组培室外植体消毒等基本操作技术
花卉植物无菌接种组培技术
花卉植物无菌接种组培技术
养瓶备用。
2、外植体消毒⑴蒸馏水冲洗外植体置于已杀菌开机的超净工作台上，新洁尔灭洗液消毒双手，用无菌蒸馏水清洗外植体2-3次，需晃动。
⑵酒精消毒75%酒精倒入装外植体的容器内，消毒外植体30-60s，时间长短视植物材料情况而定。
动作一定迅速，需晃动。
然后将酒精倒去。
⑶升汞消毒1%生汞倒入装外植体的容器内，消毒外植体5-10min，时间长短视情况而定。
需晃动，在最后3min静置，升汞注满容器，将已灼烧的镊子放入容器升汞内浸泡。
⑷蒸馏水清洗用镊子将外植体取出，放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗，反复清洗4次。
⑸茎尖的剥离用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理，剥离外植体材料芽外部小叶片，露出尖端生长点和2-3片叶原基部分，将此部分剪下做培养材料。
再用无菌蒸馏水清洗3-4次。
⑹接入培养基培养基瓶放入工作台内，将剥离的材料分别用消毒过的镊子放入培养瓶内，盖上瓶盖，置培养篮内，写上培养时间、操作人及培养品名，入培养室培养。
组织培养中的清洗、消毒灭菌技术
组织培养中的清洗、消毒灭菌技术1、清洗植物组织培养用的各种玻璃器皿，特别是培养瓶和盛培养基的器皿，一定要严格清洗，以防油污、重金属离子、酸、碱等有害物质残留在瓶内，影响培养物的生长。
使用过的玻璃器皿应及时清洗，先将污物如培养基、培养物倒掉，再浸入水中，然后洗涤。
玻璃器皿的洗涤，可根据器皿的污染程度和性质，采用不同的方法，通常有碱洗法和酸洗法。
凡有微生物污染的器皿，必须先进行高压消毒和煮沸，以杀死菌体，否则会产生孢子飞扬，污染环境，给组织培养带来严重困难。
器皿洗净后，应烘干或晾干，放在规定的地方，便于取用。
常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。
这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用湿热灭菌（培养基）培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在o．1MPa的压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。
高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底。
常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到O．05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。
三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0．1-0．15Mpa时，维持15-20min。
•对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。
而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间。
对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。
最新植物组培外植体消毒详解
精品文档植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
(1)常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75% 酒精杀菌效果最好，95% 或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+ 可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2] ，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭精品文档这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
最新植物组培外植体消毒详解
植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
（2）消毒方法①茎尖、茎段及叶片等的消毒消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。
