生物样品定量分析方法验证指导原则
9012生物样品定量分析方法验证指导原则
中国药典2015年版9012生物样品定置分析方法验证指导原则一、范围准确测定生物基质(如全血、血清、血浆、尿)中的药物浓度,对于药物和制剂研发非常重要。
这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性,或根据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。
因此,必须完整地验证和记录应用的生物分析方法,以获得可靠的结果。
本指导原则提供生物分析方法验证的要求,也涉及非临床或临床试验样品实际分析的基本要求,以及何时可以使用部分验证或交叉验证,来替代完整验证。
本指导原则二和三主要针对色谱分析方法,四针对配体结合分析方法。
生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。
应该在相应的生物样品分析中遵守G L P原则或GC P原则。
二、生物分析方法验证(一)分析方法的完整验证分析方法验证的主要目的是,证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析物浓度的可靠性。
此外,方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。
一般应对每个新分析方法和新分析物进行完整验证。
当难于获得相同的基质时,可以采用适当基质替代,但要说明理由。
一个生物分析方法的主要特征包括:选择性、定量下限、响应函数和校正范围(标准曲线性能)、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液中储存和处理全过程中的稳定性。
有时可能需要测定多个分析物。
这可能涉及两种不同的药物,也可能涉及一个母体药物及其代谢物,或一个药物的对映体或异构体。
在这些情况下,验证和分析的原则适用于所有涉及的分析物。
对照标准物质在方法验证中,含有分析物对照标准物质的溶液将被加人到空白生物基质中。
此外,色谱方法通常使用适当的内标。
应该从可追溯的来源获得对照标准物质。
应该科学论证对照标准物质的适用性。
分析证书应该确认对照标准物质的纯度,并提供储存条件、失效日期和批号。
对于内标,只要能证明其适用性即可,例如显示该物质本身或其相关的任何杂质不产生干扰。
当在生物分析方法中使用质谱检测时,推荐尽可能使用稳定同位素标记的内标。
9101 分析方法验证指导原则
分析方法验证(analytical method validat)io目的是证明建立的方法适合于相应检测要求。
在建立药品质量标准、变更药品生产工艺或者制剂组分、修订原分析方法时,需对分析方法进行验证。
生物制品质量控制中釆用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法,其中理化分析方法的验证原则与化学药品基本相同,所以可参照本指导原则进行,但在进行具体验证时还需要结合生物制品的特点考虑;相对于理化分析方法而言,生物学测定方法存在更多的影响因素,因此本指导原则不涉及生物学测定方法验证的内容。
验证的分析项目有:鉴别试验、杂质测定(限度或者定量分析)、含量测定(包括特性参数和含量/效价测定,其中特性参数如:药物溶出度、释放度等)。
验证的指标有:专属性、准确度、精密度(包括重复性、中间精密度和重现性)、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
在分析方法验证中,须用标准物质进行试验。
由于分析方法具有各自的特点,并随分析对象而变化,因此需要视具体情况拟订验证的指标。
表1 中列出的分析项目和相应的验证指标可供参考。
①已有重现性验证,不需验证中间精密度。
②如一种方法不够专属,可用其他分析方法予以补充。
③视具体情况予以验证。
方法验证内容如下。
一、专属性专属性系指在其他成份(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下,采用的分析方法能正确测定出被测物的能力。
鉴别反应、杂质检查和含量测定方法,均应考察其专属性。
如方法专属性不强,应采用一种或者多种不同原理的方法予以补充。
1. 鉴别反应应能区分可能共存的物质或者结构相似的化合物。
不含被测成份的供试品,以及结构相似或者组分中的有关化合物,应均呈阴性反应。
2. 含量测定和杂质测定采用的色谱法和其他分离方法,应附代表性图谱,以说明方法的专属性,并应标明诸成分在图中的位置,色谱法中的分离度应符合要求。
在杂质对照品可获得的情况下,对于含量测定,试样中可加入杂质或者辅料,考察测定结果是否受干扰,并可与未加杂质或者辅料的试样比较测定结果。
9012生物样品定量分析方法验证指导原则
9012生物样品定量分析方法验证指导原则9012生物样品定量分析方法验证指导原则是为了确保生物样品定量分析方法的准确性和可靠性而制定的一系列原则和指导。
生物样品定量分析方法验证是指通过实验和数据分析,验证该方法能够准确、可靠地定量分析生物样品中目标物质的含量。
以下是关于9012生物样品定量分析方法验证指导原则的详细介绍。
1.验证目标:明确验证的目标,即要验证的生物样品定量分析方法和目标物质的含量范围。
验证的目标应明确具体,包括检测的目标物质、所用的定量方法和样品类型等。
2.实验设计:合理设计验证实验方案。
验证实验应采用相关的生物样品,并根据目标物质的特性选择合适的样品处理方法。
实验设计应包括重复次数的确定、正负对照样品的设置和实验步骤的详细描述。
3.准确性:验证方法的准确性是指分析结果与真实值之间的一致性。
通过对一定数量的已知浓度样品进行分析,评估方法的准确性。
评估指标可包括回收率、偏差等指标。
4.精密度:验证方法的精密度是指同一样品在重复测量条件下,方法重复性的可靠性。
通过测量同一样品的重复测量值,评估方法的精密度。
评估指标可包括相对标准偏差(RSD)、变异系数等指标。
5.灵敏度:验证方法的灵敏度是指方法对目标物质浓度变化的敏感程度。
通过测量不同浓度样品的分析信号,评估方法的灵敏度。
评估指标可包括最低检测限、定量限等指标。
6.选择性:验证方法的选择性是指方法对其他干扰物质的响应能力。
通过测量其他相关物质的干扰试验,评估方法的选择性。
评估指标可包括干扰物质的峰检出率、峰分离度等指标。
7.稳定性:验证方法的稳定性是指方法在规定条件下的变化范围。
通过存储试样的时效试验、方法的变更试验等,评估方法的稳定性。
评估指标可包括试样的峰面积或峰高百分含量的变化程度。
8.结果分析:根据验证实验的结果,进行数据统计和分析。
根据评估指标的要求,判断方法是否满足准确性、精密度、灵敏度、选择性和稳定性等要求。
结果分析应包括合理的统计方法和结果显示方式。
