实验 MS培养基母液和常用试剂的配制
MS培养基配方
MS 培养基配方1、配置MS母液母液配置：加热都是用温水浴加热，全部都要避光保存，用装乙醇的棕色瓶来保存在4度即可表2.1大量元素母液药品20x g/L 500ml（20 x）KNO338g 19gNH4NO333 g 16.5gMgSO4•7H2O7.4 g 3.7gCaCl2 6.644g 3.322gKH2PO4 3.4g 1.7g溶于200ml蒸馏水,定容至500ml 需要加热才能完全溶解CaCL2.2H2O 4.4g/L表2.2微量元素母液药品100x g/L 500ml（100x g/L）KIH3BO3MnSO4.4H2OZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OGuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.083g0.6222.3 g0.86 g0.025 g0.0025 g0.0025 g0.0415 g0.31 g1.115 g0.43 g0.0125 g0.00125 g0.00125 g溶于100ml蒸馏水,定容至500ml表2.3有机母液药品100x 1L500ml(100x)肌醇10g5g烟酸0.05g0.025gVB60.05g0.025gVB10.1g0.05g甘氨酸0.2g0.1g表2.4铁盐母液药品100x g/L500mlFeSO4•7H2O 2.78g 1.39gNa2-EDTA. 2H2O 3.73g 1.865g铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于100ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，加水定容至500ml，置于小口瓶中，贴上标签2、固体MS培养基材料•找到4种母液：大量元素，微量元素，有机微量元素，铁盐母液•蔗糖，琼脂锥形瓶MS培养基配方：母液都稀释至1xMS培养基配方（1L）母液体积或重量(1L) 200ml大量元素20x50mL 10ml铁盐100x 微量100x 10mL 2ml 10mL 2ml有机100x10mL 2ml 蔗糖15g（15g/L）3g琼脂8g（8g/L） 1.6gPH先调至 5.85-5.88，最终灭菌后pH接近5.81）。
ms培养基配方
实验八MS培养基的配制和灭菌一、实验目的：了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验材料：天平、牛角匙、量筒、烧杯、搅拌机、胶桶、组培瓶、6种母液、白沙糖、活性炭、卡拉胶。
三、方法步骤1、母液配制大量元素(母液Ⅰ) mg／L 100ml。
(2) 微量元素(母液Ⅱ) (3) 铁盐(母液Ⅲ) (4) 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 和ⅣB (5) 植物生长调节物质(2，4-D，NAA)以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为10倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液。
其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1 mg/mL)。
其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。
2、培养基配制（1）配制培养液用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为100 ml，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各10ml。
再取2，4-D 10ml、NAA 2ml，与各种母液一起放入烧杯中。
（2）称取54g卡拉胶；300g蔗糖；活性炭1g。
（3）在胶桶中加入规定量的各种母液，包括生长调节物质。
组织培养实验MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制
其他常用试剂的保存
配制好的其他试剂应保存在密封的玻璃瓶中 ，并放置在阴凉干燥处。避免阳光直射和高 温环境，以防变质。对于一些易挥发或易氧 化的试剂，应特别注意密封保存和使用。
04
实验操作流程与注意事项
03
04
配制好的培养基应尽快使用，避 免长时间存放。
实验安全须知
避免直接接触培养基和化学试剂，如不慎接 触，应立即用大量清水冲洗。
对于有毒有害的化学试剂，应遵循相关规定 进行操作和处理，不得随意倾倒或排放。
在实验过程中，应注意防范火灾、爆炸等安 全事故，遵循实验室安全规定。
05
实验结果与数据分析
03
常用试剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制
根据实验需求，将植物生长调节剂溶解于相应的溶剂中，如 水、乙醇等。按照所需的浓度进行配制，并充分摇匀。
植物生长调节剂的保存
配制好的植物生长调节剂应保存在低温、避光、干燥的环境 中，避免长时间暴露在空气中，以防氧化失效。
无机盐与微量元素的配制与保存
实验过程中严格控制了操作步 骤和试剂质量，确保了实验结 果的准确性和可靠性。
实验结果符合预期，证明了实 验方案的有效性和可行性。
实验中存在的问题与改进建议
实验中存在试剂配制误差和操 作不规范的问题，可能导致实
验结果的不准确。
建议加强实验操作规范性培 训，提高实验人员的操作水 平，确保试剂配制的准确性
熟悉实验操作流程与注意事项
实验操作流程
准备所需试剂和器材→按照配方配制 母液和常用试剂→过滤除菌→分装→ 储存。
MS培养基及配制注意事项
2． 称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制：
