细胞凋亡试剂盒(FITC)

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Annexin V-FITC说明书

Annexin V-FITC说明书
C. 取5-10万重悬的细胞,1000g离心5分钟,弃上清,加入195µl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。 D. 加入5µl Annexin V-FITC,轻轻混匀。 E. 室温(20-25℃)避光孵育10分钟。可以使用铝箔进行避光。 F. 1000g离心5分钟,弃上清,加入190µl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。 G. 加入10µl碘化丙啶染色液,轻轻混匀,冰浴避光放置。 H. 随即进行流式细胞仪检测,Annexin V-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光。如果用于荧光显微镜下检测,1000g离心5
注意事项:
¾ 如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。 ¾ 染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。 ¾ 如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,最终导致染
色失败。 ¾ 荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。 ¾ 需自备PBS。 ¾ 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用本产品的文献:
1. Wu XX, Sun Y, Zhou XB, Zhang J, Yu BY, Xu Q. Effect of Bufotalin on the Apoptosis of BGC-823 Cells. Chinese medicine and clinical pharmacology of new drugs.2007 March,Vol.18 No.2.
包装清单:
产品编号 C1062-1 C1062-2 C1062-3

产品名称
Annexin V-FITC Annexin V-FITC结合液

AnnexinV-FITC细胞凋亡检测说明书

AnnexinV-FITC细胞凋亡检测说明书

凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒一、原理在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。

Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V进行荧光素(FITC、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

与FITC 的绿色荧光信号相比,FITC的绿色荧光信号具有信号强,不易淬灭,稳定性高等优点,故本试剂盒采用FITC作为荧光标记探针。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。

因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

二、试剂盒组份三、操作步骤1.用适当的方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性对照组,并收集细胞;2.用PBS洗涤细胞二次(离心2000rpm,5min)收集1~5×105细胞;3.吸取250μL的2×Binding Buffer和250μL灭菌去离子水(用户自备),混匀;4.用上述500μL的1×Binding Buffer悬浮细胞;5.加入1μL Annexin V-FITC混匀后加入5 μL Propidium Iodide,然后混匀;6.避光室温反应5min;根据不同的分析方法选择步骤A或B。

A.荧光显微镜观察1.滴一滴经过步骤1~6处理过的细胞悬浮液于载玻片,并用盖玻片盖上细胞;2.对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;(1)将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;(2)用PBS洗涤细胞两次;(3)吸取250μL 的2×Binding Buffer和250μL灭菌去离子水(用户自备),混匀;(4)加入1μL Annexin V-FITC混匀后加入5 μL Propidium Iodide,然后混匀;(5)将(4)步骤的溶液滴加于盖玻片表面,使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖;(6)避光室温反应5 min。

Annexin-V-FITC细胞凋亡检测试剂盒

Annexin-V-FITC细胞凋亡检测试剂盒
3. Gao C, Jiang Y, Tan C, Zu X, Liu H, Cao D. Synthesis and potent antileukemic activities of 10-benzyl-9(10H)-acridinones. Bioorg Med Chem. 2008 Sep 15;16(18):8670-5. Epub 2008 Aug 5.
2. Yang L, Zhou X, Yang J, Yin X, Han L, Zhao D. Aspirin inhibits cytotoxicity of prion peptide PrP106-126 to neuronal cells associated with microglia activation in vitro. J Neuroimmunol. 2008 Aug 13;199(1-2):10-7.
分钟,收集细胞,用50-100μl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞,涂片后,荧光显微镜下观察。 2. 对于贴壁细胞:
A. 把细胞培养液吸出至一合适离心管内,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量胰酶细胞消化液(可含有EDTA)消化细胞。 室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化。
使用说明:
1. 对于悬浮细胞: A. 在进行完细胞凋亡刺激后,1000g (约1000-2000rpm)离心5分钟,弃上清,收集细胞,用PBS轻轻重悬细胞并计数。 注意:PBS重悬不能省略,PBS重悬的过程同时也起到了洗涤细胞的作用,可以保证后续Annexin V-FITC的结合。
B. 取5-10万重悬的细胞,1000g离心5分钟,弃上清,加入195μl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。 C. 加入5μl Annexin V-FITC,轻轻混匀。 D. 室温(20-25℃)避光孵育10分钟。可以使用铝箔进行避光。 E. 1000g离心5分钟,弃上清,加入190μl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。 F. 加入10μl碘化丙啶染色液,轻轻混匀,冰浴避光放置。 G. 随即进行流式细胞仪检测,Annexin V-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光。如果用于荧光显微镜下检测,1000g离心5

