金黄色葡萄球菌的检验PPT课件

金黄色葡萄球菌的致病性
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素 和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分α 、β 、γ 、δ ，能损伤血小板， 破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液 或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞 的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶 能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋 白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F六种血清型。
季节分布，多见于春夏季；中毒食品 种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此 外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起 的中毒事件也有报道。
金黄色葡萄球菌的检验
GB4789.10-2010 √第一法：金黄色葡萄球菌的定性检测 √第二法：金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 √第三法：金黄色葡萄球菌MPN计数
*金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生 问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起 的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%， 加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此 类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件：
√存放温度，在37℃内，温度越高，产 毒时间越短；
√存放地点，通风不良氧分压低易形成 肠毒素；
√食物种类，含蛋白质丰富，水分多， 同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。
• 7月2日，大阪府公共卫生研究所证实，从患 者饮用剩余的雪印牛奶中检查出了金黄色葡 萄球菌，这种葡萄球菌导致A型肠毒素滋生， 该毒素可造成饮用者腹泻、呕吐及全身不适。
• 牛奶被污染原因何在？
一、金黄色葡萄球菌的生物学特性
1、形态与染色：(staphylococcus aureus)
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，不运动 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右，显 微镜下排列成葡萄串状。 革兰氏染色阳性
金黄色葡萄球菌的定性检验
检样
增菌（7.5％氯化钠肉汤或
10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤）
BP平板，血平板
涂片染色
观察溶血 报告
BHI肉汤和营养琼脂 血浆凝固酶实验
金黄色葡萄球菌的检验
1、样品制备 按无菌操作取检样25 g（mL），加入
225 mL灭菌生理盐水，固体样品研磨或置 均质器中制成1:10样品混悬液。
＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较 多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条 件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数量的肠毒 素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。
人摄食该菌污染的食物2～3h后 可引起中毒症状，它引起的食 物中毒症状是呕吐和腹泻。
金黄色葡萄球菌的流行病学特点
供计数检验时，可按十进位递增稀释法 将样品匀液再进行适当稀释。
金黄色葡萄球菌的检验
2、增菌及分离培养 吸取5 mL混悬液，接种于7.5%氯化钠
肉汤或胰酪胨大豆肉汤50 mL培养基内， 36℃±1℃培养24 h，转种血平板和BairdParker平板， 36℃±1℃培养24 h，挑取血 平板上金黄色（有时为白色）菌落进行革 兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。
血平板上金黄色葡萄球菌 菌落形态
金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血 平板上呈金黄色，有时也为白色，大而 突出、圆形、不透明、表面光滑，周围 有溶血圈。
溶血圈
金黄色葡萄球菌 在BP平板上的菌落形态
在Baird-Parker琼脂平板上菌落呈圆形，表面光 滑、凸起、湿 润，直径2～3 mm。灰黑色至黑色，有 光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明 圈 （沉淀），其外常有一清晰带。当用接种针触及 菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的 菌株，除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相 同。从长期贮存的冷冻或脱 水食品中分离的菌落， 其黑色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙，质地 较干燥。
附： 金黄色葡萄球菌的显微照片 金黄色葡萄球菌的染色照片 金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片 金黄色葡萄球菌的透射电镜照片

金黄色葡萄球菌的显微照片
典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm 左右，显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜
革兰氏染色阳性
金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片 Staphylococcus aureus Enhanced sem w: 7.9 micron
金黄色葡萄球菌的透射电镜照片 Tem x12000 digitized Staphylococcus aureus
2、培养特性：
金黄色葡萄球菌营养 要求不高，在普通培养基 上生长良好，加少量葡萄 糖或血液生长更旺盛。需 氧或兼性厌氧，最适生长 温度37℃，最适生长pH 7.4
金黄色葡萄球菌检验
雪印牛奶中毒事件
• 人民日报（记者于青 管克江）报导 6月底以来，日本 关西等地区发生特大食品中毒事件，截至6月30日晚间， 因喝下有问题的雪印牌低脂肪牛奶而产生上吐下泻、腹 痛等不适症状的患者人数为4891人，到7月1日中午， 中毒人数已经超过5000人！且受害范围 也由原来的5个行政区域扩大至8个。这是战 后日本发生的规模最大的一起食品中毒事件。
成分：
胰蛋白胨 牛肉膏 酵母膏 丙酮酸钠 甘氨酸 氯化锂 卵黄 亚碲酸钾 琼脂
亚碲酸钾
卵磷脂环
甘氨酸、 氯化锂
BP平板主要成分及作用
• 氯化锂、甘氨酸 抑制非致病性葡萄球菌的生长
• 丙酮酸钠 促进葡萄球菌生长
• 亚碲酸钾 抑制G-杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还原为碲盐呈 黑色
• 卵黄 含蛋白质、卵磷脂、脂肪，提供营养和有利于观察卵 磷脂环
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.5～ 15%NaCl肉汤中生长。
3、生化特性：
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸 不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝 酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺 类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏 感。