生物样品定量分析方法验证指导原则
生物样品定量分析方法验证指导原则1.设计验证计划:验证计划应明确验证的目的、范围和任务,并确定所需资源和时间。
验证计划还应包括验证参数、验证样品数量和测试条件等详细信息。
2.确定验证参数:验证参数是指确定方法准确性、精密度、线性范围、检测限和选择性等方面的参数。
根据具体的分析方法,选择适当的验证参数进行验证。
3.准确性验证:准确性验证包括回收率、加标回收率和对照品比较等方法。
在准确性验证中,使用已知浓度的标准品或对照品进行分析,并比较结果与标准值或真实值之间的差异。
4.精密度验证:精密度验证是通过重复测定同一样品,评估方法的精密度。
重复测定应在相同条件下进行,采用适当的统计方法计算结果的精密度。
5.线性范围验证:线性范围验证涉及不同浓度下的响应与浓度之间的线性关系。
通过分析一系列不同浓度的标准品或对照品,并绘制浓度与响应之间的曲线,确定方法的线性范围。
6.检测限验证:检测限是方法能够可靠检测到的最低浓度。
通过分析一系列浓度低于检测限的样品,并确定能够可靠检测到的最低浓度。
7.选择性验证:选择性验证是评估方法对目标物和干扰物的选择性。
通过分析不同的样品矩阵或添加干扰物,并验证分析结果是否受到干扰。
8.数据分析:在验证完成后,应进行数据分析和评估。
使用适当的统计方法,计算准确度、精密度和线性范围等参数,并评估分析方法的可行性和可靠性。
9.结果报告和文件管理:验证的结果应记录并报告。
应编写验证报告,包括验证计划、实验结果、数据分析和结论等。
还应制定相应的文件管理措施,以确保验证结果的追溯性。
综上所述,生物样品定量分析方法验证是确保分析结果准确性和可靠性的重要步骤。
实施验证需要设计验证计划、确定验证参数、进行准确性、精密度、线性范围、检测限和选择性等方面的验证,并进行数据分析和结果报告。
通过遵循上述指导原则,可以有效验证生物样品定量分析方法的可行性和可靠性。
中国药典 版生物样品定量分析方法验证指导原则 草案
生物样品定量分析方法验证指导原则(草案)11. 范围2准确测定生物基质(如全血、血清、血浆、尿)中的药物浓度,对于药物和3制剂研发非常重要。
这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性,或根据毒动4学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。
因此,必须完整地验证和5记录应用的生物分析方法,以获得可靠的结果。
6本指导原则提供生物分析方法验证的要求,也涉及非临床或临床试验样品实7际分析的基本要求,以及何时可以使用部分验证或交叉验证,来替代完整验证。
8生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。
9应该在相应的生物样品分析中遵守GLP原则或GCP原则。
102.生物分析方法验证112.1 分析方法的完整验证12分析方法验证的主要目的是,证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析13物浓度的可靠性。
此外,方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。
一般应对每14个物种和每种基质进行完整验证。
当难于获得相同的基质时,可以采用适当基质15替代,但要说明理由。
16一个生物分析方法的主要特征包括:选择性、定量下限、响应函数和校正范17围(标准曲线性能)、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液18中储存和处理全过程中的稳定性。
19有时可能需要测定多个分析物。
这可能涉及两种不同的药物,也可能涉及一20个母体药物及其代谢物,或一个药物的对映体或异构体。
在这些情况下,验证和21分析的原则适用于所有涉及的分析物。
22对照标准物质23在方法验证中,含有分析物对照标准物质的溶液将被加入到空白生物基质24中。
此外,色谱方法通常使用适当的内标。
25应该从可追溯的来源获得对照标准物质。
应该科学论证对照标准物质的适用26性。
分析证书应该确认对照标准物质的纯度,并提供储存条件、失效日期和批号。
27对于内标,只要能证明其适用性即可,例如显示该物质本身或其相关的任何杂质28不产生干扰。
29当在生物分析方法中使用质谱检测时,推荐尽可能使用稳定同位素标记的内30标。
中国药典2024年版生物样品定量分析方法验证指导原则
一、验证目标和范围生物样品定量分析方法的验证目标是评估方法的适用性、准确性、精密度、灵敏度、线性范围、选择性、稳定性和测定限等指标。
验证的范围应包括常规样品、稳定样品和特殊样品等方面。
二、验证计划和报告验证计划应包括验证的目的、范围、方法、样品、检测设备和仪器的选择、验证标准和指标的确定、样品的制备与处理、实验设计和统计分析等内容。
验证报告应包括验证计划的执行情况,具体的验证结果和分析,以及结论和建议等内容。
三、适用性验证方法要考虑分析方法的适用性,包括样品的特性和要求、方法的灵敏度和特异性、样品制备和处理的方法、测定限和线性范围等因素。
四、准确性和精密度准确性和精密度是衡量定量分析方法的重要指标。
准确性的评估包括系统误差的测定和修正,常用方法有标准样品、对比法和加标回收法等。
精密度的评估要考虑到实验操作的稳定性和方法的重复性等因素。
五、选择性和特异性选择性和特异性是评估定量分析方法对目标物质的识别和测定能力的指标。
选择性的评估要考虑方法的干扰物质的影响和实际样品的复杂性。
特异性的评估要考虑到方法对其他物质的干扰以及交叉反应的影响。
六、线性范围和灵敏度线性范围是评估定量分析方法测定结果与目标物质浓度之间的关系的指标。
灵敏度是评估定量分析方法对目标物质低浓度范围内变化的敏感性的指标。
线性范围的评估要包括线性相关系数、回归方程和相关系数的确定。
灵敏度的评估要考虑到检测限和测定限等因素。
七、稳定性稳定性是评估定量分析方法在时间、温度、湿度、光照等条件下的稳定性和耐受性的指标。
稳定性的评估要包括样品的稳定性、试剂的稳定性和仪器的稳定性等方面。
八、测定限测定限是评估定量分析方法可以测定的最低浓度的指标。
测定限的评估要考虑方法的灵敏度和噪声的干扰等因素。
综上所述,中国药典2024年版生物样品定量分析方法验证指导原则(草案)主要涵盖了验证目标和范围、验证计划和报告、适用性、准确性和精密度、选择性和特异性、线性范围和灵敏度、稳定性和测定限等方面的内容。
中国药典2020年版 9101 分析方法验证指导原则
9101分析方法验证指导原则分析方法验证(analytical method validation)的目的是证明建立的方法适合于相应检测要求。
在建立药品质量标准、变更药品生产工艺和制剂组分、修订原分析方法时,需对分析方法进行验证。
