尼康显微镜操作规范

Nikon Ti-U荧光倒置显微镜操作规范

操作前须知：

使用荧光显微镜的荧光观察功能需提前填写预约记录，使用后填写使用记录。普通观察切片和细胞无需登记（只有荧光观察或荧光拍照才需要打开汞灯，明场、相差图像和观察细胞不需要打开汞灯）。填写预约记录是为避免频繁开、关汞灯，延长汞灯寿命，当操作者看到有人预约在自己后面时间不长时，可以不用关汞灯。（汞灯打开后40分钟后才能关：汞灯关闭后无论多急，40分钟后才能开）。

彩色相机的开机:

1. 首先确认电源连接正常，打开外置灯箱电源控制器开关（2-2）；

2. 打开机身底座左侧白色（正方形）卤素灯开关（2-3），通过调节机身左侧开关下方的旋钮（3-1）控制灯泡亮度确认显微镜处于工作状态。把透射照明器中的“NCB11 滤色片”和“D滤色片”（3-2）插入光路中以保证色彩真实。

明场图像观察：

1. 先把显微镜的物镜转盘转到低倍物镜档位，把准备观察的切片（切片的方向应是盖玻片朝下）放到显微镜载物台上；

2. 聚光镜（5-1）的选择：（一）聚光镜对应空白挡位A

（二）聚光镜孔径光栏：将聚光镜的孔径值设定在物镜数值

孔径值的60%—80%之间即可

3. 通过目镜观察调节显微镜视野内的亮度，达到最佳位置图像最清晰；

4. 将显微镜机座右侧的分光旋钮旋到“L”（相机端口）的位置上，通过计算机进行图像采集保存。

相差图像观察：

1. 先把显微镜的物镜转盘转到低倍物镜档位，把准备观察的样本放到显微镜载物台上；

2. 聚光镜（5-1）的选择：（一）聚光镜根据物镜选择对应的相差环

（注：4倍物镜对应PHL，10倍、20倍物镜对应PH1，40倍物镜对应PH2）

（二）可根据物镜倍数的提升结合镜下效果来调整聚光镜上

的孔径光阑的数值

3. 通过目镜观察调节显微镜视野内的亮度，达到最佳位置图像最清晰。20,40倍物镜上有较正环，可配合使用获得清晰图像；

4. 将显微镜机座右侧的分光旋钮旋到“L”（相机端口）的位置上，通过计算机进行图像采集保存。

荧光图像观察（黑白相机）：

1. 打开外置荧光电源控制器开关，使汞灯开始工作；

2. 通过明场的卤素灯照明状态下找到样本的焦点平面，关闭卤素灯开关或把聚光镜对准C暗档，选择相应的荧光滤色镜，荧光光闸推至“O”的状态；

UV：紫外，Ex：330-380nm；Em：＞420nm

G：红色，观察绿色荧光，Ex：515-565nm；Em：595-705nm

B：蓝色，观察绿色荧光，Ex：465-495nm；Em：515-555nm

3. 通过目镜观察微调节显微镜视野内的清晰度并找寻最佳的位置；

4. 将显微镜机座右侧的分光旋钮旋到“R”（相机端口）的位置上，通过计算机进行图像采集保存。

软件操作（如有问题，可问询吕明）：

1. Aquire选项下选择相应的相机，彩色相机或黑白相机；

2. 单击右键，调出DS-QI MC Settings, Annotations and Measurements等工具以调节分辨率、曝光时间等；

3. 为方便之后加标尺，选择相应的物镜放大倍数；

4. 背景颜色不正需做白平衡；

5. 黑白相机拍摄荧光照片可添加伪彩，并将不同颜色通道的图片merge到一起；

6. 细胞计数，圈定面积的大小以及设定长度的计算等。

使用注意事项：

1. 关显微镜前需将光源调到最小；

2. 调节物镜时旋转物镜转换器而非直接旋转物镜；

3. 不要将灰尘、指纹等留在镜头上，镜头、滤色片上的灰尘将影响视场中的图像，如果镜头变脏，用擦镜纸蘸酒精轻拭；

4. 汞灯的开启时间最少要达到40分钟以上，关闭后再次开启中间的间隔时间应在40分钟以上（以便使灯箱充分散热）；

5. 显微镜上端的灯柱上滤光片的使用：“D”模板推进光路里，“ND”模板可以根据镜下亮度选择推进或拉出（其内置ND2和ND16两个减光片），“NCB11”模块是日光平衡片，是纠正卤素灯泡原始的颜色，是必须推进光路里的，“GIF”是绿色干涉片，是调整镜下视野为绿色背景的，可以自行选择；

6. 聚光镜前段的两个白色的旋钮是来调整控制科勒照明中心位置的，实验者不须使用；

7. 显微镜机身前端有一个1X/1.5X的光学变倍，中间变倍：1.5 x，显微镜最大放大倍数（1.5×10×40 = 600倍）不管使用哪个档位，一定要推到位；

8. 采集系统开启顺序遵照先硬件后软件的原则，关机遵照先软件后硬件的原则。通过计算机进行图像采集时，打开相应的CCD开关，待开关上的绿色指示灯不再闪烁时再开软件；

9. 荧光控制器和显微镜荧光装置之间是通过光纤进行连接的，切勿将其弯折；

10. 及时填写预约和使用记录。