培养基配制和灭菌方法验证
培养基的灭菌实验报告
河北省张家口市《行政能力测试》事业招聘考试《说明：本卷为历年及近期公务员(国考)考试真题》本卷共150题，考试时间90分钟，满分100分一、单选题1. 根据公文内容的性质与作用，公报、公告、通告属于（）。
A、指挥性公文B、知照性公文C、报请性公文D、记录性公文【参考答案】B2. 下列文种中属于通用公文的是（）。
A、通知B、调查报告C、计划D、合同【参考答案】A3. 下列地貌中，因板块碰撞形成的是（）。
A、海岭B、海沟C、裂谷D、大西洋【参考答案】B4. 根据行政处罚法规定，行政机关作出责令下列除（）之外的行政处罚决定之前，应当告知当事人有要求举行听证的权利；当事人要求听证的，行政机关不需要组织听证。
A、停产停业B、吊销许可证或者执照C、较大数额罚款D、行政拘留【参考答案】D5. 社会主义金融市场的基础是（）。
A、资本市场B、证券市场C、外汇市场D、期货市场【参考答案】A6. 该公文的主送机关正确的是（）。
A、党中央B、青海省政府办公厅C、国务院办公厅D、中共中央办公厅【参考答案】C7. 我在接触历史之前，想象大部分领域都已经被人耕耘过了，后来发现并非如此。
即使是被大家炒得很热的任务，你仔细去研究已有的研究成果，和一些相关的史料做对比，就会发现，几乎每个人、每一段历史，都有被历史学家疏忽的地方，有大量的空白存在。
对这段文字的观点概括最准确地的是（）。
A．若你们对历史的认识存在误区B．历史研究依然大有可为C．目前的历史研究成果较为有限D．急需加强历史研究方法的探讨【参考答案】B8. 行政违法的主体是指（）。
A、行政主体B、行政相对方C、行政法律关系D、公务员【参考答案】C9. 国家垄断资本主义发展的基础是（）。
A、国有垄断资本B、资产阶级国家C、私人垄断资本D、资本输出【参考答案】C10. 四川省雅安市芦山县发生7.9 级地震，红十字会立即将500 顶帐篷调往受灾区域。
这500 顶帐篷（）。
A、是商品，因为他是劳动产品B、是商品，因为它是供人们消费的C、不是商品，因为它不具有使用价值和价值D、不是商品，因为它没有用于交换【参考答案】D11. 中共之所以能够明确地提出彻底反帝反封建的民主革命纲领，最主要的原因是（）。
培养基验证
1. 稀释液的制作磷酸盐缓冲稀释液贮存液：磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g蒸馏水 500mL用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2（图1-1、1-2），用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。
稀释液：用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL,分装于合适容器,121℃高压灭菌15min。
1-1 1-22. 培养基制作①计算出所需数量，用电子称、称量纸、药勺来称取。
②放入比所用蒸馏水大的烧瓶中，使之充分混匀于蒸馏水后加热溶解并煮沸。
※备注：即使是同一培养基，各个厂家的配制方法多少有些不同，所以一定要充分参照培养基上的说明。
2.1 倾注培养培养基：加温溶解（高压灭菌）保存使用时溶解倾注●平板计数琼脂等：高压灭菌后保存，使用时加温溶解。
●去氧胆酸盐琼脂培养基：使用时将培养基粉末加温溶解。
※备注：倾注培养时，向培养基分注的步骤参照下述的注意事项①样液稀释以及从接种到培养基混合完毕，最好在15分钟以内完成。
②每个平皿的分注量约15-20ml。
分注后将平皿倾斜和旋转使之充分混合，但要注意不要让培养基从平皿内溢出，且不要粘附在平皿壁和盖上。
③分注时三角烧瓶挂有培养基滴时，下一次分注的培养基可能被烧瓶外壁的细菌污染，所以要用酒精棉擦拭，再将瓶口用火焰灭菌。
2.2 平板培养基：平板培养基是将溶解后的培养基分注15-20ml到无菌平皿里，使之凝固。
●TCBS琼脂培养基、DHL琼脂培养基：加温溶解后，分注、凝固、干燥表面。
为了防止沉淀的发生，加温溶解后要充分混匀（注意不要起泡）。
●EMB琼脂培养基：高压灭菌后，分注、凝固、干燥表面。
●卵黄甘露醇高盐琼脂培养基：将鸡蛋放在95%酒精中浸泡1小时左右，用酒精棉（纱布）擦拭蛋壳表面，打开鸡蛋取出卵黄。
加入经高压灭菌后冷却到55-60℃培养基里（6%卵黄）搅拌摇匀凝固后干燥表面（搅拌时不要起泡）。
若培养基温度过高，卵黄凝固，过低则培养基分注时开始结块，所以操作要迅速。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、引言在微生物学研究中，培养基的制备与灭菌是非常重要的步骤。
培养基是供养微生物生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了消除其中的有害微生物，保证培养基的纯净度。
本实验旨在探讨培养基的制备与灭菌的方法与步骤，以及其对微生物培养的影响。
二、培养基的制备2.1 选择培养基成分培养基的成分根据所需培养的微生物种类和目的而定，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基之前，需要明确所需微生物的营养需求，选择合适的成分。
2.2 配制培养基根据所选的成分和配方，按照一定比例将各种成分溶解在适当的溶剂中，常见的溶剂包括蒸馏水和生理盐水。
注意溶解顺序和温度，保证各种成分充分溶解。
2.3 调节pH值微生物对pH值的要求各不相同，因此在制备培养基时需要调节pH值。
使用酸碱溶液逐滴加入培养基中，同时使用pH试纸或pH计检测pH值，直到达到所需的范围。
2.4 灭菌前的处理在灭菌之前，需要对培养基进行一些处理，包括过滤、加热和冷却等。
过滤可以去除其中的固体杂质和大颗粒微生物。
