厌氧菌的培养方法ppt课件
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微生物学第13章厌氧性细菌
厌氧性细菌的酶系统适应了无氧 环境，能够利用各种有机物作为 能源和碳源。
生长速度
由于无氧环境的限制，厌氧性细 菌的生长速度通常较慢，需要较 长时间才能达到较高的细胞密度。
02
厌氧性细菌的生态分布与作 用
厌氧性细菌在自然环境中的分布
土壤中
厌氧性细菌在土壤中发挥着分解有机物的作用， 将动植物残体转化为腐殖质和气体。
生殖道中
女性生殖道中的厌氧性细菌参与维持阴道正常菌群平衡，预防感染。
厌氧性细菌在工业生产中的应用
01
02
03
生物制氢
有机废水处理
甲烷发酵
厌氧性细菌可用于生物制氢过程， 通过发酵作用将有机物转化为氢 气。
厌氧性细菌可应用于有机废水处 理，将废水中的有机物转化为沼 气和二氧化碳。
厌氧性细菌可将有机废物转化为 甲烷，用于生产能源或进行沼气 发酵。
水体中
在缺氧的水体中，厌氧性细菌参与水体自净过程， 将有机物转化为氨气、硫化氢等气体。
动物消化道中
许多动物消化道内存在厌氧性细菌，帮助动物消 化食物，合成维生素等。
厌氧性细菌在人体内的分布与作用
肠道中
肠道中的厌氧性细菌帮助消化食物，合成维生素K、维生素B12等 人体必需的营养素。
口腔中
口腔中的厌氧性细菌参与龋齿的形成，某些种类还可能导致牙周病。
对于已经感染的患者，需要进 行彻底的治疗，包括使用敏感 抗生素、清创引流等。
在治疗过程中，患者需要保持 良好的生活方式和饮食习惯， 以提高免疫力，促进康复。
05
厌氧性细菌的培养与鉴定
厌氧性细菌的培养方法
厌氧培养箱
01
厌氧性细菌需要在无氧环境中生长，厌氧培养箱能够提供恒温、
生长速度
由于无氧环境的限制，厌氧性细 菌的生长速度通常较慢，需要较 长时间才能达到较高的细胞密度。
02
厌氧性细菌的生态分布与作 用
厌氧性细菌在自然环境中的分布
土壤中
厌氧性细菌在土壤中发挥着分解有机物的作用， 将动植物残体转化为腐殖质和气体。
生殖道中
女性生殖道中的厌氧性细菌参与维持阴道正常菌群平衡，预防感染。
厌氧性细菌在工业生产中的应用
01
02
03
生物制氢
有机废水处理
甲烷发酵
厌氧性细菌可用于生物制氢过程， 通过发酵作用将有机物转化为氢 气。
厌氧性细菌可应用于有机废水处 理，将废水中的有机物转化为沼 气和二氧化碳。
厌氧性细菌可将有机废物转化为 甲烷，用于生产能源或进行沼气 发酵。
水体中
在缺氧的水体中，厌氧性细菌参与水体自净过程， 将有机物转化为氨气、硫化氢等气体。
动物消化道中
许多动物消化道内存在厌氧性细菌，帮助动物消 化食物，合成维生素等。
厌氧性细菌在人体内的分布与作用
肠道中
肠道中的厌氧性细菌帮助消化食物，合成维生素K、维生素B12等 人体必需的营养素。
口腔中
口腔中的厌氧性细菌参与龋齿的形成，某些种类还可能导致牙周病。
对于已经感染的患者，需要进 行彻底的治疗，包括使用敏感 抗生素、清创引流等。
在治疗过程中，患者需要保持 良好的生活方式和饮食习惯， 以提高免疫力，促进康复。
05
厌氧性细菌的培养与鉴定
厌氧性细菌的培养方法
厌氧培养箱
01
厌氧性细菌需要在无氧环境中生长，厌氧培养箱能够提供恒温、
厌氧菌讲义PPT课件
（一）标本采集与运送
1.厌氧菌标本的采集 ➢采集原则：体表及其与外界相通的腔
道，即有正常菌群寄生的部位的标本 ，不宜作厌氧菌检查。 ➢采集方法：针筒穿刺抽取，严格无菌 操作，尽量避免接触空气。
原则上只有在正常情况下无菌的部 位采取的标本(如血、胸腔抽出液、心包 液、腹腔液、关节液、胆汁、外科手术 取出的脓、深部脓肿抽出物、膀胱穿刺 抽出的尿)适于做厌氧培养。被正常菌群 污染的标本(如大便、自行排出的尿、直 接咳出的痰、胃和十二指肠引流液、前 列腺分泌物、支气管镜冲洗液等)不宜做 厌氧培养
2.厌氧菌药敏试验指征：
➢ 严重感染，如心内膜炎、脑脓肿、骨髓 炎治疗时期长，观察药物敏感性变化。
