实验室平板培养基配方
PDA培养基
gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。
β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。
由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。
可作为GUS报告基因检测方法根据gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高），其中最为常用的是组织化学法。
组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物。
将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡，若组织细胞发生了解gus 基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物，这是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。
因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。
CTAB法的全称是十六烷基三甲基溴化铵法（Hexadecyltrimethy Ammonium Bromide）。
主要用于提取生物DNA步骤（1）2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。
（2）取少量实验材料（约300mg）置于研钵中，用液氮磨至粉状；（3）加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动；（4）将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之二；（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，30~60min 后取出；（6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3 min（若提取的是总基因组，则不能剧烈震荡。
），使两者混合均匀；（7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min，与此同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中；（8） 10 000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物；（9）10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上；（10）60 sec后，直立离心管，加入720ul的75%乙醇及80 ul 5 M的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中；（11）放置30 min，使DNA块状物的不纯物溶解；（12）10000 rpm离心1 min后，倒掉液体，再加入800 ul 75%的乙醇，将DNA再洗 30 min；（13）10000 rpm离心30 sec后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）；（14）加入50 ul 0.5 × TE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37℃恒温箱约15 h，使RNA消解；以上为通用CTAB法,实验时可根据不同材料加以改进,以获得最佳实验结果.TE Buffer配制：10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)1 mmol/L EDTA(pH 8.0)因为含有以上两种物质，所以称为TE。
常用细菌培养基配方
常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
实验室常用培养基大全及配方
枝毛霉、两型孢毛霉、直立毛霉、球孢毛霉、丝球毛霉、大毛霉、多型孢毛霉、总状
毛霉、鲁氏毛霉、五通桥毛霉、黑球漆斑菌、露湿漆斑菌、玫烟色拟青霉、棉铃虫拟
青霉、拟青霉、球形阜孢、白腐菌、少根根霉、华根霉、科恩根霉、戴尔根霉、日本根霉、爪哇根霉、米根霉、点头根霉、绿穂霉、簇孢匍柄霉、雅致枝霉、康宁木霉、绿色木霉、黄萎轮枝孢、大丽花轮枝孢
大豆酪蛋白琼脂培养基(含卵磷脂)
哥伦比亚CNA琼脂
SLB培养基
胰酪胨大豆琼脂
大豆酪蛋白琼脂（灌装生产用）
血琼脂基础2号
酪胨琼脂（G.A）
三糖铁（TSI）琼脂
含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化钠-蛋白液
3%氯化钠碱性蛋白胨水
TCBS琼脂
3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂
3%氯化钠三糖铁琼脂
氯化钠三糖铁琼脂
适用范围：大豆根瘤菌（慢生型）、豇豆慢生根瘤菌、花生根瘤菌、紫云英根瘤菌、
大豆根瘤菌（快生型）、大豆根瘤菌、豌豆根瘤菌、苜蓿根瘤菌、田菁根瘤菌
10. Mannitol Agar (甘露醇琼脂)
Yeast extract (酵母膏)5gPeptone (蛋白胨)3g
Mannitol (甘露醇)25gAgar (琼脂)15g
适用范围：植物乳杆菌（胚芽乳杆菌）、嗜热乳酸链球菌
6. Lactic-bacteria MidiumⅡ(乳酸菌培养基Ⅱ)
Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨)10gBeef extract (蛋白胨)10g
Yeast extract (酵母膏)5gGlucose (葡萄糖)5g
Tween (吐温) 801gK2HPO42g
实验七 培养基的配制和灭菌
（二）培养基灭菌
