第5章 免疫凝集试验ppt课件

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5章凝集反应 Microsoft PowerPoint 演示文稿

5章凝集反应 Microsoft PowerPoint 演示文稿
抗原抗体在玻片上进行的反应,血型鉴定、细菌分型。
相应抗体
玻片法直接凝集反应示意图
(1)半定量试验-抗体效价测定。 (2)玻片凝集试验也可用试管法,如肥达外斐反应。 非特异性凝集可出现假阳性,必须做阴性对照(不加抗体, 只加抗原)。
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临床检验中早期妊娠试验,现已被金标法替代。
三、间接血凝试验 间接血凝实验是以红细胞作为载体的间接凝集实验,用已 知的抗原或抗体致敏红细胞与标本中的抗体或抗原特异性结 合。常用绵羊、家兔等红细胞。
自身红细胞凝集试验 样本:患者全血(含有红细胞,血清中有待检的抗原或抗)。 试剂:抗红细胞单克隆抗体与已知抗体连接,检测未知抗 原。例如:乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
载体颗粒
抗原致敏颗粒
凝集
正向间接凝集反应原理
已知 抗原
无抗体
胶乳 颗粒
载体颗粒
抗原致敏颗粒
无凝集
无相应抗体存在时无凝集现象发生
2.反向间接凝集反应 用特异性抗体(已知)致敏载体检测未知抗原。
已知 抗体
待检 抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
凝集
反向间接凝集反应原理
已知 抗体
无抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
无凝集
待检血清 (RH抗体)
不完全抗体 (RH抗体)
Rh抗原
凝集 现象
Rh+O型红细胞
抗人球蛋白
间接接coombs试验原理示意图
直接与间接Coombs试验的区别
试验 检测目的
样本
直接 红细胞表面的

凝集试验(四项)PPT课件

凝集试验(四项)PPT课件

注意事项
❖ 玻片应洁净、干燥、中性,以防止和减少非 特异性凝集。
❖ 室温低于10℃时,易出现冷凝集而造成假阳 性结果。
间接凝集试验
❖ 将可溶性抗原(或抗体)吸附于一种与免疫无关的、适当的 大小的载体微粒表面,再与相应抗体(或可溶性抗原)在适 宜条件下相互作用,经一定时间出现肉眼可见的凝集现象, 这种方法称为间接凝集试验,又称被动凝集试验。
❖ 如将抗原包被于载体微粒表面以检测抗体,称为(正向)间 接凝集试验;
❖ 如将抗体吸附于载体微粒表面以检测抗原,则称为反向间接 凝集试验。
❖ 实验室常用的载体有红细胞、胶乳颗粒、活性碳、SPA菌体 等,其中以红细胞为载体的间接凝集试验称为间接血凝试验, 以胶乳为载体的间接凝集试验称为间接胶乳凝集试验。
❖ 间接凝集反应 正向间接凝集试验--测RF 反向间接凝集试验--测HBsAg 间接凝集抑制试验--测HCG 协同凝集反应
直接凝集试验--测ABO血型
原理(玻片法)
❖ 天然的颗粒性抗原(如红细胞,白细胞,细 菌等)与相应抗体在适宜条件下反应,出现 肉眼可见的凝集物,称为直接凝集反应。玻 片法属于定性试验。
间接凝集抑制试验—测HCG
步骤
❖ 将阳性尿、阴性尿(用生理盐水代替)、待检尿液 分别滴一滴在玻片上
❖ 然后分别滴一滴诊断血清(用HCG免疫动物得到的 抗血清),分别用牙签搅匀,手持玻片,前后旋转 摇动1min
❖ 在上述三滴上各加一滴胶乳抗原,用牙签混匀,在 轻摇2~3min,观察结果。
写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More