为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配 成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸 （NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米 素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。 激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸 需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母 液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃） 保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为 0.5mg时，则取1ml母液即可。
2.无菌操作可按以下步骤进行：
（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外 线灯进行杀菌； （2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯； （3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； （4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后搽拭工 作台面； （5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； （6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽 等； 材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切 割。（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要 剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉 污染。
MS培养基配制方法-new
MS 培养基一、大量元素母液1：大量A母液2：大量B母液3：Fe盐注：配制顺序如下1. 称取3.73 g Na2-EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中，并置于70℃预热(A)；2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中(B)；3. 将B缓慢倒入A中混合，边倒边搅动，置于70 ℃水浴锅中螯合2 h；4. 冷却后定容至1 L。
二、微量元素母液4：微量三、有机物质母液5：有机（不含肌醇）℃注：配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel；肌醇也可加入有机母液。
四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp（氨苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ ml Km（卡那霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ ml Str（链霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ ml Cb（羧苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌250 mg/ ml 6-BA (6-苄基嘌呤) 1M NaOH或盐酸溶解，双蒸水定容，高压灭菌 1 mg/ ml NAA（萘乙酸）1M NaOH溶解，双蒸水定容，高压灭菌 1 mg/ ml IAA 95% 乙醇溶解，双蒸水定容，过滤灭菌 1 mg/ ml五、乙酰丁香酮(Acetone-syringone, AS)称取196.2 mg AS用10 ml DMSO溶解，母液浓度100 mM，-20℃避光保存，工作浓度100 ~ 200 μM六、MS溶液的混合5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中，混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素（6-BA和NAA），定溶至1000 ml，用1M NaOH调pH至5.8。
最后加Phytagel （Sigma）4.4g或Agar 10g。
灭菌完后，在培养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素（IAA）。
配置MS培养基
配置MS培养基以配置1000ml培养基为例。
MS培养基所需材料：大量元素：KNO3、NH4NO3、MgSO4·7H2O、KH2PO4、CaCl2·2H2O微量元素：MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·7H2O、CuSO4.5H2O4、CoCL2.6H2O铁盐：七水合硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）、乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA·2H2O）有机物：甘氨酸、盐酸硫胺素（维生素B1）、盐酸吡哆醇（维生素B6）、烟酸、肌醇1、配置MS培养基所需母液。
2、称取5-7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解。
3、称取30g蔗糖倒入,搅拌溶解。
4、分别移取各种母液混合，微量母液使用移液器吸取。
5、将混合好的母液加入琼脂与蔗糖溶液中，均匀混合，加蒸馏水用量筒定溶至1L.6、用1N的HCL和1N的NaOH来调溶液PH值至5.7-5.8.8、稍微冷却后,按需要分装入培养容器中.牛皮纸封口,用橡皮筋或绳子扎紧，高温灭菌。
注意事项：1．大量元素： CaCl2·2H2O单独配制置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制：铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合配置。
3．铁盐配制：将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制:储存在棕色无菌瓶中。