生物制品质量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法,其中理化分析方法的验证原则与化学药品基本相同,所以可参照本指导原则进行,但在进行具体验证时还需要结合生物制品的特点考虑;相对于理化分析方法而言,生物学测定方法存在更多的影响因素,因此本指导原则不涉及生物学测定方法验证的内容。
验证的分析项目:鉴别试验、杂质检查(限度或定量分析)、含量测定(包括特性参数和含量/效价测定,其中特性参数如:药物溶出度、释放度等)。
验证的指标有:专属性、准确度、精密度(包括重复性、中间精密度和重现性)、检测限、定量限、线性、范围、耐用性。
在分析方法中,须用标准物质进行试验。
由于分析方法具有各自的特点中,并随分析对象而变化,因此需要视具体情况拟订验证的指标。
表1列出的分析项目和相应的验证指标可供参考。
表1检验项目和验证指标项目内容鉴别杂质测定含量测定-特性参数-含量或效价测定定量限度专属性②++++准确度-+-+精密度重复性-+-+中间精密度-+①-+①检测限(LOD)--③+-定量限(LOQ)-+--线性-+-+范围-+-+耐用性++++ 1已有重现性验证,不需要验证中间精密度;2如一种方法不够专属,可用其他分析方法予以补充;3视具体情况予以验证。
方法学验证内容如下:一、专属性专属性系指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下,采用的分析方法能正确测定出被测物的能力。
鉴别反应、杂质检査和含量测定方法,均应考察其专属性。
如方法专属性不强,应采用一种或多种不同原理的方法予以补充。
1.鉴别反应应能区分可能共存的物质或结构相似的化合物。
不含被测成分的供试品,以及结构相似或组分中的有关化合物,应均呈阴性反应。
最新生物样本分析法指导原则
最新生物样本分析法指导原则为了适应医药工业全球化的进展,生物样本的分析方法也需要全球化的指导原则。
本文就SFDA,FDA及EMA有关生物样本分析的指导原则进行综述分析,了解其中的差异,为研究者进行生物样本分析提供参考。
美国食品药品管理局(FDA)在2001年颁发的关于生物分析方法验证(BMV)的指导原则。
2005年SFDA颁发了三个与生物分析法相关的准则:一是关于非临床研究的,其他两个是关于临床研究的。
最近,欧洲药品管理局(EMA)发布了自己的关于BMV的草案准则[8]。
这些指导原则颁布后,引起了包括EBF(欧洲生物论坛),美国药学科学家协会(AAPS)以及SBDG(上海生物分析讨论组)和BBDG(北京生物分析讨论组)在内的组织的关注。
这些组织都希望建立适用于全球的统一指导原则。
目前这些指导原则存在如下方面的不同:1. 法规遵从与美国FDA的指导原则一样,中国SFDA的指导原则没有明确BMV是否必须遵循GLP规范。
2003年9月以后,SFDA要求,非临床毒代动力学(TK)研究和临床BA/BE研究应分别遵守GLP和GCP 规范,而对于人样本的生物分析没有规定是否仍遵循GLP规范。
EMA 草案明确指出,非临床试验生物样本分析无论是方法学验证还是样本测定均要遵循GLP规范,而人类生物分析研究应遵循GCP原则而不是GLP。
2. 方法验证的范围分析方法学的全部方法学验证的范围,SFDA、FDA和EMA的要求基本一致。
对于在不同种属间进行TK研究的生物样本分析,SFDA 和FDA指导原则要求在更换种属时,仅要求部分方法学验证,而EMA 要求全部验证。
3. 对照和内标SFDA的指导原则要求在分析方法验证时应记录待测物、代谢产物及内标的信息(例如,纯度,来源和稳定性),但目前尚没有具体的质量标准要求。
FDA指导原则规定了待测药物对照品的质量要求,但没有强调作为内标使用的化学品的质量要求[4]。
EMA指导原则既规定了对照品的质量标准,又规定了内标的质量标准,还对内标的稳定性提出了要求[8]。
9012生物样品定量分析方法验证指导原则
9012生物样品定量分析方法验证指导原则生物样品定量分析方法验证是确保所采用的分析方法能够准确、可靠地定量生物样品中目标分析物的含量的过程。
验证验证是科学研究中非常重要的步骤,能够确保分析方法的可靠性和有效性。
本文将就生物样品定量分析方法验证的指导原则进行详细介绍。
一、准备工作:1.要明确分析方法的目的和要求,明确分析的目标物质、相关物质和可能影响分析结果的有害物质。
2.正确选择参考标准物质,确保其纯度、稳定性和可获得性。
二、验证方案的制定:1.根据样品的特点和目标物质的性质,制定验证方案。
验证方案应包括验证对象(样品类型、目标物质),验证方法(样品前处理、分析流程),验证指标(准确度、精密度、线性等)等内容。
2.确定验证方案的验证参数,包括样品容量、配制方案、浓度范围等。
三、验证准确度:1.准确度是指分析结果与真实值的接近程度。
验证准确度可以使用加标回收率和对照样品法进行验证。
2.加标回收率验证是在不同浓度水平下,加入一定量的目标物质,并对其进行分析,计算加标回收率。
3.对照样品法是用已知浓度的标准物质进行测定,计算其测定值与已知浓度之间的偏差。
四、验证精密度:1.精密度是指同一样品在同一实验室下,通过多次测定得到的结果的一致性。
验证精密度可以使用重复测定法进行验证。
2.重复测定法是在相同条件下,对同一样品进行多次独立测定,计算测定结果的方差或相对标准偏差。
五、验证线性范围:1.线性范围是指分析方法能够在一定范围内随着目标物质浓度的变化而呈现线性关系。
验证线性范围可以使用系列标准品浓度进行测定,绘制标准曲线。
2.根据标准曲线,分析样品中目标物质的浓度,在线性范围内,测定值与实际浓度之间的误差应在一定范围内。
六、其他验证指标:除了上述的准确度、精密度和线性范围,根据实际需要,还可以对选择性、稳定性、重复性、指标回收率等指标进行验证。
七、结果分析和报告:1.对验证结果进行评价和分析,判断分析方法是否满足要求。
生物样品分析方法确证的SOP
生物样品分析方法确证的SOP1.专属性:应着重考察药物的代谢物、内源性物质和同时服用药物的干扰。
取6个个体空白样品,采用拟定的方法测定,所得结果与接近于定量限的被测物浓度的纯溶剂溶液所得的结果进行比较。
在药物、代谢物、内标物的保留时间处不应有大的干扰,任何有大干扰的样品应舍去,如果大于10%的空白样品有干扰,应另取一组空白样品重试,如果仍有大于10%的空白样品有干扰,则应改变拟定方法。
2.质控样品(QC样品):系将已知量得待测药物加入到生物介质中配制的样品,用于质量控制。
3.线性范围:标准曲线由5 ~ 8个系列浓度标准溶液组成,包括LOQ,线性程度用加权最小二乘法处理,相关系数r不应低于0.99,同时必须符合一定的精密度和准确度。
线性范围浓度上限为实际样品最高浓度的120%,下限为实际样品最低浓度的80%。
要求LOQ偏离标准浓度(RSD)应小于等于20%,其他各点应小于等于15%。