外植体消毒方法
外植体消毒方法
外植体消毒
1 、材料：油菜、番茄、芝麻等种子或其他培养材料。
2 、仪器：，含MS 培养基的，镊子，培养皿，酒精灯，接种器械（解剖刀、剪子、镊子等）。
3 、试剂： 70% 酒精， 95% 酒精， % 升汞或漂白粉、无菌水等。
方法步骤
1 、用水和肥皂洗净双手，穿上灭过菌的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。
2 、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射 20 分钟。
3 、上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，然后用 70% 酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面。
4 、先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸 95% 酒精在酒精灯火焰上灼烧，放置冷却。
5 、修整接种材料，除去不用的部分，然后进行外植体消毒：
（1）水洗，吸干。
（2） 70% 酒精中浸泡约 30-60 秒（注意：酒精穿透力很强，时间不宜过长，以免损伤材料组织细胞）。
（3）在% 升汞中浸泡10 分钟；或在10% 漂白粉上清夜中泡10-15 分钟；（4）无菌水冲洗 3-5 次。
6 、接种：将种子或其他培养材料放到培养基上。
（1）先解开包口纸，将或拿成斜角，使瓶口在酒精灯火焰上方灼烧数秒钟。
（2）用灼烧过的冷却的镊子取外植体材料转接到或培养瓶中，轻轻插入或放在培养基表面。
（3）接种完毕后，将瓶口在火焰上转动灼烧，封口。
（4）操作期间应经常用70% 酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在 95% 酒精中浸泡和火焰上灼烧灭菌。
注意：双手不能离开工作台，不能说话、走动或咳嗽等。
7 、接种结束后，清理和关闭超净工作台，并用 70% 酒精擦拭工
作台面。
植物组织培养无菌操作技术
无菌操作技术植物组织培养要求严格的无菌条件及无菌操作技术。
无菌操作技术如下：一、接种室的无菌技术无菌操作室或接种室除用甲醛和高锰酸钾按2比1的比例定期熏蒸灭菌，在实验室用甲醛和高锰酸钾封闭消毒器具，不宜进入消毒空间。
消毒后通风换气，等气味散尽后再出入。
使用前用20%新洁尔灭（苯扎溴铵溶液）对接种室内墙壁、地板及设备擦洗，用70%酒精喷雾（使灰尘迅速沉淀），用紫外线灭菌20分钟或更长，照射期间接种室门要关严。
当接种室紫外线消毒期间，工作人员不要处于正消毒的空间内，更不要用眼睛注视紫外灯，也要避免长时间在开着紫外灯的超净工作台内进行操作。
一般在接种室用紫外线消毒后，不要立即进入接种室，此时室内充满高浓度的臭氧，会对人体，尤其是呼吸系统造成伤害。
应在关闭紫外线灯15-20分钟后再进入室内。
二、工作人员的无菌技术工作人员要经常洗头、洗澡、剪指甲，保持个人清洁卫生。
在接种室穿医护用的特制工作衣帽。
工作衣、帽、口罩也要经常清洗，洗净晾干后用纸包好进行高温高压消毒。
工作衣使用前后挂于预备间，并用紫外线照射灭菌。
接种前洗手，最好用肥皂水或新洁尔灭、洗手液等清洗，然后用酒精擦洗或喷洒。
三、接种器械无菌技术接种时首先要用紫外线照射超净工作台面后，用70%酒精喷雾或擦洗工作台面。
工作前送风15-30分钟左右。
首先对器械支架进行灼烧消毒，然后对接种工具如手术剪、手术刀、镊子等进行灼烧消毒，方法一般是用70%酒精浸渍、擦拭或喷洒后再酒精灯上灼烧。
接种工具灼烧后放在器械支架上冷却待用。
接种一定数量材料后，接种器械要重新灼烧灭菌，避免因沾有植物材料或琼脂等引起双重污染和交叉污染。
通常采用两套接种工具，使用一套时，另一套灼烧后冷却。
对于较大的器械如显微镜等，可用70%酒精擦洗表面，然后用紫外线照射灭菌。
继代转接时，要注意对待转接的培养物进行仔细观察挑选，防止将已经污染的培养物继代扩增；放置了很久的试管或三角瓶表面和瓶塞宜用70%酒精棉擦洗。
实验二 外植体的消毒接种与培养
实验二外植体的消毒接种与培养一、实验目的本次实验主要是为了掌握外植体的消毒、接种和培养技术，了解外植体的形态特征和生长规律，为后续的组织培养和基因转化提供基础。
二、实验原理1.外植体的消毒外植体是指从植物细胞或组织中切取的一小段或一小块，应用于外植体培养中。
外植体在切取和处理过程中容易受到细菌和真菌的污染，所以需要对外植体进行消毒处理。
