小檗碱的提取分离及结构鉴定
黄柏中小檗碱的提取、分离与鉴定（2010）实验报告
黄柏中⼩檗碱的提取、分离与鉴定（2010）实验报告实验三黄柏中⼩檗碱的提取、分离与鉴定(⼀)实验⽬的要求学习和掌握⼩檗碱的结构特点和特殊的理化性质，及⼩檗碱的⼀般提取精制⽅法。
(⼆)实验的基本原理1.⼩檗碱的提取原理根据⽔溶性季铵碱在⼄醇和碱⽔中溶解度⼤性质，利⽤⼄醇回流法和碱⽔提取法进⾏提取。
2.⼩檗碱的分离原理(1)利⽤⼩檗碱的盐酸盐在⽔中溶解度⼩（1：500），采⽤盐析法使⼩檗碱沉淀析出，达到纯化的⽬的。
(2)利⽤盐析法分离⼩檗碱(三)实验内容1. ⽤⼄醇回流提盐析法、醇索⽒提盐析法和碱渗漉提盐析法提取黄柏中盐酸⼩檗碱。
2. 溶剂重结晶精制盐酸⼩檗碱。
3. 薄层显⾊反应鉴定盐酸⼩檗碱(四)实验药材仪器与试剂1. 实验药材黄柏30g。
2. 仪器：250ml烧瓶、500ml烧杯，冷凝管、渗漉筒250ml，粉碎机、减压过滤装置、纱布、漏⽃，层析缸等。
3. 试剂：氧化钙，氨⽔，NaCI，盐酸、H2SO4，三氯甲烷，甲醇，⼄醇，改良碘化铋钾等。
(五)实验步骤及现象Day 1 （2011-5-21）1.⼩檗碱的提取(醇索⽒提盐析法)称取黄柏(图3-1)15.00g，粉碎成粗粉，⽤滤纸包成筒状，置于索⽒提取器(图3-2)中(长度要适宜，使滤纸筒正好位于提取器上下两孔之间)。
⽤棉花包住提取器侧管，防⽌蒸汽接触使侧管的温度过⾼。
⼀开始再烧瓶中加⼊105ml的95%⼄醇，量不够，回流4-5次颜⾊仍较深,后⼜补加少许。
⽔浴提取，刚开始提取液是黄⾊的（图3-3），回流七次后颜⾊变淡，⼤概⽤三个⼩时。
回流过程中由于溶沸腾，有些蒸汽直接从下⼝进⼊提取器，所以如果观察到颜⾊变淡反应程度不⼀定⾼（图3-4）。
取出烧瓶中的提取液加⽔约40mL，滤出沉淀，沉淀物深黄⾊，很黏。
向滤液中加⼊6.05g NaCl固体,溶解后静置过夜,得到黄⾊的固液混合物,固体很少抽滤⼲燥,得到粗提物(3-5)。
Day 2 （2011-5-22）2．精制产物过少，没有精制。
实验二 黄连中小檗碱的提取、分离和检识
实验二黄连中小檗碱的提取、分离和检识一、实验目的要求（一）掌握小檗碱的提取和精制方法。
（二）熟悉小檗碱的性质和检识方法二、实验原理本实验是根据游离小檗碱可溶于水，其盐酸盐难溶于水的性质进行提取的。
提取的原料可选用黄连、三棵针、十大功劳、黄柏皮等。
三、实验材料黄连粗粉层析滤纸（6×20cm）或薄层层析板稀硫酸（0.3％）石灰乳（新制）浓盐酸氢氧化钠试液丙酮稀硫酸（10％）漂白粉精制食盐广泛pH试纸活性炭浓硝酸正丁醇:醋酸:水（7:1:2）或（4:1:1）四、实验内容1、提取称取黄连根粗粉50g，用0.3％硫酸溶液（药材:酸液＝1:10）室温浸泡24h，过滤，收滤液；药渣同法操作一次，合并两次滤液，用石灰乳调滤液pH 10～12，静置过夜，过滤，滤液加入精制食盐使含盐量达6％的浓度，静置过夜，布滤，即得小檗碱粗品。
2、精制将上述得到的粗制小檗碱（勿需干燥）置于烧杯中，加入约50倍纯化水（的80ml），煮沸1分钟，搅拌使充分溶解，迅速抽滤，不溶物可再加纯化水30～40ml再煮一次，滤过，合并滤液，加浓盐酸调声pH1～2，放冷即可析出盐酸小檗碱精制品，减压过滤，并用少量70％乙醇洗涤结品，于80℃以下干燥，称重，计算提取率。
粗制品盐酸小檗碱亦可用乙醇为溶剂精制，将粗制品加50～60ml 95％乙醇，活性炭0.5g，水浴上回流煮沸半小时，抽滤，滤液放冷即析出盐酸小檗碱精制品，于80℃以下干燥即得。
3、检识反应（1）取盐酸小檗碱（实验产品）约50mg，加纯化水５ml，缓缓加热使溶解，加氢氧化钠试液2滴，产生橘红色，溶液经放冷后，过滤，滤液中加丙酮数滴，即产生黄色丙酮小檗碱的浑浊或沉淀。
（2）取盐酸小檗碱（实验产品）少许，加稀硫酸2ml温热溶解，再加漂白粉少许，振摇后即产生樱红色。
（3）于盐酸小檗碱的水溶液（3～4ml），滴加浓消酸数滴，溶液产生黄绿色硝酸小檗碱沉淀。
4、纸层析检识（或用薄层层析检识）层析材料中速层析滤纸（5×20cm）展开剂正丁醇:醋酸:水（7:1:2或4:1:1）显色剂紫外灯下观察荧光或自然光下观察黄色斑点对照品0.1％盐酸小檗碱醇溶滤供试品实验产品醇溶液层析操作取层析滤纸或薄层板（己活化），于一端2cm处用铅笔画起始线并画出等距离两个原点标记，然后用毛细管分别点样（供试品与对照品各一个）在原点上，待样点溶剂挥干后，进行展开，当展开滤纸或薄板1/2～2/3距离时，即可取出，用铅笔画下展层的前沿，用电吹风冷风吹至干，观察黄色斑点位置和数目，比较样品与对照品的R f值。
生药黄连中小檗碱
·
◆总碱的提取 ◆生物碱类分离与检识 ◆定性鉴别 ◆结构鉴定 ◆含量测定
