生物化学重点

下列过程分别发生在哪些亚细胞结构内完成：a.糖酵解：胞浆 b.丙酮酸氧化脱羧：线粒体 c.TCA：线粒体 d.氧化磷酸化：线粒体内膜 e.糖异生：肝、肾细胞的胞浆及线粒体 f.磷酸戊糖途径（己糖磷酸支路）：胞液g.脂肪酸的β氧化：胞质溶液和线粒体h.16碳的软脂酸合成：胞浆 i.尿素循环中的氨甲基磷酸合成：线粒体 j.鸟氨酸循环中的精氨酸合成：胞浆

（除Gly之外，其余蛋白氨基酸都具有手性碳原子，都有旋光性。

AA同时具有两性，氨基酸性，羧基碱性。

凯氏定氮法：粗蛋白质含量=蛋白氮×6.25

在等电点时,AA溶解度最小。

蛋白质功能直接由其高级结构（构象）决定。蛋白质的一级结构决定高级结构（构象），因此最终决定了蛋白质的功能。）合成代谢（同化作用）：指生物体从外界摄取物质，并把它们转变成自身物质的过程。通常是将生物小分子合成为生物大分子。需要能量。

分解代谢（异化作用）：指生物体内原有的物质经一系列变化最终变成排泄物排出体外的过程。通常将生物大分子分解为生物小分子。放出能量。

合成氨基酸的主要途径：1. α—酮酸还原氨化2. 转氨作用3.氨基酸的相互转化

电子传递链又称呼吸链：代谢物脱下的成对氢原子（2H）通过多种酶和辅酶所催化的连锁反应逐步传递，最终与氧结合生成水，这一系列酶和辅酶。电子传递有严格顺序，只能从氧化还原势较低的载体传递到氧化还原势较高的载体。

Km等于酶促反应速度达最大值一半时的底物浓度。Km是酶的特征常数，经常表示酶与底物的亲和力。Km值越大，亲和力越小。

米氏常数: Km的值是当反应速度为最大反应速度的一半时所对应的底物浓度。所以Km的单位为浓度单位

（1 ）Km是酶的一个特征性常数，只与酶的性质有关，与酶的浓度无关

（2 ）如酶能催化几种不同的底物，对每种底物都有一个特定的Km 值，其中Km 值最小的称该酶的最适底物。

（3 ）Km除了与底物类别有关，还与pH、温度有关，所以Km是一个物理常数，是对一定的底物、一定的pH、一定的温度而言的。

（4 ）当k2 >>k3，Km可表示酶和底物的亲和力，Km值越大，亲和力越小。

酶的比活力：每毫克蛋白质中含有的酶单位数（U/mg）比活力=活力U/mg蛋白=总活力U/总蛋白数mg 代表酶的纯度：比活力愈大，纯度愈高。纯化倍数=每次比活力/第一次比活力回收率（产率）=（每次总活力/每一次总活力）×100%

底物浓度对反应速度的影响：底物越多，速度越快。米氏方程： v=V max·[S]/(K m+[S])

酶浓度对反应速度的影响：速度与浓度成正比。

温度对反应速度的影响：随着温度的升高，反应速度会加快。随着温度的升高，酶蛋白会失活，使反应速度下降

Ph对反应速度的影响：在最适pH 条件下，酶活性最高，即酶反应速率最大。低于或高于最适pH 值，酶反应速率均会下降。

抑制剂对反应速度的影响：某些抑制剂的化学结构与底物相似，与底物竞争酶的活性中心并与之结合，从而减少了酶与底物的结合，因而降低酶反应速度。这种作用称为竞争性抑制作用。

温度、Ph不是特征性常数。

必需氨基酸有：赖氨酸Lys，色氨酸Trp，苯丙氨酸Phe，四硫氨酸Met，苏氨酸Thr，亮氨酸Leu，异亮氨酸Ile，缬氨酸Val。（半必需AA：精氨酸Arg，组氨酸His）

