应用高分辨率熔解曲线检测MTHFR和MTRR基因多态性_潘登
多囊卵巢综合症与MTHFR、MTRR、HCY的相关性研究
多囊卵巢综合症与MTHFR、MTRR、HCY的相关性研究摘要】目的：探讨多囊卵巢综合症与MTHFR、MTRR、HCY的相关性，为改善PCOS妊娠结局提供更多帮助。
方法：收集就诊于我院生殖科的67例PCOS患者与37例健康女性的口腔黏膜上皮脱落细胞，利用荧光定量PCR技术检测 MTHFR 基因C677T、A1298C和MTRRA66G位点的单核苷酸多态性(SNPs)，同时进行红细胞叶酸和HCY检测，PCOS组和对照组进行比较。
结果：基因型和基因频率在MTHFRC667T和1298C位置，两组比较均无统计学意义（P>0.05），而PCOS组MTRRA66G位置的AA、AG、GG基因型与基因频率分别与对照组比较均有统计学意义（P<0.05）,红细胞叶酸含量两组比较有统计学意义（P<0.05），而HCY含量比较无统计学意义（P>0.05）。
通过对PCOS组进行组内不同基因组型的比较，其结果显示PCOS组红细胞叶酸含量与MTHFRC667T呈负相关，HCY含量与MTRRA66G呈正相关。
结论：在本地区人群中，MTHFR C677T、A1298C基因多态性与PCOS的发生尚未发现有明确相关性，而MTRRA66G有相关性。
【关键词】多囊卵巢综合症；基因多态性；MTHFR基因；MTRR基因；红细胞叶酸；同型半胱氨酸【中图分类号】R711.75 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）24-0157-02多囊卵巢综合征(PCOS)是青春期及育龄妇女最常见的高度异质性、内分泌代谢紊乱性疾病，其发病因素尚未完全明确，但大量的研究显示，该病可能是多种环境因素和多个基因异常共同作用的结果。
在育龄妇女中PCOS的发病率大约为5％～10％，在不孕女性患者中为20％～30％，是无排卵性不孕的主要原因。
其具有妊娠率低，流产率高且早期自然流产率可达到30％～50％，比普通孕妇增加3～4倍，妊娠后易并发妊娠期糖尿病、妊娠高血压等产科并发症，严重影响妊娠结局。
吉林省汉族女性MTHFR、MTRR基因型和等位基因频率分布与其他地区的比较
５ ８ ． ３ ％及济源 的 ６ １ ． ４ ％ ，Ｐ值均＜ Ｏ ． ０ ５ ；ＭＴ Ｈ Ｆ Ｒ １ ２ ９ ８ Ｃ Ｃ基 因型频率 ３ ． ７ ％低 于德 阳的 ６ ． ３ ％ 、湘 潭 的 ４ ． ８ ％ 、惠 州的 ７ ． ２ ％和琼
海的７ ． １ ％ ，Ｐ值均 ＜ ０ ． ０ ５ ，Ｃ等位基因频率 的 １ ６ ． ４ ％低于德 阳的 ２ １ ． ８ ％ 、湘潭 的 ２ １ ． ８ ％及惠州 的 ２ ２ ． ８ ％ ，Ｐ值均＜ ０ ． ０ １ ；Ｍ Ｔ Ｒ Ｒ
目前我 国较 为严 重 的公共 卫 生和社 会 问题 就是 出 生缺陷 （ ｂ ｉ ｒ ｔ ｈ ｄ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ，Ｂ Ｄ） ¨ 的 问题 ，每 年 约 有 ９ ０ 万 例 的缺 陷 儿 出 生 。导 致 这 个 现 象 的 一 个 重 要 因 素 是 叶酸 摄 入 不 足 或 不 能 被 机 体 有 效 利 用 Ｊ 。 编 码 ５ ，１ ０ ～ 亚 甲基 四氢 叶酸 还 原 酶 （ ５ ，１ ０ 一 ｍｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｅ ｎ ｅ ｔ ｅ ｔ — ｒ ａ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｆ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｔ ａ ｓ ｅ ，ＭＴ Ｈ Ｆ Ｒ） 和 甲硫 氨 酸 合 成 酶
高分辨率熔解曲线技术常用的仪器和荧光染料
高分辨率熔解曲线技术常用的仪器和荧光染料郭心灵;尤崇革【摘要】高分辨率熔解曲线技术(HRM)是近年来发展迅速的一项用于基因突变扫描与检测的新技术.由于具备快速、简便、价廉、高通量和闭管均相检测等优点,HRM已被广泛地应用于突变基因的扫描、基因分型、遗传配型以及法医学鉴定等领域,并受到越来越多的关注且发展迅速.本文就该技术常规应用时的相关仪器与荧光染料的发展及应用进行分析总结.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2012(004)001【总页数】4页(P50-53)【关键词】高分辨率熔解曲线技术;聚合酶链反应;荧光染料;PCR仪【作者】郭心灵;尤崇革【作者单位】兰州大学第二医院中心实验室,甘肃,兰州730030;兰州大学第二医院中心实验室,甘肃,兰州730030【正文语种】中文高分辨率熔解曲线技术（high resolution melting，HRM）是美国Utah大学Wittwer实验室在2003年首次提出的基于新型饱和荧光染料LC Green的发明而进行基因突变检测的新技术[1]。
其基本原理就是利用与荧光染料结合的双链DNA 在温度升高的过程中会发生减色效应的物理性质，通过检测双链DNA在熔解过程中释放的染料荧光信号所形成的特征熔解曲线，进行PCR产物中核苷酸差异的鉴别。
该技术的应用不仅需要饱和荧光染料，而且更需要能进行高分辨检测的定量PCR仪。
近年来用于HRM技术的仪器和染料都在不断更新，朝着操作简便化、试剂专业化的方向发展，在常规检测、疾病诊断、实验室研究、前沿问题研究等方面发挥着重要作用[2,3]。
目前HRM技术可用于基因突变扫描、遗传配型、细菌分型和多重基因分型等领域[4,5]。
本文就HRM技术的常规开展所需要的相关仪器与荧光染料进行综述。
1 HRM仪器常规定量PCR仪由于温控不够灵敏、分辨率不够高及其熔解曲线无法区分熔解温度上差异很小的序列（如单核苷酸多态性、单碱基插入/缺失等），所以不能用于HRM分析。
高分辨率熔解曲线分析技术检测 EGFR 基因突变方法的建立及其初步临床应用
高分辨率熔解曲线分析技术检测 EGFR 基因突变方法的建立及其初步临床应用王卓;井昶雯;曹海霞;马蓉;吴建中【期刊名称】《中国肿瘤外科杂志》【年(卷),期】2014(000)004【摘要】目的：建立高分辨率熔解曲线（high resolution melting，HRM）分析技术检测表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因突变的方法，并探讨其的临床应用价值。
方法建立HRM 技术检测 EGFR 基因突变方法，并用其检测200例非小细胞肺癌患者肿瘤石蜡包埋标本，并与测序法的结果进行比较。
结果所建 HRM 检测方法 Tm 与 ct 值的 CV 值均较小，重复性好。
HRM 法检测标本 EGFR 基因突变的结果与测序法相比，突变总检出率分别为40.0%和37.0%，敏感性为100%，特异性﹥95%。
