实验一 MS培养基的配制和灭菌
实验一 培养基的配制与灭菌
铁盐
有机物质 2,4-D
200倍液
100倍液 1.0 mg/ml
5 ml
10ml 1ml
——
5 ml
10ml ——
5 ml
10ml 1ml
NAA
KT 蔗糖
1.0 mg/ml
1.0 mg/ml 30 g
0.2ml
1.0ml 30 g
——
—— 30 g
0.1ml 30 g
琼脂
pH值
8g
5.8
8g
5.8
8g
五、作业要求：完成实验报告，回答下面的思考题 1、根据以下所给母液浓度、蔗糖和琼脂量，配制烟草愈伤组织诱 导和培养的培养基（MS1），按MS配方（Murashige and Skoog, 1962）计算各种母液吸取量或药品的直接称量量。 2、简述高压蒸气灭菌的步骤；培养基采用高压蒸气灭菌应注意哪 些事项？
药品名称
母液倍或母 液浓度 （mg/ml）
配制1 L培养基 配制0.25 L培养基所需母液量(ml) 所需母液量(ml) 或质量（g） 或直接称量量（g） MS 1 MS 2 MS 3
大量元素 微量元素 铁盐 有机物质 2,4-D NAA KT 蔗糖 琼脂 pH值
10倍液 100倍液 200倍液 100倍液 1.0 mg/ml 1.0 mg/ml 1.0 mg/ml 30 g 8g 5.8
5.8
——
5.8
1）在烧杯内放入一定量的蒸馏水，用量筒或移液枪按上述表 格内配方加入各种母液及激素。 2）加入蔗糖30g，待蔗糖溶解后（可搅拌）加水定容至1L。 3）调节PH值，用酸度计测量PH值至5.8，常用1mol/l的HCl或 NaOH调整。 4）在MS1和MS2中加入琼脂8g，加热溶解，溶解过程中不断 搅拌，加热时烧杯口上盖上锡箔纸，防止水分过度蒸发。 5）分装：将配好的培养基及时分装到小三角瓶中，防止凝固 ，每瓶约30ml-40ml（约覆盖瓶底），分装时不要沾壁口。 6）封口：用封口膜将将三角瓶封口。
实验一MS培养基的配制
实验一MS培养基的配制一、实验目的：了解MS培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验材料与仪器：电子天平、量筒、烧杯、玻璃棒、组培瓶、移液器、6种母液、白沙糖、琼脂、氢氧化钠、盐酸、酸度计或pH试纸。
三、实验方法与步骤1、母液配制（1）大量元素(母液Ⅰ) (2) 微量元素(母液Ⅱ) (3) 铁盐(母液Ⅲ) (4) 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 和ⅣB (5) 植物生长调节物质(6－BA，NAA)以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液。
2、1 L固体MS培养基配制（1）用电子天平称出8 g琼脂粉和 30 g蔗糖放在烧杯中，加入少量的蒸馏水在微波炉中加热使之溶解。
（2）用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 ml，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB 各10ml。
（3）最后用蒸馏水定容到1 L；用 2 mol/L NaOH 或 2 mol/LHCL 溶液调节培养基的 pH 值至 5.8～6.0。
（4）用量筒量取100ml液体培养基分装在组培瓶里，再用移液器取适量的6－BA和NAA放入组培瓶里。
（5）在 1.1kg/cm2 压力（约 121℃）高压灭菌锅中灭菌 15～20 min；灭菌后，放置于室温自然冷却凝固待用。
3、实验分组本实验分五组，每组负责配制一组培养基组合：（1）MS+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA（2）MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA（3）MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA（4）MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA（5）MS+3mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA4、其他需要灭菌的实验材料剪刀、镊子、蒸馏水、滤纸、培养皿、组培瓶。
四、分析1.MS母液分得更加细，一般实验室只分大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四大类。
这里将大量元素中钙离子与硫酸根离子分开配，避免产生不溶物，将硼酸也单独列出来。
实验一培养基的配制与灭菌
实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。
二、方法步骤1、母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。