Annexin V-FITC细胞凋亡检测详细步骤及说明

Annexin V-FITC细胞凋亡检测详细步骤及说明

Annexin V-FITC细胞凋亡检测详细步骤及说明1. 对于悬浮细胞:a. 在进行完细胞凋亡刺激后,1000g离心5分钟,弃上清,收集细胞,用PBS 轻轻重悬细胞并计数。

注意:PBS重悬不能省略,PBS重悬的过程同时也起到了洗涤细胞的作用,可以保证后续Annexin V-FITC的结合。

b. 取5-10万重悬的细胞,1000g离心5分钟,弃上清,加入195µl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。

c. 加入5µl Annexin V-FITC,轻轻混匀。

d. 加入10µl碘化丙啶染色液,轻轻混匀。

e. 室温(20-25ºC)避光孵育10-20分钟,随后置于冰浴中。

可以使用铝箔进行避光。

孵育过程中可以重悬细胞2-3次以改善染色效果。

f. 如果用于流式细胞仪检测,可立即上机检测,Annexin V-FITC为绿色荧光,碘化丙啶(PI)为红色荧光,流式检测细胞凋亡的效果及其验证请参考图1和图2。

初次进行流式细胞仪检测时,建议选择一组适当的细胞参考图2设置未染色、PI单染和Annexin V-FITC单染这3个对照。

如果用于荧光显微镜检测,1000g 离心5分钟,收集细胞,用50-100µl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞,涂片后,荧光显微镜下观察。

注意:细胞在染色后须尽快完成检测,通常宜在1小时之内完成检测。

用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测。

2. 对于贴壁细胞的消化后检测:a. 把细胞培养液吸出至一合适离心管内,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量胰酶细胞消化液(可含有EDTA)消化细胞。

室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液。

需避免胰酶的过度消化。

Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒操作方法及步骤说明书

Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒操作方法及步骤说明书

Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒说明:细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。

Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)高亲和力特异性结合。

以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

Propidium iodide(PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。

将Annexin Ⅴ与PI匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。

产品组成(50/25次反应):· Annexin V-FITC 500ul/250ul(20ug /ml)· Binding Buffer 40ml/20 ml· Propidium Iodide (PI) 250ul/125ul(50ug /ml)保存条件: 2-8℃储存,有效期一年。

注意事项:1.为保证得到理想的实验结果,在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项;2.试剂(尤其是小瓶装的试剂)在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落;3.Propidium iodide(PI)能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用;4.此试剂盒仅供科研使用,不宜用于临床诊断;5.本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送,并非试剂盒的真正组成成分;细胞的洗涤同常规方法。

操作注意要点:1.整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作;2.反应完毕后请尽快检测,因为细胞凋亡是一个动态的过程,反应1小时后荧光强度就开始衰变;3.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质,在操作时请注意避光;4.成功的检测凋亡受以下几种因素的影响,如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等,把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的;5.在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果;6.PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,上机前5分钟再加入PI染色。

AnnexinV凋亡试剂盒操作步骤

AnnexinV凋亡试剂盒操作步骤

请在使用前仔细阅读说明书Annexin V,FITC 凋亡检测试剂盒(100次)产品名称货号规格储存条件运输条件Annexin V,FITC结合物AD01-10 100次×1 0-5℃,避光(切勿冻存) 室温PI Solution AD02-05 50次×2 0-5℃,避光(切勿冻存) 室温10×Annexin V Binding Buffer AD03-05 50次×2 0-5℃,避光(切勿冻存) 室温*注:规格中的每“次”是以细胞浓度1×106 cells/ml计算产品描述细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。

正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。

例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。

然而在抑癌基因p53出现问题时,凋亡就不会诱导发生,从而导致癌细胞的不断增长。

细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。

目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。

Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。

在细胞凋亡早期,膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。

Annexin V 是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合,因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

用绿色荧光FITC标记的Annexin V 通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜,因此Annexin V和PI结合使用,可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。