➢ 慢性感染 ➢ 经验用药无效 ➢ 对新药评价 ➢ 耐药监测
3.药敏试验方法 ➢ ATB ANA厌氧菌药敏实验：挑取菌落于
API 20 A培养基，制成3McF的菌悬液， 吸取200uL 至ATB S 培养基接种试条，厌 氧环境下培养24-48 小时，仪器或手工判
2.厌氧菌生长速度慢，实验室报告结果时间较长， 对临床及时指导不够，这是临床医生不愿送标 本的主要原因。
3.临床微生物实验室对开展厌氧菌检验态度不够 积极，主要由于：培养庆氧菌所需要的条件比 较高，操作程序繁琐,花费的成本高，效益低。
二、厌氧菌的基本概念
（一）细菌分类(根椐对氧分子的需求）
专性需氧菌：结核分枝杆菌，星状诺卡 菌
（五）厌氧菌的鉴定
1.API鉴定系统：挑取菌落于API 20 A培养基，制 成3McF的菌悬液，移至API 20 A的试条中，放 厌氧环境中培养24小时，加相应的试剂，判读 结果。
2.ATB快速鉴定系统：挑取菌落于悬浮培养基，制 成4McF的菌悬液，移至Rapid ID 20A的鉴定试 条，于普通培养箱37度培养4小时，加相应的 试剂，仪器判读结果。
第章厌氧菌ppt课件
第十五章
厌氧菌
郑州大学第一临床学院
冯羡菊
2019
-
1
第一节
概
述
厌氧性细菌(anaerobic bacteria)指一 群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件 下才能生长繁殖的细菌。
2019
-
2
厌氧菌的分类
分为两类： 一类为有芽胞厌氧菌，只有一个属，即梭菌属， 共有130个种，以芽胞形式存于体外。 另一类为无芽胞厌氧菌， 包括40多个属， 300 多个菌种和亚种；多为体内正常菌 群， 存在于皮肤、口腔、上呼吸道、肠道和泌尿生 殖道。易引起这些部位的内源性感染。
坏死梭杆菌形态
2019
-
27
致病性
坏死梭杆菌是毒力很强的梭杆菌，常引起急性 扁桃体炎，有时并发单核细胞增多症，是儿童 和青年人扁桃体周围脓肿中最常分离到的厌氧 菌。局部症状还包括颈间隙感染和颈静脉脓毒 性血栓静脉炎，尚可引起胸膜渗出性脓胸、增 生性转移脓肿和菌血症。
2019
-
28
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ五节
革兰阳性无芽胞厌氧杆菌
2019革兰染色形态及其他特征脆弱类杆菌两端钝圆着色深中间色浅不均匀有空泡长短不一标本有琥珀味产黑色素普雷沃菌球杆菌可见多形性长短不一紫外线照射发红色荧光标本有恶臭具核酸杆菌菌体细长两头尖紫色颗粒沿菌体长轴成双排列标本有丁酸味坏死梭杆菌菌体细长高度多形性长短不一菌体中部膨胀呈圆球形韦荣球菌极小的革兰阴性球菌消化链球菌球形或卵圆形呈链状的小球菌易染成阴性乳酸杆菌细长无芽胞有时多形性标本有乳酸气味痤疮丙酸杆菌排列呈xyv或栅状标本有丙酸气味放线菌分枝呈棒状xyv或栅状排列脓汁中的黄色颗粒呈琥珀酸气味破伤风梭菌细长鼓槌状极端芽胞圆形产气荚膜梭菌粗大杆菌呈单或双排列有芽胞有荚膜艰难梭菌粗长杆菌芽胞卵圆形或长方形位于次极端2019初代培养
厌氧菌
郑州大学第一临床学院
冯羡菊
2019
-
1
第一节
概
述
厌氧性细菌(anaerobic bacteria)指一 群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件 下才能生长繁殖的细菌。
2019
-
2
厌氧菌的分类
分为两类： 一类为有芽胞厌氧菌，只有一个属，即梭菌属， 共有130个种，以芽胞形式存于体外。 另一类为无芽胞厌氧菌， 包括40多个属， 300 多个菌种和亚种；多为体内正常菌 群， 存在于皮肤、口腔、上呼吸道、肠道和泌尿生 殖道。易引起这些部位的内源性感染。
坏死梭杆菌形态
2019
-
27
致病性
坏死梭杆菌是毒力很强的梭杆菌，常引起急性 扁桃体炎，有时并发单核细胞增多症，是儿童 和青年人扁桃体周围脓肿中最常分离到的厌氧 菌。局部症状还包括颈间隙感染和颈静脉脓毒 性血栓静脉炎，尚可引起胸膜渗出性脓胸、增 生性转移脓肿和菌血症。
