厌氧菌的培养方法(PPT课件)
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厌氧菌的培养方法
精品课件
1 液体培养基的厌氧培养法
培养基煮沸：驱气后置流水中急速冷却 添加还原剂：
0.03～0.05％L-盐酸半胱氨酸 0.01～0.02％硫乙醇钠 0.5～1％葡萄糖 0.1％抗坏血酸 其它还原剂 添加琼脂
精品课件
2 固体培养基的厌氧培养法
厌氧罐法 简易厌氧罐和厌氧袋法 钢丝绒法 焦性没食子酸法 抽气换气厌氧培养法 生物好氧厌氧培养法 转管技术和气体喷射培养法 厌氧手套箱法 （又称厌氧室法）
2.6 生物好氧厌氧培养法
疱肉培养基:
牛肉渣
0.5g
牛肉浸液 7ml
液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。
生物好氧厌氧培养方法
精品课件
2.7 转管技术和气体喷射培养法
钢瓶进气 除氧气体
微量O2 H2源
铜柱
360℃ （亮黄色）
精品课件
CuO （黑色）
2.8厌氧手套箱法
又称厌氧室法
精品课件
干燥器容内径（厘米） 容器3
容积（毫升）
容器1
0.2克
柠檬酸0.6克
15cm（约2150毫升）
和
1.5克
碳酸氢钠0.7克
容器2
硼氢钠
氯化钴
或
0.6克
钯粒
18cm（约3500毫升） 1克
硼氢钠
氯化钴0.33克
精品课件
柠檬酸
2.2.2 厌氧袋法
聚碳酸酯（复合塑料膜）制厌氧袋 产气袋 厌氧指示剂 触媒
融化的白蜡封边
精品课件
2.5 抽气换气厌氧培养法
玻璃干燥罐 混合气钢瓶:
10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气
三通阀 触媒:钯粒 / 浸泡钢丝绒 / 氯化钴 厌氧指示剂
1 液体培养基的厌氧培养法
培养基煮沸：驱气后置流水中急速冷却 添加还原剂：
0.03～0.05％L-盐酸半胱氨酸 0.01～0.02％硫乙醇钠 0.5～1％葡萄糖 0.1％抗坏血酸 其它还原剂 添加琼脂
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2 固体培养基的厌氧培养法
厌氧罐法 简易厌氧罐和厌氧袋法 钢丝绒法 焦性没食子酸法 抽气换气厌氧培养法 生物好氧厌氧培养法 转管技术和气体喷射培养法 厌氧手套箱法 （又称厌氧室法）
2.6 生物好氧厌氧培养法
疱肉培养基:
牛肉渣
0.5g
牛肉浸液 7ml
液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。
生物好氧厌氧培养方法
精品课件
2.7 转管技术和气体喷射培养法
钢瓶进气 除氧气体
微量O2 H2源
铜柱
360℃ （亮黄色）
精品课件
CuO （黑色）
2.8厌氧手套箱法
又称厌氧室法
精品课件
干燥器容内径（厘米） 容器3
容积（毫升）
容器1
0.2克
柠檬酸0.6克
15cm（约2150毫升）
和
1.5克
碳酸氢钠0.7克
容器2
硼氢钠
氯化钴
或
0.6克
钯粒
18cm（约3500毫升） 1克
硼氢钠
氯化钴0.33克
精品课件
柠檬酸
2.2.2 厌氧袋法
聚碳酸酯（复合塑料膜）制厌氧袋 产气袋 厌氧指示剂 触媒
融化的白蜡封边
精品课件
2.5 抽气换气厌氧培养法
玻璃干燥罐 混合气钢瓶:
10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气
三通阀 触媒:钯粒 / 浸泡钢丝绒 / 氯化钴 厌氧指示剂
厌氧处理原理培训PPT课件
厌氧处理原理培训
目录
• 厌氧处理原理简介 • 厌氧处理的基本原理 • 厌氧处理工艺流程 • 厌氧处理的优缺点 • 厌氧处理的实际应用案例
