DNA的粗提取和鉴定PPT课件

损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞
液
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讨论：提取鸡血中的DNA时，为什么除去血液 中的上清液？
答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分 是血细胞，离心后除去的上清液是血浆
5、方法步骤
①提取鸡血细胞的细胞核物质
将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到
50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL，
3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯 胺可以作为鉴定DNA的试剂
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实验用具：铁架台；铁环；镊子；三角
架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒； 滤纸；滴管；量筒（100ml，一个）；烧 杯；（100ml，一个，50ml、500ml各 二个）；试管（20ml，二个）；漏斗；试 管夹；纱布。
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（四） DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒 精溶液（体积分数为95％），静置2-3min，溶 液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。 用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用 滤纸吸取上面的水
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三、实验案例 （一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的 粗提取 1、鸡血细胞做实验材料的原因
①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得
②用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和 离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长
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4、课前准备鸡血细胞液
①过程
取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝
③析出含DNA的粘稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停
地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观
察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中
出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时
停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量
浓度相当于0.14 mol／L）
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讨论：加入蒸馏水的目的？
离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞
液。）
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②柠檬酸钠作用
防止血液凝固
③作用机理
柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应，生成柠 檬酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大减少， 血液就不会凝固
④注意事项
鸡血细胞破碎以程中为了减少DNA的
(1)先将新鲜的鸡血离心，获得鸡血细胞 (2)在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水，同时用 玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可
讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
利用了什么原理？
2、过滤，获取含DNA的滤液
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讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些 细胞成分？
答：可能含有核蛋白和RNA等杂质
答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的 破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能 太快太猛，防止打碎DNA
（3）滤去的是什么物质？得到的是什么？
答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；
得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA
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②溶解细胞核内的DNA
将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶40mL加 入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min， 使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态
剂）100ml，置于500ml烧杯中。注入新鲜的鸡
血（约180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液
与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。将烧杯
中的血液置于冰箱内，精置一天，使血细胞自
行沉淀。（也可以将血液倒入离心管内，用
1000r/min（转每分）的离心机离心2min，血
细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除去
同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速
破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过
滤20至20/1/156 00mL。取其滤液。
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讨论：
（1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞 会有什么变化？
答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞 会吸水以至胀破 （2）用玻璃棒搅拌有什么意义？
降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使 DNA从NaCl溶液中析出
注意事项：
将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是 实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸 馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌， 以利于DNA分子的附着和缠绕
DNA的粗提取和鉴定
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目的要求
• 1、了解从细胞中提取DNA的基 本原理
• 2、初步掌握DNA的粗提取和鉴 定的方法
• 3、观察提取出来的DNA
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实验思路
• 1、DNA从哪提取？ • 2、怎样将DNA与细胞中的其他物质分
离？ • 3、怎样鉴定我们提取的DNA？
为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一 步处理
（三）去除滤液中的杂质
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讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不 能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解 在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出 DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质
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2、 DNA的鉴定
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为 2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一 只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。 混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试 管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看 看溶解有DNA的溶液是否有蓝色
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实验原理
• 1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓 度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以 使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可 以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出 含杂质较少的DNA。
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二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计
（一）实验材料的选取
原则上只要含DNA的生物材料都可以，但 是选取DNA含量相对较高的生物组织，成 功率更大。
材料：新鲜的鸡血
注意： 本实验中，要往鸡血中加入抗凝剂（柠檬酸钠
溶液）
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（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、破碎细胞