组织培养复习题

细胞全能型：植物器官培养：愈伤组织培养：

19世纪30年代，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。1902年，德国植

1958年，一个振奋人心的消

胞全能的预言。植物组培的简单过程如下：剪接植物器官或组织——

分化）形成愈伤组织————经过培养发育成一颗完整的植株。植物组培的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，用纤维素酶与果胶酶处理用以去掉细胞壁，使之露出原生质体，然后放在

的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以

在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科

培养方法

1非试管微组织快繁技术是将外植体（一般要求带一叶一芽）放置在室内外普通沙子培养基上进行培养，利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的。一般植物7～15天可以生长出根系。此技术投资低，操作环节少。2、试管组织培养试

下进行组织培养获得组培瓶苗。

培养步骤

第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。当

然，最理想的清洗物质是表面活性物质第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1—2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗

3-l0

幼嫩材料易在酒精中失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料，特别

是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱，一般浸泡10分钟左右，对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿，所以对于

幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08—0.12%80（一种湿润剂），

培养特点

1、培养条件可以人为控制

小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。2、生长周期短，繁殖率高组培是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然组培需要一定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。3、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，极利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控

草、浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。

培养优点

1、占用空间小，不受地区、季节限制。

2、培养脱毒作物

3、培养周期短

4、可用组培中的愈伤组织制取特殊的生化制品

5、可短时间大量繁殖，用于拯救濒危植

6、可诱导之分化成需要的器官，如根和芽

7、解决有些植物产种子少或无的难题，

8、不存在

9、投资少，经济效益高10、繁殖方式多，试用品种多

培养材料采集

无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一

无菌操作手续接到培养基上。试剂·乙醇。·吲哚乙酸（IAA）或 2 ，4 –D （生长素类似物）。·氯化汞（升汞）或次氯酸钠。·6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ）·MS 培养基·0.1 mol/L NaOH与0.1 mol/L HCl 配制培养基

（1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基10 g/L ，2,4 – D 含量为 2 mg/L ，

）。（ 2 ）试验培养基：在MS 培养基中加入IAA 和6–BA 。吲哚乙酸（IAA)先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。仪器设备培养室，高压灭菌锅，

100mL ）

培养基灭菌将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL组培瓶中，每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后，盖上组培盖，或盖上封口膜并用棉线扎牢，然

后在高压灭菌锅中121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌20 min 。取出组培瓶放在台子上，冷却

1

2、器官培养指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的

瓣、雄蕊（花药、花丝）、胚珠、子房、果实等的离体无菌培养。3、组织培养指以分离出植物各部位的组织（如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层、胚乳组织、薄壁组织、髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。这是狭义的植物

组织培养。4指以单个游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，

5指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。

植物组织培养试题

植物组织培养考试题5

一、名词解释：（每小题3分，共15分）

1．初代培养基；2．脱分化；3．液体培养；4．细胞全能性；5．再分化.

二、填空（每空1分，共40分）

1．植物组织培养过程中，最常用的培养基是，培养基的pH因外植体的来源不同而异，常用和调节pH，大多数植物的pH要求调节在范围内。

2．可以通过、、、、等措施预防褐变的发生。

3．植物组织培养时，外植体可以是、、、。

4．应用微尖嫁接技术进行脱毒培养无病毒苗，主要程序为