01 厌氧处理原理简介
厌氧处理的概念
01
厌氧处理是一种生物处理技术， 利用厌氧微生物在无氧或低氧条 件下将有机物转化为沼气、二氧 化碳和有机酸等物质的过程。
02
农业废弃物处理
农业废弃物如畜禽粪便、农作物秸秆等，如果得不到妥善处理，会对环境造成严 重污染。厌氧处理技术可以用于农业废弃物处理，将其转化为沼气和肥料。
通过厌氧处理技术，可以将农业废弃物中的有机物转化为沼气，用于发电或供热 ；同时将厌氧消化后的残渣加工成有机肥料，用于农业生产，实现废弃物的资源 化利用。
高浓度有机废水处理
高浓度有机废水含有大量的有机物， 如纤维素、淀粉、糖类等，如果直接 排放会对环境造成严重污染。厌氧处 理技术可以有效地处理高浓度有机废 水。
VS
厌氧处理技术可以将高浓度有机废水 中的有机物转化为沼气和二氧化碳， 同时将废水中的有毒物质转化为无害 或低害的物质。该技术在高浓度有机 废水处理中具有高效、低能耗、环保 等优点。
高处理效率。
在UASB中，废水中的有机物被 颗粒污泥吸附并分解为沼气，沼 气可从反应器顶部排出并进行收
集利用。
UASB反应器的设计需考虑颗粒 污泥的培养和维持，以保证处理
效果和沼气产量的稳定性。
膨胀颗粒污泥床反应器（EGSB）
膨胀颗粒污泥床反应器是一种改进型的UASB反应器，通过增加反应器的高度和减小底部面 积来提高传质效率。
02 厌氧处理的基本原理
厌氧微生物的种类与特性
厌氧微生物种类繁多，包括产 甲烷菌、硫酸盐还原菌、产氢 产乙酸菌等。
目录
• 厌氧处理原理简介 • 厌氧处理的基本原理 • 厌氧处理工艺流程 • 厌氧处理的优缺点 • 厌氧处理的实际应用案例
01 厌氧处理原理简介
厌氧处理的概念
01
厌氧处理是一种生物处理技术， 利用厌氧微生物在无氧或低氧条 件下将有机物转化为沼气、二氧 化碳和有机酸等物质的过程。
02
农业废弃物处理
农业废弃物如畜禽粪便、农作物秸秆等，如果得不到妥善处理，会对环境造成严 重污染。厌氧处理技术可以用于农业废弃物处理，将其转化为沼气和肥料。
通过厌氧处理技术，可以将农业废弃物中的有机物转化为沼气，用于发电或供热 ；同时将厌氧消化后的残渣加工成有机肥料，用于农业生产，实现废弃物的资源 化利用。
高浓度有机废水处理
高浓度有机废水含有大量的有机物， 如纤维素、淀粉、糖类等，如果直接 排放会对环境造成严重污染。厌氧处 理技术可以有效地处理高浓度有机废 水。
VS
厌氧处理技术可以将高浓度有机废水 中的有机物转化为沼气和二氧化碳， 同时将废水中的有毒物质转化为无害 或低害的物质。该技术在高浓度有机 废水处理中具有高效、低能耗、环保 等优点。
高处理效率。
在UASB中，废水中的有机物被 颗粒污泥吸附并分解为沼气，沼 气可从反应器顶部排出并进行收
集利用。
UASB反应器的设计需考虑颗粒 污泥的培养和维持，以保证处理
效果和沼气产量的稳定性。
膨胀颗粒污泥床反应器（EGSB）
膨胀颗粒污泥床反应器是一种改进型的UASB反应器，通过增加反应器的高度和减小底部面 积来提高传质效率。
02 厌氧处理的基本原理
厌氧微生物的种类与特性
厌氧微生物种类繁多，包括产 甲烷菌、硫酸盐还原菌、产氢 产乙酸菌等。
厌氧性细菌 PPT课件
全国成人高等医学教育系列教材
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（二）致病性
致病物质：产气荚膜梭菌能产生10余种外毒素和侵袭性酶。