消毒方法分为物理消毒和化学消毒两种。
物理消毒主要是利用高温烤过或微波消毒，化学消毒则是利用消毒剂进行消毒。
本实验中，我们采用化学消毒的方法，使用70%酒精和0.1%次氯酸钠溶液进行消毒处理。
接种是指将消毒好的外植体移植到培养基上，进行生长和分化。
接种需要注意接种时间、接种方式和接种密度。
外植体的培养主要依靠培养基和培养条件的控制。
培养基的配制和不同植物种类、发育阶段和培养目的有关。
培养条件主要包括光周期、光强度、温度、湿度等。
对不同植物种类和培养阶段，要采取不同的培养条件进行调整。
三、实验操作1. 实验材料和设备氧化锌瓶、脱脂棉、酒精棉球、玻璃针、外植体、琼脂、MS基本培养基、10%蔗糖溶液、0.8%琼脂糖、0.1%次氯酸钠溶液、高温烤箱、显微镜、组织取片剪刀、组织取片镊子。
2. 实验步骤（1）消毒外植体的消毒是外植体培养中的一个必要步骤。
将外植体放入脱脂棉盒中，加入70%酒精或0.1%次氯酸钠溶液进行浸泡消毒，时间一般为3-5分钟。
消毒后用脱脂棉纸吸干余液，进行无菌操作。
（2）接种将已消毒好的外植体用组织取片剪刀分割成2-3mm长的段，将其移植到琼脂中，培养基为MS基本培养基，添加10%蔗糖和0.8%琼脂糖。
接种时注意切口与琼脂接触，并尽量避免外植体处于吸水的状态，以减少周围细胞破裂。
（3）培养将已接种好的外植体置于温度适宜、光照强度适中的培养箱内，在合适的光周期下进行培养，并观察外植体的生长状态。
观察时应注意以下几点：①外植体的生理状况：生长慢、残缺、干瘪、腐烂、出现菌丝等表明外植体存在刺伤、污染等问题。
组培技术培训：外植体消毒注意事项--亚龙组培
在整个组培实验中，难度较高的在于外植体清洗与消毒。
野外采集的外植体，表面附着各种微生物以及微尘等，清洗时需要耐心的清洗。
还有的外植体表面生长绒毛，因此清洗时更加花费时间。
外植体消毒，第一步是用酒精消毒，由于酒精能是蛋白质变性的特性，所以酒精处理时间不能太长也不能太短，时间太长外植体受伤严重降低其生长活力；时间太短则消毒的效果不好。
第二步进一步消毒，一般用的较多的是次氯酸钠和氯化汞。
氯化汞毒性较大，操作起来不方便，因此更常用次氯酸钠。
但是次氯酸钠易分解因此需现用现配，同时把握好消毒时间。
如果在操作后发现还是被污染了，这也是有应对方法的。
以后会提及如何处理。
组培实验外植体选择处理及接种培养
2．温度 离体培养中对温度的调控要比光照显得更 为突出。不同的植物有不同的最适生长温度，大多 数植物最适温度在23C-32C之间。培养室一般所 用的温度是25C±2C。低于15C或高于35C，对 生长都是不利的。
3．湿度 组织培养中的湿度影响主要有两个方面，一是培 养容器内的湿度，它的湿度条件常可保证100%。二是培 养室的湿度，它的湿度变化随季节和天气而有很大变动 。湿度过高过低都是不利的，过低会造成培养基失水而 干枯，或渗透压升高，影响培养物的生长和分化；湿度 过高会造成杂菌滋长，导致大量污染。因此，要求室内 保持70%-80%的相对湿度。
3.选择最适的时期 组织培养选择材料时，要注意植物的生长季节和植物 的生长发育阶段。如快速繁殖时应在植株生长的最适时期 取材，这样不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高； 花药培养应在花粉发育到单核期时取材，这时比较容易形 成愈伤组织。
4.选取适宜的大小 建立无菌材料时，取材的大小根据不同植物材料而异 。材料太大易污染，也不需要；材料太小，多形成愈伤组 织，甚至难于成活。一般选取培养材料的大小，在0.5cm-1.0cm。如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。
4．氧气 植物组织培养中，外植体的呼吸需要氧气。在液 体培养中，振荡培养是解决通气的良好办法。
1. 选择优良的种质 无论是离体培养繁殖种苗，或者是进行生物技术研究， 培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的 种质，或特殊的基因型。对材料的选择要有明确的目的， 具有一定的代表性，提高成功机率，增加其实用价值。
2. 选择健壮的植株 组织培养用的材料，最好从生长健壮的无病虫的植株 上，选取发育正常的器官或组织。因为这些器官或组织代 谢旺盛，再生能力强，比较容易培养成功。
• （5）布质制品的灭菌 • 湿热灭菌法：工作服、口罩、帽子等布质品均用湿
外植体消毒的一般步骤
外植体消毒的一般步骤在植物组织培养中，外植体消毒是非常重要的一步，它关系到实验的成败。
