烟草野火病病原细菌的鉴定
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春游漫兴
春芳到处任留连， 不是山巅即水边。 细雨梨花含食日， 春风杨柳清明天。 一生碌碌编辑梦， 游兴悠悠寄暮年。 支将冬夜作春宵， 留得寒香怜晚节。 夕阳黄昏景更好， 满头银丝我不老。
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烟草野火病是烟草生产上的主要病害之一， 最 早 由 Ｗｏｌｆ Ｆｏｓｅｒ（ １９１７） 报 道 在 美 国 北 卡 罗 来 纳 州 上升为严重病害。该病主要发生于烟株旺长后期， 在南方烟区或高度感病品种上， 或在多雨潮湿， 幼 苗密集的情况下， 苗期有时也有发生。主要危害叶 片形成病斑， 周围产生一很宽的黄色褪绿晕圈， 于 幼苗期或气候潮湿时最为明显。在多雨潮湿， 幼苗 密集的情况下， 病害蔓延迅速， 往往引起幼苗成片 腐烂， 倒伏死亡， 如被野火焚烧状。
烟草野火病（ ｗｉｌｄｆｉｒｅ ｏｆ ｔｏｂａｃｃｏ） 是由烟草假单 胞杆菌（ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｔａｂａｃｉ） 引起的细 菌性病害。该菌属于薄壁细菌门， 暗细菌纲， 假单胞 科， 假单胞杆菌属， 丁香假单胞杆菌烟草致病变种。 研究通过革兰氏染色反应、病原菌菌体和菌落形态 的观察、致病性测定以及丁香假单胞杆菌典型的生 理生化特征和营养利用情况的测定， 确定菌株为 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｔａｂａｃｉ。不同地理来源的 菌株在生化特征和营养利用上略有差异。
区连年发生， 危害严重， 论述了烟草野火病菌的鉴定方法。
关键词： 烟草野火病； 野火病原细菌； 丁香假单胞杆菌
中图分类号： Ｑ９４
文献标识码： Ａ
文章编号： １００８－ ６５８７（ ２００７） ０５－ ０２９－ ０３
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｓｙｒ ｉｎｇａｅ ｐｖ． Ｔａｂａｃｉ
２．３ 生理生化测定 供试菌株能从蔗糖产生果聚糖， 水解明胶， 产
生烟草枯斑反应。过氧化氢酶反应阳性， 氧化酶反 应 、精 氨 酸 双 水 解 酶 、甲 基 红 试 验 阴 性 。 能 利 用 蔗 糖、甘露醇、Ｄ－ 木糖等作为唯一碳源， 不能利用果 糖、乳糖、酒石酸钠等作碳源。不能水解淀粉， 不能 软腐马铃薯。部分菌株的生理生化特性和营养利用 情况见表 １。
Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒ ｏｍ Ｙｕｎｎａｎ
Ｘｕｌｉｎｇ Ｌｉ Ｆｕｙｕａ ｎ
（ Ｂａｏｓｈａｎ Ｔｅａｃｈｅｒ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｂａｏｓｈａｎ ，Ｙｕｎｎａｎ， ６７８０００）
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｔｏｂａｃｃｏ ｗｉｌｄｆｉｒｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｓ ａ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｉｔ ｉｓ ｂｒｏｕｇｈｔ ａｂｏｕｔ ｂｙ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． Ｔａｂａｃｉ． Ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ， ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｍｏｒｅ ｓｅｒｉｏｕｓ ｅｖｅｒｙ ｙｅａｒ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｔｏｂａｃｃｏ ｄｉｓｔｒｉｃｔｓ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ． Ｈｅｒｅ ｒｅｐｏｒｔｓ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． Ｔａｂａｃｉ． Ｋｅｒ ｗｏｒ ｄｓ： ｔｏｂａｃｃｏ ｗｉｌｄｆｉｒｅ ｄｉｓｅａｓｅ； Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｔａｂａｃｉ； Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇｅ
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本刊原副主编王春芳老师诗歌作品获奖
本刊讯（ 记者 王国龙） 近日， 本刊原副主编王春芳老师的诗 歌作品《春游漫兴》荣获 ２００７ 年“华夏情”诗文书画大赛一等奖。下面 是该诗原文。
参考文献： ［１］ Ｌｕｃａｓ Ｇ Ｂ． Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ Ｔｏｂａｃｃｏ （ Ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ） ［Ｍ］． Ｒａｌｅｉｇｈ Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ． Ｕ．Ｓ．Ａ，１９７５： ３９７￣４０５． ［２］ 河南农业大学， 云南农业大学．烟草病理学教程［Ｍ］．北京： 中国科
技出版社， １９９５： １４９￣１５２． ［５］ 刘秋， 吴元华， 于基成．烟 草 野 火 病 的 研 究 进 展［Ｊ］．沈 阳 农 业 大 学
学报．１９９９， ３０（ ３） ： ３５４￣３６０． ［３］ 张世珖． 烟草野火病病原鉴定及品种抗病性的研究［Ｊ］．云南农业
大学学报， １９９０， ５（ ３） ： １８５￣１８７． ［４］ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｊ， Ｍｕｒｗｉｎ Ｈ Ｆ． Ａ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｗｉｌｄｆｉｒｅ ｏｆ ｔｏｂａｃｃｏ［Ｊ］．Ｗｉｓ．Ａｇｒｉ．Ｅｘｐ．Ｓｔａ．Ｂｕｌｌ，１９２５（６２）：３５． ［５］ 任欣正．植物病原细菌的分类和鉴定［Ｍ］．北京： 农业出版社， １９９４． ［６］ 东 秀 珠 ， 蔡 妙 英 ． 常 见 细 菌 系 统 鉴 定 手 册 ［Ｍ］． 北 京 ： 科 学 出 版
表 １ 供试菌株的生化特性和营养利用
试验项目
参试菌株 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３ １４ １５ １６
精氨酸双解酶水解 － － － － － － － － － － － － － － － －
果聚糖产生
＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
革兰氏染色反应 － － － － － － － － － － － － － － － －
供试菌株革兰氏染色反应试验， 呈阴性。菌体 短 杆 状 ， 单 生 ， 两 端 钝 圆 ， 大 小 为 ０．５￣０．９ × １．９￣３μｍ， 鞭毛极生 １￣５ 根。在 ＮＡ 培养基上初呈
透明状， 后为乳白色， 微突起菌落， 边缘透明， 中心 不透明。在 ＫＢ 上黄乳白色隆起菌落， 边缘整齐， 产 生绿色荧光色素。在 ＰＤＡ 培养基上生长良好， 菌落 圆形隆起， 灰白至白色。
参 试 菌 株 １－ １６ 分 别 为 ： Ｌｆｈ，Ｌｂｈ２，Ｌｇａ，Ｌｐ２，ＳＺ， Ｄｘｙ，Ｄｗｑ１，Ｄｆｙ１，Ｄｆｙ３，Ｙｊｃ１，Ｙｊｃ７，Ｙｔｈ１，Ｙｅｈ，Ｙｘｐ，Ｙｃａ， Ｙｃｈ。“＋ ”表示阳性，“－ ”表示阴性。
经过各项生化特征和营养利用情况的测定， 得 到的菌株与参考文献中［５， ６］反应的烟草野火病菌 的性状基本一致， 确定为 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｔａｂａｃｉ。