结论 HRM 法检测 EGFR 基因突变，敏感性高，特异性强，重复性好，操作简便，节约时间，成本低，适用于临床。
【总页数】4页(P236-239)【作者】王卓;井昶雯;曹海霞;马蓉;吴建中【作者单位】210009 江苏南京，江苏省肿瘤医院临床肿瘤实验中心;210009 江苏南京，江苏省肿瘤医院临床肿瘤实验中心;210009 江苏南京，江苏省肿瘤医院临床肿瘤实验中心;210009 江苏南京，江苏省肿瘤医院临床肿瘤实验中心;210009 江苏南京，江苏省肿瘤医院临床肿瘤实验中心【正文语种】中文【相关文献】1.高分辨率熔解曲线分析技术在检测非小细胞肺癌组织和血清EGFR基因突变中的应用 [J], 刘晓蕾;陈英剑;孙晓明;胡成进2.高分辨率熔解曲线分析技术在检测非小细胞肺癌组织EGFR基因突变中的应用[J], 由田;刘政;邱广斌3.高分辨率熔解曲线分析技术检测血清游离DNA的EGFR基因突变 [J], 王卓;井昶雯;吴建中;马蓉4.高分辨率熔解曲线分析技术检测BRAF基因V600E突变方法的建立及初步临床应用 [J], 汤俊明;刘奇;王学才;乔国洪5.高分辨率熔解曲线技术检测非小细胞肺癌患者胸水中EGFR基因突变 [J], 谈云;陈姝颖;汤俊明;乔国洪;何超;毛旭华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
MTHFR与MTRR基因相关突变与H型高血压相关性分析
MTHFR与MTRR基因相关突变与H型高血压相关性分析任燕;何玉红;曹敏娟【摘要】目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)基因多态性与H型高血压的相关性.方法选取2017-04 ～2017-10西安北方医院55例H型高血压患者样本做为病例组,37例孕妇样本作为健康对照组,使用PCR熔解曲线法检测两组人群MTHFR基因677C＞T、1298A＞C和MTRR 基因66A＞G位点的多态性,分析两组人群的基因型及分布,采用循环酶法检测血清同型半胱氨酸(Hcy)水平.结果与孕妇健康对照组相比,H型高血压组MTHFR 677C ＞T的T等位基因频率显著升高(x2=10.172,P＜0.01),而MTHFR 1298A＞C和MTRR66A＞G差异无统计学意义(P＞0.05).此外,H型高血压组血清Hcy明显高于孕妇健康对照组(P＜0.01),血清Hcy水平在MTHFR 677C＞T的基因型间差异有统计学意义(P＜0.05),但在MTHFR 1298A＞C和MTRR66A＞G的基因型间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MTHFR 677C＞T中T等位基因与H型高血压密切相关,也与Hcy水平升高相关,但未发现MTHFR 1298A＞C和MTRR66A＞G与H 型高血压及Hcy水平升高有关.【期刊名称】《延安大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2018(016)003【总页数】4页(P73-76)【关键词】H型高血压;MTHFR;MTRR;Hcy【作者】任燕;何玉红;曹敏娟【作者单位】子长县人民医院,陕西子长717300;子长县人民医院,陕西子长717300;西安北方医院,陕西西安710000【正文语种】中文【中图分类】R446;R544.1同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是人体内的一种含硫氨基酸，由甲硫氨基酸通过脱甲基分解产生，正常人体内大部分Hcy与血浆中的蛋白结合，只有1/5的游离Hcy参与正常的代谢反应。
围受孕期个体化增补叶酸的意义-MTHFR和MTRR基因多态性与新生儿出生缺陷的相关性
MTHFR C677T基因突变使新生儿出生缺陷风险升高
母亲677TT纯合子突变使出生神经管缺陷婴儿的风险高2倍。 MTHFR 677TT基因型妊娠前未服用叶酸的母亲生唇腭裂儿的风险高 5.9倍。 677T等位基因型母亲比677 CC基因型母亲生育Down综合征儿的风险高2.6倍。 677T等位基因型母亲比677 CC基因型母亲生育先天性心脏病儿高1.2倍。
围受孕期、围生期个体化增补叶酸的意义
新生儿出生缺陷风险评估及个体化干预
MTHFR、MTRR基因多态性与新生儿出生缺陷的相关性
作者：Chris Pang
我国新生儿出生缺陷的形势严峻
据《中国出生缺陷预防报告》数据显示，我国每年新生儿出生数量中约有80～120万新生儿出生缺陷病 例, 约占每年出生人口总数的4%～6%，也就是说，18个新生儿就有1个出生缺陷。这些先天缺陷儿的出 生不仅给家庭和社会造成了沉重的经济负担, 也给患儿自身带来巨大的痛苦。
母亲MTRR66A>G基因突变会显著增加 后代先天性心脏病的风险。
1. MTRR 66A>G polymorphism as maternal risk factor for Down syndrome: a metaanalysis.Genet Test Mol Biomarkers. 2013 Jan;17(1):69-73. 2. Doolin M T, Barbaux S, Mcdonnell M, et al. Maternal Genetic Effects, Exerted by Genes Involved in Homocysteine Remethylation, Influence the Risk of Spina Bifida[J]. American Journal of Human Genetics, 2002, 71(5):1222-6. 3. 宫婷, 李芬, Huang,等. MTR、MTRR基因多态性与先天性心脏病的相关性研究[J]. 第三军医大学 学报, 2010, 32(2):127-130
亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性在产前筛查前的性能验证
２０２１年１２月 第２８期综合医学论坛亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性在产前筛查前的性能验证张艳秋太仓市疾病预防控制中心，江苏 苏州 215400【摘要】目的：亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性检测是产前筛查的一个重要项目，有助于指导临床，避免新生儿缺陷有重要意义，需确保结果的准确性。
方法：选取门诊进行产前筛查的孕妇样本(覆盖MTHFR三种基因型)，对西安金磁纳米生物技术有限公司的MTHFR C677T基因检测试剂盒进行检测下限、符合率、精密度三方面的性能验证。
结果：MTHFR C677T基因检测试剂盒具有高精密度和符合率，在临床应用中的安全性和有效性均能保证。
结论：MTHFR C677T基因快速层析检测系统实验快速简便，在短时间内就可观察到结果，基本满足对产妇进行产前筛查的要求，可以应用于临床检测。