以下是外植体消毒的一般步骤：1.剪取外植体在消毒前，需要选取健康、无病虫害的外植体。
剪取时要保证无菌操作，避免污染。
一般选取植物的新鲜、幼嫩的部分作为外植体。
2.清洗外植体剪取后的外植体需要用无菌水或酒精进行清洗。
要多次清洗，以去除表面的杂质和细菌。
在清洗时，应注意不要损伤外植体。
3.切除两端为了防止两端感染，在外植体两端用火焰消毒或75%酒精浸泡2-3分钟。
然后切除两端，减小接触面积，避免污染。
4.浸泡在酒精中将外植体完全浸泡在75%酒精中，取出后用无菌水冲洗。
这样可使外植体表面的细菌和病毒失去活性，提高消毒效果。
5.取出并用无菌水冲洗将外植体从酒精中取出，用无菌水冲洗干净。
在冲洗时，要确保每个外植体都冲洗到位，以避免残留物影响培养效果。
6.消毒剂处理在外植体上涂抹一层消毒剂，进行进一步的杀菌处理。
涂抹时要适量，避免过度使用导致外植体损伤。
7.无菌水冲洗用无菌水冲洗外植体，重复多次，确保外植体表面没有消毒剂残留。
在冲洗时，要注意更换无菌水，以确保冲洗效果。
8.滤纸吸干表面水分在外植体表面用滤纸吸干水分，确保外植体保持干燥。
这一步可以有效避免培养过程中出现水分过多导致霉变的情况。
9.接种到培养基中将外植体轻轻插入培养基中，注意不要损坏外植体和培养基。
接种时需要保证无菌操作，避免带入新的污染源。
以上就是外植体消毒的一般步骤，希望能对你有所帮助。
在进行实验时，一定要注意无菌操作，确保每个步骤都符合要求，以获得良好的实验效果。
植物组培外植体消毒详解
植物组培外植体消毒详解Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌一、目的要求1、通过实验，培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识。
2、掌握组织培养室的消毒及灭菌方法。
3、掌握培养用具的干热灭菌的一般操作技术。
二、仪器与用具1、用具：喷雾器、工作服、口罩、手套等。
2、药品：2%新洁尔灭，高锰酸钾，甲醛，70%酒精。
三、方法步骤（一）植物组织培养室的灭菌1、地面、墙壁和工作台的灭菌：用2%新洁尔灭喷雾。
（1）配方：取新洁尔灭原液20ml，加水980ml，配成2%新洁尔灭溶液。
（2）方法：将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内，进行均匀喷雾。
（3）注意事项：①墙壁、角落、地面喷雾要均匀，不要遗漏；②注意安全，在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌：用甲醛和高锰酸钾熏蒸，1年中熏蒸1-2次。
（1）配方：每立方米空间用甲醛10ml加高锰酸钾5g的配比液熏蒸。
（2）方法：首先房子要密封。
然后在房子中间放一口缸或大烧杯，将称好的高锰酸钾放入缸内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入缸内，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天。
（3）注意事项：①操作前要戴好口罩及手套；②倒入甲醛时要小心，因为甲醛遇到高锰酸钾会迅速沸腾，并产生大量烟雾。
操作时人要迅速避开烟雾；③3天后，打开房间，搬走费液缸；一周后，方可进入操作。
3、在已经熏蒸过的房间内，用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。
4、用紫外灯照射20—30min。
5、使用前，再用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。
（二）培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）（1）洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。
自然晾干或烘箱干燥。
（2）包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金属器械分别包扎好。
（3）装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水（水要淹没电热丝）。
（切忌干烧！）（4）装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装蒸馏水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金属器械等。