一、总碱的提取
小檗碱的性质
小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及 乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷 等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸 盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。 小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三 种互变形式。
季铵式（红棕色）
醇式（黄色）
醛式（黄色）
季铵式（红棕色）
醇式（黄色）
醛式（黄色）
小檗碱（黄连素）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
小檗碱的提取分离及鉴定
盐酸小檗碱得提取分离及鉴定黄连具有清热燥湿、清心除烦,泻火解毒得功效。
黄连得有效成分主要就是生物碱，已分离出得主要生物碱有小檗碱(berbｅrｉｎe)、掌叶防己碱（palmaｔine)、黄连碱(jatrorrｈizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达1０%左右,就是以盐酸盐得状态存在于黄连中。
小檗碱有很强得抗菌作用,已广泛地应用于临床,掌叶防己碱也作药用,其抗菌性能与小檗碱相似。
［目得要求]1．学习与掌握水溶性生物碱得提取方法。
2.学习与掌握生物碱得柱色谱分离方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶,ｍp为145℃，游离得小檗碱能缓缓溶于水(1：2０)及乙醇中（1:1０0）,易溶于热水及热醇,难溶于乙醚,石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂,其盐在水中溶解度很小，尤其就是盐酸盐。
盐酸盐为l：50０，枸橼酸盐1:１25,酸性硫酸盐1:1０0，硫酸盐ｌ:3０,但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在,碱性强(pka11、5３),能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
O33NHCHOOOOCH3OCH3季铵式(红棕色）醇式(黄色) 醛式(黄色)N+OOOCH33小檗碱（黄连素)掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶,溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶,并有强烈得黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇,在冷水中得溶解度也比盐酸小檗碱大。
N +H 3COH 3COOCH 3OCH 3掌叶防己碱 本实验就是利用小檗碱与掌叶防己碱得硫酸盐在水中溶解度大得性质,用硫酸水提取出来总生物碱,再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用,使生物碱盐析出,以除去水溶性杂质。
再利用两种生物碱极性不同,采用柱色谱分离。
[实验内容]一、提取分离黄连粗粉50ｇO 4５０0ml,浸渍20分钟加石灰乳调ＰH 值至中性放置１0分钟，抽滤滤液加HC ｌ调PH2～3加滤液体积4~5%得NaCl,放置30分钟,抽滤沉淀 滤液(主要含小檗碱、掌叶防己碱、黄连碱等生物碱）加２00ml 水加热至澄明趁热抽滤滤液放置、抽滤沉淀二、生物碱类检识１．化学检识:(1)丙酮加成反应:取样品０.05ｇ,溶于50mｌ热水中,加入10％N ａＯH溶液2mｌ,混合均匀后，于水浴中加热至５0℃,加入丙酮5ml,放置,即有柠檬黄色结晶析出。
黄连中小檗碱的提取和鉴定
黄连中小檗碱的提取和鉴定黄连是一种常见的中药材，其中主要有效成分是小檗碱。
小檗碱具有抗菌、消炎、抗肿瘤等多种药理作用，因此在医药、保健品等领域有广泛的应用。
本实验旨在提取黄连中的小檗碱，并进行鉴定，以了解其化学组成和性质。
一、实验材料1.原料：黄连（购自当地中药店）2.试剂：乙醇、浓盐酸、石油醚、乙醚、甲醇、氢氧化钠、醋酸铅、明矾、醋酸铜、硅胶G、三氯甲烷、甲酸、乙酸乙酯二、实验步骤1.提取：将黄连粉碎后，用乙醇浸泡24小时，过滤，滤液浓缩至干，得到乙醇提取物。
将提取物溶于少量水中，用石油醚和乙醚分别萃取，得到石油醚和乙醚萃取物。
