培养基的配制和灭菌
培养基的配制和灭菌
实验二培养基的配制和灭菌一、实验目的微生物的生长发育都有一定的营养需要，培养基即人工培养微生物、为其生长发育提供所需营养的基质。
培养基配好后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物试验，因此培养基的配制和灭菌是植物病理实验室中最基本的工作，通过本次实验学习植病实验室中常用培养基的配制方法和高压灭菌锅的使用方法。
二、内容、材料和方法(一)培养基的配制培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基三类，从物理性质上又分为液体培养基和固体培养基两类，培养基的种类不同，配制方法也有差异，限于时间，本次实验仅配制马铃薯琼脂培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。
1 马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）这是植病实验室最常用的培养基(简称PSA)，主要用于植物病原真菌的分离和培养，有时也用于植物病原细菌。
成分：马铃薯200克蔗糖 10克琼脂 20克加水至1000毫升方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补足水量，加入琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装，塞好棉塞高压灭菌。
马铃薯蔗糖琼脂培养基略带酸性，培养真菌无需调节pH，培养细菌则调节pH至中性，此培养基留作下次实验分离培养病原真菌用，故不必调节pH。
5人分作一组，1、2组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约10毫升，灭菌后摆成斜面；其余300毫升，分装在3个250—300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善保存，留待下次实验使用。
2 牛肉膏蛋白胨培养基（NA）这种培养基主要用于细菌的分离和培养成分：牛肉浸膏 3克蛋白胨 10克蔗糖 10克酵母浸膏 1克琼脂 20克加水至 1000毫升方法：先将琼脂加热熔化于大部水中，再将其它各成分用少量水化开加入，调节pH至7，趁热用双层纱布过滤，分装，塞棉塞高压灭菌。
牛肉浸膏和酵母浸膏十分粘稠，不易称重，称重时用小烧杯盛装，以玻璃棒沾取，故要先称好杯和棒的重量后，再开始沾取浸膏称重，称后将杯和棒上粘着的浸膏洗净于锅中。
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。
培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。
为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。
在配制母液时应注意防止沉淀产生。
绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。
各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。
通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。
灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。
培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。
培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。
灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。
（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
培养基配置和灭菌的注意事项
培养基配置和灭菌的注意事项一、培养基配置1.选用适当的培养基组成：根据实验的需要选择适当的培养基成分，包括碳源、氮源、矿质盐、维生素等。
根据不同微生物的要求，可以选择不同的培养基，如富集培养基、选择性培养基等。
2.正确计量和混合培养基成分：根据实验需要和比例，精确地称取和混合培养基成分。
注意避免污染和交叉污染，使用干燥器、称重纸和清洁器具等进行操作。
3.正确调节培养基的pH值：根据不同微生物的偏好，调节培养基的pH值。
使用pH计和相应的酸碱溶液进行调节，确保培养基的pH值符合微生物的需求。
4.加热溶解和固化培养基：将培养基成分加入适量的蒸馏水中，加热搅拌溶解，然后分装到培养皿或试管中。
对于固化培养基，需要加入适量的琼脂或琼脂糖，在混合均匀后加热至溶解，然后分装到培养皿或试管中。
二、培养基灭菌1.选择合适的灭菌方法：有常见的三种灭菌方法，包括热处理（如蒸汽灭菌、热风灭菌）、化学灭菌和滤器灭菌。
根据实验需求和培养基的性质选择合适的灭菌方法。
2.准备合适的灭菌器具：根据实验需求和培养基的量，选择合适的灭菌器具，如蒸馏锅、高压灭菌器、紫外线灭菌箱等。
