谷胱甘肽的制备
谷胱甘肽的制备及含量测定
• 3.谷胱甘肽的主要来源 • 谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重 要的作用。在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很 高，达100～1000mg/100g,在人体血液中含26～ 34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～ 15mg/100g,在西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12～ 33mg/100g)，而在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较 低(0.06～0.7mg/100g)。
谷胱甘肽的制备及含量测定
一、谷胱甘肽的背景知识
• 1.谷胱甘肽是一种什么 样的物质 谷胱甘肽(glutathiose,rglutamyl cysteingl +glycine,GSH)是一种 含γ-酰胺键和巯基的三 肽，由谷氨酸、半胱 氨酸及甘氨酸组成。 谷胱甘肽：还原型谷胱 甘肽、阿拓莫兰、古 拉定
提取工艺
1、取5g干酵母，与15ml蒸馏水充分混合后倒入25ml沸腾的水中。 2、用5ml水洗涤烧杯一并倒入，使混合液保持在95-100℃，沸腾5min。 放置冰水中速冷。 3、在2000rpm速度下离心10min，取上清液，即谷胱甘肽抽提液。 4、谷胱甘肽抽提液，调pH至3.0。 5、上处理好的732阳离子交换吸附柱吸附。 6、用0.25mol/L的NaOH溶液洗脱，洗脱流速10ml/min。收集洗脱液， 洗脱终点用亚硝基氰化钠检测。 7、中和洗脱液至pH6.5。
•
谷胱甘肽还可以保护血红蛋白不受过氧化氢、自由基 等氧化从而使它持续正常发挥运输氧的能力。还原型谷胱 甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂结合，生成水和氧化型 谷胱甘肽，也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。 • 谷胱甘肽保护酶分子中-SH基，有利于酶活性的发挥， 并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶 重新恢复活性。 • 谷胱甘肽还可以抑制乙醇侵害肝脏所产生的脂肪肝。 • 谷胱甘肽对于放射线、放射性药物所引起的白细胞减 少等症状，有强有力的保护作用。谷胱甘肽能与进入人体 的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合，并促进 其排出体外，起到中和解毒作用 。
谷胱甘肽 (2)
1、简介谷胱甘肽是一种三肽(L - γ- 谷氨酰- L - 半胱氨酰-甘氨酸) 化合物,它广泛分布于动物、植物、谷物和油料种子中,它在细胞中的功能之一就是抵御各种毒素和致癌剂。
有研究表明:谷胱甘肽在小肠中能被完全吸收,并且某些上皮细胞能利用外源谷胱甘肽来去毒,这说明膳食中的谷胱甘肽决定着人体中细胞受损伤的程度。
除作为抗毒剂外,谷胱甘肽还对一些巯基酶有激活作用,可作为保护酶和其他蛋白巯基的抗氧化剂,在生物氧化、氨基酸转运、保护血红蛋白等过程中起一定作用。
另外,谷胱甘肽还具有抑制衰老,预防糖尿病、消除疲劳等作用。
最近研究还发现谷胱甘肽具有抑制艾滋病毒的作用。
因此,研究谷胱甘肽对人类的健康和生活具有重要的意义。
2、谷胱甘肽在自然界的分布谷胱甘肽在自然界中分布很广,主要存在于动物组织和血中,许多植物如蔬菜、豆类、谷物、薯类、菇类等也含有,另外酵母中谷胱甘肽的含量也较高。
2 谷胱甘肽的特性及生理功能211 谷胱甘肽的特性谷胱甘肽分子量为307. 33 ,熔点189～193 ℃(分解) ,晶体是无色透明细长柱状(板状) ,等电点(PI) 为5. 93 ,成品见光易分解,易氧化,谷胱甘肽分子中有一特殊的δ- 肽键,即由谷氨酸的δ- COOH 与半胱氨酸的α- NH2 缩合而成,这样的肽键与蛋白质分子中的一个氨基酸中α- COOH 和另一个氨基酸中α- NH2 失水缩合而成的肽键显然不同。
由于谷胱甘肽中含有一个活泼的巯基极易被氧化,2 分子还原型谷胱甘肽(简称GSH) ,脱氢以二硫键( S S ) 相连便成为氧化型的谷胱甘肽(简称GSSG) ,所以谷胱甘肽可分为氧化型和还原型两大类,在生物体中起重要功能作用的是还原型谷胱甘肽。
2.2 谷胱甘肽的生理功能谷胱甘肽的生理功能主要表现在6 个方面:(1) 维持红细胞膜的完整性。
(2) 对于需要巯基的酶有保护与恢复活性的功能。
(3) 谷胱甘肽是多种酶的辅基与辅酶。
(4) 参与氨基酸的吸收及转运。
谷胱甘肽的制造方法
谷胱甘肽的制造方法
谷胱甘肽（Glutathione）是一种重要的抗氧化剂和细胞内的天然抗氧化物质。
它由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，具有调节免疫功能、解毒和抗衰老等作用。
