功能 可容纳的样本量大，无需特殊耗材 温度均一性欠佳，有边缘效应，标准曲线的反应条 件难以做到与样品完全一致
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第二节 PCR扩增仪的分类与 结构
荧光实时定量PCR（real-time quantitative PCR,RQ-PCR）技术 在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针 荧光信号的变化真实地反映了体系中模板的增加 通过检测荧光信号，从而实时监测整个PCR反应过 程 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析
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• PCR扩增仪的操作规程
4. PCR扩增仪的应用
本文档所第提供一的信节息仅P当供C之参R处考基，之请用因联，系不扩能本作人为或科网学站依删据除，。请勿模仿。文档如有不 增仪的工作原理
一、PCR技术的聚合发酶展链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的
Khorana (1971)等分最最子大早生特提物点出学，核技是酸术能体，将外它微扩可量增看的的作D设N是A想生大：物幅“体增经外加D的。N特A因变殊此性D，，N无A与论复合是制适化，的石P引C中R物的的 杂交，用DNA聚合酶古延生伸物引、物历，史并人不物断的重残复骸该，过还程是便几可十合年成前t凶RN杀A案基中因凶。手”所遗留的 1985年，Kary M毛ull发is在、C皮e肤tus或公血司液工，作只期要间能，分发离明出了一P丁CR点。的MDuNlliAs要，合就成能D用NPAC引R物加 来进行测序工作，却以常放为大没，有进足行够比多对的。模这板也D是N“A而微烦量恼证。据”的威力之所在。 1983年4月的一个星期五晚上，他开车去乡下别墅的路上,猛然闪现出“多聚酶链 式反应”的想法。