3.正确操作灭菌设备：根据灭菌设备的说明和操作指南，正确操作和调节灭菌设备。
4.合理选择灭菌时间和温度：根据不同培养基的特性和实验需求，合理选择灭菌时间和温度。
通常情况下，蒸汽灭菌的时间为15-30分钟，温度为121摄氏度；热风灭菌的时间为1-2小时，温度为160摄氏度。
5.注意灭菌后的处理：在灭菌后，及时关闭灭菌设备，避免灭菌后的污染。
将培养基冷却后，进行温度验证，然后保存在合适的温度和条件下。
实验一培养基的配制与灭菌
实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。
二、方法步骤1、母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。
配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。
2、植物激素配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。
由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。
NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。
2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。
细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。
赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。
3、培养基配制按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。
用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。
4、培养基灭菌分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.105MPa，灭菌时间与培养基容量的关系如下表所示。
培养基体积与灭菌时间的关系三、结果与分析1、培养基的母液配制情况。
2、培养基配制时的注意事项。
四、提交实验报告附：MS培养基配方。
实验五培养基的配制和灭菌
实验五培养基的配制和灭菌实验五培养基的配制和灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2.学习常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法。
3.熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。
二、实验器材1.药品及试剂马铃薯，葡萄糖，琼脂，牛肉膏，蛋白胨，NaCl，无菌水2.仪器及其它试管、三角瓶、烧杯、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、棉花、旧报纸、麻绳、纱布、培养皿三、实验内容1.实验分组食科0901本 29人/班→7人/组，分4组2.培养基配方配方一：马铃薯培养基200ml→培养酵母菌用马铃薯水煮液 40g、葡萄糖 4 g、琼脂 4g、水 200ml、pH 自然马铃薯去皮装于烧杯中，进行煮沸，用四层纱布过滤于三角瓶中，再加糖和琼脂补水至200ml 121℃灭菌20min配方二：普通营养琼脂培养基150ml→培养大肠杆菌、枯草芽孢杆菌用蛋白胨 10g、牛肉膏 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g分装于10支试管中（试管1/5体积装液量）121℃灭菌20min四、实验方法、步骤（一）试管、锥形瓶及培养皿清洗 1人/组（二）棉塞制做 1人/组（三）培养基制作 1人/组1、马铃薯培养基削皮→切片→称量→装于烧杯中煮沸→纱布过滤于三角瓶→加糖、琼脂融化→补无菌水至200ml2、普通营养琼脂培养基称量→熔化均一→分装（试管1/5体积装液量）（四）加棉塞培养基配制完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。
（五）试管与三角瓶包扎试管5个/扎用橡皮筋捆成一捆，三角瓶在棉塞外包扎旧报纸（学会活结打法），贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。
（六）培养皿包扎 8套/包.组（七）灭菌锅的使用将包扎好的培养皿，装有培养基且包扎好的试管与三角瓶放入高压蒸汽灭菌锅内，121℃,20min高压蒸汽灭菌。
（八）摆斜面灭菌完毕，将试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上，搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。
实验一培养基的配制及灭菌
实验一培养基的配制及灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。