α毒素-----5型细菌均能产生，以A型产生量最大。能分解细胞膜上磷脂和 蛋白形成的复合物，造成红细胞、白细胞、血小板和内皮细胞溶解，引起 血管通透性增加伴大量溶血、组织坏死、肝脏、心功能受损，在气性坏疽 的形成中起主要作用。 β、ε、ι(iota)毒素-----引起坏死损伤和血管通透性增加 肠毒素------主要作用于回肠，其次为空肠。其作用机制是肠毒素肽链嵌入 细胞膜，破坏膜离子运输功能，改变膜的通透性，而引起腹泻。
全国成人高等医学教育系列教材
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所致疾病 （1）气性坏疽：60%~80%由A型引起。该病多见于战伤， 但也见于平时的工伤、车祸、地震等。致病条件与破伤风梭 菌相同。气性坏疽潜伏期短，一般仅为8~48小时，使该病发 展迅速，病情险恶。如不及时治疗，死亡率高达40%~100%。 临床表面为局部剧痛、组织水肿、气肿，触摸有捻发感，伴 组织坏死、分泌物恶臭。病菌产生的毒素和组织坏死的毒性 产物被吸收入血，引起毒血症、休克。
厌氧培养，但不十分严格。在血 琼脂平板上，多数菌株有双层溶 血环。
本菌代谢十分活跃，可分解多种 常见的糖类，产酸产气。在牛奶 培养基中能分解乳糖产酸，使其 中酪蛋白凝固，同时产生大量气 体，可将凝固的酪蛋白冲成蜂窝 状，气势凶猛，称“汹涌发酵”。
全国成人高等医学教育系列教材
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双层溶血环
内环是由θ毒素引起的狭窄的完全溶血，外环是由α毒素引起的不完全溶血。
全国成人高等医学教育系列教材
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（2）食物中毒：A型产气荚膜梭菌的某些菌株 可产生肠毒素引发食物中毒。因食入被本菌大 量污染的食物（主要为肉类食品）而引起，潜 伏期8~24小时，临床表现为剧烈腹痛、腹胀、 水样腹泻、便血。一般1~2天后自愈，但年老 体弱者可致死亡。
最新：厌氧性细菌课件-文档资料
2、毒素检测：动物试验 小鼠腹腔注射，观察发病情况
防治原则
• 加强食品卫生管理。
• 及早做出诊断，迅速注射A、B、E三型多价抗毒素， 加强护理与对症治疗。
无芽胞厌氧菌
分类
• G- 杆菌：脆弱类杆菌等，较多见，在临床分离的厌氧 菌中占70-80%。
• G+ 杆菌：双岐杆菌属等，多为肠道皮肤正常菌群，因 侵入其他非寄居部位而致病。
• G+ 球菌：消化链球菌属等 • G- 球菌
无芽胞厌氧菌的种类繁多，生物学特性各异
致病性
发病条件：本类细菌属条件致病菌，是内源性感染致 病，其发病条件应引起各科医生注意 ①由于机械或病理损伤 ②局部形成厌氧微环境 ③正常菌群失调 ④抗体免疫力减退
致病物质
不同细菌的致病物质不同，如荚膜、菌毛、胶原酶、IgA 分解酶、DNA酶、透明质酸酶等。G-菌也有内毒素，但脂质 A较少。
抗菌治疗为主
预防
抗毒素紧急预防、类 毒素预防
增强机体抵抗力
包括菌种 破伤风杆菌、产气荚膜杆菌、
肉毒杆菌等
条件致病菌 如双歧脆弱类杆菌等
共同特点
①G+大杆菌 ②严格厌氧 ③能形成芽胞，芽胞的形状和在菌体中的位置，因菌种
不同而异，在鉴别上有意义。 ④除产气荚膜杆菌外，均无荚膜。 ⑤能产生多种外毒素和侵袭性酶，致病性强。
（2）用常规细菌培养（-）的败血症、感染性心内膜炎，脓毒 性血栓性静脉炎等。
（3）分泌物或脓肿穿刺液带血性，或呈黑色或乳白色混浊，有 恶臭，有时有气体。
（4）分泌物直接涂片可见细菌，但普通培养法无细菌生长。 （5）使用氨基糖甙类抗生素如庆大，链霉素，卡那等长期治疗
无效。
微生物学检查法
• 1、标本采集：注意①避免正常菌群的污染，应自正常 无菌的部位采集。②应床边采样。③标本采集后宜立 即排除空气后无菌接种于特制的厌氧标本瓶中迅速送 检并要求立即接种于适当的培基
防治原则