培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便 可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证 灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后， 可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用。 在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌 和干热灭菌。一般培养基和水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃 器皿常用干热灭菌。蒸汽灭菌为105-121℃，15-20分钟， 干热灭菌为160-170℃，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿 热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热 穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又 可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。
高压蒸汽灭菌步骤如下： 高压蒸汽灭菌步骤如下：
灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 1. 灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 接通电源， 2. 接通电源，进行加热 排除高压锅内的空气，可将排气阀打开， 3. 排除高压锅内的空气，可将排气阀打开，待排出大气后 关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2 0.5kg/cm2时再 关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再 打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 当压力达1.05kg/cm2 1.05kg/cm2时 此时灭菌器内的温度为121℃ 121℃， 4. 当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为121℃， 维持20min 对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、 20min。 维持20min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等 物时，应适当降低压力，延长时间。 物时，应适当降低压力，延长时间。 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时， 5. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开 排气阀，然后打开灭菌器盖， 排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品
微生物实验室常见20种培养基配方大全
微生物实验室培养基配方大全一、糖发酵管成分：牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 3g磷酸氢二钠2g0.2％滇麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLPH 7.4制法1. 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5％加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。
2. 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶1000 mL，121℃高压灭菌15min。
另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。
将5mL糖溶液加入于100 mL培养基内，以无菌操作分装小试管。
蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。
从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般观察2～3d。
迟缓反应需观察14~30d。
二、乳糖胆盐发酵管成分：蛋白胨 20g猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g乳糖 10g0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL蒸馏水 1000mL制法：将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10 mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
三、5％乳糖发酵管成分：蛋白胨 0.2g氯化钠 0.5g乳糖 5g2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL蒸馏水 100mLpH 7.4制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50mL蒸馏水内，校正pH。
将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌121 ℃ 15min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。
在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。