配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。
2、植物激素配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。
由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。
NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。
2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。
细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。
赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。
3、培养基配制按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。
用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。
4、培养基灭菌分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.105MPa，灭菌时间与培养基容量的关系如下表所示。
培养基体积与灭菌时间的关系三、结果与分析1、培养基的母液配制情况。
2、培养基配制时的注意事项。
四、提交实验报告附：MS培养基配方。
组织培养实验MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制
其他常用试剂的保存
配制好的其他试剂应保存在密封的玻璃瓶中 ，并放置在阴凉干燥处。避免阳光直射和高 温环境，以防变质。对于一些易挥发或易氧 化的试剂，应特别注意密封保存和使用。
04
实验操作流程与注意事项
03
04
配制好的培养基应尽快使用，避 免长时间存放。
实验安全须知
避免直接接触培养基和化学试剂，如不慎接 触，应立即用大量清水冲洗。
对于有毒有害的化学试剂，应遵循相关规定 进行操作和处理，不得随意倾倒或排放。
在实验过程中，应注意防范火灾、爆炸等安 全事故，遵循实验室安全规定。
05
实验结果与数据分析
03
常用试剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制
根据实验需求，将植物生长调节剂溶解于相应的溶剂中，如 水、乙醇等。按照所需的浓度进行配制，并充分摇匀。
植物生长调节剂的保存
配制好的植物生长调节剂应保存在低温、避光、干燥的环境 中，避免长时间暴露在空气中，以防氧化失效。
无机盐与微量元素的配制与保存
实验过程中严格控制了操作步 骤和试剂质量，确保了实验结 果的准确性和可靠性。
实验结果符合预期，证明了实 验方案的有效性和可行性。
实验中存在的问题与改进建议
实验中存在试剂配制误差和操 作不规范的问题，可能导致实
验结果的不准确。
建议加强实验操作规范性培 训，提高实验人员的操作水 平，确保试剂配制的准确性
熟悉实验操作流程与注意事项
实验操作流程
准备所需试剂和器材→按照配方配制 母液和常用试剂→过滤除菌→分装→ 储存。
MS培养基的配制
MS 培养基的配制1、配制几种母液（1）配制MS 大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。
倍。
分别称取分别称取名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 NH 4NO 3 165g 82.5 KH 2PO4 17g 8.5 KNO 3 190g 95 CaCl 2·2H 2O 44g 22 MgSO 4·7H 2O37g18.5各自配成1L 1L（（500ml 500ml）的母液。
各自倒入）的母液。
各自倒入1L 1L（（500ml 500ml）试剂瓶中，存放于冰箱中。
）试剂瓶中，存放于冰箱中。
）试剂瓶中，存放于冰箱中。
（2）配制MS 微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
倍母液。
依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 KI 0.083g Na 2MoO 4·2H 2O 0.025gH 3BO 3 0.62g CuSO 4·5H 2O 0.0025g MnSO 4·H 2O 1.69g CoCl 2·6H 2O 0.0025g ZnSO 4·7H 2O0.86g配成配成1L 母液，倒入1L 试剂瓶中，存放于冰箱中。
试剂瓶中，存放于冰箱中。
注：注：CuSO CuSO 4·5H 2O 和CoCl 2·6H 2O O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。
可先配成调整液。