所需的设备和材料-合适量程的移液枪-样品和诱导剂-细胞培养用6,12,24,96孔板-PBS、去离子水-流式细胞仪或荧光显微镜。

ANNEXIN V-FITC PI 凋亡检测试剂盒说明书

ANNEXIN V-FITC PI 凋亡检测试剂盒说明书

第1页,共3页ANNEXINV-FITC/PI 凋亡检测试剂盒说明书注意:本产品试剂浓度发生变化,使用前请仔细阅读说明书。

货号:CA1020规格:20T/50T /100T保存:2-8°C ,避光保存,有效期1年。

产品说明:细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS 暴露在细胞膜外表面。

PS 是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS 暴露在细胞膜外。

Annexin V 具有易于结合到磷脂类如PS 的特性,对PS 有高度的亲和性。

因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS 。

PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可发生在细胞坏死中。

两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。

因此,可以采用Annexin V 与PI 双染的方法,通过流式检测细胞早期凋亡。

操作步骤:1.细胞样品的准备:a)对于贴壁细胞:小心收集细胞培养液到一离心管内备用。

用不含EDTA 的胰酶消化细胞,至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。

再次收集到离心管内。

1000rpm 左右离心5min ,沉淀细胞。

对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。

小心吸除上清,可以残留约50µl 左右的培养液,以避免吸走细胞。

加入约1ml 4℃预冷的PBS ,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清。

b)对于悬浮细胞:1000rpm 左右离心5min ,沉淀细胞。

对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。

小心吸除上清,可以残留约50µl 左右的培养液,以避免吸走细胞。

Annexin V-FITCPI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITCPI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒上海优宁维生物科技有限公司一、概述在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。

AnnexinV是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。

因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。

图Annexin V 检测细胞凋亡原理三、实验步骤贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。

注意过度消化可损伤细胞。

在消化时可加2%的BSA 可防止消化过度。

如果用含EDTA的胰酶消化时,注意必须彻底清除EDTA:在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTA与Ca2+螯合,影响Annexin V的结合。

(1)用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer;(2)细胞收集。

悬浮细胞收集:离心5分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后(注:胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合),于室温2000rpm离心5~10分钟,收集细胞;(3)细胞洗涤:用预冷1×PBS(4℃)重悬细胞一次,2000rpm离心5~10分钟,洗涤细胞;(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞;(5)Annexin V-FITC标记:加入5μL的Annexin V-FITC混匀后,避光,室温孵育15分钟;(6)PI标记:上机前5分钟再加入5μL的PI染色。

碧云天 细胞凋亡试剂盒(C1062)

碧云天 细胞凋亡试剂盒(C1062)
3. Gao C, Jiang Y, Tan C, Zu X, Liu H, Cao D. Synthesis and potent antileukemic activities of 10-benzyl-9(10H)-acridinones. Bioorg Med Chem. 2008 Sep 15;16(18):8670-5. Epub 2008 Aug 5.
7. Ji YB, Qu ZY, Zou X. Juglone-induced apoptosis in human gastric cancer SGC-7901 cells via the mitochondrial pathway. Exp Toxicol Pathol. 2009 Oct 6.
Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒
产品编号 C1062
产品名称 Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒
包装 20次
产品简介:
Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit)是用FITC标记的重组人Annexin V来检测细 胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光 检测设备进行检测。
C. 取5-10万重悬的细胞,1000g离心5分钟,弃上清,加入195μl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。 D. 加入5μl Annexin V-FITC,轻轻混匀。 E. 室温(20-25℃)避光孵育10分钟。可以使用铝箔进行避光。 F. 1000g离心5分钟,弃上清,加入190μl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。 G. 加入10μl碘化丙啶染色液,轻轻混匀,冰浴避光放置。 H. 随即进行流式细胞仪检测,Annexin V-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光。如果用于荧光显微镜下检测,1000g离心5

细胞凋亡实验报告

细胞凋亡实验报告

一、实验背景细胞凋亡,又称程序性细胞死亡,是一种由基因调控的细胞自主性死亡过程。

细胞凋亡在生物体的发育、免疫、代谢等生理过程中具有重要作用。

近年来,细胞凋亡与多种疾病的发生、发展及治疗密切相关,因此,研究细胞凋亡的机制具有重要意义。

本实验旨在通过检测细胞凋亡相关指标,探讨细胞凋亡在特定细胞类型中的作用。

二、实验材料与试剂1. 细胞:实验用细胞为正常细胞系A和肿瘤细胞系B。

2. 试剂:Annexin V-FITC/PI双染试剂盒、RNA提取试剂盒、PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、Trizol试剂、DEPC水、无血清培养基、胎牛血清、胰蛋白酶等。