在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。
培养基的配制，一是要求在营养成分上能满足所培养微生物生长发育的需要，二是培养基在使用前不带菌，三是以灭菌后和保存过程中营养成分不发生变化。
培养基的灭菌通常在培养基配制后进行，其目的是杀灭培养基中残存的微生物或活的生物残体，保证培养基在贮存过程中不变质，也防止其他生物对培养的污染。
一、实验目的1．掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。
2．明确培养基的配制原理。
3．掌握配制培养基的一般方法和步骤。
4．了解湿热和干热灭菌的原理，并掌握有关的操作技术。
二、实验原理灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。
消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。
灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性，从而达到灭菌的作用，实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160～170℃），时间长（1～2h）。
但干热灭菌温度不能超过 180℃。
否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。
待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。
实验七 培养基的配制和灭菌
（二）培养基灭菌
培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便 可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证 灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后， 可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用。 在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌 和干热灭菌。一般培养基和水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃 器皿常用干热灭菌。蒸汽灭菌为105-121℃，15-20分钟， 干热灭菌为160-170℃，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿 热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热 穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又 可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。
高压蒸汽灭菌步骤如下： 高压蒸汽灭菌步骤如下：
灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 1. 灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 接通电源， 2. 接通电源，进行加热 排除高压锅内的空气，可将排气阀打开， 3. 排除高压锅内的空气，可将排气阀打开，待排出大气后 关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2 0.5kg/cm2时再 关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再 打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 当压力达1.05kg/cm2 1.05kg/cm2时 此时灭菌器内的温度为121℃ 121℃， 4. 当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为121℃， 维持20min 对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、 20min。 维持20min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等 物时，应适当降低压力，延长时间。 物时，应适当降低压力，延长时间。 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时， 5. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开 排气阀，然后打开灭菌器盖， 排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品
实验一培养基的配制和灭菌
15.不锈钢碗1个
每张实验台上物品：
电炉+石棉网+搪瓷盘1套
共用实验物品：