2019
-
28
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ五节
革兰阳性无芽胞厌氧杆菌
2019革兰染色形态及其他特征脆弱类杆菌两端钝圆着色深中间色浅不均匀有空泡长短不一标本有琥珀味产黑色素普雷沃菌球杆菌可见多形性长短不一紫外线照射发红色荧光标本有恶臭具核酸杆菌菌体细长两头尖紫色颗粒沿菌体长轴成双排列标本有丁酸味坏死梭杆菌菌体细长高度多形性长短不一菌体中部膨胀呈圆球形韦荣球菌极小的革兰阴性球菌消化链球菌球形或卵圆形呈链状的小球菌易染成阴性乳酸杆菌细长无芽胞有时多形性标本有乳酸气味痤疮丙酸杆菌排列呈xyv或栅状标本有丙酸气味放线菌分枝呈棒状xyv或栅状排列脓汁中的黄色颗粒呈琥珀酸气味破伤风梭菌细长鼓槌状极端芽胞圆形产气荚膜梭菌粗大杆菌呈单或双排列有芽胞有荚膜艰难梭菌粗长杆菌芽胞卵圆形或长方形位于次极端2019初代培养
厌氧菌的培养方法 ppt课件
2 0.1 0.2
厌氧
无色
残存有氧气
蓝色
10
卢卡斯固体厌氧指示剂
2％硼砂溶液
5毫升
9％硫乙醇酸
1毫升
酚红溶液
0.1～0.2毫升
0.02％美兰溶液
10毫升
琼脂
1％
厌氧
无色
残存有氧气
蓝色
11
布鲁氏指示剂
60％羟甲基氨基甲酯 4％葡萄糖 0.02％美蓝
厌氧
无色
残存有氧气
蓝色
1 1 1
12
疱肉培养基:
牛肉渣
0.5g
牛肉浸液
7ml
液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。
生物好氧厌氧培养方法
30
2.7 转管技术和气体喷射培养法
钢瓶进气 除氧气体
微 H2源
360℃
铜柱
（亮黄色）
量
O2
CuO （黑色）
31
2.8厌氧手套箱法
又称厌氧室法
32
33
3 厌氧培养方法的选择
亨格特的预还原灭菌厌氧培养基的转管技术、气体喷射培 养法
Gas-Pak法的使用操作程序 平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内； 打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒； 打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片； 剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅速紧闭
罐盖，置培养箱中培养。 约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。
注：操作较复杂，需注入水作为触媒。
13
2.2.1 简易厌氧罐
22
氧气指示剂颜色变化图解
1.新鲜指示剂为粉红色（无氧，左）和蓝色（有氧，右）， 重复使）和淡蓝色（有氧，中右）。 2.厌氧培养2-3小时后指示剂颜色变化稳定。
厌氧菌课件
炭疽芽胞杆菌
• 引起动物和人类炭疽病 • 是人类历史上第一个被发现的病原菌，俗
称炭疽杆菌 • 传播方式
生物学性状
• 形态与染色
– 致病菌中最大的G+粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状、有荚膜 – 芽胞在有氧条件下形成，呈椭圆形，位于菌体中央
• 培养
– 灰白色粗糙型菌落，边缘不整齐(卷发状菌落)
• 抵抗力很强
致病性
• 致病物质——肉毒毒素
• 神经外毒素 • 剧毒（对人致死量为0.1µg)
• 作用于外周胆碱能神经，抑制神经肌肉 接点处神经介质乙酰胆碱的释放，导致 弛缓性麻痹
所致疾病
• 食物中毒：单纯性毒素中毒，而非细菌感染
– 进食被毒素污染的食物（多为罐头、肉制品、 豆制品）
– 临床表现：少见胃肠道症状，主要为神经末 梢麻痹（松驰型）
动物源性疾病 以动物作为传染源的传染病
人兽共患病（zoonosis） 即由一种病原菌同时可 引起动物和人类的某些传染病
主要动物源性细菌
• 布鲁氏菌属 • 鼠疫耶尔森菌 • 炭疽芽胞杆菌