四、缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）成分：磷酸氢二钾 5g多胨 7g葡萄糖 5g蒸馏水 1000mL制法：溶化后校正pH，分装试管，每管1mL ，121℃高压灭菌15min。
甲基红（MR）试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。
滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。
实验室常用培养基
．常用培养基的制备（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）和马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基培养真菌最常用的培养基，成分如下：去皮马铃薯200 g 葡萄糖或蔗糖20g琼脂15－20g 水1000 ml配制方法：将马铃薯洗净去皮，称取200 g，切成小块（不必大小）放入锅中，加水1000ml，煮沸半小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加蔗糖20g，加水补足到1000ml。
配成的培养基一般呈酸性，用于培养真菌，可以不必调pH。
如配制固体培养基，在加蔗糖前先加15－20g 琼胶加热熔化，最后加入蔗糖，混匀并加水补是至1000ml，趁热分装在试管或三角瓶中。
标准试管（15×150mm）分装量如下：一般用作斜面培养的每试管装培养基3－5ml，用作平面培养的每试管约10ml，加棉花塞后灭菌。
培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性（pH7．0左右）。
（2）牛肉汁蛋白胨培养基（NA）是培养细菌最常用的培养基，又称营养琼脂或肉汤培养基。
成分如下：酵母浸膏1g 牛肉浸膏3g蛋白胨5-10g 蔗糖（或葡萄糖）l0g琼脂15-20g 水1000mlpH7.0配制方法：称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用，在其余水中加入琼脂，加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀，然后加水补足到1000 ml，用NaOH或HCL调整至pH7.0，趁热分装，加棉花塞后灭菌。
（3）玉米叶培养基取一定数量的玉米叶片，洗净后剪成1㎝2左右的小块，放在250ml的三角瓶中，盛放量一般为三角瓶的1／3，然后加少量的水以保持湿润，加棉花塞后灭菌。
天然培养基一般不必调整pH。
（4）查氏（Czapek）培养基查氏培养基是一种组合培养基，其成分如下：NaNO3 2g K2HPO4 1 gMgSO4·7H2O 0．5g KCl 0．5gFeSO4 0．01g 蔗糖30g水1000ml（5）灭菌水的配制蒸馏水（或自来水）经过灭菌处理即成灭菌水，是实验室用量最大的必备品之一，常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。
生物实验室常用培养基和溶液配制
#1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)#组份浓度：1MTris-HCl 配制量：1L配制方法：1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl 调节pH值至所需值。
pH 7.4 HCl 70ml; pH 7.6 HCl 60ml; pH 8.0 HCl 42ml4.加水将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
#10&timeTEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度：100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量：1L 配制方法：1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。
3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。
4.室温保存。
#1.5MTris-HCl(pH8.8)组份浓度：1.5MTris-HCl 配制量：1L配制方法：1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调节pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
#3M醋酸钠(pH5.2)#组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
#Tris-HCl平衡苯酚#配制方法：1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。
琼脂平板培养基实验报告
琼脂平板培养基实验报告一、实验目的本次实验的目的是掌握琼脂平板培养基的制备方法，并通过使用琼脂平板培养基来观察和分离不同菌落。
二、实验原理琼脂平板培养基是一种常用的微生物学实验室培养基，其主要成分为琼脂和营养物质。
琼脂是一种从海藻中提取出来的胶状物质，可以在高温下溶解，在冷却后形成固体。
在制备琼脂平板培养基时，需要将琼脂与适量的营养物质混合后加热至完全溶解，然后冷却至适宜温度并倒入培养皿中凝固。
三、实验步骤1. 准备所需材料：琼脂、适量的营养物质（如肉汤、酵母提取物等）、试管、移液器、烧杯、玻璃棒等。
2. 在试管中加入适量的营养物质，并用移液器将其吸入。
3. 将试管加入水浴中加热至完全溶解。
4. 将琼脂加入烧杯中，并加入适量的水。
5. 将烧杯加入水浴中加热至琼脂完全溶解。
6. 将步骤4和步骤5中的溶液混合均匀，并用玻璃棒搅拌至无颗粒物质。
7. 将混合后的溶液冷却至适宜温度（通常为50℃左右）。
8. 将培养皿倾斜45度，用移液器将混合好的琼脂平板培养基倒入培养皿中，约倒满1/3即可。
