72型分光光度计工作原理
分光光度计 原理
72型分光光度计原理72型分光光度计是可见光分光光度计，波长范围为420nm～700nm，它由三大部分组成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。
其光学系统如图5-11所示。
72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。
如图所示，白色光源经入射狭缝、反射镜和透光镜后，变成平行光进入棱镜，色散后的单色光经镀铝的反射镜反射后，再经过透镜并聚光于出射狭缝上，狭缝宽度为0.32nm。
反射镜和棱镜组装在一可旋转的转盘上并由波长调节器的凸轮所带动，转动波长调节器便可以在出光狭缝后面选择到任一波长的单色光。
单色光透过样品吸收池后由一光量调节器调节为适度的光通量，最后被光电电池吸收，转换成电流后由微电计指示，从刻度标尺上直接读出透光率的值。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
分光光度计的简单原理分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。
样品的吸光值与样品的浓度成正比。
核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。
可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。
核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。
每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。
定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。
如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。
测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。
测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。
721分光光度计使用操作规程
721分光光度计使用操作规程1.仪器工作环境1.1使用温度：5~35，相对湿度≤85%1.2放置在坚固平稳的工作台上，避免震动1.3室内照明不宜太强，避免日光直射1.4电扇不宜直接向仪器吹风1.5尽量远离高强度磁场、电场及发生高频波的电器设备1.6供给仪器的电源电压为AC220V±22V，频率为50Hz±1Hz，有接地线1.7避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀气体的场所使用2.仪器的工作原理分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。
各种不同的物质都具有各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，即符合比色原理比尔定律。
T=I/I。
LogI/I。
=KCLA=KCL其中：T-透射比I。
-入射光强度I-透射光强度A-吸收度K-吸收系数L-溶液的光径长度C-溶液的浓度当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时、透射光是根据溶液的浓度而变化的。
3.仪器的光学原理钨卤素灯发出的连续辐射光经聚光镜、滤光片后，成像于单色器进狭缝，此狭缝正好于聚光镜及单色器内准直径的焦平面上，因此进入单色器的复合光通过衍射作用形成按照一定顺序均匀排列的连续的单色光谱，此单色光谱重新回到准直镜上，由于仪器出射狭缝设置在准直镜的焦平面上，这样，从光栅色散出来的光谱经准直镜后利用聚光原理成象在出射狭缝上，出射狭缝选出指定带宽的单色光通过聚光镜落在试样室被测样品中心，样品吸收后透射的光经聚光镜射向光电池接收。
4.基本操作步骤4.1连接仪器电源，确保仪器供电电源有良好的接地性能。
4.2接通电源，使仪器预热20分钟。
4.3用“功能”键设置测试方式：透射比T，吸光度A，已知标准样品浓度值方式C和已知标准样品斜率方式F4.4用波长选择旋钮设置分析波长4.5将参比样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中，液面高度比色皿2/3，打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，再盖上样品室盖。
医院检验科722分光光度计维护规程
医院检验科722分光光度计维护规程1.仪器分析原理和适用范围1.1原理分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的。
各种不同物质都具有各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定的比例关系，也即符合比色原理一比耳定律。
722分光光度计的基本原理是根据上述之物理光学现象而设计的。
1.2适用范围在近紫外、可见光谱区域内对样品物质作定性和定量分析。
可广泛用于医药卫生、临床检验、生化、石油化工、质量控制等部门，是理化实验室常用的分析仪器之一。
2.仪器性能参数2.11光源、光学系统和波长范围：鸨卤素灯，12V,30W；单光束、衍射光栅；33Onm-80OnIi1。
2.2接收元件：端窗式G1030光电管。
2.3波长精度和重显性：精度±2nm,重显性：0.5nmo2.5光谱带宽：6nπio2.6杂散光：M(T)(在360nm处)。
