分子生物学实验室常用试剂配方

分子生物学实验室常用试剂配方：医药观察之我见
2. 常用试剂配方（Prescriptions of Ordinary Reagents）（高媛）. (217)
(1) PBS (217)
(2) 胰酶Trypin (217)
(3) Tris-NH4Cl (217)
(4) Running buffer (218)
(5) Washing buffer (218)
(6) 湿转液 (218)
(7) LB培养基 (218)
(8) LB培养板 (218)
PBS:PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。

主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。

配置方法：
NaCl : 320g 优级纯
Na2HPO4. 12H2O 61.44g
KCl 8g
KH2PO4 8g
三蒸水4L
烧杯溶解后用HCl调PH为7.2-7.4，细胞用需要高温灭菌，放于超净台冷却，贴上封口膜及标签。

胰酶：Trypsin 一种胰蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离。

细胞消化胰酶常用工作浓度为0.25%，PH为7.2-7.4，储存液放在-20冻存，使用液放在4度。

Tris-NH4Cl :红细胞裂解液，是一种从人，鼠及其他哺乳动物等体内烦人组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，应用低渗的原理，改变红细胞渗透压，使得红细胞胀大破裂。

配置方法：
2L 体系：
NH4Cl : 14.94g 溶于1800mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤
Tris : 5.15g 溶于200mL ddH2O
3L体系
NH4Cl : 22.41g 溶于2700mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤
Tris : 7.725g 溶于300mL ddH2O
Running buffer: 4L （5X）
Tris: 60.6g
Gly: 288.3g
SDS: 20g
ddH2O 3.78L
Washing buffer: 4L (10X)
Tris : 48.6g
NaCl : 116.9g
Tween 20 : 40mL
ddH2O: 3.9L
湿转液：4L (10X)
Tris: 121.4g
Gly: 576.6g
ddH2O 3.57L
LB液体培养基：名字来源于英语lysogeny broth 即溶菌肉汤，应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。

配置方法：
Tryptone ( 胰蛋白胨) 10g/L
Yeast (酵母) 5g/L 溶解定容，分瓶，不拧紧灭菌（A1程序）
NaCl 10g/L
封口膜封口，4度冷却使用
LB固体培养基：
Tryptone ( 胰蛋白胨) 2g/200mL
Yeast (酵母) 1g/200mL
NaCl 2g/200mL
Agar(琼脂) 3g/200mL
于锥形瓶中溶解，定容，高压灭菌（A1），紫外照射，约室温时加入氨苄和卡那霉素（1000X），均匀涂抹于平板，紫外照射凝固，封口膜封口，注明日期及抗生素抗性，放于4度保存。