食品中乳酸菌的检测
食品中乳酸菌的分离鉴定及功能研究
食品中乳酸菌的分离鉴定及功能研究近年来，随着人们健康意识的提高，对于食品中乳酸菌的分离鉴定及功能的研究逐渐受到关注。
乳酸菌是一类广泛存在于食品中的有益菌群，具有许多对人体有益的功效，其鉴定与功能研究对于食品质量的提升和人类健康至关重要。
首先，乳酸菌的分离鉴定是研究乳酸菌功能的基础。
在食品中分离鉴定乳酸菌，可以帮助我们了解不同种类、不同来源食品中乳酸菌的种类和数量。
常见的分离鉴定方法包括传统的培养分离方法、分子生物学方法和基因测序技术等。
其中，传统的培养分离方法是最常用的一种方法。
通过在不同的培养基上进行培养，分析菌落形态、生理和生化特性，可以初步鉴定出乳酸菌的种类。
而分子生物学方法则可通过引物对乳酸菌特异基因进行扩增和检测，进一步确定其种类。
基因测序技术则可以更加准确地鉴定不同乳酸菌的种类和亲缘关系，为进一步深入研究乳酸菌功能奠定基础。
其次，乳酸菌的功能研究主要包括保健、抗菌和抗氧化等方面。
乳酸菌具有胃肠道保健功能，可以维护肠道的健康平衡，促进食物的消化吸收，降低胃肠道疾病的风险。
此外，乳酸菌还具有抗菌作用，特别是对肠道中的有害菌起到抑制作用，有利于维持肠道菌群的稳定。
同时，乳酸菌还具有一定的抗氧化功能，可以清除自由基、减少氧化应激，保护人体细胞免受氧化损伤。
乳酸菌的功能主要通过其代谢产物来实现。
乳酸菌代谢产物包括乳酸、抗菌物质、挥发性化合物和细胞外多糖等。
其中，乳酸是乳酸菌最主要的代谢产物之一，可以维持肠道的酸碱平衡，抑制有害菌的生长。
抗菌物质则可以直接杀灭或抑制有害菌的生长。
挥发性化合物则赋予乳酸菌独特的风味和香气，为食品增色不少。
细胞外多糖则具有一定的黏附能力，有助于乳酸菌在肠道中生存和繁殖。
针对乳酸菌的功能研究还包括乳酸菌的应用。
乳酸菌可以被广泛应用于食品工业，通过发酵食品，不仅可以制造出更多种类的美味食品，还可以增加食品的营养价值和保质期。
此外，乳酸菌在医学领域也有着广泛的应用前景。
研究表明，乳酸菌在预防和治疗肠道疾病、免疫调节、降低胆固醇、抑制肿瘤等方面具有潜在疗效。
乳酸菌实验报告
乳酸菌实验报告乳酸菌实验报告引言：乳酸菌是一类常见的益生菌，被广泛应用于食品工业和医药领域。
乳酸菌具有促进肠道健康、增强免疫力等益生功效，因此备受关注。
本次实验旨在研究乳酸菌的生长特性和其在食品发酵过程中的应用。
实验一：乳酸菌的生长特性在第一部分的实验中，我们选择了三种常见的乳酸菌进行研究：嗜热乳酸菌、嗜酸乳酸菌和嗜碱乳酸菌。
我们分别在不同的培养基中培养这三种乳酸菌，并观察其生长情况。
结果显示，嗜热乳酸菌在高温环境下生长较为迅速，适宜的生长温度为45-50摄氏度；嗜酸乳酸菌则在酸性环境下表现出较好的生长能力，最适宜的pH值为4-5；而嗜碱乳酸菌则对碱性环境更为适应，最适宜的pH值为8-9。
这些结果表明，不同种类的乳酸菌对环境条件的适应能力存在差异，这也为后续的应用研究提供了理论基础。
实验二：乳酸菌在食品发酵中的应用在第二部分的实验中，我们选择了酸奶作为研究对象，探究乳酸菌在食品发酵过程中的应用效果。
我们将不同种类的乳酸菌分别添加到牛奶中，然后进行发酵。
结果显示，不同种类的乳酸菌对酸奶的质地和味道产生了不同的影响。
嗜酸乳酸菌发酵的酸奶味道酸甜可口，嗜碱乳酸菌发酵的酸奶味道较为柔和，而嗜热乳酸菌发酵的酸奶则具有浓郁的香味。
此外，我们还进行了酸奶中乳酸菌数量的测定。
结果显示，嗜酸乳酸菌在发酵过程中的生长速度最快，数量最多，嗜热乳酸菌次之，而嗜碱乳酸菌的生长速度较慢。
结论：通过本次实验，我们得出了以下结论：1. 不同种类的乳酸菌对环境条件的适应能力存在差异，这为乳酸菌的应用提供了理论基础。
2. 乳酸菌在食品发酵过程中具有不同的应用效果，可以根据需求选择适合的乳酸菌进行发酵。
3. 嗜酸乳酸菌在酸奶发酵过程中的生长速度最快，数量最多，适合用于酸奶的制作。
4. 乳酸菌的应用还有待进一步研究和探索，以更好地发挥其益生功效。
总结：乳酸菌作为一类重要的益生菌，在食品工业和医药领域具有广泛的应用前景。
通过本次实验，我们对乳酸菌的生长特性和其在食品发酵过程中的应用进行了初步研究，为乳酸菌的进一步研究和应用提供了一定的理论基础。
食品中乳酸菌的检测
1 范围本标准规定了含乳酸菌食品中乳酸菌（lactic acid bacteria）的检验方法。
本标准适用于含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的检验。
2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
3 术语和定义3.1 乳酸菌lactic acid bacteria一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。
本标准中乳酸菌主要为乳杆菌属（Lacto bacillus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）和链球菌属（Streptococcus）。
4 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：4.1 恒温培养箱：36℃±1℃。
4.2 冰箱：2℃～5℃。
4.3 均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。
4.4 天平：感量0.1 g。
4.5无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。
4.6 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
4.7无菌锥形瓶：500 mL、250 mL。
5 培养基和试剂5.1MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基及莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良MRS培养基：见附录A中A.1。
5.2 MC培养基（Modified Chalmers培养基）：见附录A中A.2。
5.3 0.5%蔗糖发酵管:见附录A中A.3。
5.4 0.5%纤维二糖发酵管:见附录A中A.3。
5.50.5%麦芽糖发酵管:见附录A中A.3。
5.6 0.5%甘露醇发酵管:见附录A中A.3。
5.7 0.5%水杨苷发酵管:见附录A中A.3。
5.8 0.5%山梨醇发酵管:见附录A中A.3。
5.9 0.5%乳糖发酵管:见附录A中A.3。
5.10七叶苷发酵管:见附录A中A.45.11革兰氏染色液：见附录A中A.5。
分析食品检验中乳酸菌的鉴定方法
分析食品检验中乳酸菌的鉴定方法作者：曹敬慧来源：《科学与财富》2019年第09期摘要：近年来，随着人民生活水平的不断提升，人们对于食品安全问题的重视程度也随之不断提升。