截距与C max响应值之比应≤5.0%。
4.准确度:测得的样品浓度与真实浓度的接近程度,常用回收率表示。
a.绝对回收率(萃取回收率、提取回收率)萃取回收率(%)=A测/A真×100%A测:取一定量的被测物标准品,加到空白血浆样品中,按方法处理,使最后溶液中药物标准品浓度为1μg·mL-1 ,测定峰面积,记为A测。
A真:取1μg·mL-1的药物标准品的纯溶剂溶液直接进样,测定峰面积,记为A。
真考察高、中、低三个浓度,低浓度选在定量限(LOQ)附近,高浓度在标准曲线上限的附近(上限的80%),中间选一个浓度。
每个浓度各3份样品,加入量一般在10-6~10-9g, 绝对回收率50%~80%。
(注:内标法中,药物与内标各自用外标法测得的绝对回收率应相近,两者相差应小于10%。
)b.方法回收率建立标准曲线后,取高、中、低药物标准品溶液加到空白血浆中,每个浓度至少平行测定5份,按标准曲线制备法同法制备,将所得值代入回归方程,求得测定值C测。
方法验证指导原则-《中国药典》2015年版第四部
方法验证指导原则-《中国药典》2015年版第四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则量。
③应注意固体制剂的晶型原料药含量应在标准曲线的线性范围内。
④应使用外标标准物质ai2o3对仪器及数据进行校正。
方法3差示扫描量热法(DSC)定置分析方法,获得供试品晶型含量数据。
采用DSC定量分析的晶型物质一般应具有不同的熔融吸热峰值,且晶型样品质量与吸热量呈正比关系。
(a)晶型原料药分析:精密称量不同质量晶型样品,建立质量与热量的热焓值的线性关系,绘制标准曲线,定量测定样品的晶型含量。
(b)混晶原料药分析:当不同晶型含量与热焓呈正比关系,采用精密称量配制不同晶型含量的混晶样品,建立晶型含量与热焓值的线性关系,绘制标准曲线,定量测定混晶样品中的晶型含量。
(c)方法说明:①仅适用于晶型原料药定量分析。
②对熔融吸热峰值相差大的混晶原料供试品,建立标准曲线时线性范围较宽;熔融吸热峰值相差小的混晶样品,建立标准曲线时线性范围较窄。
③有时DSC法仅能作为限量检测方法。
方法4红外光谱(IR)定量分析方法,获得供试品晶型含量数据。
采用IR法可以对晶型原料药或固体制剂进行定量分析,常用的方法为相对峰强度法。
晶型特征峰选取原则:①分别选取2种晶型特有的红外光谱吸收峰作为特征峰。
②2种晶型的特征峰应独立而不受对方干扰。
③特征峰强度应与晶型成分含量呈对应线性关系。
对压力可致晶型状态发生转变的晶型原料供试品,制样时应避免压片法。
(a)晶型原料药分析:采用相对峰强度法时分别选择2 种晶型成分的特征吸收峰位置匕与b2,在同一红外光谱图上读取2种晶型成分的特征吸收峰的吸光度值V1与42,计算二者特征吸收峰的吸光度比值r。
通过配制一系列不同晶型比例的混晶样品,建立特征吸收峰的吸光度比值的对数值与晶型含量间的线性关系,绘制标准曲线,实现对混晶样品的晶型含量进行定量分析。
(b)制剂中晶型原料药成分分析:采用相对峰强度法时分别选择晶型原料药特征吸收峰位置h与空白辅料的特征吸收峰位置b2,在同一红外光谱图上读取2种晶型成分的特征吸收峰的吸光度值八1与A2,计算二者特征吸收峰的吸光度比值~通过配制一系列含有不同质量晶型原料与空白辅料比例混合样品,建立特征吸收峰的吸光度比值的对数值与晶型原料药含量间的线性关系,绘制标准曲线,实现对固体制剂中晶型原料药含量进行定量分析。
中国药典版生物样品定量分析方法验证指导原则
二、生物分析方法验证
为了验证批内准确度,应 取一个分析批的定量下限及低、中、高浓度质控样品,每个浓 度至少用5个样品 浓度水平覆盖标准曲线范围:定量下限,在不高于定量下限浓度3倍的低浓度质控样品, 标准曲线范围中部附近的中浓度质控样品,以及标准曲线范围上限约75 %处的高浓度质控 样品
准确度均值一般应在质控样品标示值的±15%之内,定量下限准确度应在标示值的±20%范围 内
除正常基质外,还应关 注其他样品的基质效应, 例如溶血的或髙血脂的 血浆样品等
二、生物分析方法验证
9.稳定性
必须在分析方法的每一步骤确保稳定性,用于检查稳定性的条件,例如样品基质、抗凝剂 、容器材料、储存和分析条件,都应该与实际试验样品的条件相似 用文献报道的数据证明稳定性是不够的 采用低和髙浓度质控样品(空白基质加人分析物至定量下限浓度3倍以内以及接近定量上限 ),在预处理后以及在所评价的条件储存后立即分析 由新鲜制备的校正标样获得标准曲线,根据标准曲线分析质控样品,将测得浓度与标示浓 度相比较,每一浓度的均值与标示浓度的偏差应在±15%范围内 应通过适当稀释,考虑到检测器的线性和测定范围,检验储备液和工作溶液的稳定性
中国药典(2020版)9012 生物样品定量分析方法验
证指导原则
中国药典(2020版)9012生物样品定量分析方法验证指导原则
二、生物分析方法验证 三、试验样品分析
目录
中国药典(2020版)9012生物样品定量分析方法验证指导原则
9012生物样品定量分析方法验证指导原则 —、范围 准确测定生物基质(如全血、血清、血浆、尿)中的药物浓度,对于药物和制剂研发非常重 要 这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性,或根据毒动学、药动学和生物等效性试验 的结果做出关键性决定 因此,必须完整地验证和记录应用的生物分析方法,以获得可靠的结果 本指导原则提供生物分析方法验证的要求,也涉及非临床或临床试验样品实际分析的基本 要求,以及何时可以使用部分验证或交叉验证,来替代完整验证 本指导原则二和三主要针对色谱分析方法,四针对配体结合分析方法 生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求
2024药典生物样品定量分析方法验证指导原则
2024药典生物样品定量分析方法验证指导原则2024药典生物样品定量分析方法验证指导原则是指对于药物及其原料药以及相关的生物样品进行定量分析方法验证的准则和指导性原则。
这些原则是为了确保药物和生物样品的准确性、可靠性和重复性,从而保证药物的质量和安全性。
以下是关于2024药典生物样品定量分析方法验证指导原则的详细介绍。
首先,2024药典生物样品定量分析方法验证指导原则要求验证人员具有相应的专业知识和经验,能够进行准确、可靠和重复的测试。
验证人员应具备合适的教育背景、培训经历和实践经验,能够正确操作和解释测试结果。
其次,验证步骤应按照规定的程序和要求进行。
验证步骤包括方法准确性验证、方法精密度验证、方法线性范围验证、方法选择度验证和方法稳定性验证等。
这些步骤能够评估方法的准确性、精密度、线性范围、选择度和稳定性等重要指标。
方法准确性验证是评估方法测量结果与真实值之间差异的步骤。
