凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒显色法-碧云天
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品简介：碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是本试剂盒通过TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
TUNEL-roche使用流程
In situ cell death detection kit-POD法一、原理：TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）把荧光素（fluorescein）标记的dUTP（三磷酸脱氧尿甘）连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，HRP又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。
还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。
二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含TdT 10×、荧光素标记的dUTP 1×、标记荧光素抗体的HRP；自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5 μl 20×DAB+1μL 30%H2O2+94 μl PBS）、Proteinase K工作液（10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl， pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 in 0.1% sodium citrate，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DNase 1（3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl，pH 7.5， 10 mM MgCl2，1 mg/ml BSA）等。
一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒红色TRITC标记荧光检
一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒（红色 TRITC 标记荧光检测法，通用型）说明书修订日期：2018.07.31 Catalog No.：KGA7061 / KGA7062 / KGA7063Storage：-20℃ for 12 months,避光For Research Use Only（科研专用）一、TUNEL 检测原理凯基一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(TRITC红色荧光标记，通用型)提供一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法，可检测细胞在凋亡过程中细胞核 DNA 的断裂情况，其原理是红色荧光素（Tetramethylrhodamine，TRITC）标记的 dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂 DNA 的3′－OH 末端，可用荧光显微镜检测。
由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 的断裂，因而没有3′-OH 形成，很少能够被标记。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片或爬片）的凋亡原位检测。
对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜检测到凋亡细胞。
二、TUNEL 试剂盒组分运输及保存条件：2-8℃低温运输，收到后-20℃避光保存，保质期一年。
实验前准备：实验前按说明书准备好相应试剂与器具，多聚甲醛、二甲苯、乙醇、1×PBS pH 7.4、H2O2、Triton X-100、甲醇、多聚赖氨酸铺载玻片（细胞样本）、盖玻片、染色缸、温盒、量筒等。
三、操作步骤各个样本请用免疫组化笔做好标记，另外加 2 张样本切片分别用于阳性片和阴性片制备并做好标记。
在每步反应或浸洗的间隙时，配制下一步即用的工作液。
注意事项反应液最好根椐计算好的样本数量集中配制，再分别滴加于各样本上，避免因每个样本单独配制而产生的试剂损耗，TdT 酶反应液如需短暂保存时，请置于冰上。
tunel法检测细胞凋亡实验步骤
tunel法检测细胞凋亡实验步骤细胞凋亡是一种重要的生物学过程，它在多种生理和病理情况下发挥着关键作用。
为了研究细胞凋亡的机制和调控，科学家们发展了多种方法来检测细胞凋亡。
其中一种常用的方法是使用tunel法。
本文将介绍tunel法检测细胞凋亡的实验步骤。
实验步骤如下：1. 细胞培养和处理我们需要选择一种适合的细胞系进行实验。
常用的细胞系有HEK293、HeLa和Jurkat等。
将细胞培养在含有适当培养基和补充物的培养皿中，并在37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中培养至细胞密度适当。
在进行实验之前，需要根据实验设计的需要处理细胞。
例如，可以给予细胞不同的处理，如药物刺激、放射线照射或感染病毒等。
2. 固定细胞将处理后的细胞用适当的缓冲液进行固定。
常用的缓冲液有4%的乙醛或4%的甲醛等。
将缓冲液加入培养皿中，使细胞完全覆盖，并在室温下固定15分钟。
3. 洗涤细胞将固定的细胞用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3次，每次5分钟。
洗涤的目的是去除固定液中的残留物质，以减少后续步骤中的非特异性背景。
4. 使细胞透膜使用蛋白酶K或蛋白酶XXIV等酶将细胞膜上的蛋白质降解，使细胞透膜。
将适量的酶加入细胞中，根据实验的需要，可以调整酶的浓度和作用时间。
一般来说，酶的浓度为20μg/ml，作用时间为30分钟。
5. tunel反应使用tunel试剂盒进行细胞凋亡检测。
tunel试剂盒中含有标记有荧光物质的dUTP，可以与DNA断裂的末端结合。
按照试剂盒说明书的要求，将tunel试剂加入细胞中，与细胞中的DNA断裂末端发生连接反应。
反应时间一般为1-2小时。