MS培养基母液的配制与保存
仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH，0.1-1NHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。
优点：（1）保证各物质成分的准确性。
（2）便于配置时快速移取。
（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10X）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16．5g②KNO31900 mg/L 19．0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4．4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3．7g⑤KH2PO4170 mg/L 1．7g2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22．3 mg/L（21．4 mg/L）223mg②ZnSO4·7H2O8．6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0．025mg/L 0．25mg④CuSO4·5H2O0．025 mg/L 0．25mg⑤Na2MoO4·2H2O0．25 mg/L 2．5mg⑥KI 0．83 mg/L 8．3 mg⑦H3BO36．2 mg/L 62 mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml（即含0．25 mg 的量）加入到母液中。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
MS培养基配制方法-new
MS 培养基一、大量元素母液1：大量A母液2：大量B母液3：Fe盐注：配制顺序如下1。
称取3。
73 g Na2—EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中,并置于70℃预热(A）；2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中（B）;3. 将B缓慢倒入A中混合，边倒边搅动,置于70 ℃水浴锅中螯合2 h；4. 冷却后定容至1 L。
二、微量元素母液4：微量三、有机物质母液5：有机（不含肌醇）℃注:配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel；肌醇也可加入有机母液。
四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp（氨苄青霉素) 双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ ml Km(卡那霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ ml Str（链霉素）双蒸水溶解,定容，过滤灭菌50 mg/ ml Cb（羧苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌250 mg/ ml 6-BA (6-苄基嘌呤) 1M NaOH或盐酸溶解，双蒸水定容，高压灭菌 1 mg/ ml NAA（萘乙酸) 1M NaOH溶解，双蒸水定容，高压灭菌 1 mg/ ml IAA 95% 乙醇溶解,双蒸水定容，过滤灭菌 1 mg/ ml五、乙酰丁香酮(Acetone—syringone，AS）称取196。
2 mg AS用10 ml DMSO溶解，母液浓度100 mM，-20℃避光保存,工作浓度100 ～200 μM六、MS溶液的混合5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中,混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素（6-BA和NAA）,定溶至1000 ml，用1M NaOH调pH至5.8。
最后加Phytagel （Sigma)4.4g或Agar 10g。
灭菌完后，在培养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素(IAA）.。
MS培养基的配置
MS培养基的配置一、母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（50X）称10升量溶解在200 ml蒸馏水中。
配1升培养基取20 ml。
注：CaCl2·2H2O单独配置2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
注：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0．25 mg的量。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
注：配制时，两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。
混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。
4、MS有机物母液（200X）称10升量溶解在50ml蒸馏水中。
配1升培养基母液5ml。
二、MS固体培养基的配制1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出，按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。
2、取少量的蒸馏水（约为配制培养基量的2/3）加入烧杯中。
注意：配500ml培养基用1000ml烧杯。
3、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。
每1000ml培养基，需要：MS大量元素母液 20mlMS微量元素母液 10mlMS铁盐母液 10mlMS有机物母液 5ml4、通过计算，用微量移液器取所需的各种生长调节剂母液。