2.分离纯化：将石油醚萃取物用硅胶G进行柱层析分离，以三氯甲烷-甲酸-水（80:10:10）为洗脱剂，得到A组分。
将乙醚萃取物用硅胶G进行柱层析分离，以三氯甲烷-乙酸乙酯（7:3）为洗脱剂，得到B组分。
3.鉴定：对A组分和B组分进行红外光谱、核磁共振等测试，确定其化学结构。
同时，进行薄层色谱和高效液相色谱等分析，以确定组分的纯度和含量。
三、实验结果1.提取物得率：经过称重和计算，得到黄连乙醇提取物的得率为5.8%。
2.组分纯度：经过柱层析和洗脱剂洗脱，得到A组分和B组分。
经过薄层色谱和高效液相色谱分析，A组分的纯度为92%，B组分的纯度为85%。
3.鉴定结果：经过红外光谱和核磁共振等测试，确定A组分和B组分的化学结构分别为小檗碱和黄连碱。
四、实验结论本实验成功从黄连中提取并鉴定出了小檗碱和黄连碱。
实验结果表明，黄连中含有较高浓度的小檗碱，这为其在医药和保健品等领域的应用提供了依据。
同时，实验中使用的柱层析方法能够有效分离纯化小檗碱和黄连碱，为进一步研究其药理作用和临床应用提供了技术支持。
五、实验建议与展望本实验中使用的提取和分离纯化方法相对简单易行，但在实际应用中可能存在提取效率不高、分离纯度不够理想等问题。
未来研究可进一步优化提取和分离纯化工艺，提高小檗碱和黄连碱的提取率和纯度。
小檗碱的提取分离及结构鉴定讲课讲稿
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小檗碱的提取分离及结构鉴定
药物背景：小檗碱 理化性质
（1）小檗碱(Berberine，又称黄 连素)一种常见的异喹啉生物碱， 分子式C20H18NO4。为黄连主要 有效成分，其含量约为4%~10% ，但根据野生和栽培产地的不同， 其含量各异
药物背景：小檗碱 理化性质
（2）小檗碱是黄色针状结晶体， 能缓慢溶于水（1:20）， 乙醇（1:100），较易于溶于热水 ，热乙醇，微溶于丙酮、氯仿、苯 、几乎不溶于石油醚中。
酸水提取法
酸水法是利用小檗碱的硫酸盐在酸性溶 液中的溶解度大、而盐酸盐几乎不溶于 水的性质来实现提取分离的。
实验提取流程
黄连粗粉
0.2%硫酸煎煮 纱布过滤
滤液
加石灰乳调PH=12 静置 、过滤
滤液
加HCL调 PH=2~3 加Nacl 饱和 静置 、抽滤
粗品
静置出现黄色结晶 抽滤
滤液
加水加热至澄明 趁热抽滤
稀浆糊状，然后均匀涂布在洁净的玻璃板上，铺成一均匀薄板，室温晾干， 105度下活化30min备用。 点样、展开、显色：取自制的盐酸小檗碱乙醇样品溶液和盐酸小檗碱乙 醇对照品溶液，分别用毛细管点在薄层板上，重复点样3~5次。用甲醇-丙 酮-乙酸4：5：1（或氯仿-氨-甲醇30:1:8）为展开剂，展开完毕，先观察 荧光斑点，再喷改良碘化铋钾试剂显色。
小檗碱的提取技术
传统技术
新技术
酸水法提取法 石灰乳法提取法、 乙醇回流提取法；
微波法提取； 微波—索氏联合工 艺提取 超声波法提取小檗碱 酶法、 超临界提取法
最终实验方案——酸水法提取
传统提取法
目前传统的提取技术主要是溶剂提取法。 此法是从中草药中提取有效成分的常用 方法，通过浸渍、渗漉、回流等方式将 有效成分从药材组织内溶解，进行萃取。
实验三 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定综述
实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定小檗碱又称黄连素，是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学成分。
主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。
小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。
黄连为毛茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch。
），三角叶黄连（C。
deltoidea C。
Y。
Cheng et Hsiao）或云连（C。
teetoides C。
Y。
Cheng）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。
目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。
三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis）多种植物，其根皮含生物碱约2%，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。
