维生素B2片分析方法验证方案

一．概述

1.维生素B2片含量测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定。

1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为

填充剂；以0. Olmol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇(85∶10∶5)为流动相；检测波长为444nm。理论板数按维生素B2峰计算不

低于2000。

1.2测定法避光操作。取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于维生素B2 10mg)，置500ml量瓶中，加盐酸溶液(1→2)10ml，振摇使维生素B2 溶解，加水20ml，继续振摇数分钟，再加

水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B2对照品约10mg，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

1.3本品含维生素B2计算，应为标示量的90.0% ～110.0%。

2. 维生素B2片溶出度测定：照溶出度与释放度测定法（通则0931第二法）

测定法避光操作。取本品，以冰醋酸3ml与4%氢氧化钠溶液

18ml用水稀释至600ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经20分钟时，取溶液10ml，滤过，取续滤液，照紫外-可分光光度法（通则0401)，在444nm的波长处测定吸光度，按C17H20N4O6的吸收系数()为323计算每片的溶出量。限度为标示量的75%，应符合规定。

3. 维生素B2片有关物质测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件照含量测定。

避光操作。取本品的细粉适量（约相当于维生素B2 10mg)，置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（1→2)5ml，振摇使维生素B2溶解，加水10ml，继续振摇数分钟，再用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，

作为对照溶液。精密量取供试品溶液与对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色

谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的

0.75倍(1.5% ) ，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的

1.5倍（3.0% )。供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0.025

倍的色谱峰忽略不计。

4.工艺处方组成

5、仪器基本情况：

6.相关术语：

6.1准确度系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。一般用回收率（%）表示。回收率限度应在98%～102%之间。

6.2精密度系指在规定的条件下同一份均匀的供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。

6.3线性系指在设计的范围内，测定响应值与试样中被测物质浓度呈比例关系的程度

6.4范围系指分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时的高低限浓度或量的区间。

6.5检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。

6.6耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。

二.验证目的

通过验证以确认所采用的方法适合于维生素B2片的测定。根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行维生素B2片检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。

三.验证依据

中国药典2015年版二部

中国药典2015年版四部9101《药品质量标准分析方法验证指导原则》

四.参考文件

1、验证管理规程

2、验证总计划

3、SIL-20A高效液相色谱仪操作维护保养规程

4 UV-1800紫外可见分光光度计操作维护保养规程

5、中国药典2015年版

6、变更控制规程

7、偏差控制规程

XXXX

五.验证步骤

1. 维生素B2片含量分析方法验证

1.1系统适应性试验

1.1.1色谱条件

①固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（C18）；

②检测器：紫外检测器，检测波长444nm；

③流动相：0. Olmol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇

(85∶10∶5)

④流速：1.0mL/min。

⑤柱温：30℃

⑥进样量：20μL。

照高效液相色谱法（通则0512）测定。

1.1.2系统适用性试验溶液：取维生素B2对照品10mg，置500ml的容量瓶中，加盐酸溶液（(1→2)10ml）振摇使维生素B2溶解，加水20ml，继续振摇数分钟，再加水稀释至刻度，摇匀。溶解并稀释制成每1ml中各约含20µg的溶液，

1.1.3取系统适用性试验溶液20μL注入液相色谱仪。

1.1.4判定标准：理论板数按维生素B2峰计算不低于2000。

1.2维生素B2片含量分析方法线性验证

1.2.1溶液配制

1.2.1流动相配制

0. Olmol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇(85∶10∶5)为流动相

1.2.2处方量辅料配制

精密称定淀粉约307mg、糊精约240mg、硬脂酸镁约3mg、混合。此混合辅料约为10片维生素B2（50mg）所需的辅料共约550 mg。1.2.3样品溶液配制

精密称定维生素B2对照品约25mg，置250ml容量瓶中，加入处方量混合辅料275mg，加盐酸溶液（(1→2)10ml）振摇使维生素B2溶解，加水20ml，继续振摇数分钟，再加水稀释至刻度，摇匀,滤过,取续滤液，制成浓度为100µg /ml的溶液。

按80%、90%、100%、110%、120%的倍数稀释，精密量取8ml、9ml、10ml、11ml、12ml分别置50ml容量瓶中，加水配置成浓度为16µg /ml、