三、实验方法1. 细胞培养:将正常细胞系A和肿瘤细胞系B分别接种于培养瓶中,置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

2. 细胞凋亡检测:将正常细胞系A和肿瘤细胞系B分别分为实验组和对照组。

实验组加入凋亡诱导剂,对照组加入等量无血清培养基。

培养一定时间后,按照Annexin V-FITC/PI双染试剂盒说明书进行细胞凋亡检测。

3. RNA提取:将实验组和对照组细胞收集于离心管中,按照RNA提取试剂盒说明书提取细胞总RNA。

4. PCR检测:将提取的RNA进行逆转录,得到cDNA。

以cDNA为模板,进行凋亡相关基因的PCR扩增。

5. DNA提取:将实验组和对照组细胞收集于离心管中,按照DNA提取试剂盒说明书提取细胞DNA。

6.琼脂糖凝胶电泳:将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,观察条带。

四、实验结果1. 细胞凋亡检测:实验组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),说明凋亡诱导剂成功诱导细胞凋亡。

2. RNA提取:成功提取实验组和对照组细胞总RNA。

3. PCR检测:实验组凋亡相关基因表达水平显著高于对照组(P<0.05),说明凋亡诱导剂上调凋亡相关基因表达。

4. 琼脂糖凝胶电泳:实验组凋亡相关基因PCR产物条带较对照组明显,说明凋亡相关基因在实验组中表达上调。

TUNEL双色细胞凋亡原位检测试剂盒(FITC)

TUNEL双色细胞凋亡原位检测试剂盒(FITC)

Cat number:KGAStore at-20℃for one yearExpire date:For Research Use Only凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(FITC标记流式检测法,细胞样本专用)使用说明书Cat:KGA7027,7037,7047(20,50,100Tests)目录一、 TUNEL检测原理 (2)二、试剂盒组分 (3)三、检测样本的预处理1.细胞样本的准备 (4)2.阳性对照及阴性对照的准备 (5)四、标记及显色反应 (6)凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC标记流式检测法)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法,可检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况,其原理是荧光素(fluorescein)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘-OH末端,可用流式细胞仪检测。

由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被标记。

本试剂盒适用于细胞样本的凋亡原位检测。

对于经过固定和洗涤的细胞,染色后即可通过流式细胞仪检测到凋亡细胞。

本试剂盒特点● 操作简便:使用Ready-to-Use型试剂。

● 高灵敏度:可以检出初期的凋亡细胞。

● 高特异性:能特异性染色凋亡细胞。

● 快速操作:整体操作约需3小时。

● 方便观察:可使用流式细胞仪检测实验结果。

● 高正确性:有阳性对照的制备方法,可以确认试剂盒的有效性组 份 Cat: KGA-702720 assays Cat: KGA-703750 assaysCat: KGA-7047100 assays储存条件TdT Enzyme 80μL 200μL 400μL -20℃ FITC-12-dUTP 20μL 50μL 100μL -20℃EquilibrationBuffer1.0 mL2.5 mL 5.0 mL -20℃PI/RNase Buffer10mL 25mL 50mL -20℃ 注意事项1 使用前请认真阅读本说明书,提前准备好相关试剂。

细胞凋亡检测(Annexin-V-FITC 单染法)(Assay of Cell Apoptosis)

细胞凋亡检测(Annexin-V-FITC 单染法)(Assay of Cell Apoptosis)

细胞凋亡检测(Annexin-V-FITC 单染法)(Assay of CellApoptosis)2010-05-25 20:06:41 来源:易生物实验浏览次数:197 网友评论0 条细胞凋亡或称程序性细胞死亡(Programmed Cell Death ,PCD)是细胞的生命现象之一,它在机体的胚胎发育、组织修复及自身反应性T淋巴细胞的清除等方面起着十分重要的作用。

细胞凋亡调节的失控可导致临床各种疾病的发生。

如老年性痴呆与神经细胞凋亡过度有关,自身免疫性疾病和肿瘤与细胞凋亡的抑制有关。

细胞凋亡有别于细胞坏死,它有一系列的细胞形态学和生物化学的改变,包括出现染色质浓缩、DNA降解、凋亡小体形成等。

关键词:细胞检测单染法细胞凋亡检测Annexin-V-FITCAssayCellApoptosis一、实验原理细胞凋亡或称程序性细胞死亡(Programmed Cell Death ,PCD)是细胞的生命现象之一,它在机体的胚胎发育、组织修复及自身反应性T淋巴细胞的清除等方面起着十分重要的作用。