食品检验与人民的身体健康和生命安全有着极为密切的关系，完善现有的食品检验标准和方式是十分必要的。
本文就针对食品检验中乳酸菌的鉴定方法进行了简要的探讨分析，立足于我国当前的乳酸菌鉴定标准，分析在食品检验过程中实用性较强的乳酸菌鉴定方法，希望可以为保证食品安全贡献一份力量。
关键词：食品检验;微生物检测技术一、引言常见的乳酸菌包括多个种类，且应用较为广泛。
乳酸菌不仅可以改善食物的味道，同时也可以提升食品的营养价值，延长其储存时间。
它们不仅是研究分类、生化、遗传、分子生物学和基因工程的理想材料，在理论上具有重要的学术价值，而且在工业、农牧业、食品和医药等与人类生活密切相关的重要领域应用价值也极高。
在我们日常生活中，经常食用的食品当中都有乳酸菌的存在。
摄入一定量的乳酸菌，一方面可以改善人体的肠道功能，另一方面也可以降低人体内的血清胆固醇，从而起到保障人体健康、预防各类疾病的作用。
在对乳酸菌进行鉴定时，应当依据乳酸菌的不同形态以及其生物特性进行具体的划分，并有针对性地采取适当的鉴定方法，从而确保鉴定结果的精准性和可靠性。
二、乳酸菌的鉴定简单来说，乳酸菌就是一种可以充分利用可发酵碳水化合物而形成的乳酸细菌，乳酸菌种类多样，且在人们日常的生活中发挥着较为重要的作用。
当前阶段已知的乳酸菌类型已达数百种，大部分乳酸菌都可以起到改善人体机能的作用。
我们可以将乳酸菌细分为动物源乳酸菌以及植物源乳酸菌两大类。
对比两类乳酸菌，人体在摄入乳酸菌时，对于植物源乳酸菌具备更强的吸收能力。
加之，植物乳酸菌的活性明显强于动物乳酸菌，因而在各类食品的生产过程中，往往更加青睐于使用植物乳酸菌。
乳酸菌鉴定，简单来说，就是指通过以不同种类的乳酸菌形态及其他特性为基础，充分利用先进的检验方法，分析乳酸菌的类型以及其中含有的各类元素。
乳酸菌的检验(11-12)
专业名称：食品药品监督管理 课程名称：食品微生物检测技术
3
乳酸菌的检验操作
任务三 样品稀释制备
全过程遵循无菌操作程序，考虑如何满足要求？
⑴检样处理 以无菌操作取经过充分摇匀的检样25mL，放入含有 225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内做成1:10的均匀稀释液。 ⑵样品稀释 用1mL灭菌吸管,吸取1:10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含 有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及 管内稀释液),充分振摇试管，使之混合均匀,制备成1:100的稀释液。另 取1mL灭菌吸管,按上项操作顺序，作10倍递增稀释液,如此每递增稀释 一次,即换用1支1mL灭菌吸管。
3
乳酸菌的检验操作
从样品稀释到平板 涂布要求在15min 内 完成。
3
乳酸菌的检验操作
任务四 培养
Hale Waihona Puke 如何进行厌氧培养？3
乳酸菌的检验操作
微生物对氧的需要和耐受力在不同的类群 中变化很大，根据微生物与氧的关系,可 把它们分为几种类群:
专性好氧菌: 好氧菌
微好氧菌： 兼性厌氧菌
耐氧菌： 厌氧菌
(专性)厌氧菌：
食品中乳酸菌的筛选与活性鉴定
食品中乳酸菌的筛选与活性鉴定乳酸菌是一类对人体健康具有益处的细菌，在许多食物中都可以找到它们的踪迹。
从酸奶到发酵食品，乳酸菌都发挥着重要的作用。
然而，如何筛选出具有较高活性的乳酸菌，并对其进行鉴定，这是一个令人感兴趣的话题。
首先，我们需要选择适当的食品样本进行筛选。
常见的食品包括酸奶、奶酪、纳豆等发酵产品。
这些食品中含有大量的乳酸菌，因此是我们进行筛选的理想选择。
此外，还可以考虑其他一些食物，如蔬菜和肉类，它们也可能含有乳酸菌。
接下来，我们需要从样本中分离出乳酸菌。
这可以通过培养基选用和分离培养来实现。
培养基的选用非常重要，它应提供乳酸菌所需要的营养物质。
我们可以选择常用的乳酸菌培养基，如MRS培养基。
通过将样品接种于MRS培养基中，我们可以让乳酸菌生长并形成可见的菌落。
然后，通过将这些菌落转移至其他培养基中，可以进行单菌落分离，确保我们获得的是纯种的乳酸菌菌株。
鉴定乳酸菌的活性也是我们的重点之一。
活性乳酸菌可以产生乳酸、酶和抗菌物质，这些物质对人体健康有益。
因此，我们想要筛选出活性较高的乳酸菌菌株。
常见的活性鉴定方法包括测定乳酸产量、酶活性和抗菌活性。
乳酸产量是乳酸菌活性的重要指标之一。
我们可以通过高效液相色谱法（HPLC）来测定乳酸的含量。
通过将培养基或发酵物转移到HPLC系统中，我们可以分析出乳酸的浓度。
通过与不同菌株之间的比较，我们可以确定哪些菌株产乳酸的能力更强。
酶活性是另一个衡量乳酸菌活性的重要指标。
乳酸菌常常能够产生多种酶，如蛋白酶和纤维素酶。
我们可以使用相应的酶活性试剂盒来检测其酶活性。
高酶活性的乳酸菌意味着它们能够更好地消化蛋白质和纤维素，从而提高食物的可消化性和营养吸收能力。
除了乳酸和酶活性外，抗菌活性也是评估乳酸菌活性的重要指标之一。
乳酸菌可以产生抗菌物质，对抗病原菌的侵袭。
我们可以通过抗菌活性试验来评估乳酸菌的抗菌能力。
将不同乳酸菌菌株与病原菌一起接种在琼脂平板上，观察是否形成抑制区域。
发酵食品中乳酸菌的分离与鉴定
发酵食品中乳酸菌的分离与鉴定乳酸菌是一类重要的微生物，在食品发酵过程中扮演着不可替代的角色。
乳酸菌不仅能够提高食品的营养价值，还具有促进肠道健康、增强免疫力等益生作用。
因此，分离和鉴定发酵食品中的乳酸菌是食品科学领域中的一项重要研究内容。
要进行乳酸菌的分离与鉴定，首先需要从发酵食品样品中分离乳酸菌。
一般而言，我们可以选择将样品通过稀释后接种于选择性培养基上，以便只有乳酸菌能够生长。
接种后，将培养基放置于适宜的温度下，培养一段时间。
乳酸菌具有较强的酸性产生能力，因此在培养过程中会形成明显的酸性环境。
可通过测量培养基的pH值来初步判断是否有乳酸菌生长。
在分离乳酸菌的培养基上，我们可能会观察到许多不同形态的菌落。
这些菌落在形状、颜色、质地等方面可能存在差异。
我们可以选择几个具有代表性的菌落进行后续的鉴定。
对于乳酸菌的鉴定，有许多方法可供选择。
一种常用的鉴定方法是形态学观察。
乳酸菌具有一些特征性的形态特征，如菌落的形状、边缘的特点、质地的柔软程度等。
此外，乳酸菌的细胞形态也具有一定的特征，如形状、大小、胞内结构等。
通过在显微镜下观察乳酸菌的形态特征，可以初步判断其种属。
除了形态学观察外，乳酸菌的生理生化特性也是鉴定的重要依据。
例如，乳酸菌通常能够在不产生气体的条件下发酵葡萄糖。
此外，乳酸菌对于一些特定的碳源、氮源等具有较强的利用能力。
通过对乳酸菌进行代谢特性的测试，可以进一步确认其种属。
分子生物学方法也为乳酸菌的鉴定提供了新的手段。