【关键词】 亚甲基四氢叶酸还原酶基因；产前筛查；PCR+金标免疫层析法；性能验证[中图分类号]R711.6 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2021)28-0270-03随着二胎政策放开，高龄孕妇与日俱增，这不仅仅要求医师提高剖宫产的手术技能，减少孕产妇死亡率，更为检验科工作人员和临床医师敲响警钟，如何联合协作做好产前筛查，降低新生儿畸形和死亡率。
出生缺陷影响着新生儿的生存和后续生活，也对新生儿家庭产生难以抹去的阴影，更给社会造成了巨大的负担。
现今，新生儿缺陷难以有效治疗，所以临床上多采取产前筛查的方法预防新生儿缺陷发生。
大量研究已经证明，亚甲基四氢叶酸还原酶(Recombinant Methylenetetrahydrofolate Reductase, MTHFR)基因是叶酸代谢通路中的关键代谢酶，亚甲基四氢叶酸还原酶缺陷可以导致5-甲基四氢叶酸合成减少，通过体内生化变化最终导致叶酸水平降低和发生高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia, Hhcy)。
高分辨熔解曲线技术及其临床应用进展
高分辨熔解曲线技术及其临床应用进展李瑜琴;刘权贤;袁阳;张建勇;陈玲【摘要】High-resolution melting(HRM)is a new technology of new gene analysis based on monitoring dou-ble-stranded DNA melting process with saturated fluorescent dyes in real time to reflect the amplicon DNA sequence characteristics.The technology has the advantages of fast,high efficiency,high specificity,low pollution,and low cost. Therefore,it has been widely used in clinical medicine,bioscience,forensic medicine,herbs and food identification and other fields.This paper reviews the basic principles,key factors,and clinical application of HRM.%高分辨率熔解曲线(HRM)技术是一种通过饱和荧光染料实时监测双链DNA的熔解过程,以此反映扩增子DNA序列特性的基因分析新技术.该技术具有快速、高效、高特异性、污染小、廉价等优点,目前已广泛应用于临床医学、生命科学、法医学、药材和食品鉴定领域.本文对高分辨率熔解曲线技术及其在临床医学的应用进行综述.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2018(029)007【总页数】3页(P984-986)【关键词】高分辨率熔解曲线技术;医学;应用;进展【作者】李瑜琴;刘权贤;袁阳;张建勇;陈玲【作者单位】遵义医学院附属医院呼吸二科,贵州遵义563000;遵义医学院附属医院呼吸二科,贵州遵义563000;遵义医学院附属医院呼吸二科,贵州遵义563000;遵义医学院附属医院呼吸二科,贵州遵义563000;遵义医学院附属医院呼吸二科,贵州遵义563000【正文语种】中文【中图分类】R392.13高分辨率熔解曲线(high resolution melting，HRM)技术是由美国Idaho公司与美国犹他大学Carl Wittwer实验室于2003年合作开发的一种建立在实时荧光定量PCR(RT-PCR)基础上的新技术[1-2]，具有准确、闭管操作、快速、廉价、污染小等优点[3]。
hrm高分辨率溶解曲线
hrm高分辨率溶解曲线高分辨率溶解曲线（High-resolution Melting，简称HRM）是一种基于PCR技术的高灵敏度、快速检测和基因分型等应用的新兴方法。
它通过对PCR产物进行高温梯度退火，利用DNA序列中的单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，简称SNP）或突变等，可以对不同的DNA样本进行鉴别和分类。
HRM技术的原理是利用DNA双链在高温梯度环境下的失配特性。
在PCR反应中，经过一定的循环扩增过程，得到目标序列的大量复制品。
然后，通过控制扩增产物的温度、缓慢升温，逐渐增加其中的失配碱基数目，最终使DNA双链断裂解离。
同时，加入一种特定的DNA染料（例如SYBR Green），该染料能够与双链DNA结合并发光。
当溶解曲线进行扫描时，溶解温度越高，样品中的双链DNA越容易解离，染料释放的荧光信号越强。
而当双链DNA中存在SNP或突变时，会引起其中某一个区域的碱基配对发生改变，导致产物的熔解曲线发生改变。
根据熔解曲线的形状、峰型、峰面积等特征，可以判断样品中的SNP型态或突变类型，并进行分类鉴别。
HRM技术具有多个优点。
首先，HRM技术不需要引入特异性的探针或标记物，减少了实验操作的复杂性和成本。
其次，HRM技术具有高度灵敏性和准确性，能够鉴别并区分出少量变异的DNA样品，并且对于SNP的鉴定准确度高。
此外，HRM技术具有高通量、快速、操作简单等特点，适用于大规模基因分型和突变检测等实验。
HRM技术在药物研发、医学诊断和遗传学研究等领域有着广泛的应用。
例如，在药物研发中，可以通过HRM技术对候选靶点进行筛选，评估药物的安全性和有效性。
在医学诊断中，HRM技术可以应用于肿瘤的分型和突变检测，早期发现和预测疾病的风险。
在遗传学研究中，HRM技术可以用于亲子鉴定、人群遗传学调查和基因组学研究等方面。
尽管HRM技术具有许多优点和应用前景，但也存在一些局限性。
MTHFR基因多态性
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1
Contents
1
MTHFR基因简介
2
MTHFR基因型引起相关疾病机理
3
MTHFR基因与优生优育
4
MTHFR基因与冠心病
5
MTHFR基因与神经精神类疾病
6
MTHFR基因多态性检测的临床应用
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2
MTHFR基因简介
人类亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因位于1号染色体短臂末端(1p36.3),是亚甲基四氢 叶酸还原酶蛋白编码基因，是叶酸代谢与甲硫氨酸代谢中的关键酶。
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10
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11