噪声：0.5+(T)(在550nm处)2.7透光率测定范围：0-100%(T)；重显性0.5*(T)；线性精度：土0.5%(T) 2.8吸光度测定范围：07.999(A)；精度：±0.004A,(在0.5A处)。
2.9光源、检测波长和光电计：鸨化卤素灯，全息光栅，17个测试点，每点28个数据，26秒间期。
10个不同波长(340-800nm);单波长或双波长内、外2圈直接检测。
硅光电池检测器，测定范围：0.0000-2.50000D,分辨率：0.0001ODo2.10环境条件：温度：5~35℃；相对湿度：40~80%。
2.11电源：电压：220±10%Vac;49.5-50Hzo2.12大小和重量：400mm×230mm×552mm,22.5kg。
3.操作规程1.11将灵敏度旋钮调置“1”档（放大倍率最小）。
打开仪器电源开关，选择开关置于“T”，调节波长（入）调节旋纽，选择需用的单色光波长。
721分光光度计
1 仪器的主要用途721可见分光光度计是专供工厂、矿山、医院以及各科研单位的化验室，在可见光谱区范围内（360nm~800nm）进行定量比色分析用。
仪器在410nm~710nm之间可增加消光片或采用有色溶液作被测溶液的陪衬代空白，以便提高分析灵敏度和提高消光读数范围。
2 仪器的工作环境该仪器应安放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强，热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发光不稳。
尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。
避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀性气体的场所使用。
推荐使用交流稳压电源，以加强仪器的抗干扰性能。
使用功率为100W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。
3 仪器的主要技术指标及规格a)波长范围：360nm~800nm。
b)波长准确度：360nm~600nm±3nm；600nm~700nm±5nm；700nm~800nm±8nm。
c)透射比准确度：±2％。
d)透射比重复性：≤0.5％。
e)稳定性：暗电流漂移不超过0.5%/3min。
f)仪器外形尺寸：480mm长×370mm宽×210mm高。
g)仪器净重：18kg。
4 仪器的工作原理分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的。
各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理——比耳定律。
τ＝I／I ologI o/I=KCLA=KCL其中：τ透射比I o 入射光强度I 透射光强度 A 吸光度K 吸收系数L 溶液的光径长度C 溶液的浓度从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时，透过光是根据溶液的浓度而变化的，721可见分光光度计的基本原理是根据上述之物理光学现象而设计的。
722分光光度计
722分光光度计1. 引言分光光度计是一种常用于实验室和工业生产中的仪器，用于测量光的强度和光的吸收、透射等特性。
722分光光度计是一种先进的光度计型号，具有多种功能和特点，在各个领域中被广泛使用。
2. 工作原理722分光光度计的工作原理基于光的吸收和透射特性。
当经过选择性滤光片筛选后的光线通过样品时，样品会吸收一部分特定波长的光，而透射另一部分光线。
仪器将测量透射的光线强度，然后与未经样品处理的光线强度进行比较，从而得到样品对特定波长光的吸收情况。
3. 功能特点3.1 高精度测量722分光光度计采用先进的光学技术和检测器件，具有高精度测量能力。
它可以测量到小到纳米级别的光强度变化，确保实验和生产过程中的精确度和可靠性。
3.2 宽波长范围分光光度计722具有广泛的波长范围，一般从185nm到1100nm。
这使得它适用于不同波长范围的实验和应用，例如化学分析、生物学研究和药物开发。
3.3 多种测量模式722分光光度计可以通过选择不同的测量模式来适应不同的应用需求。
常见的测量模式包括吸光度测量、透射测量、蓝光疏水性分析和荧光测量等。
用户可以根据实际需求选择最适合的测量模式。
3.4 数据处理与分析分光光度计722提供强大的数据处理和分析功能。
用户可以使用内置的软件进行数据采集、存储和处理。
此外，它还支持与计算机的连接，可以方便地导出数据到其他应用程序进行进一步分析和处理。
4. 应用领域722分光光度计在各个领域都有广泛的应用，包括但不限于以下几个方面：4.1 化学分析在化学分析中，分光光度计722可以用于测量溶液中化学物质的浓度。
通过比较样品溶液透射的光强和标准溶液的透射光强，可以确定样品中化学物质的浓度。
4.2 生物学研究在生物学研究中，分光光度计722可以用于测量生物样品中的DNA、蛋白质等生物分子的含量。
这对于研究细胞、基因和蛋白质的功能和结构具有重要意义。
4.3 药物开发在药物开发过程中，分光光度计722可以用于药物的质量控制和稳定性测试。
简述722型分光光度计的原理
简述722型分光光度计的原理722型分光光度计是一种常见的实验室仪器，用于测量溶液中的化学物质浓度和反应速率。
其原理是利用化学物质吸收或透过可见光和紫外线之间的特定波长范围的光线的能量，从而推断其浓度。
722型分光光度计由光源、单色器、样品室、光检测器和显示器组成。
光源可以是白炽灯或汞灯。