通过对乳酸菌的DNA进行提取和PCR扩增，可以得到乳酸菌的16S rRNA序列。
将这些序列与已知种属的乳酸菌进行比对，可以准确鉴定乳酸菌的种属。
在发酵食品中，常常存在多种乳酸菌同时存在的情况。
因此，对于从发酵食品中分离到的乳酸菌，进行种属鉴定是至关重要的。
只有确定了乳酸菌的种属，才能更好地利用其在食品工业中的潜力。
发酵食品中乳酸菌的分离与鉴定是一项科学而有趣的工作。
通过对乳酸菌的研究，我们可以更好地了解乳酸菌在食品发酵过程中的功能和作用，为食品工业的发展提供更多的可能性。
实验一乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验
实验一乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验一、实验目的1.熟悉酸乳中乳酸菌分离原理2. 学习并掌握乳酸菌饮料中乳酸菌菌数的检测方法。
二、实验原理活性酸奶需要操纵各类乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种与质量的根据。
由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素与矿物质等，通常的肉汤培养基难以满足其要求。
测定乳酸菌时务必尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。
要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。
使用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各类乳酸菌可获得满意的结果。
三、实验材料1.培养基改良MC培养基(Modified Chalmers培养基)2.仪器与器具无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器。
恒温培养箱。
四、实验方法流程：酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数1.样品稀释先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。
2.制平板选用2~3个适合的稀释度，培养皿贴上相应的标签，分别吸取不一致稀释度的稀释液1ml置于平皿内，每个稀释度作2个重复。
然后用溶化冷却至46℃左右的改良M C培养基倒平皿，迅速转动平皿使之混合均匀，冷却成平板。
3.培养与计数将平皿倒置于40℃恒温箱内培养24~48h，观察长出的细小菌落，计菌落数目，按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
五、结果1.指示剂显色反应乳酸菌的菌落很小，1~3mm，园形隆起，表面光滑或者稍粗糙，呈乳白色、灰白色或者暗黄色。
由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈，酸碱指示剂呈酸性显色反应。
2.镜检形态必要时，可挑取不一致形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或者乳链球菌。
保加利亚乳杆菌呈杆状，成单杆、或者双杆菌或者长丝状。
乳酸菌检测方法
一、乳酸菌检测方法植物乳杆菌的检验1原理植物乳杆菌能在相应的厌氧培养条件下，于MRS培养基表面生长成白色、细密、圆形光滑突起的菌落，根据长出的菌落数和稀释倍数，计算出活菌数。
2仪器与试药2.1 仪器超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、电冰箱、恒温培养箱（60℃±1℃）、恒温水浴锅、显微镜（10x—100x）、架盘天平（0—500g，精确至0.5g）、250ml锥形瓶、250ml 盐水瓶、灭菌吸管：1ml(具0.01ml刻度）、10ml(具0.1ml刻度）、灭菌平皿（直径90mm）、灭菌试管（15mm×160mm）、灭菌L型玻璃棒等。
2.2 试药酪蛋白胨、牛肉浸膏、酵母提取物、琼脂等均为生化试剂；无水乙酸钠、柠檬酸三胺、硫酸镁、硫酸锰、葡萄糖、磷酸氢二钾、碳酸钙、吐温-80、氯化钠等均为分析纯；水为双蒸馏水，其他化学试剂均为分析纯。
2.3 MRS琼脂培养基的组成与制备2.3.1培养基的组成酪蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母提取物5g、葡萄糖20g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺3g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.2g、磷酸氢二钾2.0g、碳酸钙20g、吐温-801ml、琼脂15g、蒸馏水1000ml。
2.3.2培养基制备将上述的各组分在80～90℃加热使溶解，校正pH6.2，加蒸馏水至1000ml中，摇匀，分装于盐水瓶，每瓶100ml。
在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。
2.4营养琼脂平板的制备取冷至45℃左右的MCA琼脂培养基，在无菌的条件下倒入无菌的培养皿中，每平皿各约15ml，待冷却凝固后，备用。
2.5无菌生理盐水的制备称取氯化钠9.0g，用蒸馏水溶解并定容于1000ml量瓶中，摇匀，分装于250ml三角瓶中，每瓶装90ml. 在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。
3供试品溶液的制备以无菌操作法取检品10.0g，加入盛有90ml无菌生理盐的三角瓶中，充分振荡10分钟，制成1﹕10样品悬液。
食品中乳酸菌数的检验技术
样品中所包括乳酸菌菌属
培养条件的选择及结果说明
仅包括双歧杆菌属
按GB 4789.34的规定执行
仅包括乳杆菌属
按照乳杆菌计数操作
仅包括嗜热链球菌
按照嗜热链球菌计数操作
同时包括双歧杆菌属和乳杆菌属
按照乳杆菌计数操作，结果即为乳酸菌总数
同时包括双歧杆菌属和嗜热链球菌 按照双歧杆菌计数和嗜热链球菌计数操作。两
5~10%CO2时，可增加其表面生长物。 发酵代谢，专性分解糖。产生大量乳酸和乳酸盐。生长
温度2~53℃，最适生长温度30~40 ℃。
双歧杆菌属的特征
一、乳酸菌概述
细胞呈多形态，单个或链状、V形、栅栏状排列。 革兰染色阳性(24h培养)，无芽胞、不抗酸、不运动。
厌氧，但不同的种对氧的敏感性不同。
厌氧 36±1℃ 72h±2h
三、注意事项
双歧杆菌在改良MRS琼脂平板上的 菌落特征为：平皿底为黄色，菌落 中等大小，瓷白色，边缘整齐光滑， 菌落呈圆形，直径为2.0 mm±1 mm。
嗜热链球菌在MC琼脂平板上的菌落特 征为：菌落中等偏小，边缘整齐光滑的 红色菌落，直径2mm±1mm，菌落背 面为粉红色