MTHFR C677T基因型能使男性不育风险增加2.68倍： TT型发生习惯性流产的风险是野生型的2.96倍
个性化用药MTHFR
基因突变对叶酸转化能力显著降低，分次补充有利于充 分发挥叶酸转化能力，更好的维持血清叶酸浓度，根据 基因型不同，确定个体化的叶酸补充方案。
复杂疾病的病因学诊断、 MTHFR C677T导致新生儿缺陷疾病和妊娠风险急剧增 个体化用药、出生缺陷风 加 险提示
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8
MTHFR基因与神经精神类疾病
亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是叶酸和同型半胱氨酸(Hcy)代谢的关键 酶之一,参与阿尔茨海默病、抑郁症等神经精神类疾病的发生。MTHFRC677T基因突变引起酶耐热性和活性降低,导致叶酸水平降低,血浆同型半胱 氨酸(Hcy)浓度升高,造成中枢神经元和微血管的损害,影响中枢神经递质的合 成以及中枢神经系统中生物胺类和磷脂类的甲基化,诱发抑郁症等多种神经 精神类疾病。
.
6
MTHFR基因与优生优育
基因的缺陷会影响机体对叶酸的利用，引起孕妇人群妊娠期高血压疾病，自发性流产，以 及胎儿神经管缺陷、先天性心脏病、唇腭裂等。
MTHFR和MTRR基因多态性与急性脑梗死的关联分析
MTHFR和MTRR基因多态性与急性脑梗死的关联分析王海滨;张冬青;赵娇;陈嫚;张菲娅【摘要】目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)基因多态性与急性脑梗死(ACI)的关联.方法以130例ACI患者为病例组,130例体检健康者为健康对照组,PCR-荧光探针法对两组人群MTHFR基因677C＞T、1298A＞C位点和MTRR基因66A＞G位点的多态性进行定性检测,分析两组人群的基因型及其分布,酶法检测血清同型半胱氨酸(Hcy)水平.结果与健康对照组比较,ACI组MTHFR 677C＞T的T等位基因频率、MTRR 66A＞G的G等位基因频率显著升高(x2 =21.03,P＜0.01和x2=12.45,P＜0.01),而MTHFR 1298A＞C差异无统计学意义(P＞0.05).此外,与健康对照组比较,ACI组血清Hcy 明显升高(P＜0.01),血清Hcy水平在MTHFR 677C＞T、MTHFR 1298A＞C及MTRR 66A＞G的基因型间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 MTHFR 677 T等位基因、MTRR 66 G等位基因与ACI密切相关,MTHFR 1298A＞C未发现与ACI 相关,3位点SNP均与ACI患者Hcy水平升高有关.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2016(034)006【总页数】4页(P407-410)【关键词】急性脑梗死;亚甲基四氢叶酸还原酶;甲硫氨酸合成酶还原酶;基因多态性;同型半胱氨酸【作者】王海滨;张冬青;赵娇;陈嫚;张菲娅【作者单位】解放军总医院第一附属医院检验科,北京100048;解放军总医院第一附属医院检验科,北京100048;解放军总医院第一附属医院检验科,北京100048;解放军总医院第一附属医院检验科,北京100048;解放军总医院第一附属医院检验科,北京100048【正文语种】中文【中图分类】R544.1近年来研究发现多个单核苷酸位点多态性(SNP)与急性脑梗死的发生、发展及转归关系密切。
高分辨率溶解曲线.pptx
Rosario Muleo,Marir Chiara Colao,Dario Miano at el. 2009 Genome52:252-260
第35页/共46页
第8页/共46页
Mutation Scanning
未知SNP扫描
第9页/共46页
等对北京油鸡CAPN1基因外显子进行扫描，筛查其潜在SNPs。
第10页/共46页
Bernhard等对Barley的eukaryotic translation
initiation factor 4E (eIF4E) gene基因外显子进行突变扫描结果
— 筛查突变 （mutation scanning） — 基因分型（Mutation Genotyping）
—小片段+内标法（ Small Amplicon Genotyping ） —非标记探针法（Unlabeled Probe Genotyping，LunaProbe） —SSR分析 — 检测甲基化 • HRM仪器
内容提示
• 高分辨熔解曲线（High Resolution Melting） • 高分辨熔解曲线在遗传育种中的应用
— 筛查突变 （mutation scanning） — 基因分型（Mutation Genotyping）
—小片段+内标法（ Small Amplicon Genotyping ） —非标记探针法（Unlabeled Probe Genotyping，LunaProbe） —SSR分析 — 检测甲基化 • HRM仪器
• 0.3oC/秒 升温速度= 67 pts/ ℃ • 0.05oC/秒 升温速度 = 400 pts/ ℃
高分辨率熔解曲线
高分辨率熔解曲线（HRM）技术的应用举例HRM应用举例1 突变筛查HRM的特点是高灵敏度和高特异性，检测灵敏度可以达到1%-0.1%，既能检测出已知突变，也能检测出未知突变。
在大量样本、多个突变位点的筛查上，比传统的非均一性方法（如dHPLC）更方便、性价比更高，因为后者需要将扩增产物转移到另一台仪器上进行突变分析（表1）。
表1、突变检测方法的比较研究方法优点缺点直接测序法突变检测金标准，能发现已知和未知突变位点每个位点均需要经PCR扩增，然后测序，成本较高，工作量大，周期特别长，价格昂贵，不适合大样本、少位点的样本检测，容易交叉污染。
Taqman探针法适合已知突变位点、位点数量少、通量高的检测价格昂贵（探针合成费用高），不能同时发现未知突变位点普通PCR方法技术简便，价格便宜，仅适用已知SNP判断，不能确定何种突变，适宜少量样本检测费时费力，速度较慢，灵敏度差；RFLP仅能检测有酶切位点的片断，无酶切位点不能检测；上述方法都需要凝胶电泳，DNA链二级结构容易造成人工假相，使结果出现偏差。
SSCP、DGGE花费时间长、稳定性差、灵敏度有限，难以大规模开展工作。
芯片技术与传统的仪器检测方法相比具有高通量、微型化、自动化、防污染等特点仅适用于全基因组扫描，不适宜单个或少数基因的突变位点检测，精度低，价格昂贵。
Illumina技术这种方案可以帮助研究人员在得益于起始样品量要求很低优点的同时，还能够检测多个感兴趣的区域，从而检出罕见的基因突变。
高通量检测，在全基因组上扫描分析上有优势，价格昂贵。
MALDI-TOF MS 质谱技术检测速度快，理论上能分开单个碱基变化这种纯物理检测易受到样本因素的多种干扰，如盐离子含量等，适宜于已经优化的特定突变检测，不适宜该服务商未做过或很少做过的新突变检测。