细胞凋亡调节的失控可导致临床各种疾病的发生。

如老年性痴呆与神经细胞凋亡过度有关,自身免疫性疾病和肿瘤与细胞凋亡的抑制有关。

细胞凋亡有别于细胞坏死,它有一系列的细胞形态学和生物化学的改变,包括出现染色质浓缩、DNA降解、凋亡小体形成等。

在正常的活细胞,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在凋亡的细胞,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。

Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。

因此将Annexin-Ⅴ进行荧光素(如FITC、PE)或生物素(Biotin)标记,以标记了的Annexin-Ⅴ作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

二、实验仪器和材料Annexin V-FITC(膜联蛋白-V-FITC)500μl/250μl 20μg/ml标记缓冲液(Binding Buffe)r 40/20 mlPBS(1×)60/30 ml20μl , 200μl , and 1000μl 移液器和吸头微量离心管可调速离心机载玻片(用于荧光显微镜观察)盖玻片(用于荧光显微镜观察)去离子水冰块流式细胞仪或荧光显微镜三、实验方法1.凋亡细胞的制备:小鼠腹腔注射地塞米松25mg/kg体重,10h后解剖取胸腺,分离胸腺细胞。

一文掌握AnnexinV-FITCPI细胞凋亡实验方法

一文掌握AnnexinV-FITCPI细胞凋亡实验方法

一文掌握AnnexinV-FITCPI细胞凋亡实验方法一、技术原理细胞凋亡(apoptosis)是指细胞在一定的生理或病理条件下,受内在遗传机制控制,按照自身程序主动性、生理性的死亡过程。

细胞凋亡受凋亡相关基因调控,故又称为程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)。

一般来说,凋亡早期,主要涉及胞内一些蛋白的变化,例如蛋白量的增高、位置的迁移、状态的改变等,还有一些磷脂、Ca2+的变化等;中晚期则伴随着DNA的断裂、凋亡小体的形成;而细胞形态的改变则伴随着整个凋亡过程。

二、产品应用目前可以采用单染色法和双染色法对细胞进行染色,流式细胞仪检测或荧光显微镜观察来检测细胞凋亡,其中Annexin V/PI法是当下较为流行的检测细胞凋亡的方法。

正常细胞中,磷脂酰丝氨(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡细胞中,PS会从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。

Annexin-V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。

用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的Annexin-V作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生;碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。

因此将Annexin-V 与PI结合使用,就可以检测出细胞群体中的早期凋亡细胞与晚期凋亡细胞。

Apoptosis-AnnexinV 检测示意图碘化丙啶PI检测示意图三、使用方法1悬浮细胞,2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎,造成假阳性,过短,细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶消化液,加入细胞培养液终止消化,,2000rpm离心5min收集细胞;24℃预冷PBS,洗涤细胞2次(2000rpm x 5min),收集细胞2~5×105 ;3离心弃上清,加入500μL结合缓冲液,轻轻吹打重悬细胞;4加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)说明书

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)说明书

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)说明书货号:CA1040规格:25T/50T保存:-20℃保存,FITC-dUTP需避光保存。

如果频繁使用(一周内),5×Reaction Buffer,FITC-dUTP和抗荧光淬灭封片剂可2-8℃保存。

产品简介:一步法TUNEL细胞凋亡检测是一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。

对于经过固定和洗涤的细胞或组织,只要经过一步染色反应,洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到凋亡细胞。

细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。

细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以观察到180-200bp的DNA ladder。

基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP),从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL(TdT--mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。

TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂,但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。

这样一方面可以把凋亡和坏死区分开,另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。

极少数细胞凋亡时没有DNA断裂,此时不适用TUNEL法检测。

在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。

在需要严格判断细胞凋亡的情况下,最好同时检测多个凋亡指标。

产品内容:试剂名称包装包装TdT酶25μl50μlFITC-dUTP25μl50μl5×Reaction Buffer400μl2×400μl抗荧光淬灭封片剂 2.5ml5ml说明书1份1份注意事项:用户需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS,用于固定的4%多聚甲醛,同时需自备含0.1%Triton X-100的PBS。