免疫凝集反应及临床应用ppt课件

免疫凝集反应及临床应用ppt课件

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红细胞 抗原 致敏
待测抗体
间接血凝试验原理
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致 敏 红 细 胞
集红 细 胞 凝
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血凝试验强度
-:红细胞沉积于孔底 +:红细胞沉积于孔底,周围有散在少量凝集 ++:红细胞形成凝集,面积较小,边缘较松散 +++:红细胞形成片层凝集,面积略多于++ ++++:红细胞形成片层凝集,均匀布满孔底,或边缘皱缩如花边状
沉淀 大的凝集块 大多凝集管底 小、部分凝集块 很小的凝集颗粒 无凝集现象
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凝集程度 ++++ +++ ++ + -
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管底沉淀 凝集程度
最高稀释比例
试管凝集试验 结果判断
待测血清的滴度
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间接凝集反应 indirect agglutination
将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表 面,然后与相应的抗体或抗原反应,在电解 质的作用下,出现肉眼可见的凝集现象
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胶乳凝集试验
➢ 以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒的间接凝集反应
➢ 胶乳为人工合成的载体,性能比红细胞稳定 ,均一性好
➢ 但与蛋白质结合能力以及聚集性能不如红细 胞
➢ 因此作为间接凝集反应,胶乳凝集的敏感度 不及血凝试验
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明胶凝集试验
➢ 以明胶为载体颗粒的间接凝集反应
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直接Coombs试验
检测红细胞上的不完全抗体

医学免疫学检验-凝集反应PPT优选课件

医学免疫学检验-凝集反应PPT优选课件
凝集反应
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2020/10/18
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一、凝集反应的概念及特点
定义:细菌,螺旋体,红细胞等颗粒性 抗 原,或可溶性抗原(或抗体)与载体颗粒结合 成致敏颗粒后,它们与相应抗体(或抗原) 发生特异结合,在适当电解质存在下,形成 肉眼可见的凝集现象,称为凝集反应 (agglutination)。 反应的两个阶段:1)抗原抗体的特异性结合 阶段,2)出现肉眼可见的凝集现象。
直接Coombs试验 检测红细胞上的不完全抗体
间接Coombs试验 检测游离在血清中的不完全抗体
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特点:抗原抗体反应既可以在体内作为 体液免疫应答的效应机制自然发生,也 可以在体外作为免疫学试验的结果而出 现,体外实验的抗原抗体反应称为血清 学反应(serological reaction).
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二.直接凝集反应
定义:细菌、红细胞等颗粒性抗原在适量电解 质的参与下,直接与相应抗体结合,出现肉眼 可见的凝集现象,该反应中的抗原称为凝集原 (agglutinatinogen),抗体称为凝集素 ( agglutinin)。 一)玻片凝集试验(ABO血型鉴定);二) 试管凝集试验(肥达试验)。
缘皱缩成花边状
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自身红细胞凝集试验

第5章免疫凝集试验

第5章免疫凝集试验
临床免疫学与免疫学检验
第五章 免疫凝集试验
凝集反应的发现
• 早在1896年,Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆 菌发生特异性凝集的现象,有效地诊断伤寒病。--肥 达试验 • 至1903年,Landsteiner在特异性血凝现象的基础上 发现了人类ABO血型,并于1930年获得了诺贝尔医学 奖。 --血型鉴定
玻片凝集试验:常作定性检测。用已知抗体检测未知的颗 粒性抗原,主要用于细菌菌种的鉴定及分型、ABO血型鉴定等 。
试管凝集试验:可作为半定量检测。多用于测定血清中某 种特异性抗体的效价,以协助临床诊断或供流行病学调查;在 用颗粒性抗原免疫动物后,可用该法测定免疫血清中特异性抗 体的效价,判定抗体生成情况。
注:待检标本采用受检者的全血
自身红细胞免疫凝集试验原理
抗人O型红细胞的单克隆抗体。 将之与特异性抗原连接,可用于检测标本中的相应抗体 。
注:待检标本采用受检者的全血
第六节 免疫凝集试验的临床应用
重点提示
直接免疫凝集试验的临床应用 间接免疫凝集试验的临床应用
抗原的检测 抗体的检测
一、直接免疫凝集试验的临床应用
采用不同颗粒作为载体的间接免疫凝集试验。 胶乳颗粒凝集试验(LAT):载体为聚苯乙烯胶乳颗粒 明胶颗粒凝集试验(GAT):载体为明胶颗粒 炭颗粒凝集试验(CAT):载体为炭粉微粒 甲苯胺红颗粒凝集试验:载体为甲苯胺红颗粒
第四节 抗球蛋白红细胞免疫凝集试验
重点提示
又称为Coombs试验: 直接Coombs试验 间接Coombs试验
第二节 直接免疫凝集试验
重点提示
直接免疫凝集试验的概念 玻片凝集试验 试管凝集试验
直接免疫凝集试验
直接免疫凝集试验(direct agglutination test):细 菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原,在适当电解质参与下直接与 相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象