6. 洗涤和染色将反应结束后的细胞用PBS洗涤3次，每次5分钟。
然后，可以选择使用荧光染料（如DAPI）染色，以标记细胞核。
将染色液加入细胞中，孵育15分钟后再次用PBS洗涤。
7. 显微镜观察和图像获取将处理后的细胞放置在显微镜载玻片上，并使用合适的显微镜观察细胞。
可以调整显微镜的放大倍数和焦距，以获得清晰的图像。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)说明书
TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品编号 产品名称包装 C1098TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)50次产品简介：碧云天生产的显色法TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB 显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA 内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA 。
细胞凋亡时抽提DNA 进行电泳检测，可以发现180-200bp 的DNA ladder 。
基因组DNA 断裂时，暴露的3'-OH 可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP 的催化下通过DAB 显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：背景染色极低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA 断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性好：TUNEL 检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
(5) 实测效果好：参考图1。
图1. 本试剂盒的检测效果图。
A. HeLa 细胞未处理或用DNase I 室温孵育10分钟后的检测效果图。
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤精
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤精TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling）细胞凋亡试剂盒是一种常用的检测细胞凋亡的方法。
本文将介绍TUNEL细胞凋亡试剂盒的内容及操作步骤。
1.引物溶液：含有dUTP（脱氧尿苷三磷酸）的荧光标记的核苷酸。
2.终止缓冲液：用于停止反应和洗涤。
3. TUNEL酶溶液：含有DNA连接酶（terminal deoxynucleotidyl transferase），用于在DNA断裂的末端添加dUTP标记。
4.正对照组：包括经过DNA内切酶处理的组织切片或细胞，用于确定试剂盒的反应情况。
步骤一：取材将需要检测的组织切片或细胞标本取出，放入离心管或培养皿中。
步骤二：固定用4%的冷乙醇或4%的帕拉醛对组织切片或细胞标本进行固定，固定时间为10-30分钟。
步骤三：洗涤用PBS（磷酸盐缓冲液）洗涤固定的样本3次，每次洗涤5分钟。
步骤四：蛋白酶消化对组织切片或细胞标本进行蛋白酶消化，以去除背景蛋白质干扰。
消化时间和消化酶的浓度需要根据实验条件进行优化。
步骤五：洗涤用PBS洗涤样本3次，每次洗涤5分钟。
步骤六：加入TUNEL酶溶液将TUNEL酶溶液滴加到样本上，保持湿润。
反应时间为1-2小时，可以根据实验需要进行优化。
步骤七：终止反应加入终止液停止反应，并用PBS洗涤样本3次，每次洗涤5分钟。
步骤八：显微镜观察将样本用荧光或显色试剂染色，然后用荧光显微镜或普通显微镜观察，并拍摄照片。
步骤九：分析数据使用图像分析软件对显微镜拍摄的照片进行图像分析，在感兴趣区域计算标记的细胞数量，并计算相对细胞凋亡率。
值得注意的是，在进行TUNEL细胞凋亡试剂盒检测时，需要根据实验需要进行优化，如反应时间、荧光染色时间、荧光强度测量等。
此外，为了准确地判断细胞中的凋亡现象，可以与其他细胞凋亡指标一起使用，如Annexin V染色、Caspase活性检测等。
凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒
凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)（BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本）使用说明书一、TUNEL制品说明凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况，其原理是生物素（biotin）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘－OH末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。
本试剂盒特点●操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有Proteinase K 和DAB。
●高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。
●高特异性：能特异性染色凋亡细胞。
●快速操作：整体操作约需3小时。
●用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。
●方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。
●高正确性：有阳性对照片的制备方法，可以确认试剂盒的有效性使用注意事项1．使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。
2．因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。
3．为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。
4． TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。
5. 为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。