5、加入蔗糖（30g/L），溶解。
6、定容：用容量瓶。
7、调pH值：用0.1 N 和0.5N 的NaOH，一般pH=5.8。
注意：①经高温高压灭菌后，培养基的pH值会下降0.2—0.8，故调整后的pH值应高于目标pH值0.5个单位。
MS培养基的配制,灭菌等注意事项
一、MS培养基母液注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
MS培养基母液配制
10
素
烟酸
0.025
肌醇
5
BA
0．1
激
IAA、NAA、GA3
0．1
素
IBA
0．1
0．5
10
注：BA 用 1N 的 HCI （约 10ml）溶解。 IAA、NAA、GA3 用酒精 95%（约 10ml）溶解。
常用试剂药剂：
药品名称 盐酸（36.5%） 硫酸（98%） 甲醛 高锰酸钾 氢氧化钠 乙醇 氯化汞（剧毒） 次氯酸钠
规格 500ml 500ml 500ml 500g 500g （酒精 95%） 100g 500g
500g 500g 500g 500g 500g 500g 500g 500g 500g 500g 500g 500g 500g 500g 25g 100mg/ml(200 mg/2ml) 100mg/ml(200 mg/2ml) 25g 25g 1g 1g 1g
0.083 100
1
NaMoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O Na2-EDTA FeSO4·7H2O
甘氨酸
0.025
0.0025
0.0025
3.73
100
1
2.78
0.1
吸取量 ml/配 1L
100
10
10
盐酸吡多醇（B1）
0.005
维
生
盐酸硫胺2·6H2O ZnSO4·7H2O CuSO4·5H2O
H3BO3 Na2MoO4·2H2O
肌醇 烟酸 VB3 盐酸硫胺素 VB1 盐酸吡哆醇 VB6
B5(1966) 250 150 150 2500 134 27.8 37.3 10 0.75 0.025 2 0.025 3 0.25 100 1 10 1
MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
MS固体培养基的配制
MS固体培养基的配制一、实验目的通过实验实训，掌握MS固体培养基的配制技术及操作技能。
二、材料与用具配制MS培养基的各种母液、生长调节物质母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、移液管、量筒、电饭煲、全自动高压灭菌器、pH试纸、0.1mol/L 的NaOH、0.1mol/L的HCl、培养瓶、标签、铅笔等。
三、方法与步骤（一）按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量（150-200ml）纯净水的量筒中。
母液一 30ml/L母液二 15ml/L母液三15ml/L母液四 15ml/L母液五30ml/L母液六7.5ml/L1-8组4人配1L，9-10组3人配1L。
（二）加入植物生长调节物质加入的具体调节物质与量视培养物不同而异（本次实验不加生长调节剂）。
（三）定容加纯净水定容至1000ml。
（四）倒入预先用铅笔标好刻度的电饭煲中。
（五）加糖、加热：加入蔗糖20g/L并开始加热。
（六）加琼脂粉12g/L：在电饭煲中给培养基加温至冒热气时均匀缓慢地加入琼脂粉，用玻璃棒不断搅拌至全部熔解并煮沸。
（七）调节pH值：煮沸后，用试纸测试pH值，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl把培养基的pH调整到5.6—5.8；加水至预先标注的刻度处，煮沸1-2分钟。
（八）培养基分注把配置好的培养基用烧杯分注到培养瓶中，分注前用量筒量取30ml水倒入培养瓶测试，每瓶装30ml（3瓶/100 ml）左右。
分注后立即加盖，贴上标签，注明培养基的名称、配制时间、配制人姓名。
（九）培养基灭菌，无菌水、无菌瓶、无菌纸片制作。
1.将蒸馏水注入灭菌腔，直至水流进入水位板中间的水位指示器。
2.将待灭菌的物品放入提篮中，将提篮放入灭菌腔中。
3.插上电源，打开开关。
4.旋紧“排汽旋钮”，关闭灭菌腔盖，直至指示灯“LOCKED”亮起。
5.选择灭菌程序，按“SET/ENT”键设置温度为121℃，保温时间20min。
6.长按“START”键开始灭菌。
ms基本培养基母液的配制方法
ms基本培养基母液的配制方法一、准备所需材料1. 酸性植物激素溶液：包括吲哚乙酸（IAA）、纯度较高的激素（如6-苄基腺嘌呤，BA）等。
2. 碱性植物激素溶液：如生长素（GA3）等。
3. 无机盐溶液：包括硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钾、硼酸、锌硫酸、硼酸等。
4. 维生素溶液：如次黄嘌呤核苷酸（NAA）等。
5. 蔗糖溶液：用于提供能量和碳源。
6. 琼脂：用于凝固培养基。
二、配制步骤1. 称取适量的无机盐溶液成分，按照MS基本培养基的配方比例将各种盐溶解在蒸馏水中，常用的浓度为1/2或1/4的MS培养基。
2. 将酸性植物激素溶液和碱性植物激素溶液分别加入到溶液中，注意控制激素的浓度。
3. 加入维生素溶液，按照配方比例加入到溶液中。
4. 加入适量的蔗糖溶液，用来提供能量和碳源。
5. 最后将琼脂加入到溶液中，搅拌均匀。
6. 调节溶液的pH值，通常为5.8左右。
7. 用蒸馏水补充溶液至总体积，并充分搅拌均匀。
8. 将配制好的培养基溶液进行高温高压灭菌处理，一般条件下为121摄氏度，压力为0.1MPa，持续20分钟。
三、注意事项1. 在配制过程中，要保持实验室卫生，使用无菌操作。
2. 使用高质量的试剂和蒸馏水，避免杂质的干扰。
3. 激素的浓度要根据实验需要进行调整。
4. 配制过程中要注意酸碱度的调节，尽量控制在5.8左右。
5. 琼脂的加入要充分搅拌均匀，避免结块。
6. 灭菌处理要按照规定的条件进行，确保培养基的无菌性。
通过以上步骤，我们可以成功地配制出MS基本培养基的母液。
这种培养基在植物组织培养、植物细胞和胚胎发生研究中起着重要的作用。
根据实验的需要，可以在母液的基础上进一步调整培养基的成分和浓度，以满足不同植物材料的培养要求。
