胶乳凝集试
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令狐采学创作
胶乳凝集试验
令狐采学
——类风湿因子的检测
【实验目的】
1.学习凝集反响的类型及原理
2.掌握胶乳凝集试验检测血清中的类风湿因子的办法
【实验原理】
1.凝集反响是一种血清学反响。颗粒性抗原(完整的病原微生
物或红细胞等)与相应抗体结合,在有电介质存在的条件下,经过一按时间,呈现肉眼可见的凝集小块。介入凝集反响的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。根据凝集反响产生的条件分为玻片法和试管法,也可分为直接凝集反响和间接凝集反响两
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类。胶乳凝集试验也是一种间接凝集试验,它是以聚苯乙烯胶乳微粒作为惰性载体。
2. 胶乳凝集试验检测血清中的类风湿因子的原理:类风湿因子主要为IgM类自身抗体,但也有IgG类、IgA类、IgD类和IgE类,是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体,可与IgG的Fc段结合。胶乳凝集试验是将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上,此致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时,即可产生肉眼可见的凝集。胶乳凝集试剂是由纯化的人IgG和羧化聚苯乙烯胶乳共价交联而成的抗原胶乳。RF胶乳超出20U/ml即呈现肉眼可见的凝集颗粒。如呈现年夜颗粒凝集的为阳性反响,坚持均匀乳液状为阴性反响。根据阳性阴性反响即可知血清中是否有类风湿因子。检测类风湿因子对类风湿性关节炎(RA)的诊断、分型和疗效观察有着重要的意义。
【实验资料】
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1.待测血清
2.类风湿因子(RF)测定试剂盒(胶乳凝集法):
胶乳液成分:类风湿因子胶乳、牛血清白卵白、磷酸盐缓冲液;阳性对比成分:羊抗人IgG抗血清、牛血清白卵白、磷酸盐缓冲液;
阴性对比成分:牛血清白卵白、磷酸盐缓冲液。
3.微量加样器,反响板
【实验办法】
1.标识表记标帜:取四个反响板孔,标识表记标帜1号为待测,2号为阳性对比,3号为阴性对比,4号为空白对比。
2.加样:取待测血清,加入4个孔中,每孔加20μl。1号加50μl胶乳液,2号加阳性对比成分50μl,3号加阴性对比成分50μl 。
3.搅匀:轻轻晃动,充分混和。23分钟后观察结果。
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【实验结果】
正常参考规模:成人<20IU/ml
目测法:与阳性和阴性对比比较,
凝集呈现可判断样本中RF>20IU/ml阳性;
无凝集呈现可判断样本中RF<20IU/ml阴性。
【注意事项】
1.加试剂和阴性、阳性对比,包管滴液年夜小一致。
2.若阴阳
性对比结果呈现异常,则试剂不成使用。
3.试剂盒贮存210摄氏度,受热会招致试剂阳性率偏高,切勿
冷冻。
4.阴阳性对比经检HbsAg,HCV,HIV为阴性,但仍须如病人样品一样小心处理。
【参考文献】
1、吕绳凯等:上海医院检验杂志4(2):97.1989
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2、Galiving,.P.et al;https://www.360docs.net/doc/1b9868912.html,b.Assays 4:7395(1983)