6. 固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜，以改善细胞的渗透性。
kga101 n凯基annexin vegfp细胞凋亡检测试剂盒说明书
凯基Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit）Cat number：KGA For Research Use OnlyStore at4℃ for one yearExpire date：一、 试剂盒说明在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。
Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
与FITC的绿色荧光信号相比，EGFP的绿色荧光信号具有信号强，不易淬灭，稳定性高等优点，故本试剂盒采用EGFP作为荧光标记探针。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。
因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。
二、 试剂盒组份组份Cat: KGA10110 assays Cat: KGA10220 assaysCat: KGA10350 assaysCat: KGA104100 assays储存条件AnnexinV-EGFP 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光Propidium Iodide 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光Binding Buffer 5 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 4℃三、 试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液四、 使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
翻译好的罗氏公司Tunel试剂盒操作说明方案
罗氏(R o c h e)公司T u n e l试剂盒操作说明书(Insitucelldeathdetectionkit-POD法)一、原理：TUNEL（TdT-mediateddUTPnickendlabeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdTEnzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radishperoxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。
还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。
二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含：1号（蓝盖）EnzymeSolution酶溶液：TdT10×、2号（紫盖）LabelSolution标记液：荧光素标记的dUTP1×、3号（棕瓶）Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP；自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5μl20×DAB+1μL30%H2O2+94μlPBS）、ProteinaseK工作液（10-20μg/mlin10mMTris/HCl，pH7.4-8）或细胞通透液（0.1%TritonX-100溶于0.1%柠檬酸钠，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DNase1（3000U/ml–3U/mlin50mMTris-HCl，pH7.5，10mMMgCl2，1mg/mlBSA）等。
一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒
一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒产品简介：碧云天生产的一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。
注：FITC是fluorescein isothiocyanate的缩写，实际上大多数情况下所谓的FITC即为fluorescein。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约1-2个小时即可完成。
(4) 方便：只需一步染色反应，洗涤后即可观察，不必使用二抗等进行多步操作。
(5) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒AP显色系统
Human atrial natriuretic factor,ANF ELISA Kit人心纳素(ANF)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒AP显色系统
Human Stromelysin-1,ST1 ELISA Kit人基质裂解素(ST1)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Stromelysin-2,ST2 ELISA Kit人基质裂解素(ST2)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin E,FcεRⅠ ELISA Kit人免疫球蛋白E Fc段受体Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅢ ELISA Kit人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA Kit 96TELISA试剂盒
Human Eotaxin 2/CCL24 ELISA Kit人嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)ELISA Kit96TELISA试剂盒
Human lymphocyte function associated antigen 1,LFA-1 ELISA Kit人淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1/CD11a+CD18)ELISA Kit96TELISA试剂盒
TUNEL说明书