1.小塑料筐若干； 6.蒸馏水1瓶； 2.电子天平2台； 7.营养肉汤培养基1瓶； 3.称量纸若干； 8.营养琼脂培养基1瓶； 4.药匙2支； 9.高压蒸气灭菌器1台 5.毛刷2把；
四.注意事项：
在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的斜面 的长度不超过试管总长的一半。
用于活化菌种， 或培养菌种的斜面
用于保存菌种 的斜面
三.每组（4人/组）实验物品：
6.橡皮筋3根； 1.150－250ml三角瓶1个 （营养琼脂）做斜面（1 7.报纸或灭菌袋若干； 支/人）、平板（1个/人）。 8.试管架1个； 2.250ml烧杯（营养肉汤） 9.记号笔1支； +表面皿1套，分装试管， 10.酒精灯2个； 1支/人。 11.火柴1盒； 3.玻璃棒1根； 12.小棍（摆斜面用）1 4.试管8支； 根； 5.培养皿4个； 14.250ml量筒1个；
1.营养琼脂分装前必须充分溶解。 2.倒平板前必须冷却至50-60℃左右。 3.分装时要避免培养基粘染管（瓶）口， 引起污染。 4.剩余的营养琼脂培养基倒入垃圾桶，不 能倒入下水道。
1.实验完毕，各小组清洗所用 烧杯，三角瓶，玻璃棒等物品， 按原位置摆放整齐。 2.值日生清理实验台，打扫地 面，实验室整理完毕方可离开。
本次实验报告内容： 记录本实验配制培养基的 名称、数量，并图解说明其 配制过程，指明要点。
动物微生物学实验
实验一 培养基的配制和灭菌
一.实验目的
了解培养基的配制原理和方法，
掌握其配制过程。
掌握高压蒸汽灭菌法的原理及
培养基的配制与灭菌的实验原理
培养基的配制与灭菌的实验原理1. 培养基的配制1.1 配制的基本概念好啦，各位小伙伴，今天我们要聊聊培养基的配制，听上去是不是有点小复杂，但别急，让我们一起来简单搞懂这玩意儿。
培养基呢，就是我们用来培养微生物的“餐桌”，给它们提供一切所需的营养，好让它们在实验室里像“锅里煮的饺子”一样，茁壮成长。
要想培养基配制得恰到好处，就得搞清楚它的成分，这些成分一般包括碳源、氮源、矿物质、维生素等等，基本上就是“食材”的大合集。
我们会根据不同的微生物选择不同的“食谱”，这样才能让它们在我们的“餐桌”上大快朵颐。
比如，细菌特别喜欢在“营养琼脂”这个大餐上打滚，而真菌则偏爱“马铃薯葡萄糖培养基”，就像你喜欢披萨，他喜欢汉堡一样。
1.2 配制步骤说到配制过程，可得细细说说。
这可不是随便往一盆里搅几下就完事儿的事儿。
首先，我们得准备好各种原料，按照规定的比例把它们混合在一起。
像是“调味料”，我们也得精确计算，比如要加多少克的氨基酸，多少克的糖类，精确得就像给蛋糕配方量糖一样。
混合好了之后，还得将它们溶解在水里，搅拌的时候可别急，慢慢搅拌，避免出现“结块”的情况。
然后，接下来就要将混合液加热，通常是用高温高压的方式来杀死液体中的所有微生物，这一步就像是在做“清汤”，得彻底干净。
2. 灭菌的必要性2.1 为什么要灭菌那么，为啥培养基在配制好后还得做一轮灭菌呢？这就好比是咱们在吃饭前，要把手洗干净一样。
灭菌的目的是为了杀死所有可能的细菌、真菌和其他微生物，确保它们不会在咱们的培养基里横行霸道，影响实验结果。
试想一下，如果咱们的培养基里还有其他微生物，那就像是餐桌上多了几个“讨厌的客人”，它们不仅抢走了微生物的“食物”，还可能把“餐厅”弄得一团糟。
灭菌的过程，就是通过高温、高压或化学药品，把所有可能的干扰因素一网打尽，确保微生物的培养环境是“干净整洁”的。
2.2 常用的灭菌方法谈到灭菌，常用的方法有几种。
最常见的就是高压蒸汽灭菌，这种方法就像是给培养基做“深层清洁”，通过高温高压杀死所有微生物。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告实验名称：培养基的配制与灭菌实验
实验目的：了解培养基的配制方法和灭菌技术，掌握实验操作
技能，培养实验室操作能力。
实验原理：
1. 培养基配制
培养基的配制是在一定比例下将各种营养成分混合组成的，包
括碳水化合物、胺基酸、氮源、矿物质等，以提供生长和繁殖细
菌所需的条件。
2. 灭菌
细菌培养需要具备无菌环境，因此必须对培养基进行灭菌处理。
实验中常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌。
实验器材和试剂：
1. 水浴锅
2. 培养瓶和试管
3. 称量硬度高的玻璃容器
4. 试剂：琼脂、提取物、蔗糖、酵母提取物、胆汁、NaCl，
实验步骤：
1. 培养基配制
按照比例将各种营养成分混合，加入含有一定含量的蔗糖和酵母提取物的琼脂，再加入一定量的胆汁和NaCl，配制成固体培养基。
将琼脂和提取物等放入庞大的试管中；配合无水熔点管等研磨出来的溶液进行试管的分离悬胶操作，所得的琼脂可以冷藏保存。
2. 灭菌
将培养基装入培养瓶中，放入水浴锅中加热，使水温达到100℃左右，进行高压蒸汽灭菌。
灭菌后将培养基放置在无菌环境中，
待其温度降至40℃左右，即可使用。
实验结果和分析：
实验结果表明，配制的培养基已可以暂存和使用，经过高温蒸
汽灭菌可以达到无菌效果。
实验结论：
本实验灭菌技术和培养基配制方法是现代微生物学实验检测的
基础，熟练掌握这些操作技能可以提高实验室操作能力，为实验
的顺利开展提供有力保障。