植物组织培养中的清洗、消毒灭菌技术
植物组织培养中的清洗、消毒灭菌技术1、清洗植物组织培养用的各种玻璃器皿，特别是培养瓶和盛培养基的器皿，一定要严格清洗，以防油污、重金属离子、酸、碱等有害物质残留在瓶内，影响培养物的生长。
使用过的玻璃器皿应及时清洗，先将污物如培养基、培养物倒掉，再浸入水中，然后洗涤。
玻璃器皿的洗涤，可根据器皿的污染程度和性质，采用不同的方法，通常有碱洗法和酸洗法。
凡有微生物污染的器皿，必须先进行高压消毒和煮沸，以杀死菌体，否则会产生孢子飞扬，污染环境，给组织培养带来严重困难。
器皿洗净后，应烘干或晾干，放在规定的地方，便于取用。
常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。
这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用湿热灭菌（培养基）培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在o．1MPa的压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。
高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底。
常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到O．05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。
三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0．1-0．15Mpa时，维持15-20min。
?对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。
而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间。
组培实验室常见消毒方法优劣比较
组培实验室常见消毒方法优劣比较组培实验室是生命科学及相关学科实验室建设中必备的实验室。
组培实验室的消毒是实验室日常管理工作的重要环节，直接关系着组培实验的成功与否和组培幼苗的质量高低。
组培实验室的消毒一般又可分为环境消毒、培养基消毒和外植体的消毒。
培养基的消毒主要是在高压灭菌锅中进行，在此不再赘述。
环境消毒和外植体的消毒则有多种方法，这些方法各有优劣，使用不当时还会对人体产生伤害，为此，笔者特对这些典型方法进行分析比较，为组培实验室的科学管理提供一些参考。
1 组培实验室的环境消毒保持组培实验室的空气清洁度是减少组培污染的重要条件，用于实验室消毒的常规消毒方法包括紫外线照射法、甲醛熏蒸法、新洁尔灭(苯扎溴铵溶液)法等，比较新的方法有中草药消毒法。
1.1 紫外线照射法紫外线是波长在10-400 nm之间辐射光的总称，能引起细菌、病毒等微生物遗传物质的结构发生变化，从而影响DNA复制、RNA转录和蛋白质的翻译，导致病菌或病毒死亡。
此外，紫外线辐射所产生的臭氧和各种自由基可损伤蛋白质和酶分子，导致功能改变。
紫外线消毒具有广谱性，可杀灭细菌、病毒、真菌、支原体等各种微生物。
紫外消毒具有较高的杀菌效率，且由于未使用化学药剂，消毒过程中不会产生对人体和环境有害的副产物。
该技术运行维护简单，费用较低。
采用室内悬吊式紫外线消毒时，室内安装紫外消毒灯的数量为每平方不少于1. 5 W，照射时间不少于30 min。
但需要指出的是，过量的紫外线照射对人体有一定的危害乃至致癌作用。
紫外线作用于中枢神经系统，可出现头痛、头晕、体温升高等症状。
过量辐射会诱发皮肤癌。
紫外辐射对眼睛的损伤特别明显，严重时可能诱发白内障。
因此，当组培实验室在用紫外消毒期间，工作人员不要呆在正消毒的空间内，切忌用眼睛注视紫外灯。
特别的，如超净工作台内的紫外灯打开消毒时，应避免将手长时间暴漏于紫外灯下。
一般在接种室用紫外线消毒后，不要立即进入接种室，此时室内充满高浓度的臭氧，会对人体，尤其是呼吸系统造成伤害。
简述外植体消毒的一般步骤
简述外植体消毒的一般步骤外植体消毒是一项非常重要的步骤，它能够保证外植体在植入过程中的安全性和生物相容性。
在外植体操作中，消毒程序的正确执行可以减少感染的风险，并提供一个理想的环境来促进愈合和整合。
下面是一般的外植体消毒步骤：第一步：准备工作在进行外植体消毒之前，首先要准备所有必要的工具和消毒剂。
工具包括外植体引导针、外植体引导模板、外植体钻头等。
消毒剂可以使用酒精、碘酒或含氯消毒液。