临床免疫学检验-课件-第5章-凝集反应

临床免疫学检验-课件-第5章-凝集反应

•RBC为载体: •动物,或人的“0”型血 RBC
•醛化红细胞: •用戊二醛处理,成团, 不易摇散;吸附大,耐温, 耐冻融。 •致敏红细胞保存时间短, 易变脆、溶血、被污染, 因此在致敏前醛化。
•致敏醛化红细胞:用Ag/Ab 直接或化学联结,与RBC作用,
红细胞 抗原 致敏
test)
4.协同凝集试验(coagglutination test)
载体 可溶性抗原
致敏
用特异性抗原致 敏载体,检测标
致 敏 颗 粒
NS
本中的相应抗体
待测抗体
的方法。


结果判读:凝集,阳性(+)。 不凝集,阴性(-)。
颗 粒
已知抗体
载体

致敏
致 敏 颗

用特异性抗体
致敏载体,检 凝
NS
测标本中的相
•致敏颗粒(sensitized particle):吸附有已知抗 原或抗体的颗粒。
载体 可溶性抗原 致敏
致 敏 颗 粒
NS
凝 集 颗 粒
一、常用载体种类及其处理方法
•红细胞: 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一
般先醛化后应用。
•聚苯乙烯胶乳颗粒: 可物理吸附蛋白质;常制备带有化学
活性基团的颗粒。
• 结果判读: 已知Ab + 未知Ag → 凝集,阳性(+)。 不凝集,阴性(-)。
• 方法评价: 特异性强; 简便、快速;敏感度低。 • 应用:ABO血型鉴定。
细菌的鉴别与分型。
ABO血型的鉴定
1.已知抗体
抗A
抗B
2.未知抗原 (待检RBC)
3.结果:
凝集
不凝集
4.结论: 受检者血型为:A型