培养基的配制和灭菌-
三.实验步骤—培养基的配制
4．灭菌 ❖ 将上述培养基以0.103Mpa,121℃,20min高压蒸气灭菌. 5. 搁置斜面 ❖ 将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太
多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度 的器具上,搁置 的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 6.到固体平板
❖ 将灭菌培养基降温50℃，到固体平板。
谢谢大家
三.实验步骤—培养基的配制
二．牛肉膏蛋白胨培养基的制备（斜面1支/人、
培养皿1个/人、三角瓶固体200mL/3组）
配方：
❖ 营养肉汤
1.8g
❖ 琼脂
2g
❖ 固体培养基
2%L
三.实验步骤—培养基的配制
1. 斜面的制备
❖ 准确地称取营养肉汤1.8*2 g放入烧杯中。在上述烧杯中 先加入200 ml水，用玻棒搅匀，然后，将称好的琼脂4g 加入，再加热溶化，溶化时需要用玻棒不停搅拌。必要 时补足所损失的水分。将配制的培养基分装入试管内，
灭菌效果。三角瓶与试管口端不要与桶壁接触， 以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞
三.实验步骤—高压蒸汽灭菌
❖ 3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气 槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个 螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
❖ 4. 加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅 内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀， 让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅 内压力升到所需压力时，控制电源，维持压力至 所需时间。本实验用0.1MP，121.5℃，20分钟灭 菌。
每支试管约4ml。（注意：每人1支试管，3个组一起 做）。加塞，包扎后，灭菌。
❖ 注意：在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因 沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧 焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离 子进入培养基中，影响细菌生长。
培养基配制和灭菌方法验证
培养基配制和灭菌方法验证一、培养基配制培养基是一种供养菌落生长的基础物质，可以提供细菌所需的营养物质和环境条件。
培养基的配制是非常关键的步骤，如果配制不当会影响到培养菌落的生长和观察结果的准确性。
1.1固体培养基的配制固体培养基是通过在液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）使其凝固，形成固体的培养基。
固体培养基可以用来分离纯菌、观察菌落特征以及保存菌种。
配制固体培养基的主要步骤如下：步骤一：准备配方根据不同的菌种需要，选择适当的培养基配方。
常见的培养基如营养琼脂(NA)、大肠杆菌琼脂(MacConkey)、血琼脂(Blood Agar)等。
步骤二：计量和溶解根据配方，按照适当的比例称量需要的成分，并加入适量的蒸馏水。
然后，将成分加热溶解，直至成分完全溶解。
步骤三：凝固将已溶解的培养基液倒入培养皿或试管中，装入适量的培养基液。
温度下降至约50℃时，可以添加相应的抗生素(如青霉素)等，促进无菌条件的保持。
待培养基液凝固后，即可进行灭菌处理。
1.2液体培养基的配制液体培养基主要用于培养大量的菌落或进行革兰氏染色等实验。
液体培养基的配制步骤与固体培养基配制类似，只是不需要加入凝固剂。
为了确保培养基无菌，常常需要进行灭菌处理。
2.1常见的灭菌方法常见的灭菌方法主要包括以下几种：1)高压灭菌法：利用高温高压的环境，将培养基中的微生物逐一被杀死。
常用的高压灭菌法是使用高压蒸汽灭菌器进行处理。
2)紫外线灭菌法：使用紫外线灭菌器，将细菌暴露在紫外线下，排除细菌生长的可能性。
3)化学灭菌法：使用化学物质，如乙醛、次氯酸钠等，浸泡培养基或在培养基上喷雾，杀灭细菌。
2.2检验培养基灭菌效果的验证方法验证培养基灭菌效果的方法主要有两种：物理指标法和培养法。
1)物理指标法：即通过检测物理指标，如温度、压力等，来验证灭菌效果。
例如，在培养基中放置一个温度计，通过测量温度变化来判断灭菌的有效性。
2)培养法：即将培养基在灭菌前后进行对照培养，观察菌落的生长情况，或通过采样培养基，进行菌种分离和鉴定。
培养基的配制与灭菌的注意事项
培养基的配制与灭菌的注意事项培养基配制：1.选择合适的成分：根据实验需求选择合适的成分，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、维生素和其他添加剂等。