分别称取CuSO 4·5H 2O 0.05g O 0.05g，，CoCl 2·6H2O ·6H2O 0.05g 0.05g各自配成100ml 的调整液，然后取5ml 就还有0.0025g 的量。
的量。
（3）配制MS 有机母液一般配制成100倍MS 有机母液。
配制ms培养基实验报告
配制ms培养基实验报告配制MS培养基实验报告引言：培养基是生物学实验中必不可少的一种工具，它提供了细胞生长所需的营养物质和环境条件。
在植物细胞培养中，MS培养基是最常用的一种基础培养基，它由Murashige和Skoog于1962年首次提出，并被广泛应用于植物组织培养和植物生理研究中。
本实验旨在通过配制MS培养基，深入了解其成分及配制方法。
一、材料与方法：1. 材料：- 水溶性盐类：硝酸钙、硝酸钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硼酸、锰酸钾、锌硫酸、硫酸铜、钼酸铵- 无机盐类：硝酸铵、磷酸二氢钾、硝酸钠、硫酸钾、硫酸铵- 有机物：肌酸、葡萄糖、维生素B5、天门冬氨酸、吲哚乙酸- 植物激素：植物生长素、植物生长素酸、植物生长素酯、植物生长素酸钠- pH调节剂：氢氧化钠、盐酸- 琼脂：用于凝固培养基2. 方法：1) 将硝酸钙、硝酸钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硼酸、锰酸钾、锌硫酸、硫酸铜、钼酸铵分别称取适量，溶解于蒸馏水中，得到无机盐溶液A。
2) 将硝酸铵、磷酸二氢钾、硝酸钠、硫酸钾、硫酸铵分别称取适量，溶解于蒸馏水中，得到无机盐溶液B。
3) 将肌酸、葡萄糖、维生素B5、天门冬氨酸、吲哚乙酸分别称取适量，溶解于蒸馏水中，得到有机物溶液。
4) 将植物生长素、植物生长素酸、植物生长素酯、植物生长素酸钠分别称取适量，溶解于蒸馏水中，得到植物激素溶液。
5) 将无机盐溶液A、无机盐溶液B、有机物溶液、植物激素溶液按一定比例混合，加入适量的琼脂，调节pH值至适宜范围。
6) 高压灭菌培养基，使其达到无菌状态。
二、结果与讨论：通过以上步骤，我们成功配制出了MS培养基。
MS培养基的配方中包含了多种无机盐类、有机物和植物激素，这些成分为细胞生长提供了必要的营养物质和信号物质，保证了细胞的正常生长和分化。
其中，无机盐类的添加对于细胞的生长起到了重要的作用。
硝酸钙、硝酸钾等提供了细胞所需的氮源和钾源，硫酸镁和硫酸亚铁则提供了细胞所需的镁和铁等微量元素。
MS培养基的配制与灭菌
植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg／L
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2，4D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。
配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(01 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为01 mg/mL的母液。
MS培养基的配置
MS培养基的配置一、母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（50X）称10升量溶解在200 ml蒸馏水中。
配1升培养基取20 ml。
注：CaCl2·2H2O单独配置2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
注：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0．25 mg的量。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
注：配制时，两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。
混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。
4、MS有机物母液（200X）称10升量溶解在50ml蒸馏水中。
配1升培养基母液5ml。
二、MS固体培养基的配制1、将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出，按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已失效的母液。
2、取少量的蒸馏水（约为配制培养基量的2/3）加入烧杯中。
注意：配500ml培养基用1000ml烧杯。
3、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。
每1000ml培养基，需要：MS大量元素母液 20mlMS微量元素母液 10mlMS铁盐母液 10mlMS有机物母液 5ml4、通过计算，用微量移液器取所需的各种生长调节剂母液。