验证人员可以通过比较方法测得的样品浓度与已知浓度的样品进行对照,以评估方法的准确性。
方法精密度验证是评估方法测量结果的一致性和重复性的步骤。
验证人员应根据规定的程序使用不同的检测设备、分析仪器和操作员对同一样品进行多次测试,以评估方法的精密度。
方法线性范围验证是评估方法在一定浓度范围内能否提供可靠测量结果的步骤。
验证人员应根据规定的程序和要求,测试一系列浓度不同的样品,以评估方法的线性范围。
方法选择度验证是评估方法在存在多种干扰物或类似物质的情况下是否准确测量目标物质的步骤。
验证人员可以通过加入干扰物或其他相关物质来评估方法的选择度。
方法稳定性验证是评估方法在不同条件下是否产生相似结果的步骤。
验证人员应根据规定的程序和要求,测试样品在不同条件下的稳定性,以评估方法的稳定性。
最后,验证人员应根据验证结果制定合适的验证报告,包括验证方案、方法验证结果、数据分析和结论等内容。
验证报告应清晰、准确地描述验证过程和结果,并提供可验证性的依据。
生物样品分析中的方法学验证
生物样品分析中的方法学验证张剑萍* ,郭澄# (上海交通大学附属第六人民医院药剂科,上海市200233)中图分类号R927 文献标识码C 文章编号1001- 0408 (2008) 3.- 2469- 03摘要目的:介绍在色谱分析方法中方法学验证与质控的内容及其有待发展的方向。
方法:参阅国际上有关方法学验证的指导原则、国家食品药品监督管理局管理规范,结合本实验室的标准操作规程,对方法学验证与质控的内容及存在的问题进行综合分析。
结果:总结了方法学验证和质控的内容,及方法学验证中存在的可能的风险。
结论:已建立的方法学验证和质控内容基本完善,但方法学验证的标准也应该根据实际情况制定。
关键词生物样品分析;方法学验证;方法学质控生物样品分析方法的建立、验证和应用是临床前药动学和Ⅰ期临床试验研究中的重要组成部分, 关系到药动学研究和生物等效性试验研究的科学性和正确性。
其中, 方法学验证(Met hod validation) 是整个试验数据可靠的基本保证,因此其是各个实验室标准操作规程(SOP) 的重点内容。
本文根据国际上有关生物分析方法验证的指导原则, 参照我国国家食品药品监督管理局的管理规范, 结合本实验室研究经验, 总结了以色谱分析方法为主的生物样品分析中方法学验证的内容及其标准制定中有待发展的方向,以供同行交流参考。
1 意义方法学验证,又称方法学评价、方法学确认等,是整个药动学、生物利用度及生物等效性研究的基础。
这是药动学研究有别于其他药理毒理研究的特殊之处。
所有药动学研究结果都依赖于生物样品的测定, 只有可靠的方法才能得出可靠的结果。
在通过特异性、灵敏度、精密度、准确度、稳定性等研究并建立检测方法学,以及得到了标准曲线后, 在检测过程中还应进行方法学质控, 制备随行标准曲线并对质控样品进行测定, 以确保检测方法的可靠性。
2 分类及其应用范围按照美国食品与药品管理局( FDA)分类,方法学验证分为全面验证( Full validation) 、部分验证(Partial validation) 和交叉验证(Cross validation) [1 ]。
药典生物样品定量分析方法验证指导原则
在对已被验证的分析方法进行小幅改变情况下,根据改变的实质内容,可能需要部分方法验证。可能的改变包括:生物分析方法转移到另一个实验室,改变仪器、校正浓度范围、样品体积,其他基质或物种,改变抗凝剂、样品处理步骤、储存条件等。应报告所有的改变,并对重新验证或部分验证的范围说明理由。
(三)交叉验证
3. 定量下限
定量下限是能够被可靠定量的样品中分析物的最低浓度,具有可接受的准确度和精密度。定量下限是标准曲线的最低点,应适用于预期的浓度和试验目的。
4. 标准曲线
应该在指定的浓度范围内评价仪器对分析物的响应,获得标准曲线。通过加入已知浓度的分析物(和内标)到空白基质中,制备各浓度的校正标样,其基质应该与目标试验样品基质相同。方法验证中研究的每种分析物和每一分析批,都应该有一条标准曲线。
生物样品定量分析方法验证指导原则
一、范围
准确测定生物基质(如全血、血清、血浆、尿)中的药物 浓度,对于药物和制剂研发非常重要。这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性,或根据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。因此,必须完整地验证和 记录应用的生物分析方法,以获得可靠的结果。
本指导原则提供生物分析方法验证的要求,也涉及非临床或临床试验样品实际分析的基本要求,以及何时可以使用部分验证或交叉验证,来替代完整验证。本指导原则二和三主要针对色谱分析方法,四针对配体结合分析方法。
批间准确度
通过至少3个分析批,且至少两天进行,每批用定量下 限以及低、中、高浓度质控样品,每个浓度至少5个测定值来评价。准确度均值一般应在质控样品标示值的±15%范围内,对于定量下限,应在标示值的±20%范围内。
报告的准确度和精密度的验证数据应该包括所有获得的测定结果,但是已经记录明显失误的情况除外。
生物样品分析方法验证M10
人用药品注册技术要求国际协调会ICH协调指导原则生物样品分析方法验证M10草案2019年2月26日授权公开征求意见中在ICH进程第2阶段,ICH大会将相应ICH专家工作组已达成共识的文本或指导原则草案递交给ICH区域监管机构,用以按照相应国家或地区的程序,征求内部和外部意见。
M10指导原则进程法律声明:本指导原则受版权保护,在ICH版权已得到认可的情况下,除ICH标识外,可在公共许可的前提下使用、复制、引用、改编、调整、翻译或传播,在任何情形下需在文件中承认ICH版权。
如需要修改或翻译,必须进行合理的处理,明确注明或以其他方式标注对原文或基于原文进行的更改。
任何暗示 ICH授权或支持对原版文件的改写、调整或翻译行为必须避免。
本文件按现有状态提供,不做任何形式的保证。
任何情况下,ICH或原版文件作者不会对任何由使用本文件造成的索赔、伤害或其他责任负责。
上述许可不适用于第三方提供的内容。
因此,对版权归属第三方的文件,必须从该版权持有者处获得复制许可。
