实验一细菌形态结构的观察

【实验报告示范】 实验一 细菌形态结构的观察
【实验内容】 1.实验室生物安全规则（每人掌握）； 2.细菌标本革兰染色观察（Gram’s Stain)(每人做）； 3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）； 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）。
【实验材料和方法】
一、细菌标本革兰染色观察 1．细菌涂片的制作 菌种： 葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物 方法：
4
4 需要 4 4 需要 4 需要
有
有 有 有
临床药学本科实验内容及安排
实验课的带教内容
1 细菌形态观察 细菌的生长现象与消毒灭 2 菌
学时数 显微镜
4 需要 4 有
录像
3 4 5 6
致病性球菌 药物的微生物检测 药物的敏感性实验 四体、真菌、病毒
4 需要 4 4 4 需要
有
有
非临床医学本科实验内容及安排
判断；
3.掌握细菌的特殊结构（荚膜、鞭毛、芽孢）的 形态特点。
【实验内容】
1.实验室生物安全规则(P3) ； 2.细菌标本革兰染色观察（Gram’s Stain)(每人做）
(P10) ；
3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）；
4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）
(P104) 。
【实验材料】
(1)菌种:
葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物。
(2)试剂:革兰染色百度文库。
(3)其他: 生理盐水、载玻片、酒精灯、接种环、显微镜、香 柏油、擦镜纸、二甲苯等。
【实验方法】
1．细菌涂片的制作
步骤： 涂片 干燥 固定 注意点： 1）无菌操作 2）加生理盐水（固体培养物）
载玻片
生理盐水 + 葡萄球菌
生理盐水 生理盐水 + + 大肠杆菌 葡萄球菌 +大肠杆菌
3.观察 将标本片在酒精灯火焰上烤干后,在涂菌处滴加1滴香柏油, 油镜下观察。 4.结果 见图1:
葡萄球菌: 革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列
大肠杆菌: 革兰阴性杆菌,不规则分散排列
图 1：
细菌标本
革兰染色观察结果
Gram’s Stain,×1000
5.讨论 本实验结果表明,通过革兰染色在油镜下 可清楚地观察到标本片上细菌的形态、染色 性和排列状态。革兰染色可将细菌分为2大 类，即染成蓝紫色的革兰阳性菌和染成红色 的革兰阴性菌。其原理是革兰阳性菌和革兰 阴性菌细胞壁结构的差异。 结果不正确的影响因素分析：
涂片 干燥 固定 1）涂片：在酒精灯火焰旁用接种环无菌操作取生理盐水和葡 萄球菌、大肠杆菌斜面培养物，涂抹、混匀于载玻片上，如 下图：
生理盐水 + 葡萄球菌
生理盐水 + 大肠杆菌
生理盐水 + 葡萄球菌 +大肠杆菌
2）干燥 将涂片在酒精灯火焰上方约20cm高处烤干。 3）固定 将载玻片以均匀的速度通过酒精灯火焰来回3次。 2.革兰染色 1)方法 初染: 结晶紫和碳酸氢钠各1～3滴,3s-5s，水冲净,甩干。 媒染: 碘液1～3滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。 脱色: 95%乙醇数滴,5s-10s, 水冲净,甩干。 复染: 稀释石炭酸复红液1～3滴,10s，水冲净,甩干。
2.革兰染色
1)方法 初染: 结晶紫和碳酸氢钠各1～3滴,3s-5s，水冲净,甩干。 媒染: 碘液1～3滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。 脱色: 95%乙醇数滴,5s-10s, 水冲净,甩干。 复染: 稀释石炭酸复红液1～3滴,10s，水冲净,甩干。 关键步骤： 掌握脱色程度。
3.观察 标本片自然干燥或在酒精灯 火焰上烤干后,在涂菌处滴加 1滴香柏油,油镜下观察。
掌握病原生物学的基本方法与基本操作技术；
强化实验室生物安全观念， 掌握无菌操作技术； 加深对病原生物学基本理论知识的理解与认识； 培养独立操作、独立观察和思考、独立分析问题和 解决实际问题的能力； 增强科技创新能力； 培养严谨的作风、科学的方法和严肃认真的工作态 度。
临床医学本科实验内容及安排
实验课的带教内容 1 细菌形态观察 细菌的生长现象与消毒灭 2 菌 3 致病性球菌 4 肠道杆菌 5 白喉杆菌、厌氧菌 6 四体、真菌、病毒 学时数 显微镜 4 需要 录像
1）破伤风杆菌的芽胞:
芽胞染色×1000
2)变形杆菌的鞭毛:
鞭毛染色×1000
3)肺炎链球菌的荚膜:
荚膜染色×1000
【实验注意点】
1.生物安全、无菌操作,菌种管清理； 2.显微镜(油镜)的使用——用后擦镜头； 3.用过的载玻片放进有消毒水的玻缸。 4.做好清洁卫生。
【实验报告内容】
1.细菌标本革兰染色观察（方法、结果画图、讨 论）； 2. 细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）观察（画 图）。
实验课内容
1 细菌形态结构的观察
学 显微 时 镜 数 4 需要
录像
细菌的生长现象与消 2 毒灭菌 3 四体、真菌、病毒
4
4 需要
有
有
实验一
细菌形态结构的观察
Observe on Morphology and Structure of Bacteria
【目的要求】
1.熟悉实验室生物安全规则,掌握无菌操作技术； 2.掌握细菌标本革兰染色的操作步骤和方法； 显微镜(油镜)下细菌形态的观察; 革兰染色结果
二、细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察
结果见图2-4。
图2 变形杆菌的鞭毛
图3 破伤风杆菌的芽胞
图4 肺炎链球菌的荚膜
鞭毛染色×1000
芽胞染色×1000
荚膜染色×1000
请班干部 填写实验运行记录， 安排做好清洁卫生。
谢谢！
【结果观察】
指标: 形态、染色性、排列。
染色性判断：
革兰阳性菌染成蓝紫色, 革兰阴性菌染成红色。
葡萄球菌: 革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列。
Gram’s Stain,×1000
大肠杆菌: 革兰阴性杆菌,不规则分散排列。
Gram’s Stain,×1000
4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察 注意点： 观察时只能动显微镜的微调,不要动位置。 要求： 画图记录。
医学微生物学实验 Experiment of Medical Microbiology
基础医学院病原生物学教研室 基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室 杨致邦
2010.1
教材
高等医学院校基础医学实验教学系列教材 ≪病原生物学实验≫ 科学出版社，2008年6月 主编 杨致邦 叶彬
实验教学的目标