Annexin V-FITC PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒说明书

Annexin V-FITC   PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒说明书

Annexin V-FITC / PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒货号: P-CA-201规格: 20Assays / 50Assays / 100Assays / 200Assays产品编号产品名称20Assays 50Assays 100Assays 200Assays Storage P-CA-101 Annexin V-FITC 染色液100 μL250 μL500 μL 1 mL 2~8℃. 避光P-CA-151 Annexin V Binding Buffer(10×) 1.4 mL×2 5.5 mL 11 mL 11 mL×2 2~8°C 碘化丙啶(PI)染色液P-CA-161 100 μL250 μL500 μL 1 mL 2~8℃, 避光说明书一份保存条件2~8℃可保存1年。

Annexin V-FITC禁止冷冻保存。

实验原理Annexin V-FITC/PI 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒,可用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡。

Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸(PS) 有高度亲和力。

当细胞发生凋亡时,膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS) 外翻到膜表面,而被荧光染料FITC标记的Annexin V结合,可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。

由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可与双链DNA特异性结合并产生强烈的荧光,与Annexin V搭配使用,可区分处于不同凋亡时期的细胞。

本试剂盒检测喜树碱诱导的Jurkat细胞凋亡效果如下图所示:Jurkat细胞用 5 μM喜树碱(Camptothecin)(左) 或未加药(右) 处理4 h,本试剂盒染色后流式检测。

Annexin V-FITC单阳细胞为早期凋亡细胞,AnnexinV-FITC和PI双阳细胞为坏死或晚期凋亡细胞,PI单阳细胞为裸核细胞。

annexin v-fitc细胞凋亡检测原理

annexin v-fitc细胞凋亡检测原理

annexin v-fitc细胞凋亡检测原理Annexin V-FITC细胞凋亡检测是一种常用的细胞凋亡检测方法,适用于多种细胞类型和实验体系。

通过该方法可以方便、准确地检测凋亡细胞的数量和比例。

细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式,与细胞发育、组织维持和免疫应答等多个生物学过程密切相关。

细胞凋亡的特征包括细胞膜破裂、核染色质凝聚、DNA断裂和细胞内炎性细胞因子释放等。

AnnexinV是一种细胞外磷脂结合蛋白,其结合于凋亡细胞外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)残基上。

而FITC(荧光同种异质体)是一种绿色荧光染料,可以用于免疫荧光标记。

Annexin V-FITC细胞凋亡检测原理基于以下三个主要步骤:标记、联合染色和流式细胞术检测。

第一步是标记。

使用Annexin V-FITC试剂盒对细胞进行标记。

该试剂盒通常由Annexin V-FITC(荧光标记的Annexin V),PI(荧光标记的胸腺嘧啶酮)和缓冲液组成。

在细胞凋亡发生时,细胞外翻的PS残基提供了Annexin V-FITC的结合位点。

同时,凋亡细胞的细胞膜通透性增加,PI能够穿透细胞膜并结合于DNA,标记死亡细胞。

第二步是联合染色。

标记的细胞与Annexin V-FITC和PI共同染色。

Annexin V-FITC结合于凋亡细胞的表面,PI则进入凋亡细胞内染色DNA。

在细胞健康和未发生凋亡的状态下,细胞内PS残基位于细胞膜内,Annexin V-FITC不会结合于细胞表面,而PI也不能进入细胞内。

对于已死亡或坏死的细胞,Annexin V-FITC和PI均能结合。

第三步是流式细胞术检测。

通过使用流式细胞术技术,即流式细胞仪,可以对联合染色的细胞进行分析。

流式细胞仪是一种能够对细胞进行快速检测和分析的仪器。

Annexin V-FITC标记的细胞会在流式细胞仪中产生绿色荧光,而PI标记的细胞会产生红色荧光。

利用激光束对细胞进行激发后,可以根据细胞荧光的强度,将细胞分为四个不同的亚群:Annexin V-FITC和PI双阴性(活细胞)、Annexin V-FITC 阳性和PI阴性(早期凋亡细胞)、Annexin V-FITC和PI双阳性(晚期凋亡细胞)、Annexin V-FITC阴性和PI阳性(死亡细胞)。