• 加强食品卫生管理。
• 及早做出诊断，迅速注射A、B、E三型多价抗毒素， 加强护理与对症治疗。
无芽胞厌氧菌
分类
• G- 杆菌：脆弱类杆菌等，较多见，在临床分离的厌氧 菌中占70-80%。
• G+ 杆菌：双岐杆菌属等，多为肠道皮肤正常菌群，因 侵入其他非寄居部位而致病。
• G+ 球菌：消化链球菌属等 • G- 球菌
无芽胞厌氧菌的种类繁多，生物学特性各异
致病性
发病条件：本类细菌属条件致病菌，是内源性感染致 病，其发病条件应引起各科医生注意 ①由于机械或病理损伤 ②局部形成厌氧微环境 ③正常菌群失调 ④抗体免疫力减退
致病物质
不同细菌的致病物质不同，如荚膜、菌毛、胶原酶、IgA 分解酶、DNA酶、透明质酸酶等。G-菌也有内毒素，但脂质 A较少。
抗菌治疗为主
预防
抗毒素紧急预防、类 毒素预防
增强机体抵抗力
包括菌种 破伤风杆菌、产气荚膜杆菌、
肉毒杆菌等
条件致病菌 如双歧脆弱类杆菌等
共同特点
①G+大杆菌 ②严格厌氧 ③能形成芽胞，芽胞的形状和在菌体中的位置，因菌种
不同而异，在鉴别上有意义。 ④除产气荚膜杆菌外，均无荚膜。 ⑤能产生多种外毒素和侵袭性酶，致病性强。
（2）用常规细菌培养（-）的败血症、感染性心内膜炎，脓毒 性血栓性静脉炎等。
（3）分泌物或脓肿穿刺液带血性，或呈黑色或乳白色混浊，有 恶臭，有时有气体。
（4）分泌物直接涂片可见细菌，但普通培养法无细菌生长。 （5）使用氨基糖甙类抗生素如庆大，链霉素，卡那等长期治疗
无效。
微生物学检查法
• 1、标本采集：注意①避免正常菌群的污染，应自正常 无菌的部位采集。②应床边采样。③标本采集后宜立 即排除空气后无菌接种于特制的厌氧标本瓶中迅速送 检并要求立即接种于适当的培基
厌氧菌ppt课件
三、临床常见的厌氧菌
• （一） 厌氧性球菌 • （二） 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌 • （三） 革兰阳性无芽胞厌氧杆菌 • （四） 梭状芽胞杆菌属
（一） 厌氧性球菌
• G＋C：主要包括消化球菌属（黑色消化球
菌Peptococcus niger）和消化链球菌属 （Peptostreptococcus anarobius）等9个种。
表1-2 不同部位标本采集法
标本来源 封闭性脓肿 妇女生殖道 下呼吸道分泌物
胸腔 组织 尿道 窦道、子宫腔、 深部创伤
收集方法 针管抽取 后穹窿穿刺抽取 肺穿刺术 胸腔穿刺术 无菌外科切开 上阴部膀胱穿刺 用静脉注射的塑料导管 穿入感染部位抽吸
在紧急情况下，可用棉拭子取材，并采用 适合的培养基传送，做厌氧菌培养，最理想 是能取得组织标本，因厌氧菌在组织中比在 渗出物中更易生长，而且组织标本可真实反 映出感染过程的细菌学变化。
3.厌氧菌的感染遍及临床各科，且多为混合感染；
4.厌氧菌对常用的氨基糖甙类抗生素耐药，而对甲 硝唑（灭滴灵）普遍敏感。 5.厌氧菌的分离鉴定较繁琐，目前国内大多医院尚 未开展此工作，而发达国家早已列为临床检验常规。
种类
•主要可分为两大类，一类是有芽胞厌氧菌，
另一类是无芽胞厌氧菌。
•据目前最新资料显示，有芽胞厌氧菌只有
以及深部脓肿渗出物，经气管抽取的肺 渗出物或直接由肺抽取渗出物以及其它组 织穿刺液等。
下列标本无送检价值，不宜做 厌氧菌培养：
①鼻咽拭子；②齿龈拭子；③痰和气管 抽取物；④胃和肠道内容物、肛拭；⑤接近 皮肤和粘膜的分泌物；⑥褥疮溃疡及粘膜层 表面；⑦排出的尿或导尿；⑧阴道或子宫拭 子；⑨前列腺分泌物。
每次标本接种前均应观察标本的性状，包括标本 的气味、是否脓性、带血或腐败物质等，厌氧菌的 代谢产物中有某些带气味的物质，对厌氧菌的鉴定 很重要。均要求详细记录 。
无芽孢厌氧菌PPT课件
.