加热可以杀灭其中的有害微生物，常用的方法包括高温灭菌和压力灭菌。
冷却后的培养基可以用于微生物的培养。
三、灭菌实验3.1 高温灭菌高温灭菌是常用的灭菌方法之一，其原理是利用高温杀灭微生物。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高温灭菌器中。
设置合适的温度和时间，一般为121℃，15-20分钟。
高温灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.2 压力灭菌压力灭菌是一种利用高温和高压杀灭微生物的方法。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入压力灭菌器中。
设置合适的温度和压力，一般为121℃，15-20分钟。
压力灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.3 灭菌效果验证灭菌后的培养基需要进行灭菌效果验证，以确保其中没有活菌存在。
常用的方法包括接种试验和平板计数法。
接种试验是将灭菌后的培养基接种到无菌平板上，观察是否有菌落生长。
培养基配制和灭菌方法验证
4.2.3.硫乙醇酸盐流体培养基的适用性检查
无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。
菌株代数
培养基
培养温度
培养时间（小时）
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉菌
4.2.验证容
4.2.1.执行标准
a.配制容器及配套器具的清洗格按照《玻璃器皿清洗操作规程》执行。
b.培养基的配制格按照《培养基管理规程》执行。
c.自动台式灭菌器格按照《TMQ.R-3870型台式灭菌器使用维护保养操作规程》执行.
a.无菌性检查
每批培养基随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。
b.灵敏度检查
菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于100cfu（菌落形成单位） 的菌悬液。
《中华人民国药典》2010年版二部规定：在实验室中，若采用已验证的配置和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可只进行一次。
本公司采用的培养基均是北京三药科技开发公司生产的市售脱水培养基。为规生测实验人员在配制培养基时标准化、程序化并符合《中华人民国药典》2010年版二部规定，特对培养基的配制程序进行验证。
c.分装 将已调节好PH值的硫乙醇酸盐流体培养基分装至25×250ml试管中，分装的管数为190～200管围，用牛皮纸按40管/捆的式包扎结实。其中一管只装约20ml，以备灭菌后最终pH值测定。
无菌检验方法验证报告
编码：无菌检验方法验证报告药业有限公司1. 概述：无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
本公司的无菌检查只是针对于灭菌注射用水的无菌检查。
灭菌注射用水灭菌工艺采用121℃30min过度杀菌法，按照2005年版《中国药典》的规定，注射剂的无菌检查应采用薄膜过滤法。
制定的《无菌检查法标准操作规程》（SOP-B）应经过验证后，才能批准使用。
2.验证目的：验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。
即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。
3. 验证范围：适用于灭菌注射用水无菌检查法的验证。
4. 验证人员及职责质量部负责该验证方案的起草及组织实施；验证小组负责验证方案的审批；质量部参与验证的实施及监督。
5.文件准备和培训检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。
6.验证条件.无菌检查室空气净化系统已经过验证并合格，仪器安装完成；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。
. 供试品：3批，批号：批号：批号：. 培养基及试剂：.1.试剂试液：氯化钠:临用前配成0.9%浓度的溶液，配制记录见附件1。
冲洗液：0.1%蛋白胨水溶液，配制记录见附件2。
.2.培养基硫乙醇酸盐流体培养基生产厂家：批号：改良马丁培养基生产厂家：批号：营养肉汤培养基生产厂家：批号：改良马丁琼脂培养基生产厂家：批号：蛋白胨生产厂家：批号：培养基配制记录见附件3。
. 验证用菌株：金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】白色念珠菌【CMCC（F）98001】黑曲霉【CMCC（F）98003】购自：各验证用菌种传代记录见附件4。
.无菌检验仪器及相关设备：压力蒸汽灭菌器型号：生产厂家：校验日期：有效期：生化培养箱（细菌培养）型号：生产厂家：校验日期：有效期：生化培养箱（霉菌培养）型号：生产厂家：校验日期：有效期：7.验证内容：7.1. 培养基无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支，培养14天，应无菌生长。
培养基配制和灭菌方法验证
培养基配制和灭菌方法验证一、培养基配制培养基是一种供养菌落生长的基础物质，可以提供细菌所需的营养物质和环境条件。
培养基的配制是非常关键的步骤，如果配制不当会影响到培养菌落的生长和观察结果的准确性。
1.1固体培养基的配制固体培养基是通过在液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）使其凝固，形成固体的培养基。