菌落一般光滑、凸圆，边缘完整、乳脂至白色。
生长温度25~45 ℃，最适温度37~41 ℃。 初始最适生长pH为6.5~7.0，pH4.0~5.0或
pH8.0~8.5不生长。
分解糖。对葡萄糖的代谢为异型发酵。触酶阴性。
链球菌属的特征
一、乳酸菌概述
成链状排列、革兰染色阳性兼性厌氧的球菌。 发酵葡萄糖的主要产物是乳酸，但不产气。 触酶阴性。通常溶血。 生长温度为25~45 ℃，最适温度为37 ℃。
二、乳酸菌检测流程
食品中乳酸菌数的检验技术
者结果之和即为乳酸菌总数
同时包括乳杆菌属和嗜热链球菌
按照乳杆菌计数和嗜热链球菌计数操作。两者来自结果之和即为乳酸菌总数
同时包括双歧杆菌属、乳杆菌属和 按照乳杆菌计数和嗜热链球菌计数操作。两者
嗜热链球菌
结果之和即为乳酸菌总数
食品微生物检验技术
样品中所包括乳酸菌菌属
培养条件的选择及结果说明
仅包括双歧杆菌属
按GB 4789.34的规定执行
仅包括乳杆菌属
按照乳杆菌计数操作
仅包括嗜热链球菌
按照嗜热链球菌计数操作
同时包括双歧杆菌属和乳杆菌属
按照乳杆菌计数操作，结果即为乳酸菌总数
同时包括双歧杆菌属和嗜热链球菌 按照双歧杆菌计数和嗜热链球菌计数操作。两
厌氧 36±1℃ 72h±2h
三、注意事项
双歧杆菌在改良MRS琼脂平板上的 菌落特征为：平皿底为黄色，菌落 中等大小，瓷白色，边缘整齐光滑， 菌落呈圆形，直径为2.0 mm±1 mm。
嗜热链球菌在MC琼脂平板上的菌落特 征为：菌落中等偏小，边缘整齐光滑的 红色菌落，直径2mm±1mm，菌落背 面为粉红色
菌落一般光滑、凸圆，边缘完整、乳脂至白色。
生长温度25~45 ℃，最适温度37~41 ℃。 初始最适生长pH为6.5~7.0，pH4.0~5.0或
pH8.0~8.5不生长。
分解糖。对葡萄糖的代谢为异型发酵。触酶阴性。
链球菌属的特征
一、乳酸菌概述
成链状排列、革兰染色阳性兼性厌氧的球菌。 发酵葡萄糖的主要产物是乳酸，但不产气。 触酶阴性。通常溶血。 生长温度为25~45 ℃，最适温度为37 ℃。
二、乳酸菌检测流程
25g（mL）样品+225mL无菌生理盐水 10倍系列稀释
食品检验中乳酸菌的鉴定方法新思考
食品检验中乳酸菌的鉴定方法新思考摘要：食品是人们生存不可或缺的重要物品，对人们的身体健康等方面具有重要的影响。
因此需要对食品进行相应的检验，明确其中的成分和含量，从而保障食品的卫生和安全。
其中对乳酸菌进行检定具有重要意义，关于鉴定方法应引起相关工作人员的重视。
关键词：食品检验；乳酸菌；鉴定方法一、研究背景乳酸菌具有较多的种类，并且具有较多的用途。
当前阶段主要广泛应用到婴幼儿的食品以及保健食品中，为保障使用者的身体健康和生命安全，对食品中含有的乳酸菌种类、含量等进行鉴定具有一定的必要性。
通过添加乳酸菌有利于视屏的营养价值提高，并且对食品味道和储藏等具有较好的改善作用，因此其在食品生产行业得到了广泛的应用，并具有较高的应用价值。
乳酸菌具有调节肠道的功能，并且有利于人体血清胆固醇的降低，因此可以起到较好的预防疾病、保障人体健康的作用。
通过对食品中含有的乳酸菌进行鉴定，可以明确乳酸菌的种类及含量，受乳酸菌自身形态的影响，可通过理化特征、生物特征等均分乳酸菌并进行相应的鉴定，从而使乳酸菌的应用符合相关的规定，应用范围具有合理性进而保障其使用功能的充分发挥。
有利于促进食品检验行业的进一步发展，切实保障使用者的身体健康、生命安全。
二、乳酸菌及鉴定相关概述乳酸菌可通过将碳水化合物发酵形成乳酸，本质上是一种细菌，具有较多的种类，并且分布范围相对广泛。
当前已经有上百种的乳酸菌种类被人们所知，其中大部分的种类对人体的肠道运行具有较好的促进作用，并有利于对人体的机能进行调整。
可将乳酸菌分成以下几个类型，即动物源乳酸菌、植物源乳酸菌。
其中植物源乳酸菌更易被人体认可和接受，植物源乳酸菌具有较高的活性，因此应用到人体中发挥的生物功效更具稳定性。
对乳酸菌进行鉴定，主要是依据不同种类的乳酸菌其形态、生物特征和理化特征等方面也不相同，因此通过现代化的方法对其进行检测，便可明确食品中所含的乳酸菌的类型、含量。
当前阶段主要通过以下两种方法对食品中的乳酸菌进行鉴定，其一便是通过生理生化的方法进行鉴定。
实验一乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验
引言概述：乳酸菌饮料是一种富含乳酸菌的食品，乳酸菌在食品工业中广泛应用于酸奶、乳饮料等产品中。
本文将详细介绍乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法。
正文内容：一、样品采集和制备1.确定样品采集时机：乳酸菌饮料中的乳酸菌数量会随着储存时间的增加而增加或减少，因此需要在存储时间稳定的情况下进行采集。
2.采集样品方法：使用无菌技术采集样品，避免外部微生物的污染。
3.样品制备：将采集到的样品进行均匀搅拌，以保证样品的均匀性。
二、总菌数检验方法1.琼脂平板法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，在琼脂平板上涂布，经过一定孵育时间后，根据菌落的数量计算总菌数。
2.膜过滤法：将样品通过膜过滤器过滤，将过滤后的膜放置在琼脂平板上孵育，根据菌落的数量计算总菌数。
三、乳酸菌检验方法1.培养基选择：根据乳酸菌的生长特性选择适合的培养基，常见的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。
2.乳酸菌的分离：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在选定的培养基上。
经过一定孵育时间后，可以观察到乳酸菌形成的菌落。
3.鉴定乳酸菌：使用形态学观察、生理生化试验和分子生物学方法等进行乳酸菌的鉴定。
四、活菌数检验方法1.孵育培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在含有乳酸菌生长所需营养物质的培养基上。
经过一定孵育时间后，观察活菌的生长情况，计算活菌数。
2.阻碍培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，与含有抑制剂的培养基混合。
通过观察生长情况，计算活菌数。
五、质量指标评价方法1.pH值测定：使用pH计或试纸对乳酸菌饮料中的pH值进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
2.乳酸浓度测定：使用乳酸测定仪器或化学试剂对乳酸菌饮料中的乳酸浓度进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
3.品尝评价：通过专业的品尝人员进行品尝评价，评估乳酸菌饮料的口感和风味。