8
微生物学检查法
• 标本的采集 • 分离培养与鉴定
– 厌氧培养 – 气相色谱法
.
9
防治原则
• 加强免疫力，减少诱发因素 • 治疗药物
– 甲硝唑 – 替硝唑 – 其他广谱抗生素
.
10
第二节 其他无芽胞厌氧菌
• 普雷沃菌属（Prevotella） • 梭杆菌属（Fusobacterum） • 乳杆菌属（Lactobacillus） • 双歧杆菌属（Bifidobacterium） • 丙酸杆菌属（Propionibacterium） • 厌氧球菌（消化球菌、韦荣球菌）
生物学性状
• 革兰阴性小杆菌 • 无鞭毛，不形成芽
胞，光滑型菌株有 微荚膜
.
73
• 专性需氧 • 生长缓慢 • 分解葡萄糖，产生少量酸 • 过氧化氢酶阳性，氧化酶阳性 • 产生H2S
B. melitensis
.
74
流行环节
• 易感者
– 人和动物
• 传染源
– 牛、羊、猪是本菌的主要自然宿主
• 传播途径
• 了解内容
– 棒状杆菌属的分类、分布及致病性。
.
16
棒状杆菌属（Corynebacterium）
• 白喉棒状杆菌（C．dephtheriae） • 类白喉杆菌（diphtheroid bacilli）
– 假白喉棒状杆菌 – 结膜干燥杆菌 – 阴道棒状杆菌等
.
17
白喉棒状杆菌
C. diphtheriae
50
第二十三章 耶尔森菌属
.
51
第二篇 致病性细菌
第二十三章 耶尔森菌属 Yersinia
医学微生物学教研室
哈尔滨医科大学
厌氧性杆菌-精品医学课件
热、干燥和消毒剂均有强大的抵抗力； • 除产气荚膜梭菌等极少数外，均有周鞭毛、无荚膜； • 多数为腐生菌、少数为致病菌 • 主分布于土壤、人和动物肠道，少数致病类型可产生外毒
素和侵袭性酶类。
重要的病原菌
• 破伤风梭菌（Clostridium Tetani）
– 破伤风
• 产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）
生物学作用 A
卵磷脂酶，增加血管通透性，
溶血和坏死作用
+
坏死作用
-
增加胃肠壁通透性
பைடு நூலகம்
-
坏死作用，增加血管通透性 -
溶血素
-
溶血素，细胞毒素
±
胶原酶、明胶酶、坏死作用 +
蛋白酶
-
毒素分型
B
CDE
++ ++ ---
±+ ++ ++ +-
++
-
-
+-
-
+
-
-
++
++
++
μ (mu)
ν (nu) 神经氨酸酶 其它 肠毒素
• 破伤风（tetanus）的病原菌，外源性感染；
• 外创后污染、在新生儿经污染脐带感染；
污染 ╭-创口 发芽 痉挛 ╭-破伤风
芽胞-----| --->繁殖---->毒素----|
╰-脐带断端
╰-新生儿破伤风
（脐风）
• 发病后机体呈骨骼肌强直性痉挛、抽搐，可因窒息 或呼吸衰竭死亡
（一）生物学性状
– 易感人群：注射破伤风类毒素，免疫力可维持12年； 儿童接种白百破三联疫苗：出生后3、4、5月连续免 疫3次，2岁、7岁时各加强一次；
素和侵袭性酶类。
重要的病原菌
• 破伤风梭菌（Clostridium Tetani）
– 破伤风
• 产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）
生物学作用 A
卵磷脂酶，增加血管通透性，
溶血和坏死作用
+
坏死作用
-
增加胃肠壁通透性
பைடு நூலகம்
-
坏死作用，增加血管通透性 -
溶血素
-
溶血素，细胞毒素
±
胶原酶、明胶酶、坏死作用 +
蛋白酶
-
毒素分型
B
CDE
++ ++ ---
±+ ++ ++ +-
++
-
-
+-
-
+
-
-
++
++
++
μ (mu)
ν (nu) 神经氨酸酶 其它 肠毒素
• 破伤风（tetanus）的病原菌，外源性感染；
• 外创后污染、在新生儿经污染脐带感染；
污染 ╭-创口 发芽 痉挛 ╭-破伤风
芽胞-----| --->繁殖---->毒素----|
╰-脐带断端
╰-新生儿破伤风
（脐风）
• 发病后机体呈骨骼肌强直性痉挛、抽搐，可因窒息 或呼吸衰竭死亡
（一）生物学性状
– 易感人群：注射破伤风类毒素，免疫力可维持12年； 儿童接种白百破三联疫苗：出生后3、4、5月连续免 疫3次，2岁、7岁时各加强一次；
厌氧菌感染科普讲座PPT课件
如何治疗厌氧菌感染？ 常用药物
抗生素是治疗厌氧菌感染的主要药物，如青霉素 、克林霉素等。
应根据医生建议使用，避免自行用药。
如何治疗厌氧菌感染？ 手术干预
在某些情况下，可能需要手术清创以去除感染部 位的坏死组织。
手术后的护理同样重要，以防复发。
如何治疗厌氧菌感染？ 康复与随访