R1 R2 R3 R4 R51R1OR2OR5£-OR3OR4+3 CH3 HCH2CH3 CH3 CH3 CH3 HCH2CH2CH2CH23H CH3 CH3 CH3 H2345小檗碱 (Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110℃时，其颜色加深变暗色。
Mp.145℃至160℃即分解。
OCH3H3NHOCH3OH小檗胺H3COHCH3游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。
醇式和醛式小檗碱则具有一般生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。
小檗碱的盐类除中性硫酸盐、磷酸盐外，一般在水中的溶解度均较小。
小檗碱及其盐类在水、乙醇中的溶解度如下表：小檗碱还能与苯、氯仿、丙酮等溶剂结合成分子缩合物，有完好的结晶状态，可作为小檗碱的识别之用。
最新实验一黄柏皮中小檗碱的提取
实验一黄柏皮中小檗碱的提取实验一 黄柏皮中小檗碱的提取、分离与鉴定一、 实验目的1掌握从黄柏皮中提取小檗碱的原理和方法。
2掌握柱层析的基本操作方法以及其在中药有效成分提取分离过程中的应用。
3掌握生物碱的鉴别方法。
二、 实验原理1、概述生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。
它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分,现已分离出有六千余种。
这些生物碱在植物体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态,还有一些是与糖结合成苷而存在。
小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连（Coptis chinensis Fran ）和芸香科黄柏(Phellodendron amurense Rup.)等植物中提出的一种黄色生物碱。
黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马亭等生物碱,我国黄连药材产量占世界第一位。
现已发现，唐松草属（Thalictrum ）、小檗科的小檗属(Berberis L.)、十大功劳属(Mahomia Nuff )及防己科的天仙藤属（Fibraurea ）等都可作为提取小檗碱的资源植物本实验是从黄柏皮中提取小檗碱。
黄柏皮是豆科植物黄皮树（Phellodendron chinense Schneid ）或黄檗（P.amurense Rupr .）的树皮，其主要有效成分为小檗碱，小檗碱及其盐类有较好的抗菌作用，临床用以治疗菌痢和一般炎症。
小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145℃(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。
小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。
不同小檗碱盐类在水中的溶解度均有较大差别。
小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。
溶解度分别为:小檗碱,1∶２０（冷水）,1∶100(冷乙醇);盐酸盐,1∶500(冷水);硫酸盐,1∶30(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。
实验三 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定
实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定小檗碱又称黄连素，是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学成分。
主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。
小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。
黄连为毛茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch。
），三角叶黄连（C。
deltoidea C。
Y。
Cheng et Hsiao）或云连（C。
