组培室外植体消毒等基本操作技术

组培室基本操作技术

器皿和器具的洗涤

1.洗涤剂：无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗洁精

2.常用清洗方法

洗涤剂清洗法

超声波清洗法

3.玻璃器皿的清洗

新购置的玻璃器皿的清洗

用过的培养器皿的清洗

已经污染的玻璃器皿的清洗

灭菌

器具的灭菌方法

干热灭菌法

高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法）

火焰灼烧灭菌法

培养基的灭菌方法

高温蒸汽灭菌法

过滤除菌法

高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项：

①灭菌前外层锅内要加入足够的水,灭菌完成后要将锅内的水排放干净。

②在灭菌过程中及灭菌后，压力表压力指针归零之前,不能打开锅盖,以免发生危险。

③注意日常维护和检查,及时发现问题,及时修理，保证使用安全可靠。

使用高压蒸汽灭菌锅进行物品灭菌时的注意事项：

①消毒锅内放置的物品要有一定的缝隙，便于高温蒸汽上下回流，达到良好灭菌效果。

②锅内冷空气必须完全排尽，否则压力表的指针虽然达到了规定的压力，但由于锅内冷空气的存在，并不能达到相应的温度，因而影响灭菌效果。

③进行培养基灭菌时，锅内达到规定的灭菌温度后，在严格保持灭菌温度的同时，还要严格保持灭菌时间。时间过长会破坏培养基内一些化学成分的有效性，时间过短则达不到灭菌效果。

无菌操作室内的灭菌方法

熏蒸灭菌法

射线灭菌法

外植体的表面灭菌

化学消毒剂灭菌法

抗生素抑菌法

1.外植体灭菌的常用杀菌剂

良好的外植体灭菌效果的含义：

外植体灭菌后无菌率高，同时植物细胞不会受损伤或只是轻微受损伤而能保持正常生长。

2.外植体表面灭菌

外植体表面灭菌操作前的准备工作：

①无菌水、漂洗瓶、切割用器皿（玻璃培养皿或不锈钢切割盘）和金属器具均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净工作台上。

②灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工作台上。

3.影响外植体消毒效果的因素：

①消毒剂种类

②消毒剂使用浓度

③消毒处理时间

4.培养过程中污染原因及对策

污染的病原类型

污染发生原因

防污染对策

外植体的接种

1 定义

2 外植体接种操作前的准备工作

接种室的清洁和灭菌

超净工作台的清洁和灭菌准备

操作人员无菌操作前的准备 3 外植体接种的具体步骤

常用外植体的种类

茎尖

带节茎段

节间部茎段

叶片和叶柄

鳞片

外植体的培养条件

温度

光照

湿度

培养基的营养物质和pH变化

培养物的气体环境