不同菌株具有不同的营养需求，因此需要根据菌株的特点进行选择。
2.称量成分：准备好所需的成分，并根据实验方案的要求称量合适的量，注意遵循慎重、准确的原则。
称量时要注意卫生和避免污染，避免手直接接触培养基成分。
3.溶解和调节pH：将所需的成分加入适量的去离子水中，用磁力搅拌器充分溶解。
根据菌株的要求，调节培养基的pH值。
常用的调节剂有氢氧化钠（NaOH）和盐酸（HCl）。
4.加入琼脂糖：将配制好的液体培养基加热至沸腾并搅拌，然后加入适量的琼脂糖，再次搅拌直至琼脂糖完全溶解。
5.分装和灭菌：将配制好的培养基分装到培养皿或试管中，然后灭菌。
灭菌的注意事项：1.选择合适的灭菌方法：常见的灭菌方法包括高压灭菌、滤液灭菌和热灭菌等。
选择合适的灭菌方法应基于培养基的成分和需求。
2.准备好实验室器具：在灭菌前，要确保实验室器具和操作台面都是清洁的，并准备好所需的灭菌设备和物品，如高压锅、培养皿、试管和酒精灯等。
3.严格操作：灭菌前要对培养基容器进行必要的清洁，如使用酒精进行消毒。
然后将培养基装入容器中，并用适当的方法进行密封，如用铝箔纸包裹或用锡纸密封。
4.控制温度和时间：根据选择的灭菌方法和设备的要求，设置合适的温度和时间。
灭菌时间一般为15-30分钟，不同的培养基和设备可能有所不同，需要根据实际情况进行调整。
5.检查培养基质量：灭菌后，打开培养基试管或培养皿的盖子，观察培养基是否有异常变化，如出现颜色变化、气泡或异味等。
若有异常，应立即进行处理。
总结：培养基的配制与灭菌是微生物学实验中必不可少的环节。
正确的配制和灭菌可以保证培养基的纯度和质量，从而确保实验结果的可靠性。
在培养基的配制过程中，要选择合适的成分，准确称量，并注意卫生和避免污染。
灭菌时，要选择合适的灭菌方法，并控制温度和时间，同时注意实验室器具的清洁和消毒。
培养基的制备与灭菌
培养基的制备与灭菌实验八培养基的制备与灭菌一、目的要求1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2.掌握培养基的配置方法。
3.掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。
由于微生物种类及代谢类型的多样性．因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。
但一般培养基的配制程序却大致相同．例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。
三、实验材料1.药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。
塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。
棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。
先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。
培养基的配制与灭菌的注意事项
培养基的配制与灭菌的注意事项
培养基是微生物学实验中必不可少的一种实验用品，它是用来培养微生物的营养物质基础。
培养基的配制和灭菌是影响实验结果的重要因素，下面我们来详细了解一下。
一、培养基的配制
1.选择合适的培养基配方
不同的微生物需要不同的营养物质，因此在选择培养基配方时需要根据实验需要选择合适的培养基配方。
2.准确称量
在配制培养基时需要准确称量每种成分，以保证培养基的质量。
3.加热溶解
将配制好的培养基加入适量的蒸馏水中，加热溶解，使其均匀混合。
4.调节pH值
不同的微生物对pH值的要求不同，因此在配制培养基时需要根据实验需要调节pH值。
5.滤过灭菌
配制好的培养基需要进行滤过灭菌，以去除其中的微生物和杂质。
二、灭菌的注意事项
1.选择合适的灭菌方法
常用的灭菌方法有高压灭菌、干热灭菌、紫外线灭菌和滤过灭菌等。
在选择灭菌方法时需要根据实验需要选择合适的灭菌方法。
2.控制灭菌时间和温度
不同的灭菌方法需要不同的时间和温度，因此在灭菌时需要控制好灭菌时间和温度，以保证灭菌效果。
3.注意灭菌器的清洁和维护
灭菌器需要定期清洁和维护，以保证其正常工作和灭菌效果。
4.注意灭菌后的保存
灭菌后的培养基需要保存在干燥、阴凉、避光的地方，以保证其质量。
培养基的配制和灭菌是微生物学实验中非常重要的环节，需要严格按照操作规程进行操作，以保证实验结果的准确性和可靠性。
培养基的配制与灭菌技术
一、培养基的配制与灭菌技术培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工的方法配制而成的用于培养微生物的营养基质。
培养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。
就培养基中营养物质的来源可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
按培养基特殊用途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。