检测过程需要多点质控，否则精确度很低。
另外，很重要的一点是过程复杂：PCR+电泳+割胶+纯化等，最后才是质谱监测，PCR需要自己做，并不便宜。
茂县羌族、汉族、藏 族女性mthfr与mtrr基因多态性分布研究
重 庆 医 学 2019 年 第 48 卷 增 刊 (下 )
1
·论 著·
茂县羌族、汉族、藏族女性 MTHFR 与 MTRR 基因多态性分布研究*
田小红1,李秋菊1,陈 敏1,何 晴1,苏帮琼1,唐志敏1,陈大红1,胡季芳2,鲁衍强2△ (1.茂县妇幼保健计划生育服务中心,四川茂县 623200;2.上海张江普汇转化医学研究院 201314)
关 键 词 :基 因 多 态 性 ;亚 还 原 酶
StudyonthePolymorphismofMTHFRand MTRR GenesinYi,HanandTibetan Womenin MaoCounty* TIAN Xiaohong1,LIQiuju1,CHEN Min1,HE Qing1,SU Bangqiong1, TANGZhimin1,CHEN Dahong1,HUJifang2,LU Yanqiang2△
Abstract:Objective ToinvestigatethemolecularpolymorphismofMTHFRandMTRR,thekeyenzymes offolatemetabolisminYi,HanandTibetanpopulations,ina molecularepidemiologicalsurveyofwomenin Mao County,Aba Tibetan and Qiang Autonomous Prefecture,Sichuan Province.Methods A totalof861 womenofchildbearingageduringpregnancywerestudied,including721Yipeople,98 Hanpeopleand42Tibetans.Theoralmucosalepithelialexfoliatedcellswerecollected,genomicDNA wasextracted,andthepolymorphismsofMTHFRC677T,A1298Cand MTRR A66Ggenesweredetectedbyreal-timequantitativePCR. Results (1)Thedistributionofgenepolymorphismsintheenrolledsubjectswasconsistentwithgeneticbalance.(2)ThegenotypefrequenciesofMTHFR677CC,CTandTTinYiwomenwere34.1% ,50.5% ,and15. 4%,respectively,34.7%,48.0% and17.3% for Han womenand45.2%,42.9%,and11.9% forTibetan women.ThegenotypefrequenciesofMTHFR1298AA,AC,andCCinYiwomenwere71.3%,25.4% and3. 3%,respectively,whichwere63.3%,33.7% and3.1%forHanwomenand54.8%,42.9% and2.4%forTibetanwomen.ThegenotypefrequenciesofMTRR66AA,AGandGG were48.0%,41.9%,and10.1%,and 57.1%,33.7%,and9.2% forHanwomen,and50.0%,42.9%,and7.1% forTibetanwomen.Therewasno significantdifferenceingenotypeandallelefrequencydistribution(P >0.05).(3)Two-pointlinkageandhap-
用于检测人类MTHFR和MTRR基因多态性的引物组、试剂盒以及检测方法[
专利名称：用于检测人类MTHFR和MTRR基因多态性的引物组、试剂盒以及检测方法
专利类型：发明专利
发明人：李三华,王知丰,齐华,刘超,刘文弟
申请号：CN202010202152.5
申请日：20200320
公开号：CN111321216A
公开日：
20200623
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种用于检测人类MTHFR和MTRR基因多态性的引物组、试剂盒以及检测方法，属于医学检验技术中的基因多态性检测技术领域。
本发明针对人类MTHFR和MTRR基因SNP位点分别设计野生型和突变型ARMS引物，结合SYBR染料法，可以实现人类MTHFR和MTRR基因多态性的检测。
该方法是利用ARMS‑PCR引物的3’端末端碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增的原理，设计等位基因特异性引物，只有在引物3’末端碱基与模板配对时目标序列可以延伸，SYBR染料插入合成的双链DNA中，产生荧光信号，通过计算△Ct值判定样本的基因型。
申请人：河南赛诺特生物技术有限公司
地址：450001 河南省郑州市高新技术产业开发区翠竹街1号109号
国籍：CN
代理机构：郑州睿信知识产权代理有限公司
代理人：牛爱周
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扎赉特旗汉族与蒙古族女性MTHFR与MTRR基因多态性分布研究
文章编号：ＷＨＲ２０２００５１２９扎赉特旗汉族与蒙古族女性ＭＴＨＦＲ与ＭＴＲＲ基因多态性分布研究高俊荣１ 汪红１ 周建华１ 鲁衍强２ 胡季芳２１．扎赉特旗妇幼保健院，内蒙古兴安盟 １３７６００；２．上海张江普汇转化医学研究院，上海 ２０１３１８【摘 要】目的：针对内蒙古兴安盟扎赉特旗汉族和蒙古族女性开展分子流行病学调查，研究叶酸代谢关键酶ＭＴＨＦＲ和ＭＴＲＲ的基因多态性分布。
方法：以孕期保健的５００例健康女性为研究对象，其中汉族３３２例、蒙古族１６８例。
提取口腔黏膜脱落细胞ＤＮＡ，采用荧光定量ＰＣＲ检测叶酸代谢关键酶基因位点多态性，并统计分析。
结果：１）入组对象的基因多态性分布符合遗传平衡。
２）汉族女性ＭＴＨＦＲ６７７ＣＣ、ＣＴ、ＴＴ的基因型频率分别为２１．４％、５０．６％、２８．０％，蒙古族女性为２６．２％、５１．２％、２２．６％，差异无统计学意义（犘＞０．０５）。
汉族女性ＭＴＨＦＲ１２９８ＡＡ、ＡＣ、ＣＣ的基因型频率分别为７１．７％、２５．３％、３．０％，蒙古族女性为７２．０％、２６．８％、１．２％，差异无统计学意义（犘＞０．０５）。
汉族女性ＭＴＲＲ６６ＡＡ、ＡＧ、ＧＧ的基因型频率分别为６０．２％、３４．０％、５．７％，蒙古族女性为４７．６％、４１．１％、１１．３％，差异有统计学意义（犘＜０．０５）。