固体培养基可以用来分离纯菌、观察菌落特征以及保存菌种。
配制固体培养基的主要步骤如下：步骤一：准备配方根据不同的菌种需要，选择适当的培养基配方。
常见的培养基如营养琼脂(NA)、大肠杆菌琼脂(MacConkey)、血琼脂(Blood Agar)等。
步骤二：计量和溶解根据配方，按照适当的比例称量需要的成分，并加入适量的蒸馏水。
然后，将成分加热溶解，直至成分完全溶解。
步骤三：凝固将已溶解的培养基液倒入培养皿或试管中，装入适量的培养基液。
温度下降至约50℃时，可以添加相应的抗生素(如青霉素)等，促进无菌条件的保持。
待培养基液凝固后，即可进行灭菌处理。
1.2液体培养基的配制液体培养基主要用于培养大量的菌落或进行革兰氏染色等实验。
液体培养基的配制步骤与固体培养基配制类似，只是不需要加入凝固剂。
为了确保培养基无菌，常常需要进行灭菌处理。
2.1常见的灭菌方法常见的灭菌方法主要包括以下几种：1)高压灭菌法：利用高温高压的环境，将培养基中的微生物逐一被杀死。
常用的高压灭菌法是使用高压蒸汽灭菌器进行处理。
2)紫外线灭菌法：使用紫外线灭菌器，将细菌暴露在紫外线下，排除细菌生长的可能性。
3)化学灭菌法：使用化学物质，如乙醛、次氯酸钠等，浸泡培养基或在培养基上喷雾，杀灭细菌。
2.2检验培养基灭菌效果的验证方法验证培养基灭菌效果的方法主要有两种：物理指标法和培养法。
1)物理指标法：即通过检测物理指标，如温度、压力等，来验证灭菌效果。
例如，在培养基中放置一个温度计，通过测量温度变化来判断灭菌的有效性。
2)培养法：即将培养基在灭菌前后进行对照培养，观察菌落的生长情况，或通过采样培养基，进行菌种分离和鉴定。
培养基配制和灭菌方法验证
3
天
第4天
第
5
天
第
6
天
第7天
第
8
天
第
9
天
第10天
第
11天
第
12
天
第
13
天
第
14
天
结果
判定
5.3.配制批号：日期： 年 月 日
天数
编号
第
1
天
第2天
第
3
天
第4天
第
5
天
第
6
天
第7天
第
8
天
第
9
天
第10天
第
11天
第
12
天
第
13
天
第
14
天
结果
判定
6.灭菌后培养基灵敏度检查
6.1.菌液计数结果日期： 年 月 日
2.实施时间为：年月日—年月日。
2、各项目验证结论
1.灭菌前后pH值日期： 年 月 日
配制批号
灭菌前pH值
灭菌后pH值
结果判定
2.外观性状
日期
年 月 日
年 月 日
结果判定
配制批号
灭菌后
保存三周后
3.留点温度计温度记录日期： 年 月 日
配制批号
灭菌后温度℃
结果判定
A
B
C
D
E
A
B
C
D
E
A
B
C
D
E
4.指示剂培养结果日期： 年 月 日
1.验证组织与实施
1.1.验证小组成员及职责分工
部门
部门职责
微生物培养基的类型及配制
微生物培养基的类型及配制微生物培养基是供给微生物生长发育所需营养物质的天然或人造的混合培养基质的总称。
它是一类具有特定性质和功能的营养环境，其作用是刺激微生物快速生长繁殖，产生一些代谢产物以及使微生物的遗传特性得以表达。
微生物培养基的种类繁多，根据其来源、成分及用途可分为多种类型。
一、按培养基来源分1、天然培养基：由动物、植物或微生物组织分离而来的培养基。
如分离土壤微生物的培养基中就使用了牛肉膏、蛋白胨等天然物质。
2、合成培养基：根据微生物的代谢规律，用已知的化学物质配制而成的培养基。
3、半合成培养基：在天然物质的基础上，根据微生物的代谢规律，加入或不加一些已知的化学物质配制而成的培养基。
二、按培养基的物理状态分1、固体培养基：在培养基中加入凝固剂琼脂而成为凝固状态的培养基，多用于菌种分离、鉴定、保藏等。
2、液体培养基：不添加琼脂等凝固剂的培养基，一般用于工业生产。
三、按培养目的分1、选择培养基：根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来，如鉴别培养基。
2、鉴别培养基：在培养基中加入某种指示剂或化学药品，用以鉴别不同菌种的分析方法。
鉴别不同种类的微生物，是利用不同微生物间某些化学或生理上的特征进行鉴别。
常用的鉴别培养基有伊红美蓝平板（EMB）、SS琼脂平板等。
四、按用途分1、菌种保存用培养基：这种培养基的成分非常简单，仅仅能维持生命，所以也称为维持培养基。
它可用来保存菌种。
2、菌种扩大用培养基：这种培养基既要满足菌种的营养需求又要满足产量需求，所以也称为扩大培养基。
3、发酵用培养基：发酵用培养基是供菌种发酵用，它既要考虑菌种的营养需求又要考虑菌种对氧气的需求，所以也称为发酵培养基或摇瓶培养基。
发酵用培养基由于加入了比较多的营养物质，往往粘度比较大，在摇瓶的时候不容易混匀。
为了解决这个问题往往需要加入一定量的缓凝剂（例如硅藻土）。
微生物限度方法学验证完整版
微生物限度方法学验证 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】微生物限度检查方法学验证一、检验方法依据微生物计数法（中国药典2015年版四部1105）；控制菌检查法（中国药典2015年版四部1106）；非无菌药品微生物限度标准（中国药典2015年版四部1107）；抑菌效力检查法（中国药典2015年版四部1121）检查。
二、菌种、培养基及稀释液表2培养基表3对照用培养基表4试剂稀释液：（1）缓冲液取L磷酸二氢钾溶液250ml,加L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至1000ml，摇匀，既得。
（2）%无菌氯化钠溶液取氯化钠，加水溶解使成1000ml，过滤，分装、灭菌。
（3）％（ml/ml）聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液取聚山梨酯80 ，用％无菌氯化钠溶液溶解并稀释至1000ml，滤过，分装，灭菌，备用。
