荧光分析法实验(有思考题答案)

实验二.氨基酸的荧光激发、发射及同步荧光光谱的测量五．数据处理

1．用实验获得的数据绘制两种氨基酸的激发、发射、同步光谱图（如图3、4）。2．从激发和发射光谱中找出最大激发波长和最大发射波长值，以及它们相对应的峰高。在它们的同步荧光光谱中也确定最大波长和对应的峰高。

苯丙氨酸的荧光光谱图

苯丙氨酸扫描激发波长在214nm和285m两处出现最高峰，本实验选择214nm为最大激发波长。此外，激发波长曲线在280－300nm处出现了一个十分完美的峰，此峰为倍频峰，非激发波长峰,我们通过同步扫描荧光光谱技术可以验证，如图，我们通过同步扫描荧光光谱技术获得的激发波长也在215nm，与之前基本吻合。

色氨酸的荧光光谱图

色氨酸扫描激发波长在217nm处有一个最大峰，所以激发波长为217，发射波长为361。发射波长曲线在450－460nm处出现了一个十分完美的峰（在这张图上没显示出来），此峰为倍频峰，非激发波长峰,我们通过同步扫描荧光光谱技术可以验证。

六．讨论与思考

1．对待测溶液进行预扫描的有何作用？

从预扫描得到激发和发射波长的初步结果，根据我们得到的初步结果对仪器进行设置，然后对两种氨基酸溶液测量它们的荧光激发、发射和同步荧光光谱。

2．观察激发波长的整数倍处荧光发射光谱在有何特点？该波长是否适合于进行定量分析？

激发波长的整数倍处荧光发射光谱会出现以很强的峰，是倍频峰。不适合定量分析。

3．同步荧光技术有哪些优点？比较激发、发射和同步荧光光谱中的峰值及对应波长，比较他们的不同，并解释原因。

同步荧光法能简化光谱，减少光谱重叠和散射的影响，提高对荧光性质相近化合物同时测定的选择性和灵敏度。同步荧光法相对于激发光谱和发射光谱，

得到的峰比较窄，更明显。同步荧光光谱不是荧光物质的激发光谱和发射光谱

的简单叠加。在选合适的扫描波长差值的情况下，同时扫描激发光谱和发射光谱重叠波长处，才同时产生信号，

4．通过两种氨基酸的化学结构，是否可以不经试验判断其荧光强度的大小次序。

CH2CH

COOH

2

C

NH

CH2

CH

CHCOOH

NH2

苯丙氨酸色氨酸

从共轭角度看，体系的共轭度增强，荧光效率一般也将增大，并使荧光波长向长波方向移动。共轭效应使荧光增强的原因，主要是由于增大荧光物质的摩尔吸光系数，π电子更容易被激发，产生更多的激发态分子，使荧光增强。苯丙氨酸有4个共轭双键，而色氨酸有5个共轭双键，所以色氨酸荧光强度要高一些。

5．比较紫外分光光度法和荧光分析法的区别和各自的优缺点。

紫外分光光度法是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。反映的是分子结构中发色基团和助色基团的特征，但是紫外分光光度法提供的信息量比较少，所以虽然可以提供化合物的骨架结构和验证某些发色基团和助色基团，但很难确定其基团位置。

利用某些物质被紫外光照射后由激发单重态（S

1）最低振动能级至基态（S

）

各振动能级的跃迁产生的荧光可以进行定性或定量分析的方法。