不适用于诊断，仅供生命科学实验使用。
仅供体外使用。
TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（标记POD）本试剂盒可标记DNA链末端，即TUNEL技术。
用于单个细胞水平凋亡（细胞程序性死亡）的免疫组织化学检测和定量分析。
光镜检测。
批号：11684817910一盒可用50次储存：-15—-25℃操作指南2006.01.1.2 试剂盒组成注意事项本品标记溶液含有二甲基砷酸盐，容易被吸入而产生毒性和导致呕吐；也含有二氯化钴，吸入后容易致癌。
因此应避免接触并遵循相关的操作说明。
使用过程中不能吃、喝和抽烟。
如果接触到皮肤，应立即用大量水冲洗干净。
如果感觉不适或者突发其它情况，应立即就医。
酶标反应应在致密的、无损坏的容器中进行，收集上清液后应标明成分。
垃圾应作为有毒废物进行处理。
注意：与先前的试剂盒/管不同，次试剂盒的酶溶解液不再含有毒的二甲砷基酸盐，因此瓶1没有毒性。
试剂盒组成请参照下表对比试剂盒组成试剂盒外自备仪器和试剂出上表所列试剂外，实验者需制备系列溶液。
下表列出了在不同实验步骤中所需要的试剂。
在每步操作前都给出了详细的说明。
2 引言2.1 产品描述实验原理在细胞凋亡过程中，基因组DNA 会断裂产生双链、低分子量的DNA 片段和高分子量的单链DNA 断端（缺口），这些DNA 链缺口可以利用酶标记核苷酸3’末端方法来识别。
应用原位细胞凋亡检测试剂盒具有准确、快速、简单、非辐射等特点，可以用来对细胞或者组织中的单个细胞进行检测并定量，因而次法被用在很多分析系统中，例如：●在基础研究和日常病理中检测冰冻和福尔马林固定的组织切片。
●在肿瘤研究和临床癌基因研究中确定某些恶性肿瘤对某种药物的敏感性。
●通过双染色操作，确定经历死亡的异常增生细胞的分型。
专一性TUNEL反应可以更好的标记通过凋亡产生的DNA链末端，因此就可以区分出凋亡与坏死，以及由抗肿瘤药物或者放射诱发的初始DNA链末端。
试验干扰假阴性：在某些形式的细胞凋亡中，DNA逃逸酶切或者不完全（37）。
TUNEL 绿色荧光检测试剂盒 说明书
4.2. DNA 酶处理阳性对照的步骤（可选的）............................................................................... 8
4.3. 标记及检测 .......................................................................................................................... 9
4. 4. 流式细胞术检测悬浮细胞的步骤 ..................................................................................... 11
五、 操作实例：喜树碱（Camptothecin）诱导的 HL-60 细胞凋亡的检测 ................................ 12
TUNEL 绿色荧光检测试剂盒 M3026
用户手册
TUNEL 绿色荧光检测试剂盒
Fluorescence and Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit
用户手册
产品编号：M3026 M3026-1 50 次
上海美季生物技术有限公司
上海市中山南二路 777 号 2 号搂 2303
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本 use only. Not for human or diagnostic use.
TUNEL 法测凋亡操作步骤
TUNEL 法测凋亡操作步骤一、TUNEL检测原理TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是采用非同位素方法来检测细胞在凋亡过程中DNA 的断裂情况，可在原位快速准确地检测单个凋亡细胞。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。
其原理是细胞凋亡发生时，内源性核酸酶激活，使DNA的双链断裂或一条链出现缺口，产生一系列3’-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）作用下，组织细胞原位DNA切口可被标记上生物素-dUTP，即TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl TransferaseBiotin-dUTP Nick End Labeling），可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，显示为棕色（过氧化物酶活性），特异准确地定位正在凋亡的细胞，在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正的或正在增殖的细胞几乎没有DNA 的断裂，因而没有3'-OH 形成，很少能够被染色。
二、试剂盒组份组份10 assays25 assays 储存条件A：Equilibration Buffer 1.0 mL 2.5 mL -20 ℃B：Biotinylated Nucleotide Mix 10 μL 25 μL -20 ℃C：TdT Enzyme 10 μL 25 μL -20 ℃D：500×Proteinase K 10 μL 25 μL -20 ℃20×SSC 15 mL 38mL 4 ℃E：Streptavidin-HRP 10 μL 25 μL 4 ℃F：20×DAB Substrate Buffer 50 μL 125 μL 4 ℃G：20×DAB Chromogen 50 μL 125 μL 4 ℃H：20×Hydrogen Peroxide 50 μL 125 μL4 ℃三、操作流程1.操作流程概览2.细胞样本制备准备：● PBS：8.0g NaCl， 0.2 g KCl， 1.44g Na2HPO4，0.24g KH2PO4，溶于800ml去离子水中，HCl调pH至7.4，加水定容至1L。
TUNEL染色方法
U /100µl
1000 U-2000 U 2000 U-3000 U 3000 U-5000 U
DNaseⅠ(50 U/µl) 用量
20μl-40μl
40μl-60μl
60μl-100μl
DNaseⅠBuffer 用量
80μl-60μl
60μl-40μl
40μl-0μl
9. 在一张样本上滴加 100µl 上述配制好的 DNaseⅠ反应液，室温～37℃处理 10～30min，
