淋巴细胞转化实验

淋巴细胞转化实验
材料
•RPMI-1640培养基
•胎牛血清（工作浓度20%灭活）
•青霉素（工作浓度100单位/毫升）
•链霉素（工作浓度100微克/毫升）
•LPS（每毫升含1000微克，工作浓度10ug每毫升）
•CSFE（DMSO溶解成1mM，工作浓度10-50μM ）
•移液器、枪头、吸管、细胞培养皿、15ml无菌离心管
方法
•取细胞悬液0.5毫升（6ⅹ106细胞）加入含有1.5毫升1640培养液的培养瓶中。

一皿为空白组，一皿为实验组。

•按每毫升营养液加10ugLPS 2ml的培养基则各加了20UL的LPS 。

•37℃孵育12小时。

•用DMSO制备1mM 的CFSE溶液。

用PBS或适当的缓冲液将其稀释成10-50μM 的CFSE溶液。

•实验组中加入200μl的CFSE（稀释的为50μM）。

在37℃培养细胞15-30分钟。

•用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。

•用490nm激发波长，530nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。