收稿日期： ２００７－ ０６－ １９ 作者简介： 徐玲（ １９７８—） ， 云南陆良人， 保山师范高等专科学校科研处， 助教， 硕士， 研究方向为植物细菌性病害的研究。
·３０·
保山师专学报
第 ２６ 卷
采 用 悬 滴 法 制 样 ， 用 日 本 ＪＥＯＬ 公 司 的 ＪｅＥ－ １２００ＥＸⅡ型透射电镜观察。用结晶紫草酸铵 染色法和 ＫＯＨ 溶解试验测定各菌株的革兰氏染色 反应。 １．５ 生理生化测定及营养利用测定
用
蔗糖
＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
情
Ｄ－ 木糖
＋ ＋ ＋ － ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
况
酒石酸钠
－ － － － －－－－ － － － －－－ － －
第５期
徐玲， 李福元： 烟草野火病病原细菌的鉴定
·３１·
３． 小结
烟草是云南省最主要的经济支柱产业之一。烟 草野火病是烟草上的主要病害之一， 在云南省各大 烟区都普遍存在， 控制不好就可能造成巨大的经济 损失。本研究对云南省防治烟草野火病菌， 减轻烟 草野火病病害具有重要意义
９０ 年代以来， 由于生产上大面积种植感病品 种和品种单一等原因， 该病害成为生产上的一大难 题。本研究提供烟草野火病病原菌的鉴定方法， 为 该病的病害防治提供理论依据。
１． 材料和方法
１．１ 病原菌的分离方法 将病斑剪下， 用 ７０％的乙醇表面消毒 ３０ｓ￣６０ｓ，
灭菌水漂洗 ３￣４ 次， 用剪刀或玻棒捣碎于少量无菌 水中， 放置几分钟 ， 蘸 取 病 组 织 液 在 ＫＢ 平 板 上 划
线培养。分离到的菌株进行 ２￣３ 次纯化， 然后移入 ＫＢ 斜面培养基上备用。 １．２ 病原菌的保存
烟草野火菌主要采用两种保存方式： １） 菌株在 ＫＢ 斜面培养基上培养 ２４ｈ（ ２８℃左 右） ， 冰箱保存（ ４℃） ， 定期（ ２￣３ 周） 转移； ２） 用 ＫＢ 培养液中加入灭菌甘油， 使甘油终 浓度 １５￣２０％， １．５ｍｌ 的冻存管中加液体积为 １．２ｍｌ， 挑单菌落于管中， 置于 － ７０℃冰箱中保存。１￣２ 年转 移一次。 １．３ 致病性测定 将分离、纯化得到的菌株培养 ２４ｈ， 制成 ３× １０８ｃｆｕ／ｍｌ 菌悬液， 用去针头注射法接种在烟草叶 片背面， 保温保湿 ２４ｈ， ７￣１０ｄ 后记载结果。 １．４ 培养性状观察、菌体形态和革兰氏染色反应 各菌株分别 在 ＫＢ、ＮＡ 和 ＰＤＡ 平 板 培 养 基 上 划线接种， ２８℃下培养 ２４ｈ 后观察菌落形态。菌体 在 ＫＢ 斜面上培养 ２４ｈ， 制成 ３×１０８ｃｆｕ／ｍｌ 菌悬液，
２００７ 年 ９ 月 第 ２６ 卷 第 ５ 期
保山师专学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｏｓｈａｎ Ｔｅａｃｈｅｒｓ′Ｃｏｌｌｅｇｅ
Ｓｅｐｔ．， ２００７ Ｖｏｌ．２６ Ｎｏ．５
烟草野火病病原细菌的鉴定
徐 玲 李福元
（ 保山师范高等专科学校 科研处， 云南 保山 ６７８０００）
摘 要： 烟草野火病是一种在烟草上普遍发生的毁灭性细菌病害， 由烟草野火病菌引起， 近年来， 云南省主要产烟
果， 萼片等器官。病叶初期产生褐色水渍状小圆斑， 病斑逐渐扩大， 直径可达 １￣２ｃｍ， 四周有较 宽 的 黄 晕圈。病斑合并后成不规则的大斑， 上有轮纹。天气 潮湿时病部表面有薄层菌脓， 干燥后病斑破裂脱 落， 叶片被毁。
人工接种所致病斑从褪绿小圆点开始， 褪绿点 逐渐扩大， 然后在其中出现褐色枯斑。接种 ７—１０ 天后， 接种点出现中心褐色、周围具很宽黄色褪绿 晕圈的圆斑（ 见图 １） 。 ２．２ 菌落、菌体形态观察和革兰氏染色
氧化酶试验
－ － － － －－－－ － － － －－－ － －
过氧化氢酶反应 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
营 Ｌ－ 精氨酸盐酸盐 － － － － － － － － － － － － － － － －
养
甘露醇
＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
利
果糖
－ － ＋－ －－－－ － － － －－－ － －
各项生理生化试验均采用 Ｌｅｌｌｉｏｔｔ 等和常规方 法进行。在营养利用试验中， 用 Ａｙｅｒ 无机盐培养基 （ ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４１ｇ、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ０．２ｇ、ＫＣｌ０．２ｇ、琼脂 １５ｇ、 水 １０００ｍｌ） 作为基本培养基， 试验按 Ｄｈａｎｖａｎｔａｒｉ 方 法进行。
２． 结果和分析
２．１ 烟草野火病症状和致病性测定 烟草野火病主要危害叶片， 也可危害幼茎， 硕
淀粉水解
－ － － － －－－－ － － － －－－ － －
明胶液化
＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
甲基红试验
－ － － － －－－－ － ຫໍສະໝຸດ Baidu － －－－ － －
烟草枯斑反应
＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
马铃薯软腐
－ － － － －－－－ － － － －－－ － －
社， １９９６． ［７］ 方中达．植病研究方法（ 第二版） ［Ｍ］．北京： 中国农业出版社， １９９８． ［８］ 王金生．植物病原细菌学［Ｍ］．北京： 中国农业出版社， ２０００： ２１￣２３． ［９］ Ｓｎｅａｔｈ Ｐ．Ｈ．Ａ， Ｓｔａｌｅｙ Ｊ．Ｔ， Ｂｒｅｎｎｅｒ Ｄ．Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｂｅｒｇｅｙ， ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ（ Ｎｉｎｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ） ［Ｍ］．１９９４： ９４， １５６．
春芳到处任留连， 不是山巅即水边。 细雨梨花含食日， 春风杨柳清明天。 一生碌碌编辑梦， 游兴悠悠寄暮年。 支将冬夜作春宵， 留得寒香怜晚节。 夕阳黄昏景更好， 满头银丝我不老。
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烟草野火病是烟草生产上的主要病害之一， 最 早 由 Ｗｏｌｆ Ｆｏｓｅｒ（ １９１７） 报 道 在 美 国 北 卡 罗 来 纳 州 上升为严重病害。该病主要发生于烟株旺长后期， 在南方烟区或高度感病品种上， 或在多雨潮湿， 幼 苗密集的情况下， 苗期有时也有发生。主要危害叶 片形成病斑， 周围产生一很宽的黄色褪绿晕圈， 于 幼苗期或气候潮湿时最为明显。在多雨潮湿， 幼苗 密集的情况下， 病害蔓延迅速， 往往引起幼苗成片 腐烂， 倒伏死亡， 如被野火焚烧状。
烟草野火病（ ｗｉｌｄｆｉｒｅ ｏｆ ｔｏｂａｃｃｏ） 是由烟草假单 胞杆菌（ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｔａｂａｃｉ） 引起的细 菌性病害。该菌属于薄壁细菌门， 暗细菌纲， 假单胞 科， 假单胞杆菌属， 丁香假单胞杆菌烟草致病变种。 研究通过革兰氏染色反应、病原菌菌体和菌落形态 的观察、致病性测定以及丁香假单胞杆菌典型的生 理生化特征和营养利用情况的测定， 确定菌株为 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｔａｂａｃｉ。不同地理来源的 菌株在生化特征和营养利用上略有差异。
区连年发生， 危害严重， 论述了烟草野火病菌的鉴定方法。
关键词： 烟草野火病； 野火病原细菌； 丁香假单胞杆菌
中图分类号： Ｑ９４
文献标识码： Ａ
文章编号： １００８－ ６５８７（ ２００７） ０５－ ０２９－ ０３
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｓｙｒ ｉｎｇａｅ ｐｖ． Ｔａｂａｃｉ