第一节 布鲁氏菌属 (Brucellae)
一类人兽共患传染病的病原菌
对人致病的有
羊布鲁氏菌 （B.melitensis)
其他需氧芽胞杆菌
• 枯草芽胞杆菌：实验室常见的污染菌 • 多粘芽胞杆菌：多粘菌素 • 嗜热脂肪芽胞杆菌：国际通用的热力灭菌
效果的质控指示菌株
一、破伤风梭菌（C．tetani）
生物学性状
• 形态与染色 菌体细长 芽胞正圆形 位于菌体顶端 细菌呈鼓槌状
生物学性状
培养特性和生化反应 血平板，β 溶血
• 抵抗力 – 芽胞抵抗力强 – 在干燥的土壤和尘埃中可存活数年
最新：厌氧性细菌课件-文档资料
2、毒素检测：动物试验 小鼠腹腔注射，观察发病情况
防治原则
• 加强食品卫生管理。
• 及早做出诊断，迅速注射A、B、E三型多价抗毒素， 加强护理与对症治疗。
无芽胞厌氧菌
分类
• G- 杆菌：脆弱类杆菌等，较多见，在临床分离的厌氧 菌中占70-80%。
• G+ 杆菌：双岐杆菌属等，多为肠道皮肤正常菌群，因 侵入其他非寄居部位而致病。
• G+ 球菌：消化链球菌属等 • G- 球菌
无芽胞厌氧菌的种类繁多，生物学特性各异
致病性
发病条件：本类细菌属条件致病菌，是内源性感染致 病，其发病条件应引起各科医生注意 ①由于机械或病理损伤 ②局部形成厌氧微环境 ③正常菌群失调 ④抗体免疫力减退
致病物质
不同细菌的致病物质不同，如荚膜、菌毛、胶原酶、IgA 分解酶、DNA酶、透明质酸酶等。G-菌也有内毒素，但脂质 A较少。
抗菌治疗为主
预防
抗毒素紧急预防、类 毒素预防
增强机体抵抗力
包括菌种 破伤风杆菌、产气荚膜杆菌、
肉毒杆菌等
条件致病菌 如双歧脆弱类杆菌等
共同特点
①G+大杆菌 ②严格厌氧 ③能形成芽胞，芽胞的形状和在菌体中的位置，因菌种
不同而异，在鉴别上有意义。 ④除产气荚膜杆菌外，均无荚膜。 ⑤能产生多种外毒素和侵袭性酶，致病性强。
（2）用常规细菌培养（-）的败血症、感染性心内膜炎，脓毒 性血栓性静脉炎等。
（3）分泌物或脓肿穿刺液带血性，或呈黑色或乳白色混浊，有 恶臭，有时有气体。
（4）分泌物直接涂片可见细菌，但普通培养法无细菌生长。 （5）使用氨基糖甙类抗生素如庆大，链霉素，卡那等长期治疗
无效。
微生物学检查法
• 1、标本采集：注意①避免正常菌群的污染，应自正常 无菌的部位采集。②应床边采样。③标本采集后宜立 即排除空气后无菌接种于特制的厌氧标本瓶中迅速送 检并要求立即接种于适当的培基
防治原则
• 加强食品卫生管理。
• 及早做出诊断，迅速注射A、B、E三型多价抗毒素， 加强护理与对症治疗。
无芽胞厌氧菌
分类
• G- 杆菌：脆弱类杆菌等，较多见，在临床分离的厌氧 菌中占70-80%。
• G+ 杆菌：双岐杆菌属等，多为肠道皮肤正常菌群，因 侵入其他非寄居部位而致病。
• G+ 球菌：消化链球菌属等 • G- 球菌
无芽胞厌氧菌的种类繁多，生物学特性各异
致病性
发病条件：本类细菌属条件致病菌，是内源性感染致 病，其发病条件应引起各科医生注意 ①由于机械或病理损伤 ②局部形成厌氧微环境 ③正常菌群失调 ④抗体免疫力减退
致病物质
不同细菌的致病物质不同，如荚膜、菌毛、胶原酶、IgA 分解酶、DNA酶、透明质酸酶等。G-菌也有内毒素，但脂质 A较少。
抗菌治疗为主
预防
抗毒素紧急预防、类 毒素预防
增强机体抵抗力
包括菌种 破伤风杆菌、产气荚膜杆菌、
肉毒杆菌等
条件致病菌 如双歧脆弱类杆菌等
共同特点
①G+大杆菌 ②严格厌氧 ③能形成芽胞，芽胞的形状和在菌体中的位置，因菌种
不同而异，在鉴别上有意义。 ④除产气荚膜杆菌外，均无荚膜。 ⑤能产生多种外毒素和侵袭性酶，致病性强。
（2）用常规细菌培养（-）的败血症、感染性心内膜炎，脓毒 性血栓性静脉炎等。
（3）分泌物或脓肿穿刺液带血性，或呈黑色或乳白色混浊，有 恶臭，有时有气体。
（4）分泌物直接涂片可见细菌，但普通培养法无细菌生长。 （5）使用氨基糖甙类抗生素如庆大，链霉素，卡那等长期治疗
无效。
微生物学检查法