（4）靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取盐酸20ml徐徐滴入。
三、菌液的制备1细菌、霉菌、酵母菌接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，培养24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，培养48小时。
上述培养物用%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养7天，加入5ml含％（ml/ml）聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，然后吸出孢子悬液（用带有无菌棉花的能过滤菌丝的无菌毛细吸管）用%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数50～100cfu的孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。
2控制菌接种大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，培养24小时。
用%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10～100cfu 的菌悬液。
培养基配制及适用性检查标准操作规程
目的：建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作流程。
范围：适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。
依据：《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版第四部职责：1.微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。
2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。
内容1 培养基的申购根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。
申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。
2 培养基的验收2.1 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。
验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。
2.2 验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。
3 培养基的贮藏3.1未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。
已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。
3.2灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存待用。
灭菌后培养基储存期为7天。
4 培养基的配制4.1培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。
4.2培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如2011年1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000，配制批号为:000000-110101。
配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）。
（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加“-”加“数字”表示，如000000-110101-01）4.3培养基配制方法4.3.1 使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。
实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别，每个成分物质含量、制造商、批号，pH值，培养基体积/分装体积，灭菌条件（灭菌方式、温度及时间），配制日期、人员等，以便溯源。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基的配制和灭菌是非常重要的实验步骤。
培养基是供养菌落生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了杀灭培养基中可能存在的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
本实验旨在探究不同培养基的配制方法以及灭菌的效果，并提供一种简单可行的实验方案。
一、培养基的配制1. 培养基的种类在微生物学实验中，常用的培养基有固体培养基和液体培养基两种。
固体培养基主要用于菌落计数、分离纯种菌落以及观察微生物生长形态等实验，而液体培养基则适用于大规模培养、生物化学分析等实验。
2. 培养基的配方培养基的配方根据不同微生物的需求而定，常见的培养基配方包括营养物、水和琼脂。
营养物可以是有机物如蛋白胨、肉汤，也可以是无机盐如硝酸钠、磷酸氢二钾等。
水的选择要注意纯净度，最好使用经过蒸馏或纯化的水。
琼脂是一种提供凝胶状基质的物质，常用于制备固体培养基。
3. 培养基的制备步骤（1）称取所需的营养物和琼脂，按照一定比例加入适量的水中。