３）研究对象的ＭＴＨＦＲＡ１２９８Ｃ与Ｃ６７７Ｔ位点有６种组合连锁，没有ＣＴ／ＣＣ、ＴＴ／ＡＣ和ＴＴ／ＣＣ。
两民族频率最高的均是ＣＴ／ＡＡ。
结论：获取扎赉特旗汉族、蒙古族女性ＭＴＨＦＲ和ＭＴＲＲ基因多态性的群体遗传学特征，存在差异性。
【关键词】基因多态性；亚甲基四氢叶酸还原酶；甲硫氨酸合成酶还原酶【中图分类号】 Ｒ１７３ 【文献标识码】 Ａ犛狋狌犱狔狅狀狋犺犲犘狅犾狔犿狅狉狆犺犻狊犿犇犻狊狋狉犻犫狌狋犻狅狀狅犳犕犜犎犉犚犪狀犱犕犜犚犚犌犲狀犲狊犻狀犎犪狀犪狀犱犕狅狀犵狅犾犻犪狀犠狅犿犲狀狅犳犣犺犪犾犪犻犅犪狀狀犲狉ＧａｏＪｕｎｒｏｎｇ１，ＷａｎｇＨｏｎｇ１，ＺｈｏｕＪｉａｎｈｕａ１，ＬｕＹａｎｑｉａｎｇ２，ＨｕＪｉｆａｎｇ２１．ＺｈａｌａｉｑｉＭａｔｅｒｎｉｔｙａｎｄＣｈｉｌｄＨｅａｌｔｈＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｉｎｇ＇ａｎＬｅａｇｕｅＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ，１３７６００，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｈａｎｇｈａｉＺｈａｎｇｊｉａｎｇＰｕｈｕｉＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，２０１３１８，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｎｄｕｃｔａｍｏｌｅｃｕｌａｒｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｕｒｖｅｙｏｎＨａｎａｎｄＭｏｎｇｏｌｉａｎｗｏｍｅｎｉｎＺｈａｌａｉＢａｎｎｅｒ，Ｘｉｎｇ＇ａｎＬｅａｇｕｅ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ，ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｋｅｙｅｎｚｙｍｅｓｏｆｆｏｌａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍＭＴＨＦＲａｎｄＭＴＲＲ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：５００ｈｅａｌｔｈｙｗｏｍｅｎｗｈｏｗｅｒｅｐｒｅｇｎａｎｔｄｕｒｉｎｇｐｒｅｇｎａｎｃｙｗｅｒｅｔａｋｅｎａｓｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｂｊｅｃｔ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ３３２Ｈａｎｐｅｏｐｌｅａｎｄ１６８Ｍｏｎｇｏｌｉａｎｓ．Ｃｏｌｌｅｃｔｔｈｅｏｒａｌｍｕｃｏｓａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｅｘｆｏｌｉａｔｅｄｃｅｌｌｓ，ｅｘｔｒａｃｔｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡ，ａｎｄｕｓｅｆｌｕｏｒｅｓ ｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｃｔＭＴＨＦＲＣ６７７Ｔ，Ａ１２９８ＣａｎｄＭＴＲＲＡ６６Ｇｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ａｎｄｐｅｒｆｏｒｍｓｔａｔｉｓ ｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：１）Ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｎｒｏｌｌｅｄｏｂｊｅｃｔｓｗａｓｉｎａｃｃｏｒｄａｎｃｅｗｉｔｈｇｅｎｅｔｉｃｂａｌａｎｃｅ．２）ＴｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＭＴＨＦＲ６７７ＣＣ，ＣＴ，ａｎｄＴＴｉｎＨａｎｗｏｍｅｎｗｅｒｅ２１．４％，５０．６％，ａｎｄ２８．０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄＭｏｎｇｏｌｉａｎｗｏｍｅｎｗｅｒｅ２６．２％，５１．２％，ａｎｄ２２．６％．Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｎｏｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（犘＞０．０５）．Ｔｈｅｇｅｎ ｏｔｙｐｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＭＴＨＦＲ１２９８ＡＡ，ＡＣ，ａｎｄＣＣｗｅｒｅ７１．７％，２５．３％，ａｎｄ３．０％ｆｏｒＨａｎｗｏｍｅｎ，ａｎｄ７２．０％，２６．８％，ａｎｄ１．２％ｆｏｒＭｏｎｇｏｌｉａｎｗｏｍｅｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｎｏｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（犘＞０．０５）．Ｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｆｒｅｑｕｅｎ ｃｉｅｓｏｆＭＴＲＲ６６ＡＡ，ＡＧ，ａｎｄＧＧｗｅｒｅ６０．２％，３４．０％，ａｎｄ５．７％ｆｏｒＨａｎｗｏｍｅｎ，ａｎｄ４７．６％，４１．１％，ａｎｄ１１．３％ｆｏｒＭｏｎｇｏｌｉａｎｗｏｍｅｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（犘＜０．０５）．３）Ｔｈｅｒｅａｒｅ６ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｏｆＭＴＨ ＦＲＣ６７７ＴａｎｄＡ１２９８ＣｉｎｔｈｅＨａｎａｎｄＭｏｎｇｏｌｉａｎｗｏｍｅｎ．ＴｈｅｈｉｇｈｅｓｔｆｒｅｑｕｅｎｃｙｉｓＣＴ／ＡＡ，ａｎｄｔｈｅｒｅｉｓｎｏＣＴ／ＣＣ，ＴＴ／ＡＣａｎｄＴＴ／ＣＣｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｉｓａｃｏｍｐｌｅｔｅｃｈａｉｎｉｍｂａｌａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｐｏｉｎｔｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｏｂｔａｉｎｔｈｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｇｅ ｎｅｔｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＭＴＨＦＲａｎｄＭＴＲＲｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎＨａｎａｎｄＭｏｎｇｏｌｉａｎｗｏｍｅｎｏｆＺｈａｌａｉＢａｎｎｅｒ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ；Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ 叶酸代谢通路中有２个关键酶基因位点，分别为甲硫氨酸合成酶还原酶（ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＭＴＲＲ）和基金项目：中国疾病预防控制中心妇幼保健中心妇幼保健分子遗传医学研究专项计划（ＦＹ ＺＸ ＺＤ ０３９４）作者简介：高俊荣（１９７９－），女，本科，妇产科副主任医师。
