实验二淋巴细胞分离实验

原理
外周血
红细胞
1.093
粒细胞
单个核细胞 (PBMC) 血小板
淋巴细胞 单核细胞
1.092 1.075~1.090
1.030~1.035
Ficoll：1.077±0.001
稀
释
外
周
血
1500rpm,
20℃ , 30min
Ficoll百度文库
Ficoll
稀释的血浆、 血小板 PBMC
红细胞 粒细胞
实验步骤
实验二
小鼠脾脏淋巴细胞的分离
小鼠脾脏淋巴细胞的分离
? 目的 ? 原理 ? 实验步骤 ? 注意事项
目的
? 熟悉淋巴细胞和外周血单个核细胞 （PBMC）的分离方法
原理
? 脾脏各种血细胞的密度不尽相同， 利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作 密度梯度离心，使一定比重的细胞 群按相应密度梯度分布，从而将各 种血细胞加以分离。
实验步骤
? 5.加足量稀释液充分洗涤，1000 r/min 离心5min ，弃上清
? 6. 适量的培养基重悬细胞 ，计数
注意事项
? 1.在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢 加，以免冲散界面
? 2. 吸取单个核细胞层时，应避免吸出过 多的上清液或分层液而导致血小板污染
细胞计数
? 实验步骤 ? 注意事项
? 1.实验一获取的小鼠脾脏载玻片研磨 （研磨同时滴加1640培养液，保持细 胞活性）
? 2. 细胞混合液静置数分钟后吸管吸取， 沿倾斜的管壁缓缓加入淋巴细胞分层 液上方（Ficoll：血细胞=1：1）
实验步骤
? 3.2000r/min ，离心15min
? 4.沿管壁周缘轻轻吸取淋巴细胞层移 入另一试管中