（2）将容器密封，并在高压蒸汽灭菌器中进行高温高压灭菌，以杀灭培养基中的有害微生物。
（3）取出灭菌后的培养基，待其冷却至适宜生长温度后，即可使用。
二、灭菌实验1. 灭菌的重要性灭菌是为了消除培养基中的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
如果培养基未经灭菌处理，其中可能存在的细菌、真菌等微生物会与待测微生物相互干扰，导致实验结果的偏差。
2. 灭菌方法（1）高温高压灭菌：将培养基密封于容器中，放入高压蒸汽灭菌器中进行高温高压处理。
高温高压可以有效杀灭细菌、真菌等微生物。
（2）化学灭菌：使用化学消毒剂如酒精、过氧化氢等进行灭菌处理。
这种方法适用于一些耐热菌种，但需要注意化学消毒剂的浓度和作用时间，以避免对待测微生物产生不良影响。
3. 灭菌效果的验证为了验证灭菌效果，可以将灭菌后的培养基分别接种于无菌平板上，并进行培养观察。
培养基适用性检查验证方案
培养基适用性验证方案编制：审核：批准：1.验证目的：本次验证的目的是确认无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基应进行培养基的适用性检查，符合灵敏度要求。
2.参照标准2010版中国药典二部附录：XII A无菌检查法和XI G微生物限度检查法。
3.验证项目无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基的适用性检查。
5.前提条件确认5.1所有本次验证实施过程中用到的仪器都已经过计量并且在计量有效期内。
5.2所有参与本次验证的公司人员均进行相关培训6.接受标准6.1.液体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。
6.2.液体培养基指示能力桧查：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。
6.3.固体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。
6.4. 固体培养基指示能力检査：被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
6.5.培养基抑制能力检査：试验菌应不得生长。
6.6.无菌性检查：应不得有菌生长。
6.7.适用性检查：被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且生长的菌落大小、形态特征应一致。
7.验证实施7.1. 试验用仪器和物料所用培养皿、移液管、工器具均应严格按照相关的灭菌程序灭菌；生物安全柜、灭菌器、霉菌培养箱、生化培养箱、水浴锅、电热鼓风干燥箱等。
7.3.验证用菌株7.4.测试菌悬液菌液制备●接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24小时。
分别取上述新鲜培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50~100cful的菌悬液。
●接种生孢梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时。
上述新鲜培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数10~100cfu的菌悬液。
药品微生物检验及方法验证
药品微生物限度检查及方法验证从事药品微生物限度检查工作两年时间，从学做到承担工作到变得有点经验，经历了一个摸索、学习和积累的过程，回过头来做一个总结，把一些零散的经验和体会做一个梳理和归整，以供在此岗位工作的同仁参考。
第一部分：外围工作外围工作主要有器皿清洗、灭菌，培养基、试剂配制及灭菌，无菌室清洁消毒等。
器皿的清洗是每个实验室和每一个实验员必须要做的最起码的工作，工作要求简单，操作方便，把握一个原则：干净。
培养基、试剂配制后一般都要求调PH到7.20，因为高温灭菌之后PH值会下降0.2左右。
固体培养基在灭菌前要先加热煮沸，使琼脂均匀分散。
煮沸时要注意不要溢出容器，以免发生烫伤。
万一不小心溢出，可用一湿抹布盖住容器口，迅速将其从加热源上移开，不要在情急之下徒手去拿或者在容器侧面拿，那样容易被从容器口源源不断溢出的培养基烫伤。
液体物品灭菌后，不能立即打开放气阀放气，因为此时被灭菌物品的温度大于100℃，在压力等于常压时，液体会暴沸，造成液体喷出或容器炸裂，发生事故。
万级洁净度的无菌室应当每周进行一次消毒，消毒剂每月更换一次，防止长期使用同一种消毒剂而使微生物形成耐药性。
消毒范围包括墙壁，地面，天花板以及空气。
表面消毒可以用消毒剂擦拭，尤其注意门框边缘以及出风回风口，不能留有死角；空气消毒宜采用臭氧或者紫外灯。
可以使用专门的臭氧发生器产生臭氧进行消毒，也可以在每一个操作间包括净化台安装适宜功率的紫外灯，一方面紫外线可以对近距离的物体表面进行消毒，另一方面紫外线的作用也可以使空气中的氧气转换成臭氧，从而能够杀死空气中的微生物。
另外在每次做完实验之后，都应当对实验台面以及地面进行消毒处理。
第二部分：检验过程整个无菌室的检验操作过程应当有一个标准的操作规范，严格按照无菌操作的规定进行操作，包括进入无菌室的程序以及人员清洁消毒，都应当遵守标准来进行。
首先，进入无菌室应当严格按照洁净区（室）有关规定进行。
进入之前先进行洗手消毒，在一更换鞋，脱去外衣，进入二更，穿洁净工作服，注意穿戴洁净工作衣帽时必须做到衣服的任何部位不得拖地。
培养基的配制
培养基的配制：实验步骤：在超净台内，安装好滤器。
用去离子水溶解1640培养基，并用磁力搅拌器搅拌2 h，使之充分溶解。
在超净台内过滤。
分装到250 mL的玻璃瓶内。