Annexin V 凋亡检测试剂盒说明书_PF032

Annexin V 凋亡检测试剂盒说明书_PF032

Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit目录货号PF032包装包装::1 试剂盒组分组分::100次检测形式形式::流式细胞仪或荧光显微镜检测方法检测方法::荧光测定种属特异性种属特异性::可适用于许多种属储存储存::Annexin V-FITC 试剂盒组分用干冰运输,4°C 储存。

为了防止由于沾在管盖上造成的试剂损失,移除管盖前需要轻轻旋转使沾在管盖上的液体落入管内。

请参考注意事项和操作建议。

适用范围适用范围::Calbiochem® Annexin V-FITC Apoptosis Detection 试剂盒是一种非同位素检测方法,可以检测伴随着细胞死亡发生的细胞膜的变化。

检测手段包括流式细胞仪或荧光显微镜。

背景背景::凋亡是细胞死亡的一种基本形式,它在胚胎发育,组织分化和一些疾病发生过程中起着重要的调控作用。

在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS )位于细胞膜内侧,一旦发生细胞凋亡,可以从细胞膜的内侧迅速翻转到细胞膜外侧,使得PS 暴露在细胞膜表面。

在体内,巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除,因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应,而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。

在体外可以用PS 与抗凝血剂annexin V 的相互作用检测外翻的PS 。

在Ca2+存在的情况下,annexin V 与PS 有很高的亲和力,可以与之迅速结合。

PS 外翻发生在细胞核破裂,DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前,这使得annexin V 与PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。

检测原理检测原理::在该方法中,基于流式细胞仪和荧光显微镜,FITC 标记的annexin V 可以用来检测细胞凋亡。

由于细胞坏死的过程中也会发生细胞膜通透性增强,坏死的细胞同样也会结合annexin V-FITC 。

因此,propidium iodide (PI )被用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。

annexin v-fitc细胞凋亡检测原理

annexin v-fitc细胞凋亡检测原理

annexin v-fitc细胞凋亡检测原理Annexin V-FITC(荧光素I同型体)细胞凋亡检测是一种常用的流式细胞术,用于检测细胞凋亡的早期事件。

该方法基于细胞表面的磷脂酰丝氨酸(PS)的外露,这是许多凋亡细胞的特征之一。

Annexin V是一种结合于PS上的蛋白质,它与FITC标记结合后,可以通过流式细胞仪检测到荧光信号。

以下是Annexin V-FITC细胞凋亡检测的基本原理:1.PS外露:在细胞凋亡过程中,磷脂酰丝氨酸(PS)会从细胞内层翻转到胞外层,暴露在细胞表面。

这一步骤是凋亡的早期事件之一,通常在细胞膜破裂之前发生。

2.Annexin V的结合:Annexin V是一种蛋白质,具有高亲和力与PS结合。

在细胞表面的PS外露后,Annexin V能够结合到PS上形成Annexin V-PS复合物。

3.FITC标记:Annexin V-FITC是一种带有荧光素I同型体(FITC)标记的Annexin V。

FITC是一种荧光标记,可以通过流式细胞仪检测。

4.流式细胞仪检测:经过Annexin V-FITC标记的细胞在流式细胞仪中被激发,FITC会发出荧光信号。

通过检测FITC的荧光信号,可以识别PS外露的细胞,从而确定细胞是否经历了凋亡。

通过Annexin V-FITC细胞凋亡检测,可以将细胞分为四个主要类别:活细胞(Annexin V-FITC和PI均阴性)、早期凋亡细胞(Annexin V-FITC阳性、PI阴性)、晚期凋亡细胞(Annexin V-FITC和PI均阳性)和坏死细胞(Annexin V-FITC阴性、PI阳性)。

这种方法常用于研究药物诱导的细胞凋亡、细胞毒性等生物学过程。

fitc和pi试剂盒原理

fitc和pi试剂盒原理

fitc和pi试剂盒原理一、引言FITC(Fluorescein Isothiocyanate)和PI(Propidium Iodide)试剂盒是生物医学研究中常用的荧光染料试剂盒,用于细胞活力和细胞凋亡的检测。