• 1、标本采集：注意①避免正常菌群的污染，应自正常 无菌的部位采集。②应床边采样。③标本采集后宜立 即排除空气后无菌接种于特制的厌氧标本瓶中迅速送 检并要求立即接种于适当的培基
厌氧菌ppt课件
三、临床常见的厌氧菌
• （一） 厌氧性球菌 • （二） 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌 • （三） 革兰阳性无芽胞厌氧杆菌 • （四） 梭状芽胞杆菌属
（一） 厌氧性球菌
• G＋C：主要包括消化球菌属（黑色消化球
菌Peptococcus niger）和消化链球菌属 （Peptostreptococcus anarobius）等9个种。
表1-2 不同部位标本采集法
标本来源 封闭性脓肿 妇女生殖道 下呼吸道分泌物
胸腔 组织 尿道 窦道、子宫腔、 深部创伤
收集方法 针管抽取 后穹窿穿刺抽取 肺穿刺术 胸腔穿刺术 无菌外科切开 上阴部膀胱穿刺 用静脉注射的塑料导管 穿入感染部位抽吸
在紧急情况下，可用棉拭子取材，并采用 适合的培养基传送，做厌氧菌培养，最理想 是能取得组织标本，因厌氧菌在组织中比在 渗出物中更易生长，而且组织标本可真实反 映出感染过程的细菌学变化。
3.厌氧菌的感染遍及临床各科，且多为混合感染；
4.厌氧菌对常用的氨基糖甙类抗生素耐药，而对甲 硝唑（灭滴灵）普遍敏感。 5.厌氧菌的分离鉴定较繁琐，目前国内大多医院尚 未开展此工作，而发达国家早已列为临床检验常规。
种类
•主要可分为两大类，一类是有芽胞厌氧菌，
另一类是无芽胞厌氧菌。
•据目前最新资料显示，有芽胞厌氧菌只有
以及深部脓肿渗出物，经气管抽取的肺 渗出物或直接由肺抽取渗出物以及其它组 织穿刺液等。
下列标本无送检价值，不宜做 厌氧菌培养：
①鼻咽拭子；②齿龈拭子；③痰和气管 抽取物；④胃和肠道内容物、肛拭；⑤接近 皮肤和粘膜的分泌物；⑥褥疮溃疡及粘膜层 表面；⑦排出的尿或导尿；⑧阴道或子宫拭 子；⑨前列腺分泌物。
每次标本接种前均应观察标本的性状，包括标本 的气味、是否脓性、带血或腐败物质等，厌氧菌的 代谢产物中有某些带气味的物质，对厌氧菌的鉴定 很重要。均要求详细记录 。
临床细菌室厌氧菌培养基本程序-张秀珍69页PPT
临床细菌室厌氧菌培养基本程序-张秀 珍
46、法律有权打破平静。——马·格林 47、在一千磅法律里，没有一盎司仁 爱。— —英国
48、法律一多，公正就少。——托·富 勒 49、犯罪总是以惩罚相补偿；只有处 罚才能 使犯罪 得到偿 还。— —达雷 尔
50、弱者比强者更能得到法律的保护 。—— 威·厄尔
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
46、法律有权打破平静。——马·格林 47、在一千磅法律里，没有一盎司仁 爱。— —英国
48、法律一多，公正就少。——托·富 勒 49、犯罪总是以惩罚相补偿；只有处 罚才能 使犯罪 得到偿 还。— —达雷 尔
50、弱者比强者更能得到法律的保护 。—— 威·厄尔
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
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19
2.4 焦性没食子酸法
焦性末食子酸粉末， NaHCO3 或NaOH溶液
无菌玻片
已接种细菌的平板倒扣在上面
融化的白蜡封边
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20
2.5 抽气换气厌氧培养法
玻璃干燥罐 混合气钢瓶:
10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气
三通阀 触媒:钯粒 / 浸泡钢丝绒 / 氯化钴 厌氧指示剂
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2
1 液体培养基的厌氧培养法
培养基煮沸：驱气后置流水中急速冷却 添加还原剂：