Streptavidin-HRP，即用即配，注意避光；
15. 样本周围用吸水纸吸干，每个样本上滴加 50µl Streptavidin-HRP 工作液，加盖玻片放入温盒中，37℃
避光反应 30min；
16. 反应后的样本片浸入 1×PBS 漂洗三次，每次 5min;
17. 配制 DAB 工作液: 计算好样本数量集中配制， 每个样本样本用量为：50 µl dH2O 加入 2.5µl DAB -A
一、TUNEL 检测原理
凯基快速型 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核 DNA 的断裂情况， 其原理是生物 素（Biotin）标记的 dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂 DNA 的 3′-OH 末端，并可与连接辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨 基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微 镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 的断裂，因而没有 3′-OH 形成，很少能 够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片或爬片）的凋亡原位检 测。
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤一、试剂盒内容2.终止缓冲液：用于停止DNA链的合成反应，防止假阳性结果的产生。
3.蛋白酶K：用于溶解细胞质膜和核膜，使DNA暴露出来。
4.异硫氰酸荧光素（FITC）标记转移酶：用于检测dUTP与DNA标记的连接。
5.正控组织切片或细胞悬液：用于检验试剂盒的敏感性和特异性。
二、操作步骤1.细胞处理将要测试的细胞分成实验组和对照组，分别处理。
实验组是要测试凋亡的细胞，对照组是不会凋亡的细胞。
2.固定细胞用4%的乙醛或无氧乙醛等适当浓度的固定液固定细胞。
涂片上的细胞需要进行细胞穿孔，可以使用0.1%的Triton X-100进行细胞穿孔。
3.蛋白酶K消化将蛋白酶K溶解在PBS缓冲液中，加入溶液中胶原酶和蛋白酶蚀解，接着加入盛有细胞的离心管中。
将离心管放入37℃恒温水浴中，反应20-30分钟。
4.清洗细胞用PBS缓冲液洗涤细胞3次。
每次用PBS缓冲液冲洗细胞5分钟。
5.脱水将细胞离心，抽去PBS缓冲液，然后使用3%的过氧化氢来进行脱水。
6.TUNEL染色将细胞加入等量的TUNEL试剂液，轻轻混合后，将离心管放入37℃恒温水浴中，反应30-60分钟。
7.洗涤细胞用PBS缓冲液洗涤细胞3次。
每次用PBS缓冲液冲洗细胞5分钟。
8.反应终止使用终止缓冲液反应终止DNA链合成反应，将离心管放入室温中静置10分钟。
9.洗涤细胞用PBS缓冲液洗涤细胞3次。
每次用PBS缓冲液冲洗细胞5分钟。
10.展片与观察将细胞滴在载玻片上，并加入封片缓冲液。
在载玻片上覆盖盖玻片，用显微镜观察。
通过上述步骤，可以使用TUNEL细胞凋亡试剂盒对细胞进行凋亡分析。
该试剂盒可根据DNA末端的3'-OH羟基与终止缓冲液中标记的dUTP之间的连接，用显微镜观察细胞内是否存在凋亡现象。
荧光标记的dUTP可通过荧光显微镜直接观察，而酶标记的dUTP则需要加入相应的底物，通过酶的催化反应后可通过光学密度法或荧光显微镜来定量测定。
TUNEL细胞凋亡检测(荧光标记)操作流程
一、TUNEL实验试剂(1)DeadEnd™Fluorometric TUNEL System试剂盒购自Promega公司(产品编号G3250)(2)二甲苯购自国药集团化学试剂有限公司（产品编号80139118，CAS号108-38-3，500ml）(3)无水乙醇购自中国上海生工生物有限公司（产品编号ET0737-500ml）(4) 过氧化氢购自上海生工生物有限公司(产品编号H1976-500ml)(5) Proteinase K购自上海生工生物工程技术服务公司(产品编号BSP169-2ml)(6)多聚甲醛购自上海生工生物有限公司（产品编号PB0684-500g）(7) Propidium iodide购自Sigma（产品编号P4170-10MG）(8) SlowFade® Gold antifade reagent购自Life Technologies（产品编号36936）二、具体实验步骤A. 石蜡包埋组织预处理：1.二甲苯5min (500ml二甲苯)2.二甲苯5min（500ml二甲苯）3.无水乙醇5min（500ml无水乙醇）4.无水乙醇5min（500ml无水乙醇）5.80%乙醇5min（500x0.8=400ml无水乙醇）6.70%乙醇5min（500x0.7=350ml无水乙醇）7.PBS 5min（500ml）8.PBS 5min（500ml）9.PBS 5min（500ml）10.4%多聚甲醛in PBS，15min11.PBS 5min（500ml）12.PBS 5min（500ml）13.Proteinase K in PBS (100ul每个样品，共6ml), 8-10min14.PBS 5min（500ml）15.PBS 5min（500ml）16.4%多聚甲醛in PBS，5min17.PBS 5min18.PBS 5min共105分钟，实际约2个小时B. 凋亡检测1.每个样品，100ul平衡缓冲液覆盖细胞，室温5-10分钟2.在平衡细胞的同时，在冰上解冻核苷混合物，并且依照表1，准备足够量的用于所有实验的和可选阳性对照反应（见4.E节）的rTdT孵育缓冲液。
细胞凋亡试剂盒(FITC)
凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit）Cat number：KGA For Research Use OnlyStore at4℃for one yearExpire date：一、试剂盒说明在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。
Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。
因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。