单色器通过光的色散将光分解成不同的波长，只选择感兴趣的波长。
样品室则是容纳待测溶液的位置，通常为一个光路和一个池。
光接收器检测光通过样品室时的变化。
最终，结果可显示在一个数字显示器上。
当光通过样品室时，样品吸收一部分光线，而另一部分透过样品室，进入光检测器中进行检测。
根据比尔-朗伯定律，吸光度（A）与溶液中某一化学物质的浓度（C）之间存在线性关系，即A = εlc，其中ε是摩尔吸光系数，l是光路长度，c是质量浓度。
在使用分光光度计之前，需要进行校准和标准曲线的绘制。
校准可使用未知浓度的标准溶液进行，以判断仪器的精度和准确度。
标准曲线则是使用一系列知名浓度的溶液进行，以绘制吸光度与浓度之间的线性关系曲线。
在测量样品之前，可以通过比较样品与标准曲线的关系来推断其浓度。
722型分光光度计的应用非常广泛，包括生物化学、药学、环境监测、食品分析等领域。
其优点是使用简单、测量快速、准确度高，是实验室中不可或缺的仪器。
722型分光光度计在生物学和生化学研究中的应用尤为广泛。
在酶动力学实验中，可以使用分光光度计来测量特定反应速率的变化，以推断酶的最大速率和米氏常数。
在生物分子结构研究中，可以使用光学光谱来测量特定化学键的吸收谱，从而确定生物分子的化学结构。
分光光度计还广泛应用于医学实验室中。
在血液化学分析中，可以使用分光光度计来测量生物标记物的浓度，例如血糖、肝酶和肌酸酐。
这些测量结果可以帮助医生诊断某些疾病，并监测疾病的进展和治疗效果。
环境科学也是分光光度计应用的另一个领域。
在水质监测中，可以使用分光光度计来测量水中各种污染物的浓度，例如硝酸盐和氨。
722分光光度计
（10）把比色皿定位装置的拉杆轻轻地拉出一格（注意应使 滑板处在定位槽中），使试样溶液进入光路，这时电表指 针偏离零位。 （11） 转动读数电位器旋钮，重新使电表指针移到“ 0 ”位 上，此时刻度盘上的读数即为试样的透光率和相应的光吸 收值。 （12） 取得读数后，应即时将暗电流闸门重新关上，以保 护光电管，防止受光时间过长而疲劳。
722型分光光度计
1.数字显示器；2.吸光度调零旋钮；3.选择开关；4.吸光度调斜率电位器；5.浓度 旋钮；6.光源室；7.电源开关；8.波长手轮；9.波长刻度窗；10.试样架拉手； 11.100%T旋钮；12. 0%T旋钮；13.灵敏度调节旋钮；14.干燥器
1. 使用方法
（1）将灵敏度旋钮调整“1”档（放大倍率最 小）。 （2）开启电源，指示灯亮，仪器预热20分 钟，选择开关置于“T”。 （3）打开试样室盖（光门自动关闭），调节 “0%T”旋钮，使数字显示为“00.0”。 （4）将装有溶液的比色皿放置比色架中。 （5）旋动仪器波长手轮，把测试所需的波长 调节至刻度线处。
2. 注意事项 主要要注意以下 几点：
（1）在接通电源之前，应该对于仪器的安全性进行检查， 电源线接线应牢固，通地要良好，各个调节旋钮的起始位 置应该正确。 （2）电表的指针必须位于零刻线上。若指针偏离，则可用 电表上的校正螺丝进行调节。 （3）仪器底部放有 2 只干燥剂筒，用以保持仪器的干燥， 此外在仪器停止工作期间，在比色皿暗箱内，塑料仪器套 内都应放防潮硅胶袋。 （4）仪器的连续使用时间不应超过 2 h。使用后必须间歇 0.5h，才能再用。 （5）务必保持比色皿透光面的清洁。不要用手摸比色皿的 光滑的表面，更不要用毛刷刷洗比色皿，以免影响读数的 准确。
（3）检查仪器的各种开关和旋钮使之处于关闭位置。然后 再打开电源开关，使仪器预热 20 min。
721G分光光度计
1 仪器的要紧用途721G/722G可见分光光度计能在可见光谱区域对样品物质作定性定量的分析。
该仪器可普遍地应用于医药卫生、临床查验、生物化学、石油化工、环境爱惜、质量操纵等部门，是理化实验室经常使用的分析仪器之一。
2 仪器的工作环境仪器应安放在干燥的房间内,利用温度为5℃~35℃，相对湿度不超过85%。
利历时放置在牢固平稳的工作台上，且幸免强烈的震动或持续的震动。
室内照明不宜太强，且幸免直射日光的照射。
风扇不宜直接向仪器吹风，以避免阻碍仪器的正常利用。
尽可能远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。
供给仪器的电源电压为AC220V±22V，频率为50Hz±1Hz,并必需装有良好的接地线。
推荐利用交流稳压电源，以增强仪器的抗干扰性能。
利用功率为500W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。
幸免在有硫化氢、亚硫酸氟等侵蚀气体的场所利用。
3 仪器的要紧技术指标及规格仪器级别：Ⅲ类光学系统：单光束、衍射光栅。
波长范围：●721G 340nm~1000nm, ●722G 325nm~1000nm。
光源：钨卤素灯12V20W。
接收元件：光电池。
波长最大许诺误差(nm): ±2。
波长重复性(nm)：≤1。
光谱带宽(nm)：5±。
杂散光（T）：≤%（在360nm处）。
透射比测量范围（T）：%~%。
吸光度测量范围（A）：~。
浓度直读范围：0000~1999。
透射比最大许诺误差（T）：±%。
透射比重复性（T）：≤%。
噪声（T）：100%噪声≤%，0%噪声≤%。
稳固性（T）：亮电流≤%/3min,暗电流≤%/3min。
电源：AC220V±22V，50Hz±1Hz。
外型尺寸：450 mm×390mm×210mm净重：12kg。
4 仪器的工作原理分光光度计的大体原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸生效应，物质对光的吸收是具有选择性的。
722s分光光度计的工作原理.
