依达拉奉凝胶的制备及体外透皮性能研究

3.1.3
回收率和精密度
制备高(70.13 µg·mL1)、
中 (8.77 µg·mL1) 、低 (1.10 µg·mL1)3 个浓度的 TMP 对照品溶液，按“1.3”项下色谱条件测定， 用浓度求算相对标准偏差，1 d 平行操作 5 次考察 日内精密度和回收率， 连续 5 d 考察日间精密度和 回收率， 结果日内 RSD≤1.78%(n=5)， 日间 RSD≤ 1.84%(n=5)，仪器精密度良好，结果见表 1。
依达拉奉是一种新型的自由基清除剂和抗氧 化剂，能清除脑缺血周边和缺血再灌注部分产生 的大量羟自由基，从而抑制神经功能障碍 ，改善 神经功能 主要原因 应用
[6-8] [2-3] [1]
依达拉奉 (批号：BCBK6062V)、 α-环糊精 (批 号：F1417042)；β-环糊精(批号：B1427002)；γ环糊精(批号：I1324047)均购于阿拉丁试剂有限公 司；月桂氮䓬酮(国药集团化学试剂有限公司，批 号：20131115)；羧甲基纤维素钠(安徽山河药用辅 料股份限公司，批号：140314)；甲醇(色谱纯，美 国天地试剂有限公司，批号：14035052)；乙腈(色 谱纯，美国天地试剂有限公司，批号：14045024)； 其他试剂均为分析纯。 1.2 动物 健康 SD 大鼠 20 只，♂，体质量 250~300 g， 购自浙江省医学科学院实验动物中心，动物合格 证号：SCXK(浙)20140001。 1.3 色谱条件 色谱分析柱为 Waters symmetry C18(250 mm× 4.6 mm，5µm)；流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸溶液 -蒸馏水(40∶20∶40)；流速：1.0 mL·min1；检测
14 496， R2=1(n=5)， 依达拉奉在 0.55~140.25 µg·mL1 内呈良好的线性关系。
动剃须刀剃毛，剥离背部皮肤，仔细剔除皮下脂 肪和黏连物，剪成适当的大小，20 ℃保存，使用 前自然解冻。 2.2.2 体外透皮试验 将解冻后的大鼠皮肤用生 理盐水浸润，滤纸吸干。绷于 Valian-Chien 双室渗 透池的 2 室之间，真皮层面向接受室，角质层面 涂上凝胶，外加一层保护膜，并用弹簧夹把双室 的双口固定，接受室中加入 4 mL 生理盐水。控制 渗透池夹层内水温在(32±0.5)℃， 池内放置星状搅 拌子 1 粒，电磁搅拌转速 500 r·min1。每隔 1 h 从 接受室吸取渗透液 1 mL，后将接受室内的液体吸 干，再补加生理盐水 4 mL，直至 12 h。将取得的 待测液以 10 000 r·min1 离心 5 min 后， HPLC 测定 依达拉奉含量。 2.3 数据处理 样品按照“1.3”项下色谱条件