总结：乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法包括样品采集和制备、总菌数检验、乳酸菌检验、活菌数检验和质量指标评价方法。
食品中乳酸菌的分离鉴定与应用研究
食品中乳酸菌的分离鉴定与应用研究随着人们对健康的关注程度不断提升，食品安全成为人们日常生活中不可忽视的问题之一。
乳酸菌作为一类有益微生物，被广泛应用于食品工业中。
然而，食品中乳酸菌的准确鉴定与合理应用仍然是当前科学研究关注的热点。
本文探讨了食品中乳酸菌的分离鉴定方法以及其在食品工业中的应用前景，旨在为食品科学领域的研究提供参考。
在食品加工过程中，乳酸菌是一类常见的菌群，可以发酵产生乳酸，给食品赋予了特殊的风味和营养价值。
为了准确鉴定食品中的乳酸菌，科学家们普遍采用了分离纯化的方法。
首先，从食品样品中分离出潜在的乳酸菌，然后通过多重培养基和生理生化特性进行初步筛选。
接下来，通过形态学观察和生理生化试验进一步确定乳酸菌的种属分类。
最后，通过分子生物学技术如PCR和DNA测序来确定乳酸菌的亲缘关系。
这些方法的综合应用可以有效地分离鉴定食品中的乳酸菌种类。
乳酸菌的应用广泛，尤其在食品工业中展现出了巨大的潜力。
首先，乳酸菌可以用于酸奶、酸乳等乳制品的生产。
其产生的乳酸不仅可以增加产品的保存期限，还能提高食品的口感，增加食品的营养价值。
其次，乳酸菌还可以应用于面包、豆腐等发酵类食品的生产。
乳酸菌发酵能够使得食品在产生特殊风味的同时，还能使食品中的抗营养因子降低，增加人体对营养物质的吸收。
此外，乳酸菌还可以应用于腌制食品的生产，通过发酵降低盐分含量，并使食品更具咸鲜味。
乳酸菌的种类繁多，其应用潜力远未被完全挖掘。
尽管食品中乳酸菌的应用前景广阔，但是乳酸菌菌株的选择和培养条件仍然是当前研究中的难题。
一方面，不同种类的乳酸菌育种有其特殊性，如何从大量的微生物中筛选出理想的乳酸菌成为了困扰科学家的问题。
另一方面，乳酸菌的培养条件也是研究的难点之一。
乳酸菌对酸碱度、温度、营养物质等环境因素都有一定要求，因此科学家们需要不断努力来寻找适宜的培养条件。
综上所述，食品中乳酸菌的分离鉴定与应用研究是当前食品科学研究的重要方向之一。
乳酸菌检测报告
乳酸菌检测报告引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界和人体内的细菌，以革兰氏阳性菌为主，能够发酵碳水化合物并产生乳酸。
乳酸菌具有许多益生作用，如改善肠道菌群平衡、增强免疫力、促进食物消化等。
因此，对乳酸菌进行检测具有非常重要的意义。
本报告旨在介绍乳酸菌检测的方法和结果。
检测方法样品收集乳酸菌检测的样品可以包括食品、饮料和生物样本等。
收集样品时，首先需要保持卫生条件，避免外界环境的污染。
然后，选择合适的容器收集样品，并尽快送至实验室进行分析。
菌落计数菌落计数是一种常用的乳酸菌检测方法。
该方法通过将合适稀释的样品涂布在琼脂平板上，经培养后根据菌落的数量进行计数。
具体步骤如下：1.将样品进行系列稀释，以获得合适的菌落计数范围。
2.取适量的稀释液，均匀涂布在琼脂平板上。
3.将平板倒置放置在恒温培养箱中，通常在30-37摄氏度下培养24-48小时。
4.检查平板上的菌落数量，并根据菌落的形态和颜色等特征进行初步鉴别。
5.计算菌落计数值，并根据所在单位面积的菌落数量转换为CFU/mL。
PCR检测PCR（聚合酶链式反应）是一种基因检测技术，可以通过扩增目标基因区域来间接检测乳酸菌。
该方法适用于检测数量较少的乳酸菌，并可以对乳酸菌的种类进行鉴定。
具体步骤如下：1.收集样品，并进行细菌的提取。
可以使用商用的细菌提取试剂盒，或者自行制备细菌提取缓冲液。
2.通过PCR扩增目标基因区域。
根据乳酸菌的保守序列设计引物，将待检样品的DNA与引物进行反应，产生特定大小的DNA片段。
3.将PCR产物进行电泳分析。
将PCR产物与DNA标记物一起加载到琼脂糖凝胶上进行电泳分离，根据标记物的迁移情况判断是否存在乳酸菌DNA片段。
4.根据PCR产物的大小和电泳图谱进行结果解读。
与已知的乳酸菌DNA片段进行比对，可以确定乳酸菌的种类和数量。
检测结果菌落计数根据菌落计数的结果，我们发现样品中乳酸菌的数量为XXXX CFU/mL。
通过初步鉴别，确定所检测的乳酸菌为XXXX属。
食品中乳酸菌的分离与鉴定
食品中乳酸菌的分离与鉴定乳酸菌是一类重要的微生物，在食品加工和保质过程中起着关键作用。
乳酸菌具有产生乳酸的能力，能够抑制有害菌的生长，提高食品的质量和安全性。
因此，乳酸菌的分离与鉴定对于食品工业具有重要意义。
乳酸菌的分离方法多种多样，常用的有直接涂布法、稀释涂布法和差减分离法等。
其中，直接涂布法是最常用的方法之一。
直接涂布法是将食品样品均匀涂布于含有特定培养基的琼脂平板上，利用乳酸菌对特定培养基的选择性生长来分离乳酸菌。
稀释涂布法则是将食品样品稀释到一定程度后，涂布于琼脂平板上进行分离。
差减分离法是相对于稀释涂布法的一种改进方法，通过两个不同培养基的对比，进一步筛选出乳酸菌。
乳酸菌的鉴定方法主要包括形态学观察、生理生化特性鉴定和分子生物学鉴定等。
形态学观察是最基本的鉴定手段之一，通过显微镜观察菌落和细胞形态特征，可以初步判断出乳酸菌的种类。
生理生化特性鉴定是将分离出的菌株在不同条件下进行相关实验，如气体产生、温度耐受性、胞外酶产生等，通过对比不同特性的表现，进一步鉴定乳酸菌的种类。
而分子生物学鉴定则能够更准确地确定乳酸菌的种属和亚属，如通过PCR扩增特定基因序列，利用DNA测序技术进行序列比对，从而鉴定乳酸菌的种类。
乳酸菌的分离与鉴定在实际食品加工中具有重要意义。
首先，通过分离和鉴定乳酸菌，可以确定食品中乳酸菌的种类和数量，进而判断食品是否存在质量和安全性问题。
其次，乳酸菌的鉴定有助于选择合适的培养条件，促进乳酸菌的生长和产酸过程，从而提高食品品质。
此外，乳酸菌的鉴定也有利于乳品行业中的产品研发和工艺改进，为创新和提高乳制品的营养和口感贡献力量。
然而，乳酸菌的分离与鉴定也面临一些挑战。
首先，食品中的乳酸菌种类繁多，分离出纯种菌株的难度较大。
其次，乳酸菌的生理生化特性相似，需要较为精确的实验手段和技术设备来进行鉴定。
此外，乳酸菌与其他微生物的相互作用也需要考虑，有时候必须结合其他鉴定方法才能得出准确结论。
食品加工中乳酸菌的筛选与应用
食品加工中乳酸菌的筛选与应用食品加工是人们日常生活中不可或缺的一部分。
随着人们对食品质量和健康的关注度不断提高，乳酸菌作为一种有益微生物备受关注。
乳酸菌的筛选与应用对于食品加工行业来说具有重要意义，下面我们来了解一下乳酸菌筛选的方法以及其在食品加工中的应用。
一、乳酸菌的筛选方法乳酸菌是一类常见的益生菌，具有抗菌、抗肿瘤、降血脂等多种功能。
在食品加工中，需要选用菌株进行乳制品、酸奶、发酵蔬菜等食品的制作，因此，乳酸菌的筛选非常重要。