teetoides C。
Y。
Cheng）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。
目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。
三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis）多种植物，其根皮含生物碱约2%，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。
R1 R2 R3 R4 R51R1OR2OR5£-OR3OR4+3 CH3 HCH2CH3 CH3 CH3 CH3 HCH2CH2CH2CH23H CH3 CH3 CH3 H2345小檗碱 (Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110℃时，其颜色加深变暗色。
Mp.145℃至160℃即分解。
OCH3H3NHOCH3OH小檗胺H3COHCH3游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。
醇式和醛式小檗碱则具有一般生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。
小檗碱的盐类除中性硫酸盐、磷酸盐外，一般在水中的溶解度均较小。
小檗碱及其盐类在水、乙醇中的溶解度如下表：小檗碱还能与苯、氯仿、丙酮等溶剂结合成分子缩合物，有完好的结晶状态，可作为小檗碱的识别之用。
实验十黄连中盐酸小檗碱的提取分离与检识
实验十黄连中盐酸小檗碱的提取分离与检识(一)目的要求学习提取精制和检识黄连中的小檗碱,通过实验要求：1.掌握小檗碱的结构特点和理化性质。
2.熟悉浸渍法、盐析法、结晶法和薄层色谱法的基本操作过程及注意事项。
3.了解盐酸小檗碱的检识方法。
(二)主要化学成分的结构及性质黄连为毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch.、三角叶黄连CoptisdeltoideaC.Y.ChengetHsiao、峨嵋野连Coptisomeiensis(Chen)C.Y.Cheng或云连CoptisteetaWall.的根茎。
黄连的根状茎含多种生物碱,主要为小檗碱(黄连素),约5%~8%,其次为黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱、药根碱、木兰碱等。
叶含小檗碱1.49%。
小檗碱(berberine):分子式(C20H18NO4)+,分子量336.37。
系季铵生物碱。
游离小檗碱为黄色针状结晶(乙醚),mp.145℃,能缓缓溶于冷水(1∶20),可溶于冷乙醇(1∶100),易溶于热水或热乙醇,难溶于丙酮、氯仿、苯,几乎不溶于石油醚。
盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl·2H2O),为黄色结晶,微溶于冷水(1∶500),易溶于沸水,几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。
硫酸小檗碱((C20H18NO4)2·SO4·3H2O),溶于水(1∶30),溶于乙醇。
重硫酸小檗碱(C20H18NO4·HSO4)为黄色结晶或粉末,溶于水(1∶150),微溶于乙醚。
NOCH3OCH3OO+N+HOCH3OHOCH3OCH3CH3小檗碱木兰碱(三)实验原理根据小檗碱的盐酸盐在水中溶解度小,而小檗碱的硫酸盐水中溶解度较大。
因此,从植物原料中提取小檗碱时常用稀硫酸水溶液浸泡或渗漉,然后向提取液中加入10%的食盐,在盐析的同时,也提供了氯离子,使其硫酸盐转变为氯化小檗碱(即盐酸小檗碱)而�1�7�1�7�1�7出。
小檗碱的提取分离及结构鉴定
加乙醇，水浴加热，趁热抽滤
有效成分从药材组织内溶解，进行萃取。 外治湿疹，湿疮，耳道流脓。
药物背景：小檗碱 理化性质 丙酮加成反应：在盐酸小檗碱水溶液中，加入氢氧化钠使呈碱性，然后滴加丙酮数滴，即可生成黄色结晶性小檗碱丙酮加成物。 黄连：多年生草本，根茎有分枝，形如鸡爪。 为黄连主要有效成分，其含量约为4%~10%，但根据野生和栽培产地的不同，其含量各异
药物背景：小檗碱 理化性质
（3）小檗碱的结构式以稳定的季 铵盐为主。在自然界，多以季铵盐 形式存在，其盐酸盐、氢碘酸盐、 硫酸盐、硝酸盐均难溶于水，易溶 于热水，且各种盐的纯化都比较容 易。
药物背景：小檗碱 医药用途
小檗碱是一种常用的广谱 抗菌药，具有看细菌性感 染、抗肿瘤、抗心律失常、 降压降血糖等功效，在临 床上越来越广泛的应用。
