752紫外可见分光光度计使用方法

752紫外可见分光光度计

一、仪器的工作原理

分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下,产生了对光的吸收效应,物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱,因此当某单色光通过溶液时,其能量就会被吸收而减弱,光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系,也即符合于比色原理—一比耳定律。

τ=I/Io

log I/Io=KCL

A= KCL

从以上公式可以看出,当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时.透过的光是根据溶液的浓度而变化的,752紫外可见分光光度计的基本原理是根据上述物理光学现象而设计的。

二、仪器的安装、使用、安装

1 仪器在安装使用前应对仪器的安全性进行检查,电源电压是否正常,接地线是否牢固可靠,在得到确认后方和接通电源使用。

2 仪器经过运输和搬运等原因,会影响波长准确度,应进行仪器调校后使用。

使用:仪器使用前需开机预热30min。

本仪器键盘共有4个键,分别为;1 A /τ/C/F

1SD

2 ▽/0%

3?/100%

4 A /τ/C/F键:每按此键来切换A、τ 、C、F之间的值。

A——吸光度(Absorbance)

T——透射比(Trans)

C——浓度(conc)

F——斜率(Factor)

(2)F值通过按键输入(后面介绍如何设置)

5SD键:该键具有2个功能

a)用于RS232串行口和计算机传输数据(单向传输数据,仪器发向计算机)。

b)当处于F状态时,具有确认的功能,即确认当前的F值,并自动转到C,计算当前的C 值(C=F*A)。

6 ▽/0%键:该键具有2个功能

a)调零;只有在τ状态时有效,打开样品室盖,按键后应显示0.000。

b)下降键:只有在F状态时有效,按本键F值会自动减1,如果按住本键不放,目动减1会加快速度;如果F值为0后,再按键它会自动变为1999。而按键开始自动减1。

7 ?/100%键;该键具有2个功能

a)只有在A、τ状态时有效,关闭样品室盖,按键后应显示0.000、100.0。

b)上升键:只有在F状态时有效,按本键F值会自动加1,如果按住本键不放,自动加1会加快速度,如果F值为1999后,再按键它会自动变为0,再往键开始自动加l。

例如:设置斜率为1500。

方法一

T)按A/τ/C/F键切换到F状态。

b)如果当前F值为1000,则按?/100%键,直到F值为1500。

C)再按SD键,表示当前的F值为1500,然后自动回到C状态,假如所测的A值为0.234,则此时显示C值为0351。

方法二

a)按A/τ/C/F键切换到F状态。

b)如果当前的F值为1000,则按?/100%键,直到F值为1500、再按A/τ/C/F 键切换到C状态,假如所测的A值为0.224,则此时显示C值为0351。

722型分光光度计

一、测量原理

分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律:当容液中的物质在光的照射和激发下,产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性的,各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶

液时,溶液对光的吸收程度A 与溶液的浓度c(g/l)或液层厚度b(cm)成正比。其定律表达式A=abc

(a是比例系数)。当c的单位为mol/l时,比例系数用ε表示,则A=εbc称为摩尔吸光系数。其单位为L?mol-1?cm-1它是有色物质在一定波长下的特征常数。

T(透光率)=I/I0 A(吸光度)= -lgT 或A=K?C?L(比色皿的厚度)

测定时,入射光I,

吸光系数和溶液的光径长度不变时,透过光是根据溶液的浓度而变化的,即“K”为常数。比色皿厚度一定,“L”、“I0”也一定。只要测出A即可算出“C”。

二、722型分光光度计的使用

1、将灵敏度旋钮调至“1”档(信号放大倍率最小)。

2、开启电源,指示灯亮,选择开关置于“T”,波长调至到测试用波长。仪器预热20分钟。

3、打开试样室(光门自动关闭),调节透光率零点旋钮,使数字显示为000.0。(调节100%T 旋钮),盖上试样室盖,将比色皿

架处于蒸馏水校正位置,使光电管受光,调节透光率100%旋钮使数字显示100.0。如显示不到100.0,则可适当增加微电流放大的倍数。(增加灵敏度

的档数同时应重复(3)调节仪器透光率的“0”位)但尽量使倍率置于低档使用。这样仪器会有更高的稳定性。

4、预热后,按(3)连续几次调整透光率的“0”位和“100%”的位置,待稳定后仪器可进行测定工作。

三、吸光度“A”的测量

将选择开关置于A。调节吸光度调零旋钮,使得数字显示为零,然后将被测样品移入光路,显示值即为被测样品的吸光度值。

四、浓度c的测量

将选择开关由“A”旋至“C”将已标定浓度的样品放入光路,调节浓度旋钮,使得数字显示为标定值,将被测样品放入光路即可读出被测样品的浓度值。

注意事项:

1、测量完毕,速将暗盒盖打开,关闭电源开关,将灵敏度旋钮调至最低档,取出比色皿,将装有硅胶的干燥剂袋放入暗盒内,关上盖子,将比色皿中的溶液倒入烧杯中,用蒸馏水洗净后放回比色皿盒内。

2、每台仪器所配套的比色皿不可与其它仪器上的表面皿单个调换。

使用方法

(1)预热仪器将选择开关置于“T”,打开电源开关,使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳,不要连续光照,预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开,使光路切断。

(2)选定波长根据实验要求,转动波长手轮,调至所需要的单色波长。

(3)固定灵敏度档在能使空白溶液很好地调到“100%”的情况下,尽可能采用灵敏度较低