本文将介绍FITC和PI试剂盒的原理及其在实验中的应用。

二、FITC试剂盒原理FITC试剂盒是一种用于细胞活力检测的荧光染料试剂盒。

FITC是一种绿色荧光染料,具有良好的水溶性和细胞渗透性。

FITC试剂盒通过测量细胞内的活性蛋白酶活性来评估细胞的活力水平。

FITC试剂盒的原理是利用FITC染料与活性蛋白酶底物(如Calcein-AM)结合后的荧光信号来反映细胞的活力。

在活力高的细胞中,FITC染料会与底物结合,产生强烈的荧光信号;而在活力低的细胞中,底物无法被FITC染料结合,因此荧光信号较弱。

通过测量荧光信号的强度,可以判断细胞的活力水平。

三、PI试剂盒原理PI试剂盒是一种用于细胞凋亡检测的荧光染料试剂盒。

PI是一种红色荧光染料,可与细胞核酸结合。

在正常的细胞中,细胞膜完整,PI无法进入细胞核,因此没有荧光信号;而在凋亡细胞中,细胞膜破损,PI可以进入细胞核,与核酸结合产生红色荧光。

PI试剂盒的原理是通过测量细胞核的红色荧光信号来判断细胞的凋亡水平。

在正常的细胞中,凋亡水平较低,红色荧光信号较弱;而在凋亡细胞中,凋亡水平较高,红色荧光信号较强。

通过测量荧光信号的强度,可以评估细胞的凋亡情况。

四、FITC和PI试剂盒的应用FITC和PI试剂盒广泛应用于生物医学研究中的细胞生物学、免疫学和药物研发等领域。

1. 细胞活力检测FITC试剂盒可以用于评估细胞的活力水平。

通过测量FITC荧光信号的强度,可以判断细胞的活力水平。

该方法可用于筛选具有促进细胞活力的化合物,或评估细胞对外界刺激的响应能力。

2. 细胞凋亡检测PI试剂盒可以用于检测细胞的凋亡水平。

通过测量PI荧光信号的强度,可以评估细胞的凋亡情况。

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凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒
(Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit)
Cat number:KGA For Research Use Only
Store at4℃for one year
Expire date:
一、试剂盒说明
在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。

Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。

因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。

二、试剂盒组份
组份Cat: KGA105
(10 assays) Cat: KGA106
(20 assays)
Cat: KGA107
(50 assays)
Cat: KGA108
(100 assays)
储存条件
AnnexinV-FITC 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光
Propidium Iodide 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光
Binding Buffer 5 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 4℃
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器
1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片(荧光显微镜观察需用)、PBS、不含EDTA的胰酶消化液
四、使用注意事项
1.微量试剂取用前请离心集液。

2.Annexin V-FITC,Propidium Iodide (PI)避光保存及使用。

3.Propidium Iodide (PI)有毒,操作时要戴手套。

4.本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。

5.推荐使用悬浮培养细胞。

如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。

可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA
的PBS中,防止进一步的损伤。

6.细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。

7.因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。

五、操作方法
1.悬浮细胞离心(2000rpm离心5min)收集;贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不易过长,否则容易引起假阳性);
2.用PBS洗涤细胞二次(2000rpm离心5min)收集1~5×105细胞;
3.加入500μL的Binding Buffer悬浮细胞;
4.加入5μL Annexin V-FITC混匀后,加入5 μL Propidium Iodide,混匀;
5.室温、避光、反应5~15min;
6.请在1 hour内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。

A.荧光显微镜观察
1.滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;
2.对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;
(1)将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;
(2)用PBS洗涤细胞两次;
(3)在500μL 的Binding Buffer中加入5μL Annexin V-FITC,5 μL Propidium Iodide,混匀;
(4)将上述溶液滴加于盖玻片表面,使盖玻片表面均匀覆盖;
(5)避光、室温反应5 min。

3.将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下、双色滤光片(FITC和罗丹明)观察
Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。

B.流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测,激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=530 nm。

Annexin V-FITC的绿色荧光通过FITC通道(FL1)检测;PI红色荧光通过PI通道(FL2或FL3)检测,建议使用FL3。

荧光补偿调节:使用未经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。

六、实验范例
用凋亡诱导剂诱导P388细胞凋亡,在37o C,5%CO2培养箱培养4~6h后,参照说明书的操作方法进行检测,经流式细胞仪检测结果见下图。

七、凯基相关产品(详见凯基网站)
细胞株、细胞提取物及细胞培养产品
细胞凋亡
细胞凋亡研究试剂盒细胞凋亡相关抗体
凋亡诱导剂、抑制剂氧化应激损伤检测试剂盒细胞增殖/毒性/活力与细胞周期
细胞染色产品
亚细胞组分制备
对照诱导剂处理。

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