2硫酸煎煮加石灰乳调ph12静置过滤静置过滤加石灰乳调ph12静置出现黄色结晶抽滤抽滤静置出现黄色结晶加水加热至澄明趁热抽滤趁热抽滤加水加热至澄明粗品精制粗品粗品粗品滤液滤液滤液固体固体固体小檗碱小檗碱静置结晶抽滤静置结晶抽滤加乙醇水浴加热趁热抽滤滤加乙醇水浴醇水浴加热趁热抽加热趁热抽80干燥80干燥显色反应纸色谱法薄层色谱小檗碱结构鉴定小檗碱鉴定方法显色反应?浓硝酸或
新技术
酸水法提取法 石灰乳法提取法、 乙醇回流提取法；
微波法提取； 微波—索氏联合工 艺提取 超声波法提取小檗碱 酶法、 超临界提取法
最终实验方案——酸水法提取 加乙醇，水浴加热，趁热抽滤
乙醇（1:100），较易于溶于热水，热乙醇，微溶于丙酮、氯仿、苯、几乎不溶于石油醚中。 最终实验方案——酸水法提取 为黄连主要有效成分，其含量约为4%~10%，但根据野生和栽培产地的不同，其含量各异
黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定
实验黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的化学检识。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
[实验内容]一、提取分离黄连粗粉20g加0.3%硫酸200ml，浸泡20min煎煮30min，滤过滤液药渣加石灰乳调pH值11-12放置10min，抽滤滤液加HCl调pH2-3加滤液体积4-5%的NaCl，放置30min滤液沉淀加200ml水加热至澄明趁热抽滤滤液静置，抽滤沉淀二、精制盐酸小檗碱粗品水，加热溶解，趁热过滤不溶物pH1-2沉淀（盐酸小檗碱）三、检识精制小檗碱溶液滤过，抽干，用少许蒸馏水洗涤，70℃以下干燥，得小檗碱精品。
称重，计算提取率。
1. 浓硝酸、漂白粉实验取盐酸小檗碱少许，加稀硫酸8ml溶解，分置两支试管中，一支加入2滴浓硝酸，观察颜色变化；另一支加入少许漂白粉，观察颜色变化。
2. 丙酮小檗碱实验取盐酸小檗碱少许，加5ml蒸馏水，水浴加热溶解，溶解后加入氢氧化钠试液2滴，观察颜色变化，放冷，加入丙酮4滴，观察现象。
小檗碱的提取分离及鉴定
盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
O33NHCHOOOOCH3OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OOOCH3OCH3小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
N+H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
再利用两种生物碱极性不同，采用柱色谱分离。
[实验内容]一、提取分离黄连粗粉50g500ml，浸渍20分钟加石灰乳调PH值至中性放置10分钟，抽滤滤液加HCl调PH2～3加滤液体积4～5％的NaCl，放置30分钟，抽滤沉淀滤液（主要含小檗碱、掌叶防己碱、黄连碱等生物碱）加200ml水加热至澄明趁热抽滤滤液放置、抽滤沉淀二、生物碱类检识1．化学检识：（1）丙酮加成反应：取样品0.05g，溶于50ml热水中，加入10％NaOH 溶液2ml，混合均匀后，于水浴中加热至50℃，加入丙酮5ml，放置，即有柠檬黄色结晶析出。
小檗碱提取及结构鉴定开题报告
天然药物化学课程实验任务书一、题目：小檗碱提取及结构鉴定二、实验任务1.查阅文献资料并写出小檗碱化学研究进展的文献综述2.设计实验方案并进行可行性分析（方案应包括目的意义，设计原理、流程、实验方法、时间安排、需要的仪器与试剂）。
3.对实验材料进行性状、显微和理化鉴定并将鉴定结果写入实验报告中。
4.完成小檗碱单体化合物的分离及结构鉴定，鉴定数据应包括熔点、旋光度、紫外图谱。
5.对所得数据进行分析6.完成实验报告并提交少量小檗碱样品。
三、实验要求1.实验中要求学生不完全依赖现成条件，能在教师指导下自己创造一些条件完成实验。
2.实验方法应有一定的创新性。
3.实验数据准确，须注明实验条件。
4.要求提供的样品袋上注明样品名称、熔点、旋光度、制备者姓名、日期四、实验报告内容1.题目2.实验目的3.基本原理4.实验所用试剂、仪器的型号及生产厂家5.分离方法创新之处6.自制或创造了那些实验条件条件7.实验流程及操作方法8.结果与分析9.结论10.在所完成实验的基础上提出一个新的研究课题11.合理化建议小檗碱提取及结构鉴定 1一、文献综述1.题目背景黄连（Coptis chinensis Franch ）为我国名贵中药材之一，享有“中药抗生素”美称，其主要功能为清热燥湿、泻火解毒。
