选修1生物技术实践知识点整理

选修1《生物技术实践》

第一部分微生物的利用

实验 1 大肠杆菌的培养和分离

一、大肠杆菌

1．大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌，为兼性厌氧的肠道杆菌。2．用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。

二、本实验的内容是将大肠杆菌扩大培养和划线分离。分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。

本实验用LB液体培养基（通用的细菌培养基）扩大培养大肠杆菌，培养后用LB固体平面培

养基进行划线分离。

三、细菌的培养和分离

1．细菌的培养：

（ 1 ）繁殖方式：细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20min 分裂一次。

（2）培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环来转移带菌的培养物。

2．细菌的分离

分离的方法与特点：

划线分离法：操作简单。（接种环）

涂布分离法：操作复杂，单菌落更易分开。（玻璃刮刀）

四、灭菌操作

1．灭菌操作的原因：获得纯净的培养物的关键是防止外来杂菌的入侵污染。

2．无菌操作的条件：

（1）各种器皿必须是无菌的。（首要条件）

（2）各种培养基必须是无菌的。

“细菌喜荤，霉菌喜素”

细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透

压。在中性偏碱的环境中生长（制备培养基时需调节培养基的酸碱度）。

霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。在中性偏酸的环境中生长（制备培养基时需调节培养基的酸碱度）。

如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2压力(90 C以上)灭菌30min.

3．灭菌的方法：是指杀灭病原微生物的方法。

( 1)灼烧灭菌

(2)干热灭菌：160-170 C下加热1-2h。

(3)高压蒸气灭菌：100kPa、121 C (1kg/cm 2)下维持15min.

(4)过滤灭菌：G6玻璃砂漏斗过滤(用于有些不能加热灭菌的化合物，如尿素加热会分解)

4．消毒的方法：是指杀灭或清除环境中一切微生物(包括芽胞、孢子)的方法

(1)煮沸消毒法：100 C煮沸5-6min

(2)巴氏消毒法：70-75 C下煮30min或80 C 下煮15min

(3)化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒; 氯气消毒水源

( 4) 紫外线消毒

五、大肠杆菌的培养和分离实验

1 ．实验步骤：

(1)培养基灭菌：将50mlLB液体培养基、50mlLB固体培养基加上封口膜和培养皿用牛皮纸包好

进行高压蒸汽灭菌。(封口膜的作用是既通气又不使菌进入)

(2)倒平板：将有培养基的三角瓶和培养皿放到超净台上，打开紫外灯和过滤风

(3)接种：接种环接种，在37C振荡培养12h

( 4)划线分离：在酒精灯火焰上灼烧接种环，接种环只在菌液中蘸菌液一次，然后在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿，将培养皿倒置，放在37 C恒温培养箱中培养

12-24h ，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落。

(5)菌种保存：用接种环取出单菌落，用划线法接种在斜面上，37 C培养24h后，置于4 C冰箱

中保存

实验2分离以尿素为氮源的微生物

、脲和脲酶

1•脲或称尿素，是蛋白质降解的产物。

2•脲酶：有些细菌可以尿素为氮源，这些细菌含有脲酶

(1 )可降解尿素的酶

(2)作用原理：细菌合成的脲酶能将尿素分解成N H,致使pH升高，使酚红指示剂变红。

(NftX 二0 + HO —2NH5+ Oh

二、实验设计及步骤

1 •实验中的对照设置：

实验组：以全营养LB固体培养基进行培养(蛋白胨，酵母提取物，氯化钠，琼脂糖，水)

对照组：以尿素固体培养基进行培养(葡萄糖，氯化钠，KHPO,酚红，琼脂糖，水)

加入通过G6玻璃漏斗过滤(使之无菌)的10ml尿素溶液(内含2g脲)

2. 实验步骤：

(1)制备培养基：将已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基在酒精灯旁分别倒入两个培养皿

中，在水平的超净台上摇匀，平放至凝固。

(2)制备细胞悬液：用1g 土样配制不同浓度的细胞悬液(加无菌水稀释)。

(3)用涂布分离法分离细菌：将不同浓度的土壤稀释液分别加入到有LB培养基和尿素培养基的

培养皿中，再将保存在70%酉精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待刮刀上火焰熄

灭。在酒精灯火焰旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。

(4)培养：倒置培养皿，在37 C恒温培养箱中培养24-48h

(5)观察：培养基中的菌落数。

实验4果汁中的果胶和果胶酶

、果胶

1 •化学组成：半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯

2 •作用：（1）植物细胞壁的主要成分（2）将植物细胞粘合在一起（去掉果胶植物组织变得松散）

3 •鉴别方法：果胶不溶于酒精二、果胶酶

1. 来源：黑曲霉、苹果青霉等微生物

2.作用：巣胶萌（里胶甲酯塘）

果胶------------ > 半乳糖酵酸+半乳糖醛酸甲酯

3. 应用:

（1）应用原理：水解果胶，使水果组织的分散性加大。

（2）果汁生产：提高出汁率和澄清度。

三、探究制作果汁的最佳条件

实验流程:

95%的乙醇用于检验是否有果胶

如果有浑浊（或者沉淀），说明果胶还没有被完全水解。

如果澄清，说明果胶被完全水解