9. 等待琼脂平板培养基凝固后，将培养皿竖立并保存在冰箱内备用。
四、实验结果在使用琼脂平板培养基进行微生物分离时，可以观察到不同形态、大小、颜色等特征的菌落。
通过对这些菌落进行进一步分析和检测，可以确定其种类和数量。
五、实验注意事项1. 在制备琼脂平板培养基时需要注意材料的净化和消毒，以避免细菌污染。
2. 在加热溶液时需要注意温度，避免过高或过低导致琼脂不完全溶解或过度凝固。
3. 在混合琼脂和营养物质时需要充分搅拌，以确保混合均匀。
4. 在倒入培养皿中时需要注意倾斜角度，以避免气泡和不均匀厚度的出现。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了琼脂平板培养基的制备方法，并了解了其在微生物学研究中的重要作用。
在今后的实验中，我们将继续运用琼脂平板培养基来观察和分离不同菌落，并进一步深入研究微生物的生命活动和特性。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
实验室常用培养基
实验用培养基配制 >1 ．牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）牛肉膏3g ，蛋白胨10g ，NaCl 5g ，水1000mL ，pH7.4 ～7.62. 高氏1 号培养基( 用于放线菌培养)可溶性淀粉20g ，KNO 3 1g ，NaCl 0.5g ，K 2 HPO 4- · 3H 2 O 0.5g ，MgSO4 · 7H 2 O 0.5g, ，FeSO4 · 7H 2 O 0.01g ，水1000mL ，pH7.4 ～7.6 。
配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。
3 ．马丁氏（Martin ）培养基（用于从土壤中分离真菌）K 2 HPO 4 1g ，MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g ，蛋白胨5g ，葡萄糖10g ，1/3000 孟加拉红水溶液100mL, 水900mL ，自然pH ，121 ℃湿热灭菌30min 。
待培养基融化后冷却55 ～60 ℃时加入链霉素( 链霉素含量为30 μ g/mL).4. 马铃薯培养基(PDA)( 用于霉菌或酵母菌培养)马铃薯( 去皮)200g, 蔗糖( 或葡萄糖) 20g, 水1000mL配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧杯中煮沸30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液加糖, 再补足至1000mL, 自然pH. 霉菌用蔗糖, 酵母菌用葡萄糖.5. 察氏培养基( 蔗糖硝酸钠培养基)( 用于霉菌培养)蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 · 7H2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0 ～7.26. Hayflik 培养基( 用于支原体培养)牛心消化液( 或浸出液)1000mL, 蛋白胨10g, NaCl 5g, 琼脂15g, pH7.8 ～8.0,分装每瓶70mL, 121 ℃湿热灭菌15min, 待冷却至80 ℃左右, 每70mL 中加入马血清20mL,25% 鲜酵母浸出液10mL, 15 醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素G 钾盐水溶液(20 万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意: 醋酸铊是极毒的药品, 需特别注意安全操作.7 ．麦氏(McCLary) 培养基( 醋酸钠培养基)葡萄糖0.1g, KCl 0.18g ，酵母膏0.25g ，醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g ，蒸馏水l00mL 。
实验室36种微生物培养基配制方法
实验室36种微生物培养基配制方法实验室养菌基是为微生物的培养和研究提供合适营养和条件的培养基质。
不同微生物对培养基的要求各不相同，因此实验室通常需要配制多种不同的培养基。
下面是36种常用的微生物培养基的配制方法。
一、通用培养基1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）营养琼脂培养基是一种通用的培养基，适用于大多数微生物的培养。
其配方为：蛋白胨10克、葡萄糖5克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，加入琼脂，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
2. 营养肉膏培养基（Nutrient Broth）营养肉膏培养基是一种通用的液体培养基，适用于大多数微生物的培养。
其配方为：蛋白胨10克、牛肉提取物5克、葡萄糖5克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，高压灭菌，分装，即可使用。
3. 大肠杆菌选择性培养基（MacConkey Agar）大肠杆菌选择性培养基是一种常用的培养基，用于选择和鉴定大肠杆菌。
其配方为：蛋白胨17克、葡萄糖1.5克、恶瓜胆汁5克、硼酸紫0.5克、亮矾0.09克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，加入琼脂，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
4. Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基（Sabouraud Dextrose Agar）Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基是用于真菌的培养和鉴定。