黄连抗菌能力强，对降热镇痛、抗肠道细菌感染、急性结膜炎、口疮、急性细菌性痢疾等均有很好的疗效，在临床中有较多应用[1-3]。
小檗碱（berberine ，又称黄连素）是从中草药黄连等植物中提取分离得到的一类异喹啉类生物碱，为黄连主要有效成分，其含量约为4%-10%，但根据野生和栽培产地的不同，其含量各异。
小檗碱是黄色针状结晶体，能缓慢溶于水（1：20），乙醇（1：100），较易溶于水、热乙醇，微溶于丙酮、氯仿、苯，几乎不溶于石油醚中。
小檗碱的结构式以较稳定的季铵碱为主，其结构式如图1。
在自然界，小檗碱多以季铵盐的形式存在，其盐酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐均难溶于水，易溶于热水，且各种盐的纯化都比较容易。
实验一黄柏皮中小檗碱的提取
实验一 黄柏皮中小檗碱的提取、分离与鉴定一、 实验目的1掌握从黄柏皮中提取小檗碱的原理和方法。
2掌握柱层析的基本操作方法以及其在中药有效成分提取分离过程中的应用。
3掌握生物碱的鉴别方法。
二、 实验原理1、概述生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。
它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分,现已分离出有六千余种。
这些生物碱在植物体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态,还有一些是与糖结合成苷而存在。
小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连（Coptis chinensis Fran ）和芸香科黄柏(Phellodendron amurense Rup.)等植物中提出的一种黄色生物碱。
黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马亭等生物碱,我国黄连药材产量占世界第一位。
现已发现，唐松草属（Thalictrum ）、小檗科的小檗属(Berberis L.)、十大功劳属(Mahomia Nuff )及防己科的天仙藤属（Fibraurea ）等都可作为提取小檗碱的资源植物本实验是从黄柏皮中提取小檗碱。
黄柏皮是豆科植物黄皮树（Phellodendron chinense Schneid ）或黄檗（P.amurense Rupr .）的树皮，其主要有效成分为小檗碱，小檗碱及其盐类有较好的抗菌作用，临床用以治疗菌痢和一般炎症。
小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145℃(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。
小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。
不同小檗碱盐类在水中的溶解度均有较大差别。
小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。
溶解度分别为:小檗碱,1∶２０（冷水）,1∶100(冷乙醇);盐酸盐,1∶500(冷水);硫酸盐,1∶30(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。
小檗碱的提取和鉴定(设计性实验)
四、仪器和试剂
1.仪器与材料：100mL圆底烧瓶、冷凝管、50mL、100mL烧杯各1只，10mL、25mL量筒各1个，铁架台1个、漏斗1个、滤纸若干、滴管1个、蒸发皿、小试管三支等。
2.试剂与原料：黄连粉2.0g，体积分数为95%的乙醇20mL，浓HCl10mL、10%的醋酸溶液、蒸馏水、碘化铋钾试液、碘碘化钾试液、硅钨酸试液
溶液中有淡黄色絮状物
振摇后
红褐色沉淀产生
产生红棕色沉淀
产生黄色沉淀
七、实验说明及注意事项
1．注意实验的正确操作，尤其注意酒精灯的使用，以免出现火灾。
2.在精制盐酸小檗碱过程中，因盐酸小檗碱放冷极易析出结晶，所以加热煮沸后，应迅速抽滤或保温滤过，防止溶液在滤过过程中冷却，析出盐酸小檗碱结晶阻塞滤材，造成滤过困难，减低提取率。
放置、冷却、析晶
得精制小檗碱
重结晶
2.小檗碱的鉴定
分别取3只试管编号为①、②、③，均加入一定量的小檗碱，令其溶解后，分别滴加碘化铋钾试液、碘碘化钾试液、硅钨酸试剂1-2滴，观察加入试剂后的实验现象。
六、实验记录
象
液
现
操
作
试
碘化铋钾试液
碘碘化钾试液