以下是一种常见的谷胱甘肽的制造方法：
1. 原料准备：准备好谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸作为制备谷胱甘肽的原料。
2. 反应步骤：
a. 将谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸按一定比例混合，得到混合物。
b. 将混合物溶解在适当的溶剂中，例如水或缓冲液中。
c. 调整溶液的酸碱度和温度，通常在pH值为7-9、温度为20-40摄氏度的条件下进行反应。
d. 添加谷胱甘肽合成酶（Glutathione synthetase）作为催化剂，促进反应的进行。
e. 反应一段时间后，通过合适的方法（如离心或过滤）去除杂质，得到纯化的谷胱甘肽溶液。
3. 检测和分离：
a. 对制得的谷胱甘肽溶液进行质量检测，例如使用高效液相色谱（HPLC）或质谱法来确定纯度和结构。
b. 根据需要，可以对谷胱甘肽进行进一步的分离和纯化，例如使用柱层析或其他分离技术。
需要注意的是，谷胱甘肽的制备方法可以根据具体的工艺和要求有所不同，上述方法仅为一种常见的制备方法示例。
在实际应用中，可能
会根据需要进行工艺优化和改进。
此外，由于谷胱甘肽是一种天然产物，也可以通过生物合成的方法来获得，例如利用酵母或大肠杆菌等微生物进行合成。
谷胱甘肽
药品 基本信息 谷胱甘肽 谷胱甘肽：还原型谷胱甘肽、阿拓莫兰、古拉定 CAS号：70-18-8 EINECS200-725-4 [1] 分子式：C10H17N3O6S 分子量：307.32348 熔点：为189～193°C，晶体呈无色透明细长拉状，等电点为 5.93。 药理作用：本品可促进糖、脂肪及蛋白质代谢，加速自由基排泄， 保护肝脏的合成、解毒、灭活激素等功能。
谷胱甘肽不仅能消除人体自由基，还可以提高人体免疫力。谷胱甘肽维护 健康，抗衰老，在老人迟缓化的细胞上所发挥的功效比年轻人大。 谷胱甘肽还可以保护血红蛋白不受过氧化氢氧化、自由基等氧化从而 使它持续正常发挥运输氧的能力。红细胞中部分血红蛋白在过氧化氢等氧 化剂的作用下，其中二价铁氧化为三价铁，使血红蛋白转变为高铁血红蛋 白，从而失去了带氧能力。还原型谷胱甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂 结合，生成水和氧化型谷胱甘肽，也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。 人体红细胞中谷胱甘肽的含量很多，这对保护红细胞膜上蛋白质的巯基处 于还原状态，防止溶血具有重要意义。 谷胱甘肽保护酶分子中-SH基，有利于酶活性的发挥，并且能恢复已被 破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶重新恢复活性。谷胱甘肽还可以抑 制乙醇侵害肝脏所产生的脂肪肝。 谷胱甘肽对于放射线、放射性药物所引起的白细胞减少等症状，有强 有力的保护作用。谷胱甘肽能与进入人体的有毒化合物、重金属离子或致 癌物质等相结合，并促进其排出体外，起到中和解毒作用。
生理作用或功能 谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重要的作用。在面包酵 母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很高，达100～1000mg/100g,在人体血液中 含26～34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～15mg/100g,在西 红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12～33mg/100g)，而在甘薯、绿豆芽、洋葱、 香菇中含量较低(0.06～0.7mg/100g)。 机体新陈代代谢产生的过多自由基会损伤生物膜，侵袭生命大分子，加快 机体衰老，并诱发肿瘤或动脉粥样硬化的产生。谷胱甘肽在人体内的生化防御 体系起重要作用，具有多方面的生理功能。它的主要生理作用是能够清除掉人 体内的自由基，做为体内一种重要的抗氧化剂，保护许多蛋白质和酶等分子中 的巯基。GSH的结构中含有一个活泼的巯基-SH，易被氧化脱氢，这一特异结 构使其成为体内主要的自由基清除剂。例如当细胞内生成少量H2O2时，GSH在 谷胱甘肽过氧化物酶的作用下，把H2O2还原成H2O，其自身被氧化为GSSG， GSSG由存在于肝脏和红细胞中的谷胱甘肽还原酶作用下，接受H还原成GSH， 使体内自由基的清除反应能够持续进行。
酵母发酵生产谷胱甘肽的培养基优化_卞芙蓉
酵母发酵生产谷胱甘肽的培养基优化卞芙蓉,劳兴珍,郑 珩,吴梧桐(中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009) 摘 要:目的应用Plackett -Burman 设计和球面对称设计实验,对酵母发酵生产谷胱甘肽的培养基进行优化。