0.03～0.05％L-盐酸半胱氨酸 0.01～0.02％硫乙醇钠 0.5～1％葡萄糖 0.1％抗坏血酸 其它还原剂 添加琼脂
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3
2 固体培养基的厌氧培养法
厌氧罐法 简易厌氧罐和厌氧袋法 钢丝绒法 焦性没食子酸法 抽气换气厌氧培养法 生物好氧厌氧培养法 转管技术和气体喷射培养法 厌氧手套箱法 （又称厌氧室法）
60％羟甲基氨基甲酯
1
4％葡萄糖
1
0.02％美蓝
1
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
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10
Gas-Pak罐的使用操作程序
平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内； 打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒； 打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片； 剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅
速紧闭罐盖，置培养箱中培养。 约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。
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28
4.2 冷冻保存：
20％脱脂牛奶0.5ml分注在带螺旋塞的玻 璃瓶中，经110℃、15分钟高压灭菌，冷却后， 先用毛细吸管取半固体高层培养基24～48h生 长茂盛部位的厌氧菌液0.5ml，加入玻璃瓶中， 直接置于－80℃冰库中保存。
厌氧菌较理想的保存方法是液氮保存法。 将108以上浓菌液置脱纤维羊血、脱纤维兔血 或羊血牛奶各半的分散剂中，先在干冰中预 冻，然后连容器一起放入液氮罐中。
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12
2.2.2 厌氧袋法
聚碳酸酯（复合塑料膜）制厌氧袋 产气袋 厌氧指示剂 触媒
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13
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14
完整版课件
15
完整版课件
16
2.2.3 保险粉的厌氧罐培养法
二亚硫酸钠（Na2S2O4） 碳酸氢钠 无水硫酸钠
不用触媒
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17
2.3 钢丝绒法
酸性硫酸铜溶液 钢(铁)丝绒
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4
2.1 Gas-pak法
完整版课件
5
原理
气体发生袋：
柠檬酸和碳酸氢钠 ＋H2O
CO2
硼氢化钠 111＋11H2O
H2
触媒 ：
钯粒
H2O
厌氧罐中的O2
厌氧指示剂
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6
厌氧指示剂
亚甲基兰 指示剂 卢卡斯固体厌氧指剂 布鲁氏指示剂完整版课件
7
亚甲基兰 指示剂
6％葡萄糖水溶液
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21
1：厌氧培养罐 2：混合气体（CO2：H2：N2=1：1：8）钢瓶 3：压力表 4：三通阀 5：缓冲瓶 6：真空泵
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22
2.6 生物好氧厌氧培养法
疱肉培养基: 牛肉渣
