培养基的配置

3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
高氏一号 培养基配方：
可溶性淀粉 20g
NaCl
0.5g
KNO3 1g 1g
K2HPO4·3H2O 0.5g
MgSO4·7H2O 0.5g
FeSO4·7H2O 0.01g
琼脂
15-20g
水
1000ml
pH
7.4-7.6
马铃薯 培养基配方：
马铃薯 蔗糖（或葡萄糖） 琼脂 水 pH
200g 20g 15-20g 1000ml 自然
配法： 马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后纱布过滤 取汁，再加入糖和琼脂，溶化后补足水分。
豆芽汁 培养基配方：
黄豆芽 蔗糖（或葡萄糖） 琼脂 水 pH
100g 50g 15-20g 1000ml 自然
配法： 豆芽加水煮沸半小时，然后过滤取汁，再加入糖 和琼脂，溶化后补足水分。
为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求， 还必须控制培养基合适的pH。
实验原理 (continued)
培养基按成分可分为天然培养基（如麦芽汁培养 基）、合成培养基（如高氏一号培养基、察氏培养基） 和半合成培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯葡 萄糖培养基）。
按物理状态可分为固体培养基、半固体培养基和 液体培养基。常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加 量通常为1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%0.8%。
实验分组安排
L1 ： 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 500ml 斜面20支，余装三角瓶
L2 ： 高氏一号培养基 500ml 斜面20支，余装三角瓶
R1 ： 马铃薯葡萄糖培养基 500ml 斜面20支，余装三角瓶
R2 ： 豆芽汁培养基 500ml 斜面20支，余装三角瓶
牛肉膏蛋白胨 培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
操作步骤
1、称量及溶化 2、调pH 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤） 4、分装、加塞、包扎 5、灭菌 6、摆斜面
称量与溶化：
操作步骤 (continued)
注意：
1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，抹于称量 纸上，勿取过量，不足时，再蘸取少量，逐步添加；然 后将牛肉膏连同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从 称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。
加塞：
操作步骤 (continued)
棉塞 或 硅胶塞
作用：防止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有 良好的通气性能。
操作步骤 (continued)
棉塞制作方法：
操作步骤 (continued)
操作步骤 (continued)
A—配制时纱布塞法 B—灭菌时包牛皮纸 C—培养时纱布翻出
包扎：
1）培养基应具备哪些条件？为什么？ 2）在配制培养基过程中应注意哪些问题？为 什么？ 3）培养基配制好后，为什么要立即灭菌？如 何检查灭菌是否彻底？
操作步骤 (continued)
◇加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛 皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后 也用牛皮纸包扎。
◇以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。
◇用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制 人或实验组。
灭菌：
操作步骤 (continued)
◇ 培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌
◇ 通常灭菌条件为1.05kg/cm2, 121.3℃灭菌20分 钟；含糖量高的培养基，如马丁氏培养基则为 0.56kg/cm2,112.6℃灭菌30分钟。
分装：
操作步骤 (continued)
1）装量： 液体——试管高度的1/4左右 固体——试管高度的1/5 ，灭菌后摆斜面 半固体——一般为试管高度的1/3，灭菌后垂直放置
分装：
2）分装装置：
操作步骤 (continued)
分装：
操作步骤 (continued)
3）注意：
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以 免沾污棉塞而引起污染；若不慎沾在了管口，可用湿纱 布揩净。
2）可溶性淀粉应先用少量冷水调成稀糊状，再加入量杯 的热水中。
操作步骤 (continued)
加琼脂、溶化、定容、（过滤）
琼脂一般应在调好了pH后加入，琼脂的加入不会影响 培养基的pH。 琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则易 出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分则 琼脂过多。 加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减小，应 补充水分至所需量。 可趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察；如 无特殊要求，通常可省略该步。
培养基还可按用途划分，通常分为基本培养基、 富集培养基、选择培养基、鉴别培养基等。
实验原理 (continued)
牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、麦芽 汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁培养基 等都是常用的培养基。
牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；高 氏一号培养基用于培养放线菌；麦芽汁培养基和 豆芽汁培养基通常用于酵母菌的培养；马铃薯葡 萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。
◇ 操作步骤详见下一课件
摆斜面：
操作步骤 (continued)
◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放
◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形 成大量冷凝水
无菌检查：
ຫໍສະໝຸດ Baidu
操作步骤 (continued)
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时，以检查灭菌是否彻底。
实验报告
1、培养基配制的原理、方法、步骤及注意事项。 2、思考题
实验一 培养基的配制
实验目的
1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基 的配制原理。 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握压力蒸汽灭菌方法的原理和方法步骤。
实验原理
培养基(culture medium)是指人工配制的、适合微 生物生长繁殖或产生积累代谢产物的营养基质。
自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之 实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不 同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳 源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养 要素，且各成分比例应合适。