5、加入蔗糖（30g/L），溶解。
6、定容：用容量瓶。
7、调pH值：用0.1 N 和0.5N 的NaOH，一般pH=5.8。
注意：①经高温高压灭菌后，培养基的pH值会下降0.2—0.8，故调整后的pH值应高于目标pH值0.5个单位。
MS培养基的配制,灭菌等注意事项
一、MS培养基母液注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
实验一 MS培养基配制和灭菌
实验一MS培养基配制和灭菌一．目的和要求：1. 学会MS培养基的制作方法;2. 掌握高压灭菌的方法和基本操作。
二、仪器与试剂1. 仪器：灭菌锅、解剖刀、枪状镊子、烧杯（500ml）、培养皿、移液管等2. 试剂：MS的Macro-e、Micro-e、有机母液、Fe盐、肌醇蔗糖，琼脂粉，1N NaoH 和 1N HCl三、方法步骤（一）配方设计: 以MS为基本培养基（mg/L）（二）配制培养基(1)溶化琼脂：量取300ml左右蒸馏水，加入4.8g琼脂粉，加热溶解直至完全融化。
(2) 各种母液的吸取：Macro-e 50mlMicro-e 1ml有机成分 1mlFe盐 5ml肌醇 10ml加在一起，倒入烧杯（1L)（3）加入糖:称取 30g 蔗糖，溶于溶有琼脂的 300ml 蒸馏水中。
（4）根据实验设计，量取生长调节剂:加在一起，倒入烧杯。
（5）定容:加蒸馏水（用量杯）。
（6）调节pH至5.8，用pH试纸进行测定，用1molHcl或1Mol NaoH调节。
（7）分装:30～40 ml/瓶6，培养基勿碰三角瓶口。
（8）用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。
（三）灭菌：用高压蒸汽消毒器灭菌，其压力为0.12～0.15MPa,温度为120～126℃，保持15~20 min。
具体操作步骤：1. 加水；2. 把包扎好的培养基装入高压锅；3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀；4. 加热；5. 排除冷空气；6. 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到1Kg位置时，开始计算灭菌时间，一般在1Kg 压力(121℃)下灭菌15~20 分钟即可，但要注意保持稳定压力。
7. 灭菌时间达到20 分钟后，停止加热，待压力自动降到0磅时，打开放气阀，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。
四.作业1. 总结配制培养基的注意事项。
ms培养基的制备实验报告
ms培养基的制备实验报告
实验目的：
本实验旨在制备ms培养基，为细胞培养提供适宜的营养环境。
实验原理：
ms培养基是一种适用于植物细胞培养的基础培养基，其主要成分包括无机盐、糖类、维生素和植物激素等。
本实验制备ms培养基的主要步骤包括配制无机盐溶液、配制糖类溶液和调配维生素、植物激素溶液等。
实验步骤：
1. 配制无机盐溶液：按照ms培养基的配方，称取所需的无机盐粉末，加入适量的去离子水中，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。
2. 配制糖类溶液：按照ms培养基的配方，称取所需的糖类粉末，加入适量的去离子水中，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。
3. 调配维生素、植物激素溶液：按照ms培养基的配方，称取所需的维生素和植物激素粉末，加入适量的去离子水中，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。
4. 将无机盐溶液、糖类溶液和维生素、植物激素溶液按照一定比例混合，得到ms培养基溶液。
5. 调节溶液的pH值：使用pH计测定ms培养基溶液的pH值，并根据需要调节pH值至适宜范围。
6. 将培养基溶液过滤：使用0.22μm的滤膜将ms培养基溶液过滤，以去除其中可能存在的微生物和杂质。
实验结果：
经过上述制备步骤，我们成功制备了一定量的ms培养基溶液。
经过pH调节和滤膜过滤处理，该溶液清澈透明，无菌。
经过质量检测，该溶液满足细胞培养的要求，可以用于细胞培养实验。
结论：
本实验通过一系列制备步骤，成功制备出适用于植物细胞培养的ms 培养基溶液。
该溶液满足细胞培养的营养需求，可以用于后续细胞培养实验。
MS固体培养基的配制
MS固体培养基的配制一、实验目的通过实验实训，掌握MS固体培养基的配制技术及操作技能。
二、材料与用具配制MS培养基的各种母液、生长调节物质母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、移液管、量筒、电饭煲、全自动高压灭菌器、pH试纸、0.1mol/L 的NaOH、0.1mol/L的HCl、培养瓶、标签、铅笔等。