用封口膜封好，-20℃保存，过滤结束时，还要取少许培养基进行菌培，验证培养基是否是无菌。
胎牛血清的处理：没有灭活的血清中含有补体成分，需要将血清在56℃条件下灭活30 min。
在水浴锅内进行，灭活的过程中，要不停地摇晃，使受热均匀，防止沉淀析出来。
注意：刚取出的冻存血清不要立即放入56℃中，因为突然的温度升高会使装血清的玻璃瓶破裂，应该放在室温逐渐溶解，然后，再进行灭活处理。
生长培养基的配制：90 mL IMDM中加入大约10 mL的胎牛血清（10% 左右），双抗可以不加。
(有资料表明双抗对细胞有一定的毒副作用)Hanks 和D-Hanks液，以及胰酶的配制Hanks液是一种常用的平衡盐溶液，D-hanks 液是不含钙镁的Hanks液。
它们与细胞的生长状况下的pH值和渗透压一致，细胞在Hanks 液中可生存几个小时，Hanks液主要用于清洗细胞。
D-Hanks液主要用于配制胰酶。
配制Hanks液需将CaCl2溶于蒸馏水，再将其它试剂配制成溶液，将两次配制的溶液混合，定容。
胰酶是一种常用的细胞消化液，在原代培养时，用胰酶消化，使细胞从组织块中游离出来。
传代培养时，用胰酶消化贴壁的细胞，并分散成单个细胞。
胰酶分离细胞的能力与不仅与胰酶作用的温度、时间、浓度和pH有关，还与细胞的类型和特性有关。
用于原代培养消化组织块采用的浓度为：0.1% 或 0.125%；用于传代培养采用的胰酶浓度为：0.25%或者0.2%。
胰酶的配制：1）由于胰蛋白酶的作用主要机制是通过螯合钙镁离子，而钙镁离子是保持细胞和细胞之间相互连接所必需的，所以，胰酶的配制用无钙镁的D-Hank液，避免钙镁离子干扰胰酶的活性。
2）胰酶在pH8.0时活性最强，在过滤除菌前，须用NaHCO3干粉调溶液的pH值。
麦康凯液体培养基配制灭菌程序验证方案
麦康凯液体培养基配制灭菌程序验证方案一、目的验证微生物检测室购买的由广东环凯微生物科技有限公司生产的麦康凯液体培养基的配制和灭菌方法，验证该配制灭菌程序适合于检测室麦康凯液体培养基的配制和灭菌，为培养基配制和灭菌提供正确的操作方法，使培养基配制和灭菌标准化、程序化。
二、适用范围麦康凯液体培养基的配制和灭菌三、职责1.技术负责人1.1为验证组长，负责组织编写并审核验证方案及报告。
负责组织方案及报告的执行。
2.检测室负责人2.1负责验证方案的起草和方案的具体实施；负责验证过程的记录。
3.检测员3.1负责验证方案的具体实施；负责验证过程的记录。
4.经理4.1负责批准方案及报告。
四、作业标准1.概述培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。
一般采用商品脱水培养基，临用时按使用说明或相关规定进行称量、配制、调节pH、分装、灭菌等。
应按照生产商提供参数进行培养基的灭菌。
培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、琼脂凝固力或pH 的改变。
因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌,培养基灭菌方法和条件，应通过无菌性试验和促生长能力、抑制能力试验进行验证。
灭菌器中培养基的容积和装载方式也将影响加热的速度。
因此，应根据灭菌培养基的特性，进行全面的灭菌程序验证。
本公司现在检验用培养基的灭菌方法均为湿热灭菌方法。
2.验证实施计划年月至年月3.培训报告审批后，由验证小组组长对报告实施过程中涉及人员进行培训，以保证报告顺利实施，并做好培训记录，培训记录见附件1：《培训情况确认表》。
4.仪器确认4.1确认内容：确认过程所用仪器是否经校验，并有校验合格证且在校验有效期内。
确认所用试剂及菌液是否在有效期内。
4.2标准要求：仪器应已校验，有校验合格证并在校验有效期内。
4.3仪器及试剂的确认记录见附件2：《仪器确认记录》及附件3：《试剂确认记录》5.验证内容5.1取同一批干粉培养基配制三批进行以下验证。
药品微生物限度检查用培养基的配制、灭菌和贮存效期验证的
药品微生物限度检查用培养基的配制、灭菌和贮存效期验证的研究张颖安秀华王建平曹凤兰（天士力制药集团股份有限公司，天津300410）摘要目的：本试验通过对药品微生物限度检查用5种培养基的配制方法、灭菌程序以及配制后贮存条件和贮存效期进行验证，确保每次配制的培养基质量均满足2010年版《中国药典》要求。
方法：3次独立试验中确定了培养基的配制方法、灭菌参数（液体程序，121℃,15min）、贮存条件（洁净度为C级的环境）及贮存时间（45天），并对贮存0天、15天、30天和45天的培养基进行适用性检查(包括促生长能力、抑制能力、指示能力和无菌性)。
结果：培养基在贮存0天、15天、30天和45天后的适用性检查结果均满足2010年版《中国药典》对培养基质量控制的要求。
结论：通过该验证试验，确立了培养基的配制方法、灭菌参数、贮存条件及30天的贮存效期。
关键词：微生物限度检查，培养基适用性检查，配制方法，灭菌参数，贮存效期Study on verification of the preparation, sterilization and the storage life of the media usedin drug microbial enumeration TestsZHANG Ying, AN Xiu-hua, WANG jian-ping, CAO feng-lan(Tasly Pharmaceutical group CO., LTD, Tianjin 300410，China)Abstract Objective: In order to ensure the quality of every batch of prepared media which meet Chinese Pharmacopoeia requirement, the