ICH协调指导原则生物样品分析方法验证M10ICH 共识指导原则目录1.引言 (6)1.1 目的 (6)1.2 背景 (6)1.3 范围 (6)2.一般原则 (7)2.1 方法开发 (7)2.2 方法验证 (8)2.2.1 完整验证 (8)2.2.2 部分验证 (9)2.2.3 交叉验证 (9)3.色谱法 (10)3.1对照标准品 (10)3.2 验证 (11)3.2.1 选择性 (11)3.2.2 特异性 (12)3.2.3 基质效应 (12)3.2.4 校准曲线和范围 (13)3.2.5 准确度和精密度 (14)3.2.6 残留 (15)3.2.7 稀释完整性 (16)3.2.8 稳定性 (16)3.2.9 重进样重现性 (19)3.3 试验样品分析 (19)3.3.1 分析批 (20)3.3.2 分析批接受标准 (20)3.3.3 校正范围 (22)3.3.4 试验样品重分析 (22)3.3.5 试验样品重进样 (24)3.3.6 色谱图积分 (24)4. 配体结合分析 (24)4.1 主要试剂 (24)4.1.1 标准品 (24)4.1.2 关键试剂 (25)4.2 方法学验证 (25)4.2.1 特异性 (26)4.2.2 选择性 (26)4.2.3 校准曲线和范围 (27)4.2.4 准确度和精密度 (28)4.2.5 残留 (29)4.2.6 稀释线性和钩状效应 (29)4.2.7 稳定性 (30)4.3 试验样品分析 (31)4.3.1 分析批 (31)4.3.2 分析批接受标准 (32)4.3.3 校正范围 (32)4.3.4 试验样品重分析 (33)5.已测样品再分析(ISR) (34)6. 部分验证和交叉验证 (36)6.1 部分验证 (36)6.2 交叉验证 (38)7. 其他考虑事项 (38)7.1 待测物为内源性物质 (38)7.1.1 质控样品 (40)7.1.2 校准曲线 (40)7.1.3 选择性、回收率和基质效应 (40)7.1.4 平行性 (41)7.1.5 准确度和精密度 (41)7.1.6 稳定性 (42)7.2 平行性 (42)7.3 回收率 (42)7.4 最低稀释度 (43)7.5商品化和诊断试剂盒 (43)7.6 新技术或替代技术 (44)7.6.1 干基质方法 (44)8.文档 (45)8.1 摘要信息 (45)8.2 方法验证和生物分析报告文档 (46)9.术语 (50)1.引言1.1 目的本指导原则旨在为化学药物和生物药物定量生物分析方法验证及其在试验样品分析中的应用提供建议,以提高化学药物和生物药物研发和注册申请中生物分析方法验证支持性数据的质量和一致性。
生物样品中药物定量分析的指导原则与实验实施
FDA:Guidance for Industry Bioanalytical
Method Validation
2013年修订版本
EMEA:Guideline on bioanalytical method
validation
2012年版本
CFDA
1. 范围 2. 生物分析方法验证
2.1 分析方法的完整验证
此需要自行判断并说明理由。
EMEA:部分验证可以少到测定批间
精密度和准确度,也可以至几乎全部 验证内容。
应用不同的方法从一项或多项试验获得数据,或者 应用同一方法从不同试验地点获得数据时,需要互 相比较数据,应该进行分析方法的交叉验证。
同一份质控或者试验样品被两种分析方法测定,评 价均值的差异。
3.6 用于评价方法重现性的试验样品再分析
EMEA
2.1.1 选择性 2.1.2 残留 2.1.3 定量下限
2.1.4 标准曲线
2.1.5 准确度
2.1.6 精密度 2.1.7 稀释可靠性
2.1.8 基质效应 2.1.9 稳定性
FDA
1. 范围 测定对象确定——生物基质中的药物浓度。 适合于非临床或临床试验样品实际分析的基本要求。 规定部分验证或交叉验证的适用范围。
浓度 10 20 50 100 200 500 1000
峰面积比 0.102 0.139 0.241 0.443 0.862 2.284 4.309
INTERCEPT SLOPE
R2
1 139.7 112.9 92.6 93.3 95.3 104.3 99.2 0.0419 0.004301 0.9991
中国药典2024年版生物样品定量分析方法验证指导原则
一、验证目的:
生物样品定量分析方法验证旨在评价一种分析方法在特定条件下,确
定适用对象范围,确定方法的准确性,检测灵敏度和其他相关性能指标的
有效性。
验证的结果可以为方法的合理性提供数据支持,并为方法适用性
评价提供依据。
二、验证的步骤:
三、验证的内容:
生物样品定量分析方法验证的主要内容包括精密度、选定性、准确度、线性范围和检测限等指标的验证。
精密度是指在一定条件下,同一样品的
多次测定结果之间的变异程度,它可以衡量方法的稳定性和重复性;选定
性是指方法能够正确识别和定量分析目标物质,并能排除其他干扰成分的
能力;准确度是指方法能够恢复目标物质真实含量的能力;线性范围是指
方法能够在一定浓度范围内,准确地测定目标物质的含量;检测限是指方
法可以可靠地识别和量化目标物质的最低浓度。
这些指标的验证可以全面
评价生物样品定量分析方法的可靠性和适用性。
四、验证的评价:
对于生物样品定量分析方法验证的评价,应根据验证的目的和内容来
进行判断。
一般来说,验证结果应该符合国际和国家药品标准规定的要求,并能够在实际应用中稳定的使用。
验证结果应该包括实验数据、统计分析
和验证报告等多个方面,并且要进行全面系统的评价,最终确定方法的适
用性。
综上所述,中国药典2024年版生物样品定量分析方法验证指导原则(草案)对于药品质量控制起到了重要的指导作用。
正确的应用和执行该
指导原则,可以有效保证药品的质量和治疗效果,并为药物研发和生产提供科学可靠的方法支持。
生物样品定量分析方法验证指导原则
生物样品定量分析方法验证指导原则1.方法准确性验证:方法准确性验证是指确定方法的测量结果与真实值之间的偏差程度。
方法准确性可以通过检测已知浓度的标准品进行验证,例如添加已知浓度的化合物到样品中,然后使用待验证的方法测量其浓度。
对于生物样品的定量分析方法,可以使用已知浓度的纯化合物或参考物质进行准确性验证。
2.方法精密度验证:方法精密度验证是指对于同一样品反复进行多次测试,并评估结果的变异程度。
在方法精密度验证的过程中,应采用同一样品的多个并行测试进行比较。
可以计算相对标准偏差(RSD)来评估方法的精密度。
较低的RSD值表明方法具有更好的精密度。
3.方法线性验证:方法线性验证是指在一定范围内检测物质浓度与测量信号之间的线性关系。
为了验证方法的线性,可以制备一系列已知浓度的标准品,并使用待验证的方法进行测量。
然后,可以绘制标准品的浓度与测量信号之间的线性回归曲线,评估曲线拟合程度。
4.方法灵敏度验证:方法灵敏度验证是指确定方法能够检测的最低浓度限制。
可以制备一系列不同浓度的标准品,并使用待验证的方法进行测试。
然后,确定样品最低浓度,使其信号与噪声之间具有足够的信噪比。
5.方法选择性验证:方法选择性验证是指方法能够准确识别和测量目标物质而无需受到其他化合物的干扰程度。
在方法选择性验证的过程中,应添加其他可能存在的干扰物质,并评估它们对目标物质测量的影响。
选择性验证可以通过使用纯化合物或混合物样品进行。
6.方法稳定性验证:方法稳定性验证是指方法在一定时间范围和条件下的测量结果的变化程度。
可以通过在不同时间点和环境条件下进行样品测量,并比较结果来评估方法的稳定性。