按培养基制成后的物理状态可分为固体培养基，液体培养基和半固体培养基。
固体培养基是在液体培养基中加入1.5 %-2.0 %琼脂作凝固剂; 半固体培养基则加入0.5 %-0.8 %的琼脂。
一般培养基除含有大量水分外, 还含有碳素、氮素、无机盐类和维生素等。
此外, 由于徽生物生长繁殖必须在最适的酸碱度范围内, 才能表现出最大的生命活力, 因此应根据不同种类的徽生物. 将培养基调节到一定的pH值范围。
培养基配制后还必须进行灭菌, 灭菌是指杀死或消灭所有微生物, 包括营养体、孢子和芽孢。
灭菌的方法很多，可分为物理方法与化学方法两大类。
物理方法包括湿热灭菌、干热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等; 化学方法主要是利用化学药品对接种室空间、用具和其它物体表面进行灭菌与消毒。
消毒一般是指消灭有害微生物的营养体和病原菌。
(一) 培养基的配制方法一般培养基的配制方法如下 (各种天然培养基的配制方法略有不同)：l. 按照配方的组分及用量先分别称量并配成液体；2. 根据要求调到一定的酸碱度(pH值)；3. 若要制成固体则加入2%琼脂并加热融化；4. 根据需要的数量分装入试管或三角瓶中, 加上棉塞或盖上纱布；5. 包扎好灭菌后备用。
配制斜面培养基的一般操作步骤为：称量→ 溶解→ 调pH值→ 加琼脂→ 过滤→ 分装→ 加棉塞→ 包扎→ 灭菌→ 摆斜面→ 无菌检查。
(图9-7)(二) 培养基及常用器皿的灭菌培养微生物常用的玻璃器具主要有试管、三角瓶、培养皿、吸管等, 在使用前必须先进行灭菌, 使容器中不含任何杂菌；培养微生物用的营养基质(培养基), 在接入纯种前也必须先行灭菌, 使培养基呈无菌状态。
培养基的配制和灭菌实验报告（共8篇）
培养基的配制和灭菌实验报告(共8篇) 培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min 可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
培养基的配制和灭菌
姓名
摘要：培养基是人工配制的供给细菌或其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
培养基须经灭菌后方可使用。
培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。
此次实验我们配制LB（Luria Broth）培养基和麦康凯（MacConkey）培养基并进行高压蒸汽灭菌，目的是掌握LB培养基和麦康凯培养基的配制方法，了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围，并且熟悉培养基的灭菌方法。
通过此次实验，我们成功地进行了LB培养基和麦康凯培养基的配制，熟悉了培养基的灭菌方法，达到了预期目的。
关键词：LB培养基麦康凯培养基高压蒸汽灭菌
培养基是人工配制的供给细菌或其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
培养基必须具备下列条件：碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子、水分和合适的pH。
培养基种类较多，按其营养物来源不同，可分为天然培养基和合成培养基；按其物理状态分为液体、固体、半固体三种类型。
在一定的条件下，培养繁殖得到的微生物群体叫做培养物。
培养物分为纯培养物和混合培养物。
只有一种微生物的培养物叫做纯培养物，含有多种微生物的培养物叫做混合培养物。
通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果，自然环境中极少存在纯培养物，纯培养物通常是由人工方法获得的。
获得纯培养的关键一是所有的相关物品必须无菌，二是分离出单个的微生物细胞并将其培养成一个群体。
因此，无菌技术是保证微生物学研究正常进行的关键。
在分离、转接和培养纯培养时，防止其被其他微生物污染的技术称为无菌技术。
无菌技术包括灭菌和无菌操作。
灭菌是杀死包括芽孢在内的所有微生物。
灭菌的目的是让用于分离、培养微生物的器具和基质事先不含任何微生物。
微生物培养的常用器具（例如试管、三角瓶、培养皿等）和培养基都需要灭菌。
无菌操作要在火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行，并且接种工具（接种环、接种针等）需要灼烧灭菌。
培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。
待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
高温使蛋白质、核酸等重要生物大分子发生变性、破坏，以及破坏细胞膜上的类脂成分，导致微生物死亡。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。
1.材料和方法
1.1材料和试剂
实验试剂：蛋白胨、酵母粉、NaCl、NaOH、琼脂、麦康凯培养基、去离子水