２．３ 生理生化测定 供试菌株能从蔗糖产生果聚糖， 水解明胶， 产
生烟草枯斑反应。过氧化氢酶反应阳性， 氧化酶反 应 、精 氨 酸 双 水 解 酶 、甲 基 红 试 验 阴 性 。 能 利 用 蔗 糖、甘露醇、Ｄ－ 木糖等作为唯一碳源， 不能利用果 糖、乳糖、酒石酸钠等作碳源。不能水解淀粉， 不能 软腐马铃薯。部分菌株的生理生化特性和营养利用 情况见表 １。
Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒ ｏｍ Ｙｕｎｎａｎ
Ｘｕｌｉｎｇ Ｌｉ Ｆｕｙｕａ ｎ
（ Ｂａｏｓｈａｎ Ｔｅａｃｈｅｒ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｂａｏｓｈａｎ ，Ｙｕｎｎａｎ， ６７８０００）
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｔｏｂａｃｃｏ ｗｉｌｄｆｉｒｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｓ ａ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｉｔ ｉｓ ｂｒｏｕｇｈｔ ａｂｏｕｔ ｂｙ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． Ｔａｂａｃｉ． Ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ， ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｍｏｒｅ ｓｅｒｉｏｕｓ ｅｖｅｒｙ ｙｅａｒ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｔｏｂａｃｃｏ ｄｉｓｔｒｉｃｔｓ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ． Ｈｅｒｅ ｒｅｐｏｒｔｓ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． Ｔａｂａｃｉ． Ｋｅｒ ｗｏｒ ｄｓ： ｔｏｂａｃｃｏ ｗｉｌｄｆｉｒｅ ｄｉｓｅａｓｅ； Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｔａｂａｃｉ； Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇｅ
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本刊原副主编王春芳老师诗歌作品获奖
本刊讯（ 记者 王国龙） 近日， 本刊原副主编王春芳老师的诗 歌作品《春游漫兴》荣获 ２００７ 年“华夏情”诗文书画大赛一等奖。下面 是该诗原文。
参考文献： ［１］ Ｌｕｃａｓ Ｇ Ｂ． Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ Ｔｏｂａｃｃｏ （ Ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ） ［Ｍ］． Ｒａｌｅｉｇｈ Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ． Ｕ．Ｓ．Ａ，１９７５： ３９７￣４０５． ［２］ 河南农业大学， 云南农业大学．烟草病理学教程［Ｍ］．北京： 中国科
技出版社， １９９５： １４９￣１５２． ［５］ 刘秋， 吴元华， 于基成．烟 草 野 火 病 的 研 究 进 展［Ｊ］．沈 阳 农 业 大 学
学报．１９９９， ３０（ ３） ： ３５４￣３６０． ［３］ 张世珖． 烟草野火病病原鉴定及品种抗病性的研究［Ｊ］．云南农业