media preparation methods, sterilization procedures and the shelf life of prepared media are validated. Methods: The preparation procedure, sterilization parameters( Liquid procedure, 121℃,15min), storage condition(cleanliness environment for class C) and storage time(45 days) of the culture media for each test is determined, the performance of the media after sterilization stored 0 days, 15 days, 30 days and 45 days were checked(included sterilization, growth promotion indicative and inhibitory properties of the media.)Results: All media prepared in three tests which stored 0 days, 15 days, 30 days and 45 days in the cleanliness environment for class C met Chinese Pharmacopoeia requirement. Conclution:The preparation methods, sterilization procedures and the storage life of the 30 days of prepared media is confirmed through the verification test.Key Words: microbiological examination，applicability inspection of the culture medium, media preparation methods, sterilization parameters , storage life of prepared media培养基是否合格，对微生物的生长、分离、鉴定及检验结果的正确与否起着至关重要的作用，因此，对培养基的质量控制十分必要。
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1.1.验证小组成员及职责分工
部门
部门职责
责任人
工作划分
质量部
方案起草、实施、书写报告
操作实施
质量部
取样、检验、出报告
操作实施
验证
委员会
方案审定、批准、实施、发放验证合格证
方案审核
方案批准
1.2.本验证由质量部负责并由相关人员根据《硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案》所规定的方法与步骤实施。
15分钟
灭菌效果（F0值）
≥12
灭菌后pH值
6.9-7.3
灭菌后外观性状
符合规定
适用性检查
灵敏度检查
符合规定
无菌性检查
符合规定
有效期验证保存三周
外观性状
符合规定
灵敏度检查
符合规定
无菌性检查
符合规定
连续验证3次配制的硫乙醇酸盐流体培养基。
3.验证依据
3.1.SN/T1538.1-2005培养基制定指南
部门
部门职责
责任人
工作划分
质量部
方案起草、实施、书写报告
操作实施
质量部
取样、检验、出报告
操作实施
验证
委员会
方案审定、批准、实施、发放验证合格证
方案审核
方案批准
4、附件及相关表格文件
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告
文件编码：
项目
姓名
签名
日期
起草
审核
审核
批准
生效日期
年份
1、验证概述
培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
培养基接种取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养三天，逐日观察结果。
结果判断空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。
标准浓度
平板1
平板2
平均菌落数
金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26 003]
＜100
铜绿假单胞菌[CMCC(B) 10 104]
生孢梭菌[CMCC(B) 64 941]
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63 501]
6.2.培养基灵敏度检查结果日期：年月日
配制批号
检查项目
第一天
第二天
第三天
结果判定
阴性对照管
3.2.《药品生产验证指南》（2003版）（国家食品药品监督管理局）
3.3.《药品生产质量管理指南》（2010版）
3.4.《中华人民共和国药典》（2010年版二部）
3.5.《中国药品检验标准操作规程》（2010年版）
4.验证方法与内容
4.1.实验准备
4.1.1.器具：电磁炉（最大功率2000W）、大烧杯（2000ml）、不锈钢锅、玻璃棒、25×250ml试管、硅胶塞、细绳、牛皮纸、分析天平、药匙、量筒（100ml、1000ml）等。
配制批号
灭菌后指示剂颜色
结果判定
A
B
C
D
E
A
B
C
D
E
A
B
C
D
E
阳性对照
5.灭菌后培养基无菌性检查
5.1.配制批号：日期：年月日
天数
编号
第
1
天
第2天
第
3
天
第4天
第
5
天
第
6
天
第7天