感染后需定期随访，监测恢复情况，避免并发症 。
使用无菌材料处理伤口，有助于降低感染风 险。
如何预防厌氧菌感染？ 饮食与生活方式
保持均衡饮食，增强免疫力，避免烟酒等有 害物质。
健康的生活方式能显著减少感染的几率。
如何预防厌氧菌感染？ 定期体检
定期就医检查，尤其是有基础疾病的人群， 及时发现潜在问题。
医生可以根据病史提供个性化的预防建议。
如何治疗厌氧菌感染？
这些细菌可能导致多种感染，如牙周炎、腹膜炎 等。
谁会感染厌氧菌？
谁会感染厌氧菌？ 高风险人群
免疫力低下、糖尿病患者、老年人和长期使 用抗生素的人群更易感染厌氧菌。
创伤患者及术后病人也需特别注意。
谁会感染厌氧菌？
特殊情况
注射毒品或从事高风险行为的人群，可能因 为皮肤破损而增加感染厌氧菌的风险。
此外，长期住院或插管的患者也在风险之中 。
厌氧菌感染可导致严重并发症，如败血症、组织 坏死等，需立即处理。
早期发现和治疗可显著提高治愈率。
何时寻求医疗帮助？
定期检查
有高风险病史的患者应定期进行健康检查，及时 发现潜在的感染。
医生可能建议进行特定的检测以确认是否感染厌 氧菌。
如何预防厌氧菌感染？
如何预防厌氧菌感染？ 保持良好的卫生习惯
勤洗手，保持伤口清洁，防止细菌感染。
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0.2
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
8
卢卡斯固体厌氧指示剂
2％硼砂溶液 9％硫乙醇酸 酚红溶液 0.02％美兰溶液 琼脂
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
5毫升 1毫升 0.1～0.2毫升 10毫升 1％
9
布鲁氏指示剂
60％羟甲基氨基甲酯
1
4％葡萄糖
1
0.02％美蓝
1
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
厌氧菌的培养方法
祁红兵
1
物理方法包括遮断空气法、煮沸法、真空法、空 气置换法、气体喷射法或转管法等
化学方法包括焦性没食子酸法、铁丝绒法、保险 粉法等
生物学方法包括与需氧菌共生好氧法、燕麦发芽 法等
混合法包括厌氧罐（袋）法、厌氧手套箱法或厌 氧室法、空气置换铁丝绒法、空气置换钯粒法等。
2
1 液体培养基的厌氧培养法
28
4.2 冷冻保存：
20％脱脂牛奶0.5ml分注在带螺旋塞的玻 璃瓶中，经110℃、15分钟高压灭菌，冷却后， 先用毛细吸管取半固体高层培养基24～48h生 长茂盛部位的厌氧菌液0.5ml，加入玻璃瓶中， 直接置于－80℃冰库中保存。
厌氧菌较理想的保存方法是液氮保存法。 将108以上浓菌液置脱纤维羊血、脱纤维兔血 或羊血牛奶各半的分散剂中，先在干冰中预 冻，然后连容器一起放入液氮罐中。
融化的白蜡封边
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2.5 抽气换气厌氧培养法
玻璃干燥罐 混合气钢瓶:
10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气
三通阀 触媒:钯粒 / 浸泡钢丝绒 / 氯化钴 厌氧指示剂
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1：厌氧培养罐 2：混合气体（CO2：H2：N2=1：1：8）钢瓶 3：压力表 4：三通阀 5：缓冲瓶 6：真空泵
13
14
15
16
2.2.3 保险粉的厌氧罐培养法
二亚硫酸钠（Na2S2O4） 碳酸氢钠 无水硫酸钠
不用触媒
17
2.3 钢丝绒法
酸性硫酸铜溶液 钢(铁)丝绒
铜和铁的络合物
O2
厌氧指示剂
18
酸性硫酸铜溶液： 将自来水1升加硫酸铜60g，吐温-80
20ml，加热溶解后，又加入2N的硫酸90ml， 最后加水至6升 ； 方法：
4
2.1 Gas-pak法
5
原理
气体发生袋：
柠檬酸和碳酸氢钠 ＋H2O
CO2
硼氢化钠 111＋11H2O
H2
触媒 ：
钯粒
H2O
厌氧罐中的O2
厌氧指示剂
6
厌氧指示剂
亚甲基兰 指示剂 卢卡斯固体厌氧指示剂 布鲁氏指示剂
7
亚甲基兰 指示剂
6％葡萄糖水溶液
2
0.1N氢氧化钠水溶液
0.1
0.05％亚甲基兰水溶液
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3 厌氧培养方法的选择
亨格特的预还原灭菌厌氧培养基的转管技 术、气体喷射培养法
厌氧手套箱培养法