福建籍汉族女性MTHFR基因多态性与不孕症相关性分析研究
福建籍汉族女性MTHFR基因多态性与不孕症相关性分析研究赖燕霞;柯璐琳;张陈枝【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2022(34)6【摘要】目的分析福建籍不孕症女性5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFRC677T)基因多态性,探讨该位点基因多态性与不孕症的相关性。
方法采用病例-对照研究方法,选取本院2015年1月1日~2019年6月1日就诊的123例不孕症妇女作为病例组;正常受孕且无不良孕产史者133人作为对照组。
磁珠法抽提全血DNA,PCR扩增后,以芯片杂交法进行基因分型,所得结果用直接测序法验证,SPSS 18.0软件卡方检验分析两组人群的基因频率差异。
结果病例组MTHFR C677T位点突变纯合子(TT)频率与突变杂合子(TC)基因频率分别为8.94%、43.9%,对照组对应频率分布分别为9.02%、38.35%,差异无统计学意义(χ^(2)=0.714,P>0.05)。
本文人群不孕患者MTHFR C677T基因频率分布与国内宁夏、河南新乡有显著差异(P<0.05),与埃及、伊朗、印度德里、突尼斯、西班牙人群的基因频率分布均存在显著差异(P<0.05)。
结论福建籍汉族不孕症女性MTHFR C677T等位基因突变与不孕症的易感相关性不显著,但基因型分布存在地域与种族差异。
【总页数】6页(P99-104)【作者】赖燕霞;柯璐琳;张陈枝【作者单位】泉州市光前医院;福建医科大学附属第一医院【正文语种】中文【中图分类】R969.4【相关文献】1.南宁市汉族女性不明原因复发性流产与MTHFR基因C677T位点多态性相关性研究2.藏族女性MTHFR基因多态性与原发性不孕症相关性分析研究3.西藏地区汉族女性MTHFR、MTRR基因位点多态性与原发性不孕症相关性研究4.西藏地区汉族女性MTHFR、MTRR基因位点多态性与原发性不孕症相关性研究5.广东籍汉族妇女N5,10-MTHFR基因和eNOS基因多态性与子痫前期和子痫相关性的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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［摘 要］ 目的 探讨高分辨率熔解曲线（ HRM） 对单核苷酸多态性位点（ SNP） 检测的准确性，为新生儿出生缺陷相关基 因多态性的快速检测与治疗提供参考。方法 收集正常血样，抽取血液 DNA 并定量。设计亚甲基四氢叶酸还原酶（ MTH-
FR） 两个 SNP 位点 c． 677 C ＞ T 和 c． 1298 A ＞ C 和甲硫氨酸合成酶还原酶（ MTRR） 的一个 SNP 位点 c． 66 A ＞ G 的特异性 HRM
引物名称 C 677 T 1F C 677 T 1R C 677 T 2F A 1298C 1F A 1298C 1R A 1298C 2F A 66 G 1F A 66 G 1R A 66 G 2F
表 1 本研究所用的 HRM 及测序引物
引物序列 （ 5＇-3＇） GAAGCAGGGAGCTTTGAGGCTGACCTG GCTGACACATTCTTCCGCTTTGTGAAGGCA TCATCTCTGGGGTCAGAAGC GGGAGGAGCTGACCAGTGAAG GGAGAACCAAACCGGAATGGTCACAAAGTG AGTTTGCATGCTTGTGGTTG ATGCTACACAGCAGGGACAG GCACAAAACGGTAAAATCCA GCATTGTTTCTTAAAGATTGAGG
倒 混 匀，加 入 400 μl 氯 仿 轻 摇 混 匀，接 着 室 温 12 000 rpm 离心 20 min，转移 600 μl 上清液至新的 洁净的 1． 5 ml EP 管中，加入等体积 － 20℃ 预冷的 异丙醇，混匀后 12 000 rpm 离心 15 min，倒掉上清 液，加入 75% 乙醇清洗、沉淀两次，室温晾干使乙 醇完全挥发，然后加入 100 μl 的灭菌双蒸水溶解。 经微量紫外可见分光光度计 （ NanoDrop 2000 Gene 公司） 测定 DNA 的纯度及含量，提取的 DNA 放置 于 － 20℃ 冰箱储存。
引物，利用 HRM 法对其进行检测，然后取部分样本测序，比较检测结果，并进行 HWE 检验。结果 经 HRM 法，96 例未知
基因型的样本中，MTHFR c． 677 C ＞ T 位点检测 61 例为 C / C 型，31 例为 C / T 型，4 例为 T / T 型； MTHFR c． 1298 A ＞ C 位点 检测出 50 例为 A / A 型，30 例为 A / C 型，16 例为 C / C 型； 对 MTRR c． 66 A ＞ G 位点检测出 51 例为 A / A 型，40 例为 A / G 型，
1． 2． 2 模板准备 将所有 DNA 样本用双蒸水稀释 至 10 ng / μl。
1． 2． 3 引 物 设 计 和 反 应 条 件 根 据 Genbank 上 MTHFR 基因序列，采用引物设计软件 Primer 5 设 计了 MTHFR 的两个 SNP 位点 c． 677 C ＞ T、c． 1298 A ＞ C 和 MTRR 一个位点 c． 66 A ＞ G 的特异性引物 以及测序引物，具体见表 1。所有引物均由上海生 工生物公司合成。将引物稀释至 10 μM 备用。
中国优生优育 2013 年 6 月第 19 卷第 3 期 Chinese Journal of Healthy Birth ＆ Child Care Vol． 19 No． 3 June 2013
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·论 著·