第二步：清洁工具在进行消毒之前，必须确保所有工具和设备都是清洁的。
可以用去菌刷或者清洁剂将工具进行清洗，以去除残留的血液、唾液和细菌等。
第三步：保证无菌操作为保证无菌操作，必须穿戴无菌手套和洁净实验服。
同时，确保工作台面干净，并使用消毒液擦拭。
第四步：消毒外植体在进行消毒之前，需要将外植体从原包装中取出，并将其置于无菌的容器中。
然后，使用适当的消毒剂将外植体进行浸泡。
消毒剂的种类和浸泡时间取决于外植体的材料和厂家的建议。
第五步：清洗外植体在消毒的过程中，外植体可能残留一些消毒剂。
为了去除这些残留物，需要将外植体用无菌生理盐水进行彻底的冲洗。
第六步：储存外植体一旦外植体经过消毒和清洗，就可以将其用无菌盒子或包装进行储存，以防止再次受到污染。
同时，标记每个外植体的型号和日期，以便追踪外植体的使用情况。
第七步：临床操作在外植体植入时，需要遵循严格的无菌操作规范。
医生必须穿戴干净的手套，将外植体直接植入预定的位置。
在植入之前，可以使用适当的锥形钻头进行预钻。
第八步：术后护理植入外植体后，术后护理也非常重要。
医生会提供一些口腔护理产品和建议，以帮助患者恢复和维护口腔的卫生。
总结起来，外植体消毒是一项非常重要的步骤，它能够保证外植体的安全性和生物相容性。
在进行消毒之前，必须做好准备工作，清洁工具和保证无菌操作。
然后，将外植体进行消毒和清洗，并妥善储存。
在临床操作中，要遵循无菌操作规范。
术后护理也非常重要。
通过正确的外植体消毒步骤，可以减少感染的风险，并提供一个良好的环境来促进愈合和整合。
外植体灭菌的一般流程
外植体灭菌的一般流程
外植体消毒一般程序有自来水冲洗，酒精浸泡，消毒剂消毒，无菌水冲洗等。
外植体消毒程序较多，首先需要用自来水冲洗30min以上，然后用70%～75%酒精浸泡30秒，再然后使用消毒剂表面消毒外植体3-10min，最后使用无菌水冲洗3～10次。
外植体表面消毒和灭菌时需要注意：
1、外植体取回后要及时修整、表面清洗和流水冲洗。
2、根据外植体种类、取材时间和老嫩程度综合确定灭菌方案。
3、严格掌握酒精灭菌时间。
4、灭菌液要浸没材料，随时轻轻摇动，表面灭菌后要尽快切取所需外植体接入培养基中，以减少外植体在空气中的暴露时间，避免风干和褐化。
外植体消毒需要严格按照消毒程序清洗，以免造成不良影响。
请介绍初代培养时,外植体灭菌的一般操作流程
请介绍初代培养时,外植体灭菌的一般操作流程请介绍初代培养时，外植体灭菌的一般操作流程植物组织培养是一种重要的研究手段，可以用于植物生长发育、基因转化、基因功能研究、药用植物繁殖等方面。
其中，外植体灭菌是非常重要的一步，它可以有效地消除外植体表面的细菌、真菌等微生物，保证培养过程的纯净性。
本文将介绍初代培养时，外植体灭菌的一般操作流程。
一、实验室准备1.1 器材准备灭菌器、无菌工作台、移液器、吸头、无菌超声波清洗器、电子天平、无菌手套、无菌培养皿、无菌离心管、无菌注射器、无菌玻璃棒、无菌滤纸、无菌酒精灯等。
1.2 试剂准备70%乙醇、84消毒液、无菌蒸馏水等。
二、外植体处理2.1 采集外植体采集适合培养的植物外植体，如茎尖、叶片、花器官等，根据不同的外植体类型选择不同的处理方法。
2.2 去皮、消毒去掉外植体表面的皮、毛等杂质，然后将外植体放入无菌离心管中，加入70%乙醇或84消毒液，用移液器充分淋洗，消毒时间不少于3min。
2.3 洗涤将消毒液倒掉，加入无菌蒸馏水，用移液器充分淋洗，洗涤时间不少于3次。
2.4 剪切将外植体剪成适当大小，以便于培养时的生长和观察。
三、培养基处理3.1 培养基配制根据所需的外植体类型、培养目的等不同因素，选择适当的培养基配方，如MS培养基、B5培养基等。
将培养基配制好，并调节pH 值至适宜范围。
3.2 过滤用无菌滤纸将培养基过滤，以去除其中的微生物。
四、外植体接种4.1 灭菌台消毒打开灭菌台，用酒精灯对其进行消毒。
4.2 工具消毒将需要使用的工具放入灭菌器中进行消毒，如无菌注射器、无菌玻璃棒等。
4.3 培养皿消毒将需要使用的培养皿放入灭菌器中进行消毒，消毒时间不少于30min。
4.4 外植体接种将消毒好的外植体取出，用无菌注射器或无菌玻璃棒将其接种到培养皿中，然后加入适量的培养基。
五、培养过程5.1 培养条件将接种好的培养皿放入无菌培养箱中，保持适宜的温度、光照和湿度等条件。
请介绍初代培养时,外植体灭菌的一般操作流程
请介绍初代培养时,外植体灭菌的一般操作流程植物组织培养技术是一种重要的生物技术，它可以利用植物体内的细胞分裂和分化的特性，实现对植物的无性繁殖、基因转化和育种等方面的研究和应用。
在进行植物组织培养时，为了避免外源微生物的污染和干扰，需要对外植体进行灭菌处理。