目前，常用的乳酸菌筛选方法主要有以下几种。
首先是酸奶乳酸菌的筛选。
酸奶是一种常见的乳制品，乳酸菌在其中起到发酵作用。
筛选酸奶乳酸菌主要依靠其形态特征和代谢产物。
乳酸菌通常呈链状、球状等形态，也会产生乳酸和醋酸。
通过观察菌落形态和酸度的变化，可以初步确定乳酸菌的种类。
其次是发酵蔬菜中的乳酸菌筛选。
发酵蔬菜是另外一种常见的食品，其中的乳酸菌对保持蔬菜的新鲜度和产生特殊的风味有着重要作用。
筛选发酵蔬菜中的乳酸菌主要依靠发酵过程中的酸度和气味变化。
乳酸菌可以产生乳酸和一些挥发性化合物，通过观察酸度的变化和气味的特殊性，可以初步确定乳酸菌的种类。
最后是基因分析法。
随着科技的不断进步，乳酸菌的筛选越来越多地采用基因分析法。
基因分析法通过对乳酸菌的基因组进行测序和分析，可以准确地确定其物种和亲缘关系。
这种方法不仅可以快速准确地筛选乳酸菌，还可以为乳酸菌的进一步研究提供数据支持。
二、乳酸菌在食品加工中的应用乳酸菌在食品加工中具有广泛的应用价值。
首先是酸奶制作。
酸奶是一种受人们喜爱的乳制品，其中含有丰富的乳酸菌。
乳酸菌能够将乳糖转化为乳酸，降低酸奶的pH值，抑制有害菌的生长，同时还赋予酸奶独特的口感和风味。
其次是乳制品的保鲜。
乳酸菌产生的乳酸具有抗菌作用，可以抑制一些有害菌和腐败菌的生长，延长乳制品的保质期。
乳酸菌还可以产生一些挥发性化合物，赋予乳制品特殊的风味和香味。
此外，乳酸菌还可以用于发酵蔬菜的制作。
乳酸菌检测国标方法
乳酸菌检测方法1 适用范围本方法适用于清谷田园食品有限公司系列产品及原料中的乳酸菌的检测。
2 设备和仪器2.1 恒温培养箱：36±1℃2.2 天平：感量为0.01g2.3 无菌吸管：1 ml、2ml、10ml2.4 无菌锥形瓶：500ml2.5 无菌培养皿：直径为90mm2.6 无菌试管：18×180mm2.9 酒精灯2.10 立式蒸汽压力灭菌器2.11 超净工作台2.12 厌氧缸3试剂3.1 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
3.2 MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基3.2.1 成分蛋白胨 10.0g牛肉粉 5.0g酵母粉 4.0g葡萄糖 20.0g吐温80 1.0mLK2HPO4.7H2O 2.0g醋酸钠.3H2O 5.0g柠檬酸三铵 2.0gMnSO4.7H2O 0.2gMnSO4.4H2O 0.05g琼脂粉 15g3.2.2制法：将上述成分加于1000mL蒸馏水中，调节PH至6.2±0.2，加热煮沸溶解，分装于锥形瓶中，在121℃高压灭菌15-20min。
3.3莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）和半胱氨酸盐酸盐改良 MRS 培养基：3.3.1 莫匹罗星锂盐储备液制备：称取50mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。
3.3.2 半胱氨酸盐酸盐储备液制备：称取250mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL 蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。
3.3.3 制法将A.1.1 成分加入到950 mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH，分装后121 ℃高压灭菌15 min～20 min。
临用时加热熔化琼脂，在水浴中冷至48 ℃，用带有0.22 mm微孔滤膜的注射器将莫匹罗星锂盐储备液及半胱氨酸盐酸盐储备液制备加入到熔化琼脂中，使培养基中莫匹罗星锂盐的浓度为50 mg/mL，半胱氨酸盐酸盐的浓度为500 mg/mL。
乳酸菌饮料监测标准
乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验(GB标准)1 主题内容与适用范围本标准规定了乳酸菌饮料中乳酸菌检验的技术要求。
本标准适用于以鲜乳、乳粉或辅以大豆等为原料，经乳酸菌发酵加工制成的具有相应风味的活性乳酸菌饮料。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 术语乳酸菌：一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。
乳酸菌菌落总数：检样在一定条件下培养后，所得1mL检样中所含乳酸菌菌落的总数。
4 设备和材料4.1 温箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恒温水浴：46±1℃。
4.4 电炉：可调式。
4.5 吸管：容量为1，10和25mL。
4.6 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
4.7 平皿：直径为9cm。
4.8 试管：18×180mm。
4.9 显微镜。
5 培养基和试剂5.1 改良TJA培养基(改良番茄汁琼脂培养基)。
5.2 改良MC培养基(Modified Chalmers培养基)。
5.3 0.1%美兰牛乳培养基。
5.46.5%氯化钠肉汤。
5.5 pH9.6葡萄糖肉汤。
5.6 40%胆汁肉汤。
5.7 淀粉水解培养基。
5.8 精氨酸水解培养基。
5.9 乳酸杆菌糖发酵管。
5.10 七叶苷培养基。
5.11 革兰氏染色液：按GB 4789.28规定执行。
5.12 3%过氧化氢溶液：按GB 4789.28规定执行。
5.13 蛋白胨水、靛基质试剂：按GB 4789.28规定执行。
5.14 明胶培养基：按GB 4789.28规定执行。
5.15 硝酸盐培养基、硝酸盐试剂：按GB 4789.28规定执行。
5.16 生理盐水：定量分装于三角瓶和试剂管内灭菌。
6 乳酸菌菌落总数的测定6.1 检验程序乳酸菌菌落总数检验程序如下：（略）6.2 操作步骤6.2.1 以无菌操作将经过充分摇匀的检样25mL(或25g)放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内作成1∶10的均匀稀释液。
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1 范围本标准规定了含乳酸菌食品中乳酸菌（lactic acid bacteria）得检验方法。
本标准适用于含活性乳酸菌得食品中乳酸菌得检验。
2 规范性引用文件本标准中引用得文件对于本标准得应用就是必不可少得。
凡就是注日期得引用文件，仅所注日期得版本适用于本标准。
凡就是不注日期得引用文件，其最新版本（包括所有得修改单）适用于本标准。