方法首先通过Plackett -Burman 设计方法从10个因素中选择出对发酵产量影响较大的因素,即葡萄糖、酵母膏和半胱氨酸含量,然后用球面对称设计对这3个因素各取5个水平进行优化。
结果最佳培养基组成为:葡萄糖23.64g /L ,酵母膏29.07g /L ,半胱氨酸1g /L ,(NH 4)2SO 42g /L ,蛋白胨5g /L ,KH 2PO 41g /L ,MgSO 41g /L ,NaCl 2g /L 。
在优化条件下,发酵液中谷胱甘肽积累量可达162.3mg /L ,比优化前产量提高约56.2%。
结论证明用Plackett -Burman 设计和球面对称设计寻求菌体积累谷胱甘肽的最佳培养基组分是可行的。
关键词:谷胱甘肽;Plackett -Burman 设计;球面对称设计 中图分类号:TQ92 文献标识码:A 文章编号:1005-1678(2009)03-0184-03Study on the optimal media of glutathione production of Saccharomyces cerevisiaeBIAN Fu -rong ,L AO Xing -zheng ,ZHE NG Heng ,WU Wu -tong(School of Life Scie nce and Tec hnology ,China Pharmaceutic al University ,Nanjing 210009,China ) Abstract :Purpose To study the optimal media of glutathione pr oduction of Saccharomyces c erevisiae by Plackett -Burman design and spherical symmetric design .Methods Firstly ,the three factors were selected :glu -cose ,yeast extract and L -cysteine which can apparently influence the glutathione production from ten factors by Plackett -Bur man design ,and then three factors were optimized through spherical symmetric design .Results The optimal media suc h as 23.64g /L gluc ose ,29.07g /L yeast extract ,1g /L L -c ysteine ,2g /L (NH 4)2SO 4,5g /L peptone ,1g /L KH 2PO 4,1g /L MgSO 4,and 2g /L NaCl were applied .Under the optimal media ,the yield of glutathione in the fer mentation broth was 162.3mg /L ,which was 56.2%higher than before .C onclusion It is available to find the optimal media for glutathione pr oduction by Plackett -Burman design and spherical symmet -ric design .Key words :glutathione ;Plackett -Burman design ;spherical symmetric design 收稿日期:2008-12-16作者简介:卞芙蓉(1984-),女,江苏盐城人,在读硕士研究生;郑珩,通信作者,副教授,E -mail :z hengh18@hot mail .co m 。
溶剂挥发法制备还原型谷胱甘肽微胶囊
２ ３ ２ 壁芯 比单 因素 实验 ．．
福晨化学试剂厂 ） 明胶 （ ； 天津人民化工厂） 乙醚 ；
（ 津市凯 通化 学试 剂有 限公 司 ） 天 ．
１ ２ 实验 仪器 ．
称取 ５ 份等量的乙基纤维素 ， 每份 ０５ｇ分别 ． ， 向其中加入二氯甲烷 １． Ｌ 按壁芯比 １ ： 、５ ２ ５ｍ ， ０ １ １ ： 、０ １２ ： 、 ： 加人 Ｇ Ｈ提取液 ， １２ ： 、５ １３ １ ０ Ｓ 缓慢加入到
Ｖ１８ 。１ ｏ２ Ｎ． ．
Ｆｂ２１ ｅ・０２
溶 剂 挥 发 法 制 备 还 原 型 谷 胱 甘 肽 微 胶 囊
王 鑫， 徐丽萍 ， 宋 伟
（ 哈尔商业大学 食品工程学院省高校食 品科 学与工程重点实验室 ， 哈尔滨 １０ ７ ） ５０ ６
摘 要 ： 玉米 胚 中还 原 型 谷 胱 甘 肽 为 芯 材 ， 海 藻 酸 钠 为 壁 材 ， 用 溶 剂 挥 发 法对 玉 米 胚 中还 原 型 以 以 采