20种氨基酸：甘氨酸Gly , 丙氨酸Ala , 缬氨酸Val , 亮氨酸Leu , 异亮氨酸Ile , 丝氨酸Ser , 苏氨酸Thr , 半胱氨酸Cys , 甲硫氨酸（蛋氨酸）Met , 天冬氨酸Asp , 谷氨酸Glu , 天冬酰胺Asn , 谷氨酰胺Gln , 赖氨酸Lys , 精氨酸Arg , 苯丙氨酸Phe , 酪氨酸Tyr , 组氨酸His , 色氨酸Trp , 脯氨酸Pro

催化作用高效专一地催化机体内几乎所有的

反应

酶

运输作用专一运输各种小分子和离子如血红蛋白

调节作用调节机体代谢活动如胰岛素、钙调蛋白、阻遏蛋白

运动作用负责机体的运动如肌动蛋白、肌球蛋白

防御作用防御异体侵入机体如免疫球蛋白、病毒外壳蛋白

营养作用作为氨基酸的贮库，用于生长发育

所需或某些物质与蛋白质结合而被

贮存

如卵清蛋白、酪

蛋白、麦醇溶蛋

白、铁蛋白

结构蛋白作为构建机体某部分的材料如a-角蛋白、胶原蛋白

同工酶：同一个体的不同组织或同一组织、同一细胞，具有不同分子形成但却能催化相同的化学反应的一组酶，称之为同工酶。催化活性相同而酶蛋白的分子结构，理化性质及免疫学性质不同

酶原的激活：活体内合成出来的酶，有时不具有生物活性，经过蛋白水解酶专一作用后，构象发生变化，形成活性中心，变成有活性的酶。这个不具活性的蛋白质称为酶原，这个过程称为酶原的激活。

酶原的激活实际上是酶的活性中心形成或暴露的过程，该过程不可逆。

蛋白质的结构及与功能的关系：<1>每一种蛋白质都具有特定的结构，也具有特定的功能。<2>蛋白质的结构决定了蛋白质的功能。

<3>蛋白质的功能直接由其高级结构（构象）决定。如蛋白质的变性现象。<4>蛋白质的一级结构决定高级结构（构象），因此，最终决定了蛋白质的功能。

蛋白质的分离纯化的技术原理及方法：纯化方法的依据：蛋白质的基本性质，如：

1）溶解性：盐析等2）分子大小和形状：凝胶过滤(分子筛过滤)，透析，超离心，超滤等3）电荷(酸碱性质)：电泳，离子交换层析，等电聚焦等4）吸附性质：吸附层析，疏水互作层析5）特异生物学亲和力：亲和层析

（1）根据蛋白质分子大小不同的分离方法:a.透析和超滤b. 超速离心c.凝胶过滤

（2）根据蛋白质溶解度的差异进行分离的方法:a.等电点沉淀 b.盐溶、盐析 c.丙酮沉淀 d.重金属盐沉淀：

（3）根据蛋白质电荷不同的分离方法:a.电泳b.离子交换层析盐析，是应用中性盐加入蛋白质溶液，破坏蛋白质的水化膜，使蛋白质聚集而沉淀；透析，是利用仅能通透小分子化合物的半透膜，使大分子蛋白质和小分子化合物分离，达到浓缩蛋白质或去除盐类小分子的目的；超离心，在离心力作用下，可沉降，由于蛋白质其密度与形态各不相同，可将不同密度的蛋白质加以分离；电泳，在一定的PH溶液中带电荷，为带电颗粒，在电场中向相反的电极方向泳顽固，由于蛋白质的质量和电荷量不同，其在电场中的泳动速率也不同，分离成泳动速率快慢不等的条带；离子交换层析，与层析柱内离子交换树脂颗粒表面的相反电荷相吸引，用盐溶液洗脱，带电量小的蛋白质先被洗脱，随着盐浓度增加，带电量多的也被洗脱，分部收集洗脱蛋白质溶液；分子筛层析，根据蛋白质颗粒大小而进行分离的方法，不同分子量蛋白质在层析柱内的滞留时间不同，流出层析柱的先后不同，可将蛋白质按分子量大小而分离。