其配方为：脱氧胆汁10克、蔗糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至5.6-6.4，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
二、选择性培养基1. VC菌属选择性平皿培养基（Vogel-Johnson Agar）VC菌属选择性平皿培养基是用于选择和鉴定Voges-Proskauer菌属（如克雷伯菌）的培养基。
其配方为：葡萄糖1克、琼脂15克、盐酸75克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、加热煮沸，冷却至55-60°C，加入胆盐酯高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
培养基的制备实验总结
培养基的制备实验总结一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min可以 __灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
实验室常用试剂配制方法
实验室常用试剂配制方法一、50×TAE：称242g Tris溶于800mL 双蒸水中，加入57.1mL 冰醋酸和18.6g（或100mL 0.5mol/L，pH=8.0）EDTA，再加水定容至1L，室温保存备用。
二、1×TAE：将50×TAE加双蒸水稀释至1×使用。
三、LB液体培养基：称取10g蛋白胨（bacto-typtone）、5g 酵母提取物（bacto-yeast extract）和10g NaCl，溶于950mL 双蒸水中，摇动至完全溶解，定容至1L，120℃湿热灭菌20min，冷却至室温后4℃保存备用。
四、100mg/mL氨苄青霉素（Amp）：称取100mg粉末状氨苄青霉素（Amp）置于1.5mL 离心管中，加入800μL 无菌水使其完全溶解，定容至1mL，-20℃保存备用。
五、LA液体培养基：按照x mL培养基加入x μL的比例将100mg/mL的氨苄青霉素（Amp）加入LB液体培养基中，4℃保存备用。
六、LB固体培养基：称取10g蛋白胨（bacto-typtone）、5g 酵母提取物（bacto-yeast extract）、10g NaCl和15g琼脂粉，溶于950mL 双蒸水中，摇动至完全溶解，定容至1L，120℃湿热灭菌20min，稍冷却后按照x mL培养基加入x μL的比例加入100mg/mL的氨苄青霉素（Amp），充分混匀后倒入培养皿中制成琼脂平板，4℃保存备用。
（1L培养基大约可以倒40个平板）七、200mg/mL IPTG：称取2g 粉末状IPTG溶于8mL 双蒸水中，再定容至10mL，配成200mg/mL 溶液，（用0.22μm滤膜过滤除菌，）分装为每份1mL，-20℃保存备用。
八、20mg/mL X-gal：将X-gal溶于二甲基甲酰胺，配成20mg/mL，分装后于-20℃避光保存。
九、DEPC水：将水加入干净玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（v/v），放置过夜，高压湿热灭菌，4℃保存备用。
无菌培养平板的制作实验报告
无菌培养平板的制作实验报告
目的要求
1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
斜面和平板的制作
1．斜面的制作
将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒或玻棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面。
斜面长度不超过试管长度l／2为宜。
如制作半团体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至凝固。
2．平板的制作
将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。
温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。
平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入10~15mL培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。
布氏血琼脂平板培养基配方
布氏血琼脂平板培养基配方布氏血琼脂平板培养基，这名字听起来是不是有点高大上？一听就觉得它和什么科学研究啊，医学实验啊，关系深得很。
但实际上，这玩意儿就是细菌培养的“家”，也可以说是细菌的“豪华公寓”。
别看它名字复杂，做法其实还挺简单的，掌握了几个小窍门，你也能轻松搞定。
说起布氏血琼脂培养基，我们首先得聊聊它的成分，别看它简单，但做出来的东西可厉害了。
其实它的基础是琼脂，大家都知道琼脂嘛，像果冻一样的东西，用来给细菌提供一个可以“安家”的地方。
然后呢，布氏血琼脂里面还加了血液，通常是羊血。
羊血在这里可不只是为了让琼脂看起来更有“气质”，它能提供细菌生长所需要的一些营养成分。
羊血里面含有大量的红细胞和一些蛋白质，细菌就喜欢这些“补品”，你看它们吃得多开心。
你可能会问了，为什么是羊血呢？嘿，这可有讲究，羊血里的红细胞比其他动物的更适合培养很多种细菌，尤其是那些需要特别营养的细菌，像是一些厌氧菌和病原菌，特别喜欢在这种环境里繁衍生息。
说白了，羊血给它们提供了一个丰富的“大餐”，细菌吃得好，长得快，咱们实验也就能更顺利。
制作布氏血琼脂平板的步骤其实也没那么复杂。
首先呢，你需要准备琼脂粉，最好选择高质量的琼脂粉，不然到时候培养出来的东西可能就不太靠谱。
琼脂粉放进烧杯，加入适量的蒸馏水，像做泡泡糖一样搅拌，直到它完全溶解。
然后，别急着开心，继续加热它，注意火候，水不能让琼脂烫焦了。
琼脂融化成透明的液体后，就可以加入羊血了。
羊血的比例是关键，太多了容易把琼脂稠得像胶水，太少了又不够营养，细菌就“吃不饱”。