稳定性验证可包括样品存储稳定性、制备和处理稳定性、环境因素(如温度、湿度)稳定性等方面的考虑。
总之,生物样品定量分析方法验证是确保方法的可靠性和准确性的重要步骤。
验证过程应包括准确性验证、精密度验证、线性验证、灵敏度验证、选择性验证和稳定性验证。
2020生物样品定量分析方法验证指导原则
2020生物样品定量分析方法验证指导原则—、范围准确测定生物基质(如全血、血清、血浆、尿)中的药物浓度,对于药物和制剂研发非常重要。
这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性,或根据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。
因此,必须完整地验证和记录应用的生物分析方法,以获得可靠的结果。
本指导原则提供生物分析方法验证的要求,也涉及非临床或临床试验样品实际分析的基本要求,以及何时可以使用部分验证或交叉验证,来替代完整验证。
本指导原则二和三主要针对色谱分析方法,四针对配体结合分析方法。
生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。
应该在相应的生物样品分析中遵守GLP原则或GCP原则。
二、生物分析方法验证(一)分析方法的完整验证分析方法验证的主要目的是,证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析物浓度的可靠性。
此外,方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。
一般应对每个新分析方法和新分析物进行完整验证。
当难于获得相同的基质时,可以采用适当基质替代,但要说明理由。
一个生物分析方法的主要特征包括:选择性、定量下限、响应函数和校正范围(标准曲线性能)、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液中储存和处理全过程中的稳定性。
有时可能需要测定多个分析物。
这可能涉及两种不同的药物,也可能涉及一个母体药物及其代谢物,或一个药物的对映体或异构体。
在这些情况下,验证和分析的原则适用于所有涉及的分析物。
对照标准物质在方法验证中,含有分析物对照标准物质的溶液将被加入到空白生物基质中。
此外,色谱方法通常使用适当的内标。
应该从可追溯的来源获得对照标准物质。
应该科学论证对照标准物质的适用性。
分析证书应该确认对照标准物质的纯度,并提供储存条件、失效日期和批号。
对于内标,只要能证明其适用性即可,例如显示该物质本身或其相关的任何杂质不产生干扰。
当在生物分析方法中使用质谱检测时,推荐尽可能使用稳定同位素标记的内标。
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9012 生物样品定量分析方法验证指导原则1. 范围准确测定生物基质(如全血、血清、血浆、尿)中的药物浓度,对于药物和 制剂研发非常重要。
这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性,或根据毒动 学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。
因此,必须完整地验证和 记录应用的生物分析方法,以获得可靠的结果。
本指导原则提供生物分析方法验证的要求,也涉及非临床或临床试验样品实 际分析的基本要求,以及何时可以使用部分验证或交叉验证,来替代完整验证。
生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。
应该在相应的生物样品分析中遵守 GLP 原则或 GCP 原则。
2. 生物分析方法验证2.1 分析方法的完整验证分析方法验证的主要目的是,证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析 物浓度的可靠性。
此外,方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。
一般应对每 个物种和每种基质进行完整验证。
当难于获得相同的基质时,可以采用适当基质 替代,但要说明理由。
一个生物分析方法的主要特征包括:选择性、定量下限、响应函数和校正范 围(标准曲线性能)、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液 中储存和处理全过程中的稳定性。
有时可能需要测定多个分析物。
这可能涉及两种不同的药物,也可能涉及一 个母体药物及其代谢物,或一个药物的对映体或异构体。
在这些情况下,验证和 分析的原则适用于所有涉及的分析物。
对照标准物质 在方法验证中,含有分析物对照标准物质的溶液将被加入到空白生物基质 中。
此外,色谱方法通常使用适当的内标。
应该从可追溯的来源获得对照标准物质。
应该科学论证对照标准物质的适用 性。
分析证书应该确认对照标准物质的纯度,并提供储存条件、失效日期和批号。
对于内标,只要能证明其适用性即可,例如显示该物质本身或其相关的任何杂质 不产生干扰。
当在生物分析方法中使用质谱检测时,推荐尽可能使用稳定同位素标记的内 标。
它们必须具有足够高的同位素纯度,并且不发生同位素交换反应,以避免结 果的偏差。
12.1.1 选择性该分析方法应该能够区分目标分析物和内标与基质的内源性组分或样品中 其他组分。
应该使用至少 6 个来源的适宜的空白基质来证明选择性,它们被分别 分析并评价干扰。
当干扰组分的响应低于分析物定量下限响应的 20%,并低于内 标响应的 5%时,通常即可以接受。
应该考察药物代谢物经样品预处理生成的分解产物以及可能的同服药物引 起干扰的程度。
应该考虑通常用于受试者群体试验的同服药物。
在适当情况下, 也应该评价代谢物在分析过程中回复转化为母体分析物的可能性。
2.1.2 残留应该在方法建立中考察残留并使之最小。
残留可能不影响准确度和精密度。
应通过在注射高浓度样品或校正标样后,注射空白样品来估计残留。
高浓度样品 之后在空白样品中的残留应不超过定量下限的 20%,并且不超过内标的 5%。
应 考虑特殊措施,在方法验证时检验并在试验样品分析时应用这些措施,以确保不 影响准确度和精密度。
这可能包括在高浓度样品后注射空白样品,然后分析下一 个试验样品。
2.1.3 定量下限定量下限是能够被可靠定量的样品中分析物的最低浓度,具有可接受的准确 度和精密度。
定量下限是标准曲线的最低点,应适用于预期的浓度和试验目的。
2.1.4 标准曲线应该在指定的浓度范围内评价仪器对分析物的响应,获得标准曲线。
通过加 入已知浓度的分析物(和内标)到空白基质中,制备各浓度的校正标样,其基质 应该与目标试验样品基质相同。
方法验证中研究的每种分析物和每一分析批,都 应该有一条标准曲线。
在进行分析方法验证之前,最好应该了解预期的浓度范围。