二、试剂盒组份组份Cat: KGA105(10 assays) Cat: KGA106(20 assays)Cat: KGA107(50 assays)Cat: KGA108(100 assays)储存条件AnnexinV-FITC 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光Propidium Iodide 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光Binding Buffer 5 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 4℃三、试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液四、使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
说明书-凯基生物
凯基细胞DNA含量检测试剂盒（细胞周期）(Cell Cycle Detection Kit)Cat number：KGA512For Research Use OnlyPI Store at4℃/RNase A Store at-20℃for one yearExpire date：20140703一、试剂盒说明细胞周期（cell cycle）是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。
在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。
细胞周期又可以分为间期（interphase）和有丝分裂期(M phase)，细胞间期又常划分为休眠期（G0）,DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整个周期可表示为G1→S→G2→M。
DNA周期检测可用来反应细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。
利用细胞内DNA能够和荧光染料（如碘化丙啶--PI）结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样。
细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核裂解，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。
在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对900角光散射的能力增加或没有变化。
在细胞凋亡的晚期，前向角和900角光散射的信号均降低。
因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察凋亡细胞。
用PI对细胞进行染色，凋亡细胞由于总DNA量降低，于正常G0/G1细胞群前出现一DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1），细胞凋亡群。
本试剂盒可应用于培养细胞（悬浮、贴壁）的DNA含量（细胞周期）检测。
二、试剂盒组份组份KGA511（20assays）KGA512（50assays）储存条件RNase A 2.0mL 5.0mL-20℃Propidium Iodide（PI）8.0mL20.0mL4℃避光三、试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪、低速离心机、微量移液器、1.5m L Microtube、70％乙醇、PBS四、使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
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凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)（BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本）
使用说明书
一、TUNEL制品说明
凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA
的断裂情况，其原理是生物素（biotin）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘－OH末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH 形成，很少能够被染色。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。
本试剂盒特点
●操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有Proteinase K 和DAB。
●高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。
●高特异性：能特异性染色凋亡细胞。
●快速操作：整体操作约需3小时。
●用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。
●方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。
●高正确性：有阳性对照片的制备方法，可以确认试剂盒的有效性
使用注意事项
1．使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。
2．因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。
3．为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。
4． TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。
5. 为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。
6. 固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜，以改善细胞的渗透性。
7. 使用PBS清洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。
8. 进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。
9. DAB为固体粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10 mg/ml）后，按说明书显色使用。
二、TUNEL试剂盒组分
试剂盒以外自备仪器和试剂。