3 术语与定义3、1 乳酸菌lactic acid bacteria一类可发酵糖主要产生大量乳酸得细菌得通称。
本标准中乳酸菌主要为乳杆菌属（Lactobacillus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）与链球菌属（Streptococcus）。
4 设备与材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其她设备与材料如下：4、1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。
4、2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
4、3 均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。
4、4 天平：感量0、1 g。
4、5 无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。
4、6 无菌吸管：1 mL（具0、01 mL刻度）、10 mL（具0、1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
4、7 无菌锥形瓶：500 mL、250 mL。
5 培养基与试剂5、1 MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基及莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良MRS培养基：见附录A中A、1。
5、2 MC培养基（Modified Chalmers 培养基）：见附录A中A、2。
5、3 0、5%蔗糖发酵管:见附录A中A、3。
5、4 0、5%纤维二糖发酵管:见附录A中A、3。
5、5 0、5%麦芽糖发酵管:见附录A中A、3。
5、6 0、5%甘露醇发酵管:见附录A中A、3。
5、7 0、5%水杨苷发酵管:见附录A中A、3。
3、A中A见附录:山梨醇发酵管5%、08 、5．5、9 0、5%乳糖发酵管:见附录A中A、3。
5、10 七叶苷发酵管:见附录A中A、45、11 革兰氏染色液：见附录A中A、5。
5、12莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）：化学纯。
5、13 半胱氨酸盐酸盐（Cysteine Hydrochloride）：纯度＞99%。
6 检验程序乳酸菌检验程序见图1。
7 操作步骤样品制备1、7．7、1、1 样品得全部制备过程均应遵循无菌操作程序。
7、1、2 冷冻样品可先使其在2 ℃～5 ℃条件下解冻，时间不超过18 h，也可在温度不超过45 ℃得条件解冻，时间不超过15 min。
7、1、3 固体与半固体食品：以无菌操作称取25 g样品，置于装有225 mL生理盐水得无菌均质杯内，于8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，制成1:10样品匀液；或置于225 mL生理盐水得无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min制成1:10得样品匀液。
7、1、4 液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25 mL放入装有225 mL 生理盐水得无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量得无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1:10得样品匀液。
7、2 步骤7、2、1 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于装有9 mL 生理盐水得无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100得样品匀液。
7、2、2 另取1 mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次1 mL灭菌吸管或吸头。
7、2、3 乳酸菌计数7、2、3、1 乳酸菌总数根据待检样品活菌总数得估计，选择2个～3个连续得适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
稀释液移入平皿后，将冷却至50℃得MRS琼脂培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使混合均匀。
36℃±1℃厌氧培养48 h±2 h，培养后计数。
从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。
7、2、3、2 双歧杆菌计数根据对待检样品双歧杆菌含量得估计，选择2个～3个连续得适宜稀释度，每个稀释度吸取1 mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
稀释液移入平皿后，将冷却至50℃得莫匹罗星锂盐与半胱氨酸盐酸盐得MRS培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使混合均。
36℃±1℃厌氧培养48 h±2 h，培养后计数平板上得所有菌落数。
从样品稀释到平板倾注要求在15 min内完成。
7、2、3、3 嗜热链球菌计数根据待检样品嗜热链球菌活菌数得估计，选择2个～3个连续得适宜稀释度，每个稀释样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
稀释液移入平皿后，将冷却mL1 度吸取．h±48 ±1℃需氧培养培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使混合均匀。
36至50℃得MC℃琼脂平板上得菌落特征为：菌落中等偏小，边缘整齐MC2 h，培养后计数。
嗜热链球菌在mm，菌落背面为粉红色。
从样品稀释到平板倾注要求在mm±光滑得红色菌落，直径2 115 min内完成。
7、2、3、4 乳杆菌计数7、2、3、1 项乳酸菌总数结果减去7、2、3、2 项双歧杆菌与7、2、3、3 项嗜热链球菌计数结果之与即得乳杆菌计数。
7、3 菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数与相应得菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
7、3、1 选取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长得平板计数菌落总数。