722s分光光度计的工作原理、仪器的主要用途:在近紫外和可见光谱区域内对样品物质作定性和定量的分析,是理化实验室常用分析仪器之一。
2、仪器的工作环境:2.1该仪器应安放在干燥的房间内,使用温度为5°C~35°C。
2.2使用时放置在坚固平稳的工作台上,而且避免强烈震动或持续震动。
2.3室内照明不宜太强,且避免日光直射。
2.4电风扇不宜直接吹向仪器,以免影响仪器的正常使用。
2.5尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。
2.6供给仪器的电源为220伏±10%,49.5--50Hz,并须装有良好的接地线。
宜使用100W以上的稳压器,以加强仪器的抗干扰性能。
2.7避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀性气体的场所使用。
3、主要技术性能及规格:3.1光学系统:单光束、衍射光栅。
3.2波长范围:330nm~800nm.。
3.3光源:钨卤素灯12V30W。
3.4接收元件:端窗式G1030光电管。
3.5波长精度:±2nm。
3.6波长重现性:0.5 nm。
3.7光谱带宽:6 nm。
3.8杂散光:1%(T(在360 nm处。
3.9透过率测量范围:0-100%(T。
3.10吸光度测量范围:0-1.999(A。
3.11浓度直读范围:0-2000。
3.12光度精度:3.12.1透过率线性精度±0.5%(T。
3.12.2吸光度精度±0.004A(在0.5A处。
3.13透过率重现性:0.5%(T。
3.14噪声:0.5%(T(在550 nm处。
3.15电源:220伏±10% 49.5-50Hz。
3.16外形尺寸:552mm× 400mm ×230mm。
3.17净重:22.5公斤。
4、仪器的工作原理4.1分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下,产生了对光吸收的效应,物质对光的吸收是具有选择性的,各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱,因此当某单色光通过溶液时,其能量就会被吸收而减弱,光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系,也即符合于比色原理---比耳定律。
722可见分光光度计说明书
7
5.2.1 测定透明材料的透射比···················································································
7
5.2.2 测定透明材料的 T – λ(透射比-波长)曲线························································
9
6
仪器维护和故障识别······················································································ 10
6.1 仪器日常维护································································································· 10
7
5.2.3 测量透明溶液的吸光度···················································································
7
5.2.4 运用 A-C(吸光度-浓度)标准曲线测定物质浓度················································
1 原理、用途和特点：
1.1 原理
可见分光光度计是一种结构简洁、使用方便的单光束分光光度计，基于样品对单色光的选择
吸收特性可用于对样品进行定性和定量分析。其定量分析根据相对测量原理工作，即选定样
品的溶剂(或空气)作为标准试样，设定其透射比为 100%，被测样品的透射比则相对于标准
72型分光光度计的主要构成
72型分光光度计的主要构成72型分光光度计是一种常见的实验仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析实验中。
它主要由灯源系统、光栅系统、检测系统和数据处理系统四大部分构成。
首先，灯源系统是分光光度计的重要组成部分之一。
它通常由可见光或紫外光灯泡组成，通过发射出来的光线作为实验样品的光源。
灯源系统的稳定性和亮度直接关系到分光光度计的测量准确性和稳定性。
其次，光栅系统是72型分光光度计的核心部分。
它包括输出狭缝、光栅和入射狭缝等组件。
光栅是光栅系统的关键元件，它具有许多细密的刻痕，可以将入射光根据波长分解成不同颜色的光谱。
通过调整光栅的角度，可以选择特定波长的光进行测量。
入射狭缝和输出狭缝则用于控制光的进出，确保测量的准确性和稳定性。
第三，检测系统是用于测量光的强度的部分。
它通常由光电二极管、光电倍增管或光电管等组件组成。
这些器件能够将测量的光信号转换为电信号，并通过放大和处理后输出给后续的数据处理系统。
检测系统的灵敏度和稳定性对于测量结果的精确性至关重要。
最后，数据处理系统是72型分光光度计的重要组成部分之一。
它通常由微处理器、显示屏和键盘等组件组成。
数据处理系统能够通过处理和分析检测到的电信号，并将结果显示在显示屏上，操作者可以通过键盘输入指令和参数，对数据进行处理、分析和存储。
总的来说，72型分光光度计的主要构成包括灯源系统、光栅系统、检测系统和数据处理系统四大部分。
这些部分相互配合，实现了对光强度的准确测量和数据的处理分析。
分光光度计的应用广泛，不仅可以用于定性和定量分析，还可以用于反应动力学研究、药物测定、环境监测等领域。
其准确性和可靠性使其成为科学研究和工业生产中不可或缺的实验仪器。
722型分光光度计使用方法及原理
722型分光光度计使⽤⽅法及原理⼀、仪器⽤途本仪器能在可风光谱区范围内测定物质的吸收光谱，对物质成分及含量进⾏定性和定量分析，⼴泛⽤于医药、卫⽣、⾷品、化学、⽣物、环境保护等领域，是⽣产、教学、科研最常⽤仪器之⼀。