三、方法与步骤（一）按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量（150-200ml）纯净水的量筒中。
母液一 30ml/L母液二 15ml/L母液三15ml/L母液四 15ml/L母液五30ml/L母液六7.5ml/L1-8组4人配1L，9-10组3人配1L。
（二）加入植物生长调节物质加入的具体调节物质与量视培养物不同而异（本次实验不加生长调节剂）。
（三）定容加纯净水定容至1000ml。
（四）倒入预先用铅笔标好刻度的电饭煲中。
（五）加糖、加热：加入蔗糖20g/L并开始加热。
（六）加琼脂粉12g/L：在电饭煲中给培养基加温至冒热气时均匀缓慢地加入琼脂粉，用玻璃棒不断搅拌至全部熔解并煮沸。
（七）调节pH值：煮沸后，用试纸测试pH值，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl把培养基的pH调整到5.6—5.8；加水至预先标注的刻度处，煮沸1-2分钟。
（八）培养基分注把配置好的培养基用烧杯分注到培养瓶中，分注前用量筒量取30ml水倒入培养瓶测试，每瓶装30ml（3瓶/100 ml）左右。
分注后立即加盖，贴上标签，注明培养基的名称、配制时间、配制人姓名。
（九）培养基灭菌，无菌水、无菌瓶、无菌纸片制作。
1.将蒸馏水注入灭菌腔，直至水流进入水位板中间的水位指示器。
2.将待灭菌的物品放入提篮中，将提篮放入灭菌腔中。
3.插上电源，打开开关。
4.旋紧“排汽旋钮”，关闭灭菌腔盖，直至指示灯“LOCKED”亮起。
5.选择灭菌程序，按“SET/ENT”键设置温度为121℃，保温时间20min。
6.长按“START”键开始灭菌。
ms培养基的配制流程实验报告
ms培养基的配制流程实验报告下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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MS培养基的配制与灭菌 11
MS培养基的配制与灭菌一、目的要求1．熟悉组培母液吸取量的计算、琼脂、蔗糖的配制、各种母液的吸取、pH的调节培养基的分装与包装。
2．掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。
二、仪器与试剂1.器材：高压灭菌锅、移液管、量筒、培养瓶（三角瓶）、烧杯、玻璃棒、标签、pH试纸、电炉、电子天平。
2.试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、自来水、浓度为0.1 mol/L和0.5mol/L NaOH以及浓度为0.1 mol/L和0.5mol/L的HCl。
三、方法步骤（一）MS固体培养基的配制1.按实验说明进行MS大量元素的称量配置成1000毫升的大量元素母液配置于试剂瓶中。
2.按培养基配方计算用量，称好凝固剂和糖的用量，取出母液，按顺序放好，准备好称量用具和溶解用具。
3.在容器内加入相当配制量1/3的水，加入琼脂溶煮，再根据计算依次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节物质等，最后加入蔗糖并搅拌均匀,加水定容，搅拌均匀。
4.调整pH值，使PH为5.5～6.0。
5.尽快分装，培养基占容器的1/5--1/4为宜，尽量避免培养基沾到容器内壁或容器口，标记日期。
6.封口。
（二） MS固体培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）1.洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。
自然晾干或烘箱干燥。
2.包扎：用纱布把培养皿包扎好。
3.装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水。
4.装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶，以及包扎好的玻璃器皿。
5．灭菌：于温度为121℃时，维持20分钟，即可达到灭菌的目的。
四、注意事项1．6-BA，NAA用量甚微，取用时要使用移液管，移液管越小越精确。
2．注意配制大量元素母液时防止钙盐与硫酸盐和磷酸盐产生沉淀；3．铁盐母液用棕色瓶保存。
注意pH的调节；4．灭菌时间和压力、温度的控制；5．分装要干净，灭菌时锥形瓶尽可能放正，不要使培养基流出。
6．若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。
MS培养基的配制,灭菌等注意事项
一、MS培养基母液注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