实验器材：2个300mL三角瓶、2个100mL三角瓶、1个500mL三角瓶、量筒、电子天平、称量纸、称量匙、500mL烧杯或搪瓷缸、试管、pH试纸、电炉、高压蒸汽灭菌锅
1.2方法
1.2.1 LB培养基的配制方法
①清洗三角瓶。
需要清洗2个300mL三角瓶和2个100mL三角瓶。
三角瓶用自来水洗净，
然后蒸馏水冲洗2遍，最后沥干。
②根据LB培养基的配方配制400mL LB液体培养基。
LB液体培养基的配方：1%蛋白胨，0.5%
酵母粉，1%NaCl，用NaOH调pH至7.2。
按下列步骤进行配制：
（1）量筒量取200mL蒸馏水于500ml烧杯或搪瓷缸中，电炉微微加热。
（2）称量4g蛋白胨，2g酵母粉，4g NaCl。
将培养基组分倒入500mL烧杯或搪瓷缸中，并逐一搅拌溶解。
（3）补加剩余蒸馏水，定容至400mL。
（4）用NaOH调节pH值至7.2。
③将400mL LB液体培养基分装。
取2个300mL三角瓶，每个三角瓶加150mL LB液体培养
基，再加1.5%（即2.25g）琼脂。
剩下的LB液体培养基分装到2个100mL三角瓶，每个三角瓶有40～50mL LB液体培养基。
④2个300mL三角瓶和2个300mL三角瓶加塞。
⑤2个300mL三角瓶和2个300mL三角瓶包扎。
⑥标记后灭菌：配制好的培养基及时灭菌，否则低温保存。
灭菌方法：高压蒸汽灭菌。
参
数：121℃，20～30min。
⑦摆斜面。
试管固体一般摆斜面（长度小于试管管长的一半）。
其他根据需要处理。
⑧无菌检查。
1.2.2 麦康凯培养基的配制方法
①清洗三角瓶。
需要清洗1个500mL三角瓶。
三角瓶用自来水洗净，然后蒸馏水冲洗2
遍，最后沥干。
②配制200mL LB麦康凯培养基。
按下列步骤进行配制：
（1）量筒量取200mL蒸馏水于500mL三角瓶。
（2）称量10.4g麦康凯培养基倒入三角瓶中，搅拌溶解。
③500mL三角瓶加塞。
④500mL三角瓶包扎。
⑤标记后灭菌：压蒸汽灭菌。
参数：115℃，30min。
1.2.3 高压蒸汽灭菌操作步骤
①首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。
②放回内层锅，并装入待灭菌物品。
③加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。
再以两两对称的方式同时旋紧相对
的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
④通电加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。
待冷空气完全排尽后，
关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。
当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
⑤灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，
打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
⑥将取出的灭菌培养基放入37℃恒温箱培养24h，经检查若无杂菌生长，即可待用。
2.实验结果
本次实验我们成功配制了LB培养基和麦康凯培养基，并将两种培养基进行高压蒸汽灭菌。
本次所用的高压蒸汽灭菌锅如图一所示。
高压蒸汽灭菌后的150mL LB培养基如图二所示。
3. 讨论
①
试管和三角瓶的棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染，二是保证通气良好。
制作棉塞的过程中要注意棉塞的形状、大小和松紧程度。
②
称量培养基组分的时候需要使用电子天平，要注意电子天平的使用方法，称量的时候要在电子天平上放称量纸，用完及时关闭电子天平的电源。
③ 配制好的培养基及时灭菌，否则低温保存。
④ 灭菌锅使用前切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。
⑤ 灭菌锅装入待灭菌物品的时候注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
⑥ 灭菌的主要因素是温度而不是压力。
因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，
维持所需压力。
⑦ 灭菌锅内的压力一定要降到“0”时，才能打开排气阀，开盖取物。
否则就会因锅内压
力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼烧操操作者。
⑧ 500mL 烧杯或搪瓷缸使用完毕后要及时将里面的培养基清洗干净，以防微生物在残留培
养基上的生长繁殖。
参考文献
［1］ 沈萍，范秀容，李广武.微生物学实验.高等教育出版社.1999年6月.
［2］ 周长林.生物学实验与指导.中国医药科技出版社.2004年1月.
［3］ 徐威.微生物学实验（第二版）.中国医药科技出版社.2014年8月.
［4］ 汪天虹.分子生物学实验.北京大学出版社.2009年4月. 图二 高压蒸汽灭菌后的150mL LB 培养基 图一 手提式高压蒸汽灭菌锅。