⼆、⼯作原理物质的吸收光谱是物质对各种单⾊光能量的吸收特性，本仪器利⽤相对测量原理，在某⼀测试波长处，测试待测溶液的透射⽐，微机还可将透射⽐转换成吸光度，⽤户还可通过配制标样的⽅法，直接显⽰待测溶液的浓度值。
三、仪器使⽤条件1、仪器安放在⼲燥的房间内，使⽤换件温度为5度-35度，相对温度不超过85%2、使⽤时应放置在坚固平稳的⼯作台上，不能有强烈震动或持续震动。
3、室内照明不宜太强，避免直射⽇光的强射，尽量远离⾼强度的磁场，电场及⾼频波的电器设备。
4、供给仪器的电源压⼒为AC220V±22V,频率为50Hz±1 Hz，必须装有良好的接地线。
推荐使⽤交流稳压电源，使⽤功率为1000W以上的电⼦交流稳压器或者交流恒压稳压器。
5、避免在有硫化氢等腐蚀⽓体的场所使⽤。
四、主要技术指标1、⼯作波段：325-1000nm2、波长准确度：±2nm3、波长重复性：≤1 nm4、光谱带宽：5 nm5、测量范围透射⽐T：0-100%吸光度A：-0.097--2.000A浓度C：0-1999C6、透射⽐测量准确度：±1.0%T7、透射⽐测量重复性：0.5%T8、杂光：≤0.5%(360 nm处)9、电源：交流220±22V 50Hz1 Hz10、数据输出：RS-232打印输出(打印机可选购)五、仪器结构1、仪器外形及各部位功能图⽰说明(图⼀)：2、仪器的光学系统图(图⼆)六、使⽤⽅法1、仪器使⽤前需开机预热30min图三仪器显⽰器与键盘功能1.-状态显⽰(T.A.C.F.) 2-确认键3-调0%T键4-调100%T/0.00A键5.功能键2、确认键：具有以下功能a.⽤于向打印机发出打印信息b.当处于C状态时，具有确认功能，即确认当前的C值C.当处于F状态时，具有确认的功能，即确认当前的F值例：设置打印机(格式)a按“功能键”将测试模式转换到T状态，(即T指⽰灯亮)则打印TO35.8%b按“功能键”将测试模式转换到A状态，(即A指⽰灯亮)则打印A=0.0445c按“功能键”将测试模式转换成C状态，(即C指⽰灯亮)则打印C=0.445 F=1000(注：在C状态时F数据同时打印)3、0%键具有以下功能a.调整只有在T状态下时有效，打开样品室塞，放进⿊体，再盖上样品室盖显⽰器不是零的情况下，按此键后，T应显⽰000.0b.下降键:在C状态时有效，按此键C值会⾃动减1，如果按住不妨，⾃动减1会加快速度，如果C值为0后，再按此键会⾃动变为200，再按此键开始⾃动减1，(你的C值输⼊后必须按“确认”键才会⽣效)c.下降键：在F状态时有效，按此键F值会⾃动减1，如果按住此不妨，⾃动减1会加快速度，如果F值为0后，再按此键它会⾃动变为1999，再按此键开始⾃动减1。
72型分光光度计的主要构成
72型分光光度计的主要构成72型分光光度计是一种用于测量物质溶液中分子浓度的精密仪器。
它由许多不同的部件组成，每个部件都扮演着至关重要的角色。
以下是72型分光光度计的主要构成和相关参考内容。
1. 光源：72型分光光度计通常使用氙灯或钨灯作为光源。
这些灯具有广谱的辐射，能够提供足够的光强度，以便在测量中获得准确的数据。
2. 双道光束分配器：该仪器中的双道光束分配器允许光线通过不同的通道。
其中一个通道用于参考光束，另一个通道用于样品光束。
这种设置有助于排除不同通道之间的光源波动和其他扰动因素。
3. 准直系统：分光光度计通常包含一个准直系统，它用于将光线聚焦到样品细胞中。
准直系统由透镜、反射棱镜和其他光学元件组成，能够准确地聚焦光束。
4. 选择装置：分光光度计中的选择装置用于选择所需的波长范围。
选择装置通常由光栅构成，光栅可以根据需要选择光束中的特定波长。
5. 样品池：样品池是放置溶液的容器，通常由石英或玻璃制成。
样品池必须具有良好的光透过性和耐腐蚀性，以确保准确的测量结果。
6. 探测器：72型分光光度计通常使用光敏电池作为探测装置。
光敏电池通过将光能转化为电能来测量光束的强度。
典型的光敏电池有光电二极管（photodiode）和光电××（photomultiplier）。
7. 信号处理器和显示器：测量信号由分光光度计中的信号处理器处理，并通过显示器显示。
信号处理器能够将探测器测得的电流转化为光强度的数字读数，以便用户更好地理解和记录测量结果。
以上是72型分光光度计的主要构成和相关参考内容。
分光光度计是一个结构复杂的仪器，各个部件之间的相互作用对于获得准确的测量结果至关重要。
光源、双道光束分配器、准直系统、选择装置、样品池、探测器、信号处理器和显示器共同工作，确保测量过程的可靠性和准确性。
这些部件的精密设计和优质材料的使用是保证分光光度计性能优越的重要因素之一。
邻二氮菲分光光度法测铁722型分光光度计ppt课件
以铁的质量浓度为横坐标，A值为纵坐标，绘制标准曲线。
5．水样微量铁的测定 准确移取5～10mL（以所测吸光度在标准曲线范围内为宜） 未知试样溶液，按同样步骤和方法测定吸光度A值。在标 准曲线上查出所含铁的浓度，计算水样中铁的含量。
五、结果与数据处理
1.吸收曲线的绘制：
将各波长及相应的吸光度 A 列出，用坐标纸绘制吸收 曲线。吸光度最大时相应 的波长即为最大吸收波长， 并在图上标出。
出吸收曲线，从吸收曲线上确定最大
吸收波长（ max ).
4.铁含量的测定 标准曲线的绘制：
10 mg/ml 铁标准溶
液
1
2
3
4
5
6
参比 2 ml 3 ml 4 ml 5 ml 6 ml
以不加铁标准 溶液的试液为 参比液，上一 步骤所选择的 最大吸收波长 为测定波长， 依次测定标准 系列中各溶液 的吸光度A值。
四、实验操作步骤
1．10 ug/mL铁标准使用液和水样的配制 用移液管移取100 ug/mL的铁标准储备液10.00 mL，置于 100mL容量瓶中，加入2 mL 6 mol∕L HCl，用蒸馏水稀释至 刻度，摇匀。
2．标准系列的配制 用刻度移液管分别移取上一步骤配制的铁标准使用溶液（10ug/mL）： 0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL依次放入7只50mL容量瓶中， 分别加入10%盐酸羟胺溶液1.0 mL，稍摇动，再加入0.1%邻二氮菲溶液 2.0 mL及Hac-NaAc缓冲溶液5 mL，稀释至刻度，充分摇匀。
2+
Fe2+ + 3
N N
N
Fe
N
3
配合物
2+
N N
72型分光光度计原理