用于要求严格的厌氧培养法的微生态学（正常菌群）的研 究工作
厌氧罐(袋)法结合其它厌氧培养方法
不适用于对氧极其敏感的厌氧菌。但是在临床细菌的检验 工作中，可以充分使用此法分离感染症中的厌氧病原菌。
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4 厌氧菌的保存
4.1继代保存： 以GAM半固体流动培养基和TEP半固
体培养基作传代培养保存。用毛细吸管吸 菌进行继代培养，使用白金接种环移菌接 种，可以避免有的菌在操作中接触空气或 氧化物而死亡。数周作一次继代培养。新 分离的的菌种，在几个月内，每3～4星期 传代一次。被保存的菌种，放室温下暗处。 最好是不同菌用不同培养基保存。
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2.6 生物好氧厌氧培养法
疱肉培养基: 牛肉渣
0.5g
牛肉浸液 7ml
液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。
生物好氧厌氧培养方法
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2.7 转管技术和气体喷射培养法
钢瓶进气
360℃
铜柱
除氧气体
微量O2
（亮黄色）
H2源 CuO （黑色）
接种或移植
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2.8厌氧手套箱法
又称厌氧室法
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培养基煮沸：驱气后置流水中急速冷却 添加还原剂：
0.03～0.05％L-盐酸半胱氨酸 0.01～0.02％硫乙醇钠 0.5～1％葡萄糖 0.1％抗坏血酸 其它还原剂 添加琼脂
3
2 固体培养基的厌氧培养法
厌氧罐法 简易厌氧罐和厌氧袋法 钢丝绒法 焦性没食子酸法 抽气换气厌氧培养法 生物好氧厌氧培养法 转管技术和气体喷射培养法 厌氧手套箱法 （又称厌氧室法）
15cm（约2150毫升） 0.6克
容器2
容器3
氯化钴 0.2克 柠檬酸0.6克
或
和
钯粒1.5克 碳酸氢钠0.7克
18cm（约3500毫升） 硼氢钠 1克
氯化钴0.33克 柠檬酸1克
或
和
钯粒2克 碳酸氢钠1.15克
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2.2.2 厌氧袋法
聚碳酸酯（复合塑料膜）制厌氧袋 产气袋 厌氧指示剂 触媒
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Gas-Pak罐的使用操作程序
平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内； 打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒； 打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片； 剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅
速紧闭罐盖，置培养箱中培养。 约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。
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2.2.1 简易厌氧罐
干燥器容内径（厘米） 容器1 容积（毫升） 硼氢钠液浸泡30～60s，钢丝绒变成红铜色， 挤净液体置铝质或玻璃容器中，放入厌氧 罐内。随后将厌氧指示剂放入，密封厌氧 罐，1～4h后可达厌氧状态
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2.4 焦性没食子酸法
焦性末食子酸粉末，
NaHCO3 或NaOH溶液
无菌玻片
已接种细菌的平板倒扣在上面
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谢谢
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放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
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