下面将介绍初代培养时外植体灭菌的一般操作流程。
一、外植体的选择和处理在进行组织培养前，需要从植物体中选取适合的外植体。
通常选择的外植体包括叶片、茎段、根尖等。
外植体的选择应该注意到其发育状态、大小、形态等因素。
同时，在选择外植体的过程中，需要注意对其进行清洗和表皮去除的处理，以保证灭菌的效果。
二、灭菌方法的选择在进行外植体灭菌时，需要选择适合的灭菌方法。
常用的灭菌方法包括化学灭菌和物理灭菌两种。
化学灭菌主要是通过使用消毒剂，如酒精、过氧化氢、次氯酸钠等，来杀灭外植体表面的微生物。
物理灭菌主要是通过高温、紫外线、电离辐射等方式来灭菌。
在选择灭菌方法时，需要考虑到其对外植体的影响，以及灭菌效果等因素。
三、灭菌操作流程1. 准备消毒液：根据选择的灭菌方法，准备相应的消毒液。
如果是化学灭菌，可使用70%的酒精或0.1%的次氯酸钠溶液；如果是物理灭菌，可使用高压蒸汽或紫外线灭菌设备。
2. 外植体的处理：将选好的外植体进行清洗和表皮去除的处理，以去除表面的微生物和杂质。
3. 外植体的浸泡：将处理好的外植体放入消毒液中浸泡，时间一般为5-10分钟。
4. 消毒液的去除：将浸泡好的外植体取出，用无菌的纸巾将其表面的消毒液吸干。
5. 外植体的干燥：将去除消毒液的外植体放在无菌的工作台上，用吸水纸或干燥器将其表面的水分吸干。
6. 灭菌：将处理好的外植体放入灭菌器中进行灭菌。
灭菌时间和温度根据灭菌方法和外植体的特性而定，通常为20-30分钟。
7. 储存：将灭菌好的外植体放在无菌的保存袋中，储存在无菌的环境中，以待后续的组织培养操作。
四、注意事项在进行外植体灭菌时，需要注意以下事项：1. 消毒液的选择和浓度应该适当，避免对外植体产生不良影响。
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组培室基本操作技术
器皿和器具的洗涤
1.洗涤剂：无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗洁精
2.常用清洗方法
洗涤剂清洗法
超声波清洗法
3.玻璃器皿的清洗
新购置的玻璃器皿的清洗
用过的培养器皿的清洗
已经污染的玻璃器皿的清洗
灭菌
器具的灭菌方法
干热灭菌法
高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法）
火焰灼烧灭菌法
培养基的灭菌方法
高温蒸汽灭菌法
过滤除菌法
高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项：
①灭菌前外层锅内要加入足够的水,灭菌完成后要将锅内的水排放干净。
②在灭菌过程中及灭菌后，压力表压力指针归零之前,不能打开锅盖,以免发生危险。
③注意日常维护和检查,及时发现问题,及时修理，保证使用安全可靠。
使用高压蒸汽灭菌锅进行物品灭菌时的注意事项：
①消毒锅内放置的物品要有一定的缝隙，便于高温蒸汽上下回流，达到良好灭菌效果。
②锅内冷空气必须完全排尽，否则压力表的指针虽然达到了规定的压力，但由于锅内冷空气的存在，并不能达到相应的温度，因而影响灭菌效果。
③进行培养基灭菌时，锅内达到规定的灭菌温度后，在严格保持灭菌温度的同时，还要严格保持灭菌时间。
时间过长会破坏培养基内一些化学成分的有效性，时间过短则达不到灭菌效果。
无菌操作室内的灭菌方法
熏蒸灭菌法
射线灭菌法
外植体的表面灭菌
化学消毒剂灭菌法
抗生素抑菌法
1.外植体灭菌的常用杀菌剂
良好的外植体灭菌效果的含义：
外植体灭菌后无菌率高，同时植物细胞不会受损伤或只是轻微受损伤而能保持正常生长。
2.外植体表面灭菌
外植体表面灭菌操作前的准备工作：
①无菌水、漂洗瓶、切割用器皿（玻璃培养皿或不锈钢切割盘）和金属器具均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净工作台上。
②灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工作台上。
3.影响外植体消毒效果的因素：
①消毒剂种类
②消毒剂使用浓度
③消毒处理时间
4.培养过程中污染原因及对策
污染的病原类型
污染发生原因
防污染对策
外植体的接种
1 定义
2 外植体接种操作前的准备工作
接种室的清洁和灭菌
超净工作台的清洁和灭菌准备
操作人员无菌操作前的准备 3 外植体接种的具体步骤
常用外植体的种类
茎尖
带节茎段
节间部茎段
叶片和叶柄
鳞片
外植体的培养条件
温度
光照
湿度
培养基的营养物质和pH变化
培养物的气体环境。