免疫凝集类实验演示文稿

免疫凝集类实验演示文稿
液(7×108/ml)、生理盐水
第五页,总共五十二页。
实验方法(Widal test)
1. 取试管7支,依次编号并做好标记。
2. 每支试管中加生理盐水0.5ml。
3. 倍比稀释血清:
取1∶20稀释的待测血清0.5ml加入到第1管,混匀后吸取 0.5ml加入到第2管,如此连续稀释至第6管,混匀后吸取0.5ml弃 去;第7管不加血清作为阴性对照。
❖ 临床上开展的外斐反应是利用与立克次体有共同耐热性多糖抗原的 变形杆菌OX19、OX2、OXk菌株代替立克次体作为已知抗原,与患 者血清进行凝集试验,以辅助诊断斑疹伤寒、恙虫病等立克次体疾 病。
❖ 现有OX19、OX2、OXk三种诊断菌液和待测血清,请写出利用试管凝集法进
行的外斐试验的操作步骤。
第十三页,总共五十二页。
❖ 肉眼观察不够清晰者,可在低倍镜下观察。
第十二页,总共五十二页。
实验讨论
❖ 肥大试验是一种经典的半定量试管凝集试验。在临床上主要用已知 的伤寒沙门菌O或H抗原检测血清中有无相应的特异性抗体及其效价 ,以协助诊断伤寒病或供流行病学调查。
❖ 凝集反应只有在抗原抗体比例适当时,才能出现肉眼可见的凝集现象 。
免疫凝集类实验演示文稿
第一页,总共五十二页。
(优选)第单元免疫凝集类实验
第二页,总共五十二页。
❖ 颗粒性抗原与相应抗体直接反应,在适当电解质 参与下出现的肉眼可见的凝集现象。
❖ 常用的试验方法有玻片凝集法和试管凝集法。 ❖ 本实验以试管法凝集试验——肥大试验(Widal
test)验证凝集反应及其特点。
❖ 以胶乳凝集试验检测类风湿因子(rheumatoid
factor,RF)为例验证间接凝集实验的原理和特点
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直接法和间接法。
(三)血凝试验 微量滴定板或试管
标本倍比稀释(1:64)1滴
+
0.5%致敏红细胞悬液1滴
充分混匀 室温12h
血凝反应强度示意图
二、间接免疫血凝试验
载体:红细胞
优点:红细胞来源广,价格低。 该试验为最经典的抗原抗体反
应之一。 应用:常用于测定抗核抗体、类风湿
因子等。
三、颗粒免疫凝集试验 (一)胶乳颗粒凝集试验
二、间接Coombs试验
检测血清中游离的不完全抗体 标本中 不完全抗体 抗球蛋白抗体 具有特异抗原的红细胞 凝集
临床应用:
1.检测母体Rh(D)抗体,以便尽早 发现和避免新生儿溶血症发生。 2.输血前交叉配血或不相容输血后
抗体检测。
第五节 自身红细胞凝集试验
与一般间接免疫血凝试验不同之处 在于反应中的红细胞是未经致敏的 受检者新鲜红细胞。
第5章 免疫凝集 试验
教学目的
掌握:直接凝集反应和间接凝集反应的试
验原理、类型;抗球蛋白参与的试验原理
熟悉:凝集反应的特点、应用
第一节 免疫凝集试验的基本原理
凝集反应(agglutination reaction)
是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表
面包被可溶性抗原(或抗体)的颗粒性载
体与相应抗体(或抗原)发生特异性结合 后,在适当电解质存在下,出现肉眼可见
的凝集现象。
第一节 免疫凝集试验的基本原理
分两个阶段: ①抗原抗体的特异性结合阶段 ②出现肉眼可见的凝集现象
可见反应形成
第二节 直接免疫凝集试验
直接凝集反应(direct agglutination)细菌、 螺旋体、红细胞等颗粒性抗原,在适当电
解质参与下直接与相应抗体结合出现肉眼
可见的凝集现象。
第三节 t agglutination) 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表
面,然后与相应的抗体或抗原反应,在电解
质的作用下,出现肉眼可见的凝集现象。
一、间接免疫凝集试验的类型
正向间接免疫凝集试验 反向间接免疫凝集试验 间接免疫凝集抑制试验
协同免疫凝集试验
(二)抗体的检测 检测细菌、病毒等产生的抗体、自身
免疫病抗体、超敏反应抗体等
第七节 临床常用免疫凝集试验试剂方法特点 一、诊断菌液 二、载体颗粒 红细胞、胶乳、炭粉粒子 三、其他
第八节 影响免疫凝集试验的主要因素
一、抗原因素 二、抗血清因素 三、致敏颗粒试剂 四、血清标本 五、试验条件
小 结
凝集反应常用的实验方法:
无抗原
不凝集
B 抗体
游离抗体
凝集
结果判定
试验结果+(凝集)--(不凝集)
检测结果 --
+
(四)协同免疫凝集试验
SPA:SPA-IgG Fc; SPA抗体致敏---测抗原 反向间接凝集反应
(四)协同免疫凝集试验
载体:金黄色葡萄球菌。
优点:特异、灵敏、简便、快速。
应用:可用于细菌、病毒、毒素及各种可
免疫血清 1 1:10
2
3
10 阴性对照
………
血清稀释度 1:20 1:40 1:80 步骤:1)加生理盐水 0.5ml 2)依次倍比稀释免疫血清 3)加相同浓度的细菌悬液0.5ml
方法评价: 临床应用:
半定量试验
简便、快速 敏感度低 可有假阳性
Widal reaction
Weil-felix reaction Wright test:布鲁菌病 交叉配血试验
(一)正向间接免疫凝集试验
抗原致敏载体--检测抗体
(一)正向间接免疫凝集试验
特点:简便快速,敏感性和特异性均高, 成本低廉。 应用:伤寒沙门菌的多糖抗原致敏绵羊红 细胞测伤寒抗体。 抗原 抗 体 载体颗粒 抗原致敏颗粒
(二)反向间接免疫凝集试验
用抗体致敏载体----检测抗原
(二)反向间接免疫凝集试验
应用:检测HbsAg、AFP等。 特点:本方法快速、敏感性高、特异性强。 抗体 抗原
载体颗粒 抗体致敏颗粒
(三)间接免疫凝集抑制试验 用抗原致敏载体--检测抗原
(三)间接免疫凝集抑制试验
+ 说明标本中不存在相应抗原
— 说明标本中含有相应抗原
抗原 A 抗体
抗原致敏颗粒
抗原抗体 复合物 抗原致敏颗粒
1、玻片法:定性检测 2、试管法:半定量检测
直接凝 集反应
类型
正向间接凝集 反向间接凝集 间接凝集 间接凝集抑制试验 间接凝 间接血凝 协同凝集试验 集反应 胶乳凝集试验 明胶凝集试验 特殊凝 自身红细胞凝集试验 集反应 抗球蛋白试验
(一)胶乳颗粒凝集试验 载体:聚苯乙烯胶乳 优点:性能稳定,均一性好。
缺点:敏感度不及血凝试验。
应用:临床常用于检测抗溶血素0
和类风湿因子等。
(二)明胶颗粒凝集试验
(三)炭颗粒凝集试验
(四)甲苯胺红颗粒凝集试验
第四节 抗球蛋白红细胞免疫凝集试验
(antiglobulin test)
抗球蛋白试验 又称Coombs试 验
一、玻片凝集试验
(slide agglutination test)
+