大学学报， １９９０， ５（ ３） ： １８５￣１８７． ［４］ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｊ， Ｍｕｒｗｉｎ Ｈ Ｆ． Ａ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｗｉｌｄｆｉｒｅ ｏｆ ｔｏｂａｃｃｏ［Ｊ］．Ｗｉｓ．Ａｇｒｉ．Ｅｘｐ．Ｓｔａ．Ｂｕｌｌ，１９２５（６２）：３５． ［５］ 任欣正．植物病原细菌的分类和鉴定［Ｍ］．北京： 农业出版社， １９９４． ［６］ 东 秀 珠 ， 蔡 妙 英 ． 常 见 细 菌 系 统 鉴 定 手 册 ［Ｍ］． 北 京 ： 科 学 出 版
表 １ 供试菌株的生化特性和营养利用
试验项目
参试菌株 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３ １４ １５ １６
精氨酸双解酶水解 － － － － － － － － － － － － － － － －
果聚糖产生
＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
革兰氏染色反应 － － － － － － － － － － － － － － － －
供试菌株革兰氏染色反应试验， 呈阴性。菌体 短 杆 状 ， 单 生 ， 两 端 钝 圆 ， 大 小 为 ０．５￣０．９ × １．９￣３μｍ， 鞭毛极生 １￣５ 根。在 ＮＡ 培养基上初呈
透明状， 后为乳白色， 微突起菌落， 边缘透明， 中心 不透明。在 ＫＢ 上黄乳白色隆起菌落， 边缘整齐， 产 生绿色荧光色素。在 ＰＤＡ 培养基上生长良好， 菌落 圆形隆起， 灰白至白色。
参 试 菌 株 １－ １６ 分 别 为 ： Ｌｆｈ，Ｌｂｈ２，Ｌｇａ，Ｌｐ２，ＳＺ， Ｄｘｙ，Ｄｗｑ１，Ｄｆｙ１，Ｄｆｙ３，Ｙｊｃ１，Ｙｊｃ７，Ｙｔｈ１，Ｙｅｈ，Ｙｘｐ，Ｙｃａ， Ｙｃｈ。“＋ ”表示阳性，“－ ”表示阴性。
经过各项生化特征和营养利用情况的测定， 得 到的菌株与参考文献中［５， ６］反应的烟草野火病菌 的性状基本一致， 确定为 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． ｔａｂａｃｉ。
收稿日期： ２００７－ ０６－ １９ 作者简介： 徐玲（ １９７８—） ， 云南陆良人， 保山师范高等专科学校科研处， 助教， 硕士， 研究方向为植物细菌性病害的研究。
·３０·
保山师专学报
第 ２６ 卷
采 用 悬 滴 法 制 样 ， 用 日 本 ＪＥＯＬ 公 司 的 ＪｅＥ－ １２００ＥＸⅡ型透射电镜观察。用结晶紫草酸铵 染色法和 ＫＯＨ 溶解试验测定各菌株的革兰氏染色 反应。 １．５ 生理生化测定及营养利用测定
用
蔗糖
＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
情
Ｄ－ 木糖
＋ ＋ ＋ － ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
况
酒石酸钠
－ － － － －－－－ － － － －－－ － －
第５期
徐玲， 李福元： 烟草野火病病原细菌的鉴定
·３１·
３． 小结
烟草是云南省最主要的经济支柱产业之一。烟 草野火病是烟草上的主要病害之一， 在云南省各大 烟区都普遍存在， 控制不好就可能造成巨大的经济 损失。本研究对云南省防治烟草野火病菌， 减轻烟 草野火病病害具有重要意义
９０ 年代以来， 由于生产上大面积种植感病品 种和品种单一等原因， 该病害成为生产上的一大难 题。本研究提供烟草野火病病原菌的鉴定方法， 为 该病的病害防治提供理论依据。
１． 材料和方法
１．１ 病原菌的分离方法 将病斑剪下， 用 ７０％的乙醇表面消毒 ３０ｓ￣６０ｓ，
灭菌水漂洗 ３￣４ 次， 用剪刀或玻棒捣碎于少量无菌 水中， 放置几分钟 ， 蘸 取 病 组 织 液 在 ＫＢ 平 板 上 划
线培养。分离到的菌株进行 ２￣３ 次纯化， 然后移入 ＫＢ 斜面培养基上备用。 １．２ 病原菌的保存