希望以上内容对您有所帮助。
MS培养基及常用试剂的配制
一、MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。
MS培养基配方
MS培养基母液的配制：20×MS大量元素(1 L)：38 g KNO3，33 g NH4NO3，8.8 g CaCl2·2H2O，7.4 gMgSO4·7H2O，3.4 g KH2PO4。
200×MS微量元素(1 L)：0.166 g KI，1.24 g H3BO3，4.46 g MnSO4·4H2O，1.72 g ZnSO4·7H2O，0.05 g Na2MoO4·2H2O，0.005 g CuSO4·5H2O，0.005 g CoCl2·6H2O。
200×MS维生素和氨基酸(1 L)：20 g肌醇，0.1 g烟酸，0.1 g盐酸吡哆醇(VB6)，0.02 g盐酸硫胺素(thiamine hydrochloride, VB1)，0.4 g甘氨酸。
200×MS铁盐(1 L)：5.56 g FeSO4· 7H2O，7.46 g Na2EDTA· 2H2O，先溶于500 mL ddH2O，加热，调pH至5.5，定容至1 L。
注意：配制大量元素母液时，为避免产生沉淀，要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用分析纯。
化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合，混合时需注意边搅拌边混合。
CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。
配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA 应分别加热溶解后混合，并置于磁力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。
使用上述配好的母液，按照稀释倍数，配制基础MS培养液：1×MS大量元素，1×MS微量元素，1×MS维生素和氨基酸，1×MS铁盐，蔗糖30 g/L，定容后调节pH至5.8，高温高压灭菌。
MS培养基及常用试剂的配制
一、MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和分别溶于450ml蒸馏水中，加热，不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。
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母 液 种 类
成 分
规定 用量 /mg• L-1 2.0 0.1
0.5 0.5
浓 缩 倍 数
称 取 量 /mg 100 5
25 25
母液 配1L 定容 MS培 体积 养基 /ml 吸取 量/ml
甘氨酸
有 机 成 分
盐酸硫胺素
盐酸吡哆素 烟酸
200
250
5
肌醇
100
5 MS培养基母液和 常用试剂的配制流程
5.1培养基的成分
目前，不论液体培养还是固体培养，大多 数植物组织培养中所用的培养基都是由无 机营养物、碳源、维生素、生长调节物质 和有机附加物等几大类物质组成。
5.2 培养基的配制方法
配制培养基的最简单的方法是用市售培养 基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂 和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之 达到最终的容积。最后调节pH值，高压灭 菌，于是制成所需要的培养基。
通常把每种试剂单独溶解后再与别的也已 完全溶解的药品混合，或者待前一种化合 物完全溶解后再加入后一种化合物。混合 已溶解的各种矿质盐时还应注意先后顺序， 力求把Ca2+与SO42- 和PO43-错开，以免形 成硫酸钙或磷酸钙的不溶物。同时，要慢 慢地混合，边混合边搅拌。
5.3.1 大量元素母液的配制
MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外， 剩下的六种可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 • 2H20、MgSO4 • 7H2O、KH2PO4几种无机 盐来供应，它们可配在同一母液中（具体 配制见下表）。配制的步骤为：确定母液 的浓度和体积→计算各种化合物用量→称 量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标 签→放入冰箱保存。
母液的配制有两种方法：
一种是配制成单一化合物母液。此法适合 配制多种培养基都需要的同一种母液。
另一种是配成几种不同化合物的混合母液。 此法在大量配制同种培养基时省时省力。 由于MS 培养基较为常用，故配制MS 培养 基母液。
配好的母液应放在试剂瓶中贮存。
在配制MS培养基母液时，为减少工作量可 以把几种药品（如培养基中的大量元素或 微量元素）配在同一母液中，但应注意各 种化合物的组合以及加入的先后顺序，以 免发生沉淀。
配制好的各种母液应分别贴上标签，写明 母液名称、配制倍数、配制者、配制日期。 母液最好在2～4℃的冰箱中保存。尤其对 生长调节物质与有机类物质要求较严。 贮存时间不宜过长，如发现有霉菌和沉淀 结晶产生，就不能再使用。
注意事项：
（1）玻璃器皿的洗涤
（2）天平的使用 （3）配制大量元素母液时溶液的混合顺序 （4）铁盐的配制 （5）洗液的配制 （6）生长调节物质的配制
通过本次实验，使学生能熟练准确配制MS 培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩 固相关理论基础知识。
2 实验原理
培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生 存的营养基质。配制培养基时，为了减少 试剂称取时的工作量和少量称取时出现的 误差，以及避免多种营养成分混合导致沉 淀产生或相互反应而失去培养效果，预先 要将各种营养成分配制为一定倍数的培养 基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母 液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50 倍、100倍等或更高。