72型分光光度计原理1.灯源系统：光源通过灯源系统产生一束电磁波，通常是可见光或紫外光。
光源有不同的选择，如白炽灯、钨丝灯、氙气灯等。
其中钨丝灯是常用的光源，能够产生广泛的波长范围。
2.样品室：样品室通常由两个平行的透光窗组成，用于放置样品和参比物。
样品室内部有一个介质，通常是空气或惰性气体，以确保测量的准确性。
3.单色器：单色器用于选择特定波长的光线，以保证测量的精准性。
单色器通常由棱镜或光栅组成，能够将混合光线中的不同波长分离开来。
4.检测器：检测器用于测量透射或吸收的光强，通常是光电二极管或光电倍增管。
检测器可以将光信号转换为电信号，并传输给数据处理系统进行进一步处理。
5.数据处理系统：数据处理系统用于记录、存储和分析测量结果，可以将光强信号转换为吸光度或透射率等实际参数。
数据处理系统通常包括计算机软件和显示器，方便用户进行操作和数据处理。
分光光度计的工作原理基于比尔-朗伯定律，即透射的光强与样品的浓度呈线性关系。
当光线穿过样品时，会被样品吸收或透射，根据样品的特性不同，吸收或透射的光强也会有所差异。
通过测量样品之前和之后的光强，可以计算出吸光度或透射率，从而推断出样品的性质和浓度。
具体的测量步骤如下：1.校准仪器：在进行测量之前，需要对分光光度计进行校准，以确保测量结果的准确性。
通常会使用标准物质进行校准，调整仪器的灵敏度和零点。
2.放置样品：将待测样品与参比物放置在样品室中，调整光源和检测器的位置，使光线能够穿过样品并被检测器接收。
3.设置参数：选择适当的波长和光强范围，调节单色器和检测器的参数，以确保测量的准确性。
4.测量数据：启动仪器进行测量，记录样品之前和之后的光强，计算吸光度或透射率，并得出样品的浓度或性质。
5.分析结果：通过数据处理系统对测量结果进行分析，生成曲线图或报告，判断样品的特性和浓度，进行进一步研究或质量控制。
总而言之，72型分光光度计是一种高精度的光学仪器，能够快速、准确地测量样品对电磁辐射的吸收或透射。
72型分光光度计原理
72型分光光度计原理一、构造原理及结构72型分光光度计是可见光分光光度计，波长范围为420nm～700nm，它由三大部分组成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。
72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。
如图所示，白色光源经入射狭缝、反射镜和透光镜后，变成平行光进入棱镜，色散后的单色光经镀铝的反射镜反射后，再经过透镜并聚光于出射狭缝上，狭缝宽度为0.32nm。
反射镜和棱镜组装在一可旋转的转盘上并由波长调节器的凸轮所带动，转动波长调节器便可以在出光狭缝后面选择到任一波长的单色光。
单色光透过样品吸收池后由一光量调节器调节为适度的光通量，最后被光电电池吸收，转换成电流后由微电计指示，从刻度标尺上直接读出透光率的值。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
二、分光光度计的简单原理分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。
样品的吸光值与样品的浓度成正比。
1、核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。
可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。
核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。
每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。
定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。
如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。
测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。
测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。
721分光光度计分光原理
1 2 3
红外分光光度计
紫外分光光度计 可见分光光度计
4
5
荧光分光光度计 原子吸收分光光度计
光 源 单 色
器 检 测 器
吸 收
池
信号显示 记录装置• Nhomakorabea分光光度计的工作原理是溶 液中的物质在光的照射激发下产生 对光吸收的效应——物质对光的吸 收具有选择性。 当单色光通过某一溶液时— 其光谱变化反映在光电管上会产生 不同的电流变化讯号。
当单色光通过某一溶液时 —其光谱变化反映在光电管上 会产生不同的电流变化讯号。 这个“讯号”经放大后会在 电流表上直观的反映出来。
经过其它技术处理就能 确定某溶液的某些特性。
1 3 2 4 7 9 12
5 8 6 10 11
721 分光光度计光学系统
1—光源灯；2—聚光透镜；3—色三棱镜；4—准直镜； 5—保护玻璃；6—狭缝装置；7—反射镜；8—聚光透镜； 9—比色皿；10—光门；11—保护玻璃；12—光电管
722光栅分光光度计原理及使用方法
722型光栅分光光度计使用说明（图）1．构造原理一、原理当一束单色光照射待测物质的溶液时，当某一定频率（或波长）的可见光所具有的能量（hf）恰好与待测物质分子中的价电子的能级差相适应（即ΔE=E2-E1=hf）时，待测物将对该频率（波长）的可见光产生选择性的吸收。
用可见分光光度计可以测量和记录其吸收程度（吸光度）。
由于在一定条件下，吸光度A与待测物质的浓度C及吸收地长度l的乘积成正比，即A＝KCL所以，在测得吸光度A后，可采用标准曲线法、比较法以及标准加入法等方法进行定量分析。
722型分光光度计由光源室、单色器、试样室、光电管暗盒、电子系统及数字显示器等部件组成。
光源为钨卤素灯，波长范围为330nm～800nm。
单色器中的色散元件为光栅，可获得波长范围狭窄的接近于一定波长的单色光。
其外部结构如附图所示。
722型分光光度计能在可见光谱区域内对样品物质作定性和定量分析，其灵敏度、准确性和选择性都较高，因而在教学、科研和生产上得到广泛使用。