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（七）倒出、沥去最后一次清洗用水，开始进行植 物材料的切割及接种。 逐一取出经上述灭菌处理的植物材料，置于 下面垫有经灭菌处理的培养皿（或小白瓷碟）的无 菌纱布或滤纸上，左手拿小镊子，右手拿解剖刀， 切除各切段或切块上被灭菌剂毒坏的部分。如有必 要，也可再行切分。在完成切割后，将解剖刀和小 镊子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭 菌之后放回原处，以便待冷却后下一切割再用。
实验三 外植体材料的预处 实验三 外植体材料的预处 消毒及接种 理、消毒及接种
一、实验目的： 实验目的： 熟悉外植体材料的预处理， 熟悉外植体材料的预处理，掌 握其消毒和接种方法。 握其消毒和接种方法。
二、方法步骤： 方法步骤： 酒精消毒→消毒剂消毒 预处理 →酒精消毒 消毒剂消毒 酒精消毒
（一）对采来的植物材料进行适当的预处理。除去 不需要的部分，将所需部分切割至适当大小，置自 来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时，主要视植物 材料清洁程度而定。这在污染严重时特别有用。 （二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100 ml水）等 浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉 水。这是进一步减少污染的处理。 同时配制消毒液：50%次氯酸钠溶液。
（九） 在完成了该第一只培养容器的外植体接种操 作后，用70%乙醇对超净工作台的台面进行擦拭灭 菌，接着再进行第二只培养容器的外植体接种及超 净台台面的灭菌，直至全部完成。
作业：练习无菌操作；统计植物材料表 面灭菌结果；分析污染原因；、沥干水的植物 材料放入广口瓶或烧杯，向其中倒入新鲜配制、 浓度一定并且加有一定量（通常为灭菌剂消毒液 的0.5%，或每100 mL消毒液滴加10~15滴） Tween-80（土温-80）等表面活性剂的消毒液适量 （液面高度超出植物材料至少0.5 cm），开始计 算灭菌时间。也可在使用上述灭菌剂之前，先将 植物材料浸于70%乙醇灭菌10~30秒。
（三） 将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直 接从高压灭菌器中取出，置于超净工作台上。打开 超净工作台中的紫外灯，在进行紫外线灭菌处理至 少30 min后关掉紫外灯。 （四） 操作人员洗手擦干，换上洁净工作服，戴 上帽子以免头发散落以及带来污染。坐到超净台前， 并将装有经湿热灭菌培养基的培养瓶、配好的消毒 液、洗净沥干的植物材料置于超净工作台上，用 70%酒精棉球擦手与器具外壁，即可对经上述预处 理的植物材料进行表面灭菌处理，自此以后各步均 须在超净工作台上操作。
实验一 MS培养基的配制和灭菌 实验一 MS培养基的配制和灭菌
一、实验目的： 实验目的： 学习、 学习 、 掌握植物组织固体 培养基的配制和灭菌方法。 培养基的配制和灭菌方法。 配制 方法
二、实验步骤： 实验步骤： 称量→混合 混合→调 值 灭菌 称量 混合 调pH值→灭菌
称量：按每瓶培养基终体积50mL计，称取适量的 称量： 琼脂粉（6g/L）和蔗糖（30g/L），置于2L大烧杯 中，加蒸馏水至需配培养基终体积的3/4左右，加 热使之溶解。 混合： 混合：分别加入一定量的贮备液I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和 生长调节物质及其它特殊补加物，再加蒸馏水直至 需配培养基的终体积。 调pH值：充分混合后，0.1mol/L的NaOH调节培养 pH值 基的pH值至5.8。 灭菌： 灭菌：封严培养容器口后，120℃灭菌20min后， 将培养基取出，置于水平台子上，在室温下冷却， 备用。
（六）在持续灭菌时间内定时用玻璃棒轻轻搅动， 以促进植物材料各部分与消毒液充分接触，驱除气 泡，使灭菌彻底。在灭菌时间结束前1 min时，即可 开始用玻璃棒等轻轻压住植物材料将消毒液慢慢倒 入废物缸，注意勿使植物材料滑出。接着立即倒入 适量无菌水，轻搅植物材料以清洗去除灭菌剂残留。 一般表面灭菌时间的计算是从倒入消毒液开始，到 倒入无菌水为止。无菌水的清洗时间每次约3 min； 清洗5次。
（八）接着，左手拿培养瓶，将培养容器口外壁在 靠近酒精灯外焰处转燎数秒，以将其可能带有的微 生物等固定于原处；在酒精灯焰附近处，用右手拇 指与食指配合将瓶塞打开，并将其夹于左手无名指 与最小指之间；再将培养瓶口在酒精灯焰上轻转灼 烧灭菌；以右手拇指与食指配合，用大镊子夹紧一 外植体准确送入培养容器，并将其轻轻地半插入固 体培养基；将大镊子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒 精灯焰上灼烧灭菌之后放回原处，以便待冷却后下 一操作再用；将培养瓶口及瓶塞分别在酒精灯焰上 小心地轻转灼燎数秒；盖好瓶塞，旋紧，将其置于 超净工作台的适当位置。