硅钨酸试液
振摇前
溶液中有红褐色絮状物
溶液中有棕色絮状物
黄连中有效成分是生物碱，其中小檗碱含量最高。小檗碱对溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，淋球菌和弗氏、志贺氏痢疾杆菌等均有抗菌作用，并有增强白血球吞噬作用，对结核杆菌、鼠疫菌也有不同程度的抑制作用，对大鼠的阿米巴菌也有抑制效用。小檗碱在动物身上有抗箭毒作用，并具有末梢性的降压及解热作用。小檗碱的盐酸盐（俗称盐酸黄连素已广泛用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等，对肺结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定疗效。
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酸水法是利用小檗碱的硫酸盐在酸性溶液中的溶解度大、而盐酸盐几乎不溶于水的性质来实现提取分离的，其提取流程为：
黄连粗粉滤液
滤液固体
滤液结晶（粗品）
滤液晶体盐酸小檗碱
四、实验所用试剂
0.2%硫酸溶液，石灰乳，浓盐酸，10%Nacl溶液，蒸馏水，乙醇。
五、鉴定方法
1显色反应：
小檗碱：（1）小檗碱(Berberine，又称黄连素)一种常见的异喹啉生物碱，分子式C20H18NO4。为黄连主要有效成分，其含量约为4%~10%，但根据野生和栽培产地的不同，其含量各异。
（2）小檗碱是黄色针状结晶体，能缓慢溶于水（1:20），乙醇（1:100），较易于溶于热水，热乙醇，微溶于丙酮、氯仿、苯、几乎不溶于石油醚中。
点样、展开、显色：取自制的盐酸小檗碱乙醇样品溶液和盐酸小檗碱乙醇对照品溶液，分别用毛细管点在薄层板上，重复点样3~5次。用甲醇-丙酮-乙酸4：5：1（或氯仿-氨-甲醇30:1:8）为展开剂，展开完毕，先观察荧光斑点，再喷改良碘化铋钾试剂显色。
参考文献：
1《黄连中小檗碱提取工艺研究》熊晓莉，陈锦锦文章编号：1672—058X(2008)04—4013—03重庆工商大学学报(自然科学版)第25卷第4期2008年8月，维普资讯。
(1)目前传统的提取技术主要是溶剂提取法。此法是从中草药中提取有效成分的常用方法，通过浸渍、渗漉、回流等方式将有效成分从药材组织内溶解，进行萃取。
传统的提取技术：酸水法提取小檗碱、石灰乳法提取小檗碱、乙醇回流提取法等
提取的新技术有：微波法提取小檗碱、微波—索氏联合工艺提取小檗碱、超声波法提取小檗碱、酶法、超临界提取法等。
2《黄连中小檗碱提取方法研究进展》席国萍，宋国斌山西大同大学,山西大同037006，文章编号10013601 2009 010003000803贵州《中药有效部位及成分提取工艺和检测方法》刘斌倪健
（3）小檗碱的结构式以稳定的季铵盐为主，其结构式如下图所示。在自然界，多以季铵盐形式存在，其盐酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐均难溶于水，易溶于热水，且各种盐的纯化都比较容易。
（4）小檗碱是一种常用的广谱抗菌药，具有看细菌性感染、抗肿瘤、抗心律失常、降压降血糖等功效，在临床上越来越广泛的应用。
三、提取方案
(1)浓硝酸或漂白粉实验：取2支已加入酸性小檗碱的试管，分别加入少量的漂白粉和2滴浓硝酸，都显樱红色。
(2)丙酮加成反应：在盐酸小檗碱水溶液中，加入氢氧化钠使呈碱性，然后滴加丙酮数滴，即可生成黄色结晶性小檗碱丙酮加成物。
2纸色谱法：
支持剂：色谱滤纸
供试品：实验所得的精制盐酸小檗碱乙醇溶液
对照品：盐酸小檗碱标准品乙醇溶液
天然药物化学课程设计性实验
一、实验题目：小檗碱提取及结构鉴定
二、简介：
黄连：黄连为毛茛科(Ranunculaceae)的黄连属植物黄连(Coptis chinesis Franch)、三角叶黄连(Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao)或云连(Coptis teeta Wall)的干燥根茎。为我国名贵中药材之一，享有“中药抗生素”美称，其主要功能为清热燥湿，泻火解毒。黄连抗菌能力强，对降热阵痛、抗肠道细菌感染、急性结膜炎、口疮、急性细菌性痢疾等均有很好的疗效，在临床中有较多应用。
展开剂：正丁醇：冰醋酸：水=4:1:1或7：1:2
氯仿：乙醇：（0.1mol/L）盐酸=1:1:1
显色剂：紫外灯线观察荧光或自然光下观察黄色斑点
3薄层色谱：
制板：取层析用硅胶8g，加0.3%~.5%CMC-Na20~25ml，用研钵制成稀浆糊状，然后均匀涂布在洁净的玻璃板上，铺成一均匀薄板，室温晾干，105度下活化30min备用。