基金项 目： 黑龙江省教育厅基金项 目（ ２ １ １ １ ． １ ５ １３ ） 作者简介 ： 王 鑫（９ ４一） 女 ， １８ ， 硕士 ， 研究方向 ： 农产 品加工与贮藏
哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 （自 然 科 学 版 ）
第２ ８卷
永大 化学试 剂 有限公 司 ） 二 氯 甲烷 、 ； 甲苯 （ 津 市 天
中图分类号 ：Ｓ６ Ｔ ２２
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ：６ ２— ９６ ２ １ ） １ ０ ４ １７ ０ ４ （０ ２ ０ — ０ ９—０ ５
Ｐｒ ｐａ ａ ｉ ｎ ｏ ｃ ｏ ａ ｕ ｅ ｆｒ ｄｕ ｅ ｌ ｔ ｔ ｉ ｎｅ ｂｙ ｍ ｅ ｈ ｄ ｏ ｏ ｖ ｎ ｅ ｒ ｔｏ ｆ ｍｉ ｒ ｃ ｐｓ ｌ ｓ ｏ ｅ ｃ ｄ ｇ ｕ ａ ｈ ｏ ｔ ｏ ｆｓ ｌ ｅ ｔ
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谷胱甘肽的制备
背景
谷胱甘肽(glutathione，GSH)是由L一谷氨酸、L一半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的一种同时具有1一谷氨酰基和巯基的生物活性三肽化合物⋯，在生物体内具有多种重要的、独特的生理功能，因此又被称为长寿因子和抗衰老因子。
作为一种重要的生理活性物质，GSH在解毒、抗辐射、肿瘤、癌症、氧化衰老和协调内分泌的治疗中效果明显且无副作用，这些同类药物所不具有的优点使得GSH在临床和医药领域有着极为广泛的用途【21。
在食品加T中，GSH具有抗氧化、防止褐变、强化风味和营养等功能，已被作为生物活性添加剂应用于保健食品的生产中。
但GSH在体内循环周期短、易氧化、不能穿过细胞膜，从而限制了其保健和治疗作用的发挥。
据报道，脂质体包埋技术能够有效地提高GSH的保护和治疗作用。
试验步骤
1试验材料
谷胱甘肽(纯度≥98．0％) Amresco公司；乙醇、乙醚、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬酸(均为分析纯)、吐温一80(化学纯)、卵磷脂、胆固醇国药集团化学试剂有限公司；0．05m01·L。
磷酸盐缓冲液(PBS) 自制。
2 实验方法
1．2．1脂质体的分离方法
1．2．1．1凝胶柱过滤法选用Sephadex G一25凝胶柱，取lmL脂质体混悬液进行上样分离，采用一定的洗脱剂洗脱，洗脱速度控制在0．5—1．0mL-min～，进行分部收集，测定游离的谷胱甘肽总量，计算包封率。
1．2．1．2洗脱剂的选择取1mg·mL“的谷胱甘肽溶液1mL上柱分离，分别选用去离子水、NaCI、乙醇、PBS、乙酸和PBS(NaCl)为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度控制在0．5～1．0mL·min～，进行分部收集，。
测定洗脱液中的谷胱甘肽总量，计算回收率。
1．2．2脂质体包封率的测定方法
1．2．2．1 游离GSH的测定方法采用优化的Ellman‟s测定法”1。
1．2．2．2包封率的计算方法将脂质体与游离谷胱甘肽分离，测定游离的谷胱甘肽量，根据下式计算脂质体包埋率：EE(％)=(1一Cf／Ct)×100％。
其中：EE—GSH脂质体包封率；Cf一游离GSH含鼍；Ct一总GSH含量。
1．2．3 pH梯度法制备谷胱甘肽脂质体称取一定量的卵磷脂、胆固醇和叶温一80，溶于乙醚，得到类脂溶液；将类脂溶液置于圆底烧瓶中，在40'(2水浴中旋转蒸发除去乙醚，待类脂物在烧瓶壁上成膜后，加入一定pH的0．3tool·L。
1柠檬酸10mL，继续旋转蒸发水合30min，得空白脂质体溶液；将谷胱甘肽加入空白脂质体溶液中，用0．5mol·L。
1的磷酸氢二钠溶液调节pH，使pH增加3，将上述混合液在冰浴中短时超声(间歇超声，1s／1s)，静置2h，即得脂质体p。
1．2．4脂质体平均粒径和粒度分布吸取少量脂质体悬液，稀释至卵磷脂的含量在0．025％(W／W)，装入预处理过的透明小瓶中。
用丙酮擦拭瓶外部并吹干。
放人激光散射仪中进行检测旧‟。
激光散射测试条4r牛-：温度：25±0．1℃；角度：90。
(即垂直照射)；波长：632．8nm；扫描时间：300s／样
2结果与讨论
2．1 脂质体分离方法的确定
2．1．1 分离方法的选择测定包封率的前提是将未包封的游离GSH与脂质体分开，凝胶
过滤法具有经典、准确、方便、重现性好、耗时短，能将GSH和脂质体充分分开的优点，本实验采用凝胶过滤法来分离脂质体和游离GSH[7】。
2．1．2洗脱剂的选择水溶性物质的洗脱一般采用水或具有不同离子强度和pH的缓冲液。
为了使Sephadex G一25凝胶柱能够有效地分离脂质体和游离的谷胱甘肽，从而准确地测定游离的谷胱甘肽总量，选择了不同的洗脱剂x,-t上样谷胱甘肽进行洗脱，NaCI)为洗脱剂，谷胱甘肽经分离后可以得到较高的回收率，故本实验选用0．05mol·L…1 (0．5mol·L。
1NaCI)作为凝胶柱分离的洗脱剂。