应用高分辨率熔解曲线检测 MTHFR 和 MTRR 基因多态性
潘 登，周芳芳，叶小娟，陈红岩，卢大儒
PAN Deng，ZHOU Fang-fang，YE Xiao-juan，CHEN Hong-yan，LU Da-ru （ Institutes of Genetics，School of Life Sciences，Fudan University，Shanghai 200433，China） ［ABSTRACT］ Objective This study aims to investigate the accuracy of the HRM for SNP detection，and provide evidence for the rapid detection of birth defects related gene polymorphisms and neonatal treatment． Methods A total of 96 plasma samples of healthy persons were included． DNA was extracted from blood and quantified． Specific high resolution melting analysis （ HRM） primers were designed． Polymorphisms including c． 677 C ＞ T and c． 1298 A ＞ C of Methylenetetrahydrofolate reductase （ MTHFR） gene，as well as c． 66 A ＞ G of Methionine synthase reductase （ MTRR） gene were detected by HRM and confirmed by direct sequencing． Results Among the 96 cases genotyped by HRM，there were 61 cases with C / C type，31 with C / T type and 4 with T / T type in MTHFR c． 677 C ＞ T site． In MTHFR c． 1298 A ＞ C site，there were 50 cases with A / A type，30 with A / C type，and 16 with C / C type． As for MTRR c． 66 A ＞ G site，there were 51 cases with A / A type，40 with A / G type，and 5 with G / G type． All these results by HRM were consistent with the sequencing results． Conclusion HRM can quickly and accurately detect birth defects related gene polymorphism，and it can be applied as an easy and highly effective method for clinical detection of genetic polymorphism． ［KEY WORDS］ high-resolution melting analysis； single nucleotide polymorphism； methylene tetrahydrofolate reductase； methionine synthase reductase
均与测序结果一致。结论 HRM 可快速准确且高通量地检测新生儿出生缺陷相关基因多态性，是一种简便和准确的可应
用于临床的检测方法。 ［关键词］ 高分辨率熔解曲线； 单核苷酸多态性位点； MTHFR 基因； MTRR 基因 ［中图分类号］ R394 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1007-3434（ 2013） 03-161-05
1 材料与方法
1． 1 样本 96 份 2011—2012 年上海市肺癌研究 项目中正常对照人群剩余血样，－ 80℃ 冻存。
1． 2 方法 1． 2． 1 血液 DNA 提取 取 250 μl 全血置于 1． 5 ml 离心管，加入 410 μl STE（ 10 mmol / L Tris-HCl； pH 8． 0； 1 mmol / L EDTA，pH 8． 0； 100 mmol / L NaCl） 缓冲液、90 μl 10% SDS 以 及 10 μl 蛋 白 酶 K 后 65℃ 水浴过夜，然后加入 300 μl 饱和 NaCl 轻轻颠
［通讯作者］ 卢大儒，E-mail： drlu@ fudan． edu． cn
碍，最终引起 DNA 甲基化水平异常，从而影响胚胎 的 正 常 发 育。 MTHFR 和 MTRR 多 态 性 与 乳 腺 癌［6］、结肠癌［7］、卵 巢 癌［8］、白 血 病［9］、不 孕 不 育［10］ 等多种疾病的发生发展密切相关。因此，我们需要 简单，快速，可靠，经济的方法对 MTHFR 和 MTRR 的多态性进行检测。目前已报道的单核苷酸多态性 位点（ single nucleotide polymorphism，SNP） 的检测方 法有多种，如 RFLP、荧光实时定量 PCR、Taqman 分 型、测序以及质谱等，他们各有优缺点，但总体来 说在高通量、快速和经济方面都不如高分辨率熔解 曲 线 分 析 方 法 （ high-resolution melting analysis， HRM） ，HRM 通过饱和染料对 PCR 产物的熔解曲 线变化进行实时监测，不需要使用针对目标位点的 特异性等位引物或探针，只需一对引物就可以对等
Detection of methylene － tetrahydrofolate reductase （ MTHFR） and methionine synthase reductase （ MTRR） gene polymorphism by high resolution melting analysis
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中国优生优育 2013 年 6 月第 19 卷第 3 期 Chinese Journal of Healthy Birth ＆ Child Care Vol． 19 N敏度高、特异性 强、简单快速、高效、经济，无污染，在 PCR 之后不 需要纯化分离，检测不受碱基位点的局限，还具有 高通量、闭 管 操 作 等 优 点。 本 研 究 利 用 HRM 对 MTHFR 和 MTRR 的 SNP 位点的检测，旨在为新生 儿出生缺陷相关基因多态性的快速检测与治疗提供 参考依据。