标准曲线范围应 该尽量覆盖预期浓度范围,由定量下限和定量上限(校正标样的最高浓度)来决 定。
该范围应该足够描述分析物的药动学。
应该使用至少 6 个校正浓度水平,不包括空白样品(不含分析物和内标的处 理过的基质样品)和零浓度样品(含内标的处理过的基质)。
每个校正标样可以 被重复分析。
应该使用简单且足够描述仪器对分析物浓度响应的关系式。
空白和零浓度样 品结果不应参与计算标准曲线参数。
应该提交标准曲线参数,测定校正标样后回算得出的浓度应一并提交。
在方 法验证中,至少应该评价 3 条标准曲线。
2校正标样回算的浓度一般应该在标示值的±15%以内,定量下限处应该在 ±20%内。
至少 75%校正标样,含最少 6 个有效浓度,应满足上述标准。
如果某 个校正标样结果不符合这些标准,应该拒绝这一标样,不含这一标样的标准曲线 应被重新评价,包括回归分析。
最好使用新鲜配制的样品建立标准曲线,但如果有稳定性数据支持,也可以 使用预先配制并储存的校正标样。
2.1.5 准确度分析方法的准确度描述该方法测得值与分析物标示浓度的接近程度,表示 为:(测得值/真实值)× 100%。
应采用加入已知量分析物的样品来评估准确度, 即质控样品。
质控样品的配制应该与校正标样分开进行,使用另行配制的储备液。
应该根据标准曲线分析质控样品,将获得的浓度与标示浓度对比。
准确度应 报告为标示值的百分比。
应通过单一分析批(批内准确度)和不同分析批(批间 准确度)获得质控样品值来评价准确度。
为评价一个分析批中不同时间的任何趋势,推荐以质控样品分析批来证明准 确度,其样品数不少于一个分析批预期的样品数。
批内准确度 为了验证批内准确度,应取一个分析批的定量下限及低、中、高浓度质控样 品,每个浓度至少用 5 个样品。
浓度水平覆盖标准曲线范围:定量下限,在不高 于定量下限浓度 3 倍的低浓度质控样品,标准曲线范围中部附近的中浓度质控样 品,以及标准曲线范围上限约 75%处的高浓度质控样品。
准确度均值一般应在质 控样品标示值的±15%之内,定量下限准确度应在标示值的±20%范围内。
批间准确度 通过至少 3 个分析批,且至少两天进行,每批用定量下限以及低、中、高浓 度质控样品,每个浓度至少 5 个测定值来评价。
准确度均值一般应在质控样品标 示值的±15%范围内,对于定量下限,应在标示值的±20%范围内。
报告的准确度和精密度的验证数据应该包括所有获得的测定结果,但是已经 记录明显失误的情况除外。
2.1.6 精密度分析方法的精密度描述分析物重复测定的接近程度,定义为测量值的相对标 准差(变异系数)。
应使用与证明准确度相同分析批样品的结果,获得在同一批 内和不同批间定量下限以及低、中、高浓度质控样品的精密度。
对于验证批内精密度,至少需要一个分析批的 4 个浓度,即定量下限以及低、 中、高浓度,每个浓度至少 5 个样品。
对于质控样品,批内变异系数一般不得超 过 15%,定量下限的变异系数不得超过 20%。
3对于验证批间精密度,至少需要 3 个分析批(至少 2 天)的定量下限以及低、 中、高浓度,每个浓度至少 5 个样品。
对于质控样品,批间变异系数一般不得超 过 15%,定量下限的变异系数不得超过 20%。
2.1.7 稀释可靠性样品稀释不应影响准确度和精密度。
应该通过向基质中加入分析物至高于定 量上限浓度,并用空白基质稀释该样品(每个稀释因子至少 5 个测定值),来证 明稀释的可靠性。
准确度和精密度应在±15%之内,稀释的可靠性应该覆盖试验 样品所用的稀释倍数。
可以通过部分方法验证来评价稀释可靠性。
如果能够证明其他基质不影响精 密度和准确度,也可以接受其使用。
2.1.8 基质效应当采用质谱方法时,应该考察基质效应。
使用至少 6 批来自不同供体的空白 基质,不应使用合并的基质。
如果基质难以获得,则使用少于 6 批基质,但应该 说明理由。
对于每批基质,应该通过计算基质存在下的峰面积(由空白基质提取后加入 分析物和内标测得),与不含基质的相应峰面积(分析物和内标的纯溶液)比值, 计算每一分析物和内标的基质因子。
进一步通过分析物的基质因子除以内标的基 质因子,计算经内标归一化的基质因子。
从 6 批基质计算的内标归一化的基质因 子的变异系数不得大于 15%。
该测定应分别在低浓度和高浓度下进行。
如果不能适用上述方式,例如采用在线样品预处理的情况,则应该通过分析 至少 6 批基质,分别加入高浓度和低浓度(定量下限浓度 3 倍以内以及接近定量 上限),来获得批间响应的变异。
其验证报告应包括分析物和内标的峰面积,以 及每一样品的计算浓度。
这些浓度计算值的总体变异系数不得大于 15%。
除正常基质外,还应关注其他样品的基质效应,例如溶血的或高血脂的血浆 样品等。
2.1.9 稳定性必须在分析方法的每一步骤确保稳定性,用于检查稳定性的条件,例如样品 基质、抗凝剂、容器材料、储存和分析条件,都应该与实际试验样品的条件相似。
用文献报道的数据证明稳定性是不够的。
采用低和高浓度质控样品(空白基质加入分析物至定量下限浓度 3 倍以内以 及接近定量上限),在预处理后以及在所评价的条件储存后立即分析。
由新鲜制 备的校正标样获得标准曲线,根据标准曲线分析质控样品,将测得浓度与标示浓 度相比较,每一浓度的均值与标示浓度的偏差应在±15%范围内。
4应通过适当稀释,考虑到检测器的线性和测定范围,检验储备液和工作溶液 的稳定性。
稳定性检查应考察不同储存条件,时间尺度应不小于试验样品储存的时间。
通常应该进行下列稳定性考察: z 分析物和内标的储备液和工作溶液的稳定性; z 从冰箱储存条件到室温或样品处理温度,基质中分析物的冷冻和融化稳定性; z 基质中分析物在冰箱储存的长期稳定性; 此外,如果适用,也应该进行下列考察: z 处理过的样品在室温下或在试验过程储存条件下的稳定性; z 处理过的样品在自动进样器温度下的稳定性。
在多个分析物试验中,特别是对于生物等效性试验,应该关注每个分析物在 含所有分析物基质中的稳定性。
应特别关注受试者采血时,以及在储存前预处理的基质中分析物的稳定性, 以确保由分析方法获得的浓度反映受试者采样时刻的分析物浓度。
可能需要根据 分析物的结构,按具体情况证明其稳定性。
2.2 部分验证在对已被验证的分析方法进行小幅改变情况下,根据改变的实质内容,可能 需要部分方法验证。
可能的改变包括:生物分析方法转移到另一个实验室,改变 仪器、校正浓度范围、样品体积,其他基质或物种,改变抗凝剂、样品处理步骤、 储存条件等。
应报告所有的改变,并对重新验证或部分验证的范围说明理由。
2.3 交叉验证应用不同方法从一项或多项试验获得数据,或者应用同一方法从不同试验地 点获得数据时,需要互相比较这些数据时,需要进行分析方法的交叉验证。
如果 可能,应在试验样品被分析之前进行交叉验证,同一系列质控样品或试验样品应 被两种分析方法测定。