第
8
天
第
9
天
第10天
第
11天
第
12
天
第
13
天
第
14
天
结果
判定
5.2.配制批号：日期：年月日
天数
编号
第
1
天
第2天
第
3
天
第4天
第
5.组织实施
5.1.验证机构的组成
5.2.公司验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织、审批验证方案和验证报告、发放验证证书。
5.3.硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证工作小组，负责该验证项目的验证方案起草、实施、组织与协调实施，负责验证样品检测，完成各项记录，根据检验和验证结果进行评定、完成验证报告。
5
天
第
6
天
第7天
第
8
天
第
9
天
第10天
第
11天
第
12
天
第
13
天
第
14
天
结果
判定
5.3.配制批号：日期：年月日
天数
编号
第
1
天
第2天
第
3
天
第4天
第
5
天
第
6
天
第7天
第
8
天
第
9
天
2
天
第
13
天
第
14
天
结果
判定
6.灭菌后培养基灵敏度检查
6.1.菌液计数结果日期：年月日
指示菌名称
菌液浓度（cfu/ml）
2、适用范围
本方案适用于本公司硫乙醇酸盐流体培养基的配制和灭菌方法的验证。
3、内容
1.概述
培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。
使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照培养基厂商提供的使用说明配制，如质量/体积、PH、制备条件、灭菌条件和操作步骤等。培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、PH的改变。因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌，培养基灭菌方法和条件，应通过适用性检查试验进行验证。此外，对高压灭菌器的蒸汽循环系统也要加以验证，以保证在一定的装载方式下的正常热分布。温度缓慢上升的高压灭菌器可能导致培养基的过热，过度灭菌可能会破坏绝大多数的细菌和真菌培养基促生长的质量。灭菌器中的培养基的容积和装载方式也将影响加热的速度。因此，应根据灭菌培养基的特性，进行全面的灭菌程序验证。
《中华人民共和国药典》2010年版二部规定：在实验室中，若采用已验证的配置和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可只进行一次。
本公司采用的培养基均是北京三药科技开发公司生产的市售脱水培养基。为规范生测实验人员在配制培养基时标准化、程序化并符合《中华人民共和国药典》2010年版二部规定，特对培养基的配制程序进行验证。
贮存中培养基发生颜色变化、浑浊；固体培养基表面产生裂缝或涟漪等异常现象，不符合使用规定时，应停止使用，重新进行配制和灭菌程序验证。
4.2.3.硫乙醇酸盐流体培养基的适用性检查
无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。
二、年月日—年月日，验证方案讨论、修改、审批和培训。
三、年月日—年月日，验证工作实施。
四、年月日—年月日，根据验证情况与记录，书写验证报告。
五、
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法
验证小组名单
组长：
成员：
1、目的
通过验证验证所采用的硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法，适合于我公司硫乙醇酸盐流体培养基的制备，为质量控制试验提供优质培养基。并培养基配制和灭菌的操作方法，为培养基配制和灭菌人员提供正确的操作方法，使培养基配制和灭菌标准化、程序化。
金黄色葡萄球菌管
铜绿假单胞菌管
生孢梭菌管
枯草芽孢杆菌管
6.3.培养基灵敏度检查结果日期：年月日
配制批号
检查项目
第一天
第二天
第三天
结果判定
阴性对照管
金黄色葡萄球菌管
铜绿假单胞菌管
生孢梭菌管
枯草芽孢杆菌管
6.4.培养基灵敏度检查结果日期：年月日
配制批号
检查项目
第一天
第二天
第三天
结果判定
阴性对照管
金黄色葡萄球菌管
菌株代数
培养基
培养温度
培养时间（小时）
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉菌
4.2.验证内容
4.2.1.执行标准
a.配制容器及配套器具的清洗严格按照《玻璃器皿清洗操作规程》执行。
b.培养基的配制严格按照《培养基管理规程》执行。
c.自动台式灭菌器严格按照《TMQ.R-3870型台式灭菌器使用维护保养操作规程》执行.
名称
生产厂家
型号
校验情况
生化培养箱
电热恒温培养箱
自动台式灭菌器
电子天平
数字酸度计
生物安全柜
超净工作台
4.1.2.设备
4.1.3.培养基及试剂
名称
生产厂家
批号
纯化水
硫乙醇酸盐流体培养基
营养肉汤培养基
营养琼脂培养基
氢氧化钠
稀盐酸
嗜热脂肪芽胞菌（F0﹥12）
4.1.4.验证用菌株来源于贵州省药品检验所
验证菌株
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案
文件编码：
项目
姓名
签名
日期
起草
审核
审核
批准
生效日期
年份
硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法
验证方案目录
1、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证计划
2、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组名单