低于30 CFU得平板记录具体菌落数，大于300 CFU得可记录为多不可计。
每个稀释度得菌落数应采用两个平板得平均数。
7、3、2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长得平板作为该稀释度得菌落数；若片状菌落不到平板得一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
7、3、3 当平板上出现菌落间无明显界线得链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
7、4 结果得表述7、4、1 若只有一个稀释度平板上得菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数得平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。
7、4、2 若有两个连续稀释度得平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：式中：N——样品中菌落数；∑C——平板（含适宜范围菌落数得平板）菌落数之与；n——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；1n第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；——2．d——稀释因子（第一稀释度）。
7、4、3 若所有稀释度得平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高得平板进行计数，其她平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7、4、4 若所有稀释度得平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低得平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7、4、5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
7、4、6 若所有稀释度得平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU 或大于300 CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU得平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7、5 菌落数得报告7、5、1 菌落数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
7、5、2 菌落数大于或等于100 CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10得指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
7、5、3 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
8 结果与报告根据菌落计数结果出具报告，报告单位以CFU/g（mL）表示。
9 乳酸菌得鉴定（可选做）9、1 纯培养挑取3个或以上单个菌落，嗜热链球菌接种于MC琼脂平板，乳杆菌属接种于MRS琼脂平板，置36 ℃±1 ℃厌氧培养48 h。
9、2 鉴定9、2、1 双歧杆菌得鉴定按GB 4789、34得规定操作。
9、2、2 涂片镜检：乳杆菌属菌体形态多样，呈长杆状、弯曲杆状或短杆状。
无芽胞，革兰氏染色阳性。
嗜热链球菌菌体呈球形或球杆状，直径为0、5 μm～2、0 μm，成对或成链排列，无芽胞，革兰氏染色阳性。
2与表1乳酸菌菌种主要生化反应见表3 、2、9．附录 A培养基及试剂A、1 MRS培养基A、1、1 成分蛋白胨10、0 g5牛肉粉、0 g4、酵母粉0 g20、葡萄糖0 g1、吐温800 mL2、0 g·HPOK7HO2425、O3H·0 g醋酸钠22柠檬酸三铵、0 g0、2 g·MgSO7HO240、05 g MnSOO4H·24g0 、15琼脂粉pH、2 制法A、1、℃高压灭菌，分装后121 000 mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH将上述成分加入到1min。
min～20 15A、1、3 莫匹罗星锂盐与半胱氨酸盐酸盐改良MRS培养基A、1、3、1 莫匹罗星锂盐储备液制备：称取50mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL蒸馏水中，用0、22 ?m微孔滤膜过滤除菌。
A、1、3、2半胱氨酸盐酸盐储备液制备：称取250mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL蒸馏水中，用0、22 ?m微孔滤膜过滤除菌。
A、1、3、2 制法将A、1、1 成分加入到950 mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH，分装后121 ℃高压灭菌15 min～20 min。
临用时加热熔化琼脂，在水浴中冷至48 ℃，用带有0、22 ?m微孔滤膜得注射器将莫匹罗星锂盐储备液及半胱氨酸盐酸盐储备液制备加入到熔化琼脂中，使培养基中莫匹罗星锂盐得浓度为50 ?g/mL，半胱氨酸盐酸盐得浓度为500?g/mL。
A、2 MC培养基A、2、1 成分大豆蛋白胨5、0 g3牛肉粉、0 g3酵母粉、0 g20葡萄糖、0 g20乳糖、0 g10、0 g碳酸钙15、0 g琼脂蒸馏水1 000 mL％中性红溶液mL0 、51、pH60制法、2、A2℃种成分加入蒸馏水中，加热溶解，调节7，加入中性红溶液。
分装后pH121 将前面。
min20 ～min15 高压灭乳酸杆菌糖发酵31 基础成0牛肉蛋白0酵母浸05吐8m5琼46溴甲酚紫酒精溶m蒸馏1000m制2mimi20155加入所需糖类，并分装小试,121℃高压灭七叶苷培养基成分1 A、4、0 g蛋白胨、51g磷酸氢二钾0 、g七叶苷0 、3枸橼酸铁5 、0g16%1、溴甲酚紫酒精溶液、mL4蒸馏水mL100、A4制法、2。
20 min℃高压灭菌将上述成分加入蒸馏水中，加热溶解，121 15 ～min5A、革兰氏染色液、、A51 结晶紫染色液1 15、A、、成分、10 结晶紫g95％乙醇mL201％草酸铵水溶液mL80、5、A2 、1制法将结晶紫完全溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。