3 主要实验用具和仪器
冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的 试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、 烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、 玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~7.0）， 电磁炉等。
4 药品和试剂
硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸 二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸 钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、 硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡 哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙 酸)、NAA（α -萘乙酸）、 6-BA （ 6-苄 基腺嘌呤）、 KT、浓盐酸、氢氧化钠、浓 硫酸、重铬酸钾、95%酒精、蒸馏水等。Leabharlann 0.50.5 0.1 0.1
细胞分 裂素
6-BA KT
5.3.6 其它常用试剂的配制
盐酸（lmol· L-1 ）：用浓度36.5%、密度 1.19g/cm3的浓盐酸配制
氢氧化钠（lmol· L-1 ）：用固体氢氧化钠配 制 75%酒精(v/v) ：用95%的酒精来配制
稀铬酸洗涤液：重铬酸钾50 g溶于1000 ml 蒸馏水中，冷却后缓慢加入工业用硫酸90 ml。
如果没有培养基干粉，则可采用以下两种 方法来配制： 一个是按照配方规定的数量分别称量出各 种成分，分别使它们溶解于水，然后再将 它们混合在一起。 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液（母 液），贮存在2～4℃冰箱内，待配培养基 时取出，按比例稀释配用。此法较为常用。
5.3 MS 培养基母液的配制
5000
5.3.4 铁盐母液的配制
铁盐母液宜单独配制，其配制步骤为：
确定母液的浓度和体积→计算各种化合物 用量→称量→分别溶解→混合→煮沸数分 钟→调节pH值至5.8 →定容→装瓶（棕色） →贴标签→放入冰箱保存。 用时每配l L培养基取该溶液5ml。
母 液 种 类
成 分
规定 用量 /mg• L-1
2,4-D/NAA用少量95％酒精溶解，再加水定 容；6-BA/KT应先溶于少量1 mol·L-1的HCl 中，再加水定容。 具体配制见下表：
母液 种类 生长素
成分
母液定 母液浓 称取量 容体积 度 (mg ) (ml ) (mg/ml)
2,4-D
NAA
50
50 10 10
100
100 100 100
作业：
待本实验全部完成后撰写综合性实验报告。 报告空表自己到教务处网站下载。本次要 求详细写出MS培养基母液和常用试剂的配 制流程。
实验1 胡萝卜愈伤组织的诱导培养 实验内容：
1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制
1-2 胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制
1-3 胡萝卜愈伤组织的诱导
1-4 胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制
1-5 胡萝卜愈伤组织的继代培养
实验1-1 MS培养基母液 和常用试剂的配制
1 实验目的
母 液 种 类
成 分 MnSO4 • H2O
规定 用量 /mg• L-1
16.9 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025
浓 称取 缩 量/mg 倍 数
3380 1720 1240 200 166 50 5
母液 定容 体积 /ml
配1L 培养 基吸 取量 /ml
微 量 KI 元 素 Na2MoO4 • 2H2O CuSO4 • 5H2O
浓 缩 倍 数
称 取 量 /mg 3730
母液 定容 体积 /ml
配1L MS培 养基 吸取 量 /ml
铁 Na2EDTA • 2H2O 盐 FeSO4 • 7H2O
37.3
27.8
200
2780
500
5
5.3.5 植物生长调节物质母液的配制
对于植物生长调节物质，配制成母液时， 通常用mg·ml-1或 ppm 较为方便，一般配 制成0.1-1mg·ml-1的母液，这样的浓度便 于计算也可避免冷藏时形成结晶。
注意： CaCl2 • 2H2O最后加入
母 液 种 类
成 分
规定 用量 /mg• L-1
浓 母液 缩 称取量 定容 体积 /mg 倍 /ml 数 38000
20
配1L MS培 养基 吸取 取量 /ml
KNO3
大 量 元 素
1900 1650
440 170
NH4NO3
CaCl2 • 2H20 KH2PO4
ZnSO4 • 7H2O H3BO3
1000
5
CoCl2 • 6H2O
0.025
5
5.3.3 有机成分母液的配制
MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机 成分母液应分别单独配制（具体配制见下 表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和 体积→计算各种化合物用量→称量→溶解 →定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存。
33000
8800 7400 3400
1000
50
MgSO4 • 7H2O 370
5.3.2 微量元素母液的配制
MS培养基中的微量元素可由MnSO4 • 4H2O、ZnSO4 • 7H2O、H3BO3、KI、 Na2MoO4 • 2H2O、CuSO4 • 5H2O、CoCl2 • 6H2O几种无机盐来供应，它们也可配在 同一母液中（具体配制见下表）。配制步 骤同大量元素（混合时不要求先后顺序）。