722型分光光度计1.数字显示器2.吸光度调零旋钮3.选择开关4.吸光度调斜率电位器5.浓度旋钮6.光源室7.电源开关8.波长手轮9.波长刻度窗10.试样架拉手11.100%T旋钮12.0%T旋钮13.灵敏度调节旋钮14.干燥器2．使用方法（1）预热仪器将选择开关置于“T”，打开电源开关，使仪器预热20分钟。
为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开，使光路切断。
（2）选定波长根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的单色波长。
（3）固定灵敏度档在能使空白溶液很好地调到“100%”的情况下，尽可能采用灵敏度较低的挡，使用时，首先调到“1”挡，灵敏度不够时再逐渐升高。
但换挡改变灵敏度后，须重新校正“0%”和“100%”。
选好的灵敏度，实验过程中不要再变动。
（4）调节T=0%轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示为“00.0”（此时试样室是打开的）。
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72型分光光度计工作原理
72型分光光度计是可见光分光光度计，波长范围为420nm～700nm，它由三大部分组成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。
72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。
如图所示，白色光源经入射狭缝、反射镜和透光镜后，变成平行光进入棱镜，色散后的单色光经镀铝的反射镜反射后，再经过透镜并聚光于出射狭缝上，狭缝宽度为0.32nm。
反射镜和棱镜组装在一可旋转的转盘上并由波长调节器的凸轮所带动，转动波长调节器便可以在出光狭缝后面选择到任一波长的单色光。
单色光透过样品吸收池后由一光量调节器调节为适度的光通量，最后被光电电池吸收，转换成电流后由微电计指示，从刻度标尺上直接读出透光率的值。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
分光光度计的简单原理
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被
吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。
样品的吸光值与样品的浓度成正比。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。
可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。
核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。
每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。
定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。
如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。
测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。
测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。
然而，实验并非一帆风顺。
读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。
灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。
事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。
如EppendorfBiophotometer的准确度≤1.0%（1A）。
这样多次测试的结果在均值 1.0%左右之间变动，都是正常的。
另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。
样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。
这些小颗粒的存在干扰测试效果。
为了最大程度减少颗
粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。
在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。
从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。
最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。
除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如 A 260 / A 280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。
纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者2.0（RNA）。
如果比值低于 1.8 或者 2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
A 230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。
A 320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。
纯样品，A 320 一般是 0。
蛋白质的直接定量（UV法）
这种方法是在280 nm波长，直接测试蛋白。
选择 Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。
蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。
由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320 nm的“背景”信息，设定此功能“开”。
与测试核酸类似，要求 A 280 的吸光值至少大于
0.1A，最佳的线性范围在1.0-1.5 之间。
实验中选择 Warburg 公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。
这是一个正常的现象。
事实上，只要观察A 280的吸光值的变化范围不超过 1%，表明结果非常稳定。
漂移的原因是因为 Warburg公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。
蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。
紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如DNA 的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。
比色法蛋白质定量
蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。
有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。
比色方法一般有 BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。
Lowry 法：
以最早期的 Biuret 反应为基础，并有所改进。
蛋白质与Cu2+反应，产生蓝色的反应物。
但是与 Biuret相比，Lowry 法敏感性更高。
缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂；反应需要的时间较长；容易受到非蛋白物质的影响；含EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。
BCA（Bicinchoninine acid assay）法：
这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。
要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2+反应产生 Cu+，后者与 BCA 形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在 562 nm波长。
此化合物与蛋白浓度的线性关系极强，反应后形成的化合物非常稳定。
相对于 Lowry 法，操作简单，敏感度高。
但是与 Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。
Bradford 法：
这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应，产生的有色化合物吸收峰595 nm。
其最大的特点是，敏感度好，是 Lowry 和 BCA 两种测试方法的2倍；操作更简单，速度更快；只需要一种反应试剂；化合物可以稳定1小时，方便结果；而且与一系列干扰 Lowry，BCA 反应的还原剂相容。
但是对于去污剂依然是敏感的。
最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。
某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致，感到迷惑，究竟该相信哪种方法？由于各种方法反应的基团以及显色基团不一，所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。
例如：Keller 等测试人奶中的蛋白，结果 Lowry，BCA测出的浓度明显高于Bradford，差异显著。
即使是测定同一样品，同一种比色法选择的标准样品不一致，测试后的浓度也不一致。
如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质，以 BSA 作标准品，浓度1.34 mg / ml，以 a 球蛋白作标准品，浓度 2.64 mg /ml。
因此，在选择比色
法之前，最好是参照要测试的样本的化学构成，寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。
另外，比色法定量蛋白质，经常出现的问题是样品的吸光值太低，导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。
关键问题是，反应后的颜色是有一定的半衰期，所以每种比色法都列出了反应测试时间，所有的样品（包括标准样品），都必须在此时间内测试。
时间过长，得到的吸光值变小，换算的浓度值降低。
除此，反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。
此外，非常重要的是，最好是用塑料的比色法。
避免使用石英或者玻璃材质的比色杯，因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色，导致样品吸光值不准确。
细菌细胞密度（OD 600）
实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。
在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。
OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。
以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。
为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。
实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。
另外，需要注意的是，测试的样品不能离心，保持细菌悬浮状态。