烟草野火菌主要采用两种保存方式： １） 菌株在 ＫＢ 斜面培养基上培养 ２４ｈ（ ２８℃左 右） ， 冰箱保存（ ４℃） ， 定期（ ２￣３ 周） 转移； ２） 用 ＫＢ 培养液中加入灭菌甘油， 使甘油终 浓度 １５￣２０％， １．５ｍｌ 的冻存管中加液体积为 １．２ｍｌ， 挑单菌落于管中， 置于 － ７０℃冰箱中保存。１￣２ 年转 移一次。 １．３ 致病性测定 将分离、纯化得到的菌株培养 ２４ｈ， 制成 ３× １０８ｃｆｕ／ｍｌ 菌悬液， 用去针头注射法接种在烟草叶 片背面， 保温保湿 ２４ｈ， ７￣１０ｄ 后记载结果。 １．４ 培养性状观察、菌体形态和革兰氏染色反应 各菌株分别 在 ＫＢ、ＮＡ 和 ＰＤＡ 平 板 培 养 基 上 划线接种， ２８℃下培养 ２４ｈ 后观察菌落形态。菌体 在 ＫＢ 斜面上培养 ２４ｈ， 制成 ３×１０８ｃｆｕ／ｍｌ 菌悬液，
２００７ 年 ９ 月 第 ２６ 卷 第 ５ 期
保山师专学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｏｓｈａｎ Ｔｅａｃｈｅｒｓ′Ｃｏｌｌｅｇｅ
Ｓｅｐｔ．， ２００７ Ｖｏｌ．２６ Ｎｏ．５
烟草野火病病原细菌的鉴定
徐 玲 李福元
（ 保山师范高等专科学校 科研处， 云南 保山 ６７８０００）
摘 要： 烟草野火病是一种在烟草上普遍发生的毁灭性细菌病害， 由烟草野火病菌引起， 近年来， 云南省主要产烟
果， 萼片等器官。病叶初期产生褐色水渍状小圆斑， 病斑逐渐扩大， 直径可达 １￣２ｃｍ， 四周有较 宽 的 黄 晕圈。病斑合并后成不规则的大斑， 上有轮纹。天气 潮湿时病部表面有薄层菌脓， 干燥后病斑破裂脱 落， 叶片被毁。
人工接种所致病斑从褪绿小圆点开始， 褪绿点 逐渐扩大， 然后在其中出现褐色枯斑。接种 ７—１０ 天后， 接种点出现中心褐色、周围具很宽黄色褪绿 晕圈的圆斑（ 见图 １） 。 ２．２ 菌落、菌体形态观察和革兰氏染色
氧化酶试验
－ － － － －－－－ － － － －－－ － －
过氧化氢酶反应 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
营 Ｌ－ 精氨酸盐酸盐 － － － － － － － － － － － － － － － －
养
甘露醇
＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
利
果糖
－ － ＋－ －－－－ － － － －－－ － －
各项生理生化试验均采用 Ｌｅｌｌｉｏｔｔ 等和常规方 法进行。在营养利用试验中， 用 Ａｙｅｒ 无机盐培养基 （ ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４１ｇ、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ０．２ｇ、ＫＣｌ０．２ｇ、琼脂 １５ｇ、 水 １０００ｍｌ） 作为基本培养基， 试验按 Ｄｈａｎｖａｎｔａｒｉ 方 法进行。
２． 结果和分析
２．１ 烟草野火病症状和致病性测定 烟草野火病主要危害叶片， 也可危害幼茎， 硕
淀粉水解
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明胶液化
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甲基红试验
－ － － － －－－－ － ຫໍສະໝຸດ Baidu － －－－ － －
烟草枯斑反应
＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋＋ ＋ ＋
马铃薯软腐
－ － － － －－－－ － － － －－－ － －
社， １９９６． ［７］ 方中达．植病研究方法（ 第二版） ［Ｍ］．北京： 中国农业出版社， １９９８． ［８］ 王金生．植物病原细菌学［Ｍ］．北京： 中国农业出版社， ２０００： ２１￣２３． ［９］ Ｓｎｅａｔｈ Ｐ．Ｈ．Ａ， Ｓｔａｌｅｙ Ｊ．Ｔ， Ｂｒｅｎｎｅｒ Ｄ．Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｂｅｒｇｅｙ， ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ（ Ｎｉｎｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ） ［Ｍ］．１９９４： ９４， １５６．