红细胞血型鉴定
红细胞悬液
B A
方法评价: 定性试验 简便和快速 敏感度低
临床应用: 菌种鉴定 血清学分型 血型鉴定
二、试管凝集试验
在试管内颗粒性抗原直接与抗体 结合,在电解质的作用下,出现肉 眼可见的凝集现象。
试管凝集试验
第六节 免疫凝集试验的临床应用 一、直接免疫凝集试验的临床应用 1、玻片凝集试验:定性检测,如细菌菌 种鉴定及分型、ABO血型鉴定等 2、试管凝集试验:半定量检测,如辅助 诊断伤寒、副伤寒的肥达试验等。
第六节 免疫凝集试验的临床应用
二、间接免疫凝集试验的临床应用 (一)抗原的检测
病原体可溶性抗原、各种蛋白质检测
溶性抗原的快 速检测。
协同凝集试验
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载体种类:
常用的载体有动物或人红细胞、 聚苯乙烯胶乳颗粒、明胶颗粒和 活性炭等。
二、间接免疫血凝试验
二、间接免疫血凝试验
(一)载体: 是以红细胞作为载体的间接免
疫凝集试验。
常用的载体有:绵羊、家兔、鸡红细胞和O型人 红细胞 。
(二)致敏
蛋白质致敏红细胞的方法有:
一、直接Coombs试验
检测红细胞上抗体
不完全抗体
一、直接Coombs试验
抗球蛋白抗体
抗膜抗原的抗体
凝集
结合在红细胞表面
可用玻片法定性,也可用试管法 半定量分析。
临床应用:
新生儿溶血症、特发性自身免疫 性贫血、自身免疫性溶血症、和医源 性溶血性疾病等的检测。
检测血清中的抗红细胞抗体
二、间接Coombs试验
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