0.5g
牛肉浸液 7ml
液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。
生物好氧厌氧培养方法
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23
2.7 转管技术和气体喷射培养法
铜和铁的络合物
O2
厌氧指示剂
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酸性硫酸铜溶液：
将自来水1升加硫酸铜60g，吐温-80 20ml，加热溶解后，又加入2N的硫酸90ml， 最后加水至6升 ；
方法：
取5～6g钢丝绒/ L，于1～1.5升酸性硫 酸铜溶液浸泡30～60s，钢丝绒变成红铜色， 挤净液体置铝质或玻璃容器中，放入厌氧 罐内。随后将厌氧指示剂放入，密封厌氧 罐，1～4h后可达厌氧状态
厌氧罐(袋)法结合其它厌氧培养方法
不适用于对氧极其敏感的厌氧菌。但是在临床细菌的检验 工作中，可以充分使用此法分离感染症中的厌氧病原菌。
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4 厌氧菌的保存
4.1继代保存：
以GAM半固体流动培养基和TEP半固 体培养基作传代培养保存。用毛细吸管吸 菌进行继代培养，使用白金接种环移菌接 种，可以避免有的菌在操作中接触空气或 氧化物而死亡。数周作一次继代培养。新 分离的的菌种，在几个月内，每3～4星期 传代一次。被保存的菌种，放室温下暗处。 最好是不同菌用不同培养基保存。
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0.1N氢氧化钠水溶液
0.1
0.05％亚甲基兰水溶液
0.2
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
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卢卡斯固体厌氧指示剂
2％硼砂溶液 9％硫乙醇酸 酚红溶液 0.02％美兰溶液 琼脂
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
5毫升 1毫升 0.1～0.2毫升 10毫升 1％
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布鲁氏指示剂
钢瓶进气
360℃
铜柱
除氧气体
微量O2
（亮黄色）
H2源 CuO （黑色）
接种或移植
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2.8厌氧手套箱法
又称厌氧室法
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3 厌氧培养方法的选择
亨格特的预还原灭菌厌氧培养基的转管技 术、气体喷射培养法
厌氧手套箱培养法
用于要求严格的厌氧培养法的微生态学（正常菌群）的研 究工作
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2.2.1 简易厌氧罐
干燥器容内径（厘米） 容器1 容积（毫升） 硼氢钠
15cm（约2150毫升） 0.6克
容器2
容器3
氯化钴 0.2克 柠檬酸0.6克
或
和
钯粒1.5克 碳酸氢钠0.7克
18cm（约3500毫升） 硼氢钠 1克
氯化钴0.33克 柠檬酸1克
或
和
钯粒2克 碳酸氢钠1.15克
厌氧菌的培养方法
祁红兵
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物理方法包括遮断空气法、煮沸法、真空法、空 气置换法、气体喷射法或转管法等
化学方法包括焦性没食子酸法、铁丝绒法、保险 粉法等
生物学方法包括与需氧菌共生好氧法、燕麦发芽 法等
混合法包括厌氧罐（袋）法、厌氧手套箱法或厌 氧室法、空气置换铁丝绒法、空气置换钯粒法等。