说到羊血，得提醒一下，这东西可是得经过消毒处理的，别直接去屠宰场买一袋羊血回来用，那样可是危险的哦。
羊血需要经过无菌处理才能用，最好是从正规实验室购买的那种。
而且加入羊血后，别急着往平板里倒，温度得控制好。
热了会让血液中的成分发生变化，冷了又不容易凝固。
一般来说，倒入培养皿时，温度要在45℃左右，感觉就像是做蛋糕时的那种恰到好处的温度，既不烫手也不凉。
m9平板培养基配方的用途
m9平板培养基配方的用途以m9平板培养基配方的用途为标题，本文将介绍m9平板培养基的配方及其在微生物学研究中的应用。
一、m9平板培养基的配方m9平板培养基是一种常用的微生物培养基，其主要成分包括以下几个部分：1. 碳源：葡萄糖2. 氮源：无机氮盐（氨态氮和硝态氮）3. 磷源：磷酸盐4. 硫源：硫酸盐5. 镁盐：硫酸镁6. 钾盐：磷酸二氢钾7. 钠盐：氯化钠8. 微量元素：如铁、锌、镍、钼等9. 硼酸、钙盐、锰盐等其他添加剂二、m9平板培养基的用途m9平板培养基主要用于微生物学实验室中对细菌的培养和研究。
其主要用途如下：1. 细菌生长m9平板培养基提供了细菌所需的基本营养物质，包括碳源、氮源、磷源等。
通过在m9平板上培养，可以促进细菌的生长和繁殖。
细菌在m9平板上生长后，可以进行进一步的研究和分析。
2. 遗传学研究m9平板培养基在遗传学研究中起到了重要的作用。
通过在m9平板上培养含有突变基因的细菌，可以观察到突变基因对细菌生长和表型的影响。
这对于研究细菌的遗传特性和突变机制非常重要。
3. 药物敏感性测试m9平板培养基还可以用于药物敏感性测试。
将不同的药物添加到m9平板上，然后分别接种待测细菌，观察不同药物对细菌生长的影响，可以评价细菌对不同药物的敏感性，为临床药物选择提供依据。
4. 菌落鉴定m9平板培养基可以用于细菌的初步鉴定。
不同的细菌在m9平板上的生长特性是不同的，如生长速度、菌落形态等。
通过观察和比较不同菌株在m9平板上的生长情况，可以初步判断细菌的种属和特性。
5. 细菌代谢研究m9平板培养基还可以用于细菌代谢研究。
通过调整m9平板培养基的配方，可以控制细菌在不同代谢途径下的生长和代谢产物的产生。
这对于研究细菌的代谢途径和代谢产物的分析非常重要。
三、总结m9平板培养基是一种常用的微生物培养基，其配方包括碳源、氮源、磷源、硫源等多种成分。
m9平板培养基在微生物学研究中有广泛的应用，包括细菌生长、遗传学研究、药物敏感性测试、菌落鉴定和细菌代谢研究等方面。
大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40％甘油，—80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）:10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5g/L；NaCl：10g/L；pH7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10。
0g酵母粉 5。
0g氯化钠10。
0g水 1000mlpH 7。
4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5%－2。
0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10。
0g，酵母粉5。
0g，NaCl 10.0g,加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7。
4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7。
4，用1mol/L HCl回调）.2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂)。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干,待锥形瓶的封口纸干燥后取出.液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10—15mL（直径90mm),在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上,放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈,最后中间划之字;接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上,用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字,涂布平板。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验室用平板培养基配方
1.MRS培养基：
液体：蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 柠檬酸铵2g 乙酸钠 5g(无水乙酸钠3g) 酵母粉 5g 葡萄糖 20g
磷酸氢二钾 2g 吐温 1.0ml
盐液甲 5.0ml 蒸馏水： 1000ml
溴甲酚紫 0.8g
[备注]盐液甲的配制：MgSO
4.7H
2
O 11.5g ，MnSO
4
.4H
2
O 2.8g
蒸馏水 100ml
固体：在MRS液体培养基中加入1.6%~2%的琼脂
PH=6.5~7.0 121℃灭菌30min
2.YB培养基：
液体:蛋白胨 5g 葡萄糖 5g 酵母粉 5g 磷酸氢二钾4g
3.08%硫酸锰 1.0ml 蒸馏水 1000ml
固体：在YB液体培养基中加入1.4%~1.7%的琼脂
PH=6.0~7.0 121℃灭菌30min
3.PYD培养基：
液体：酵母粉 10g 蛋白胨 20g
葡糖糖20g 蒸馏水1000ml
固体：在PYD液体培养基中加入2%的琼脂
[备注]灭菌时要将葡萄糖和蛋白胨、酵母粉分开，溶解后单独灭菌，防止三者在高温下发生化学反应。
PH自然121℃灭菌30min
中国农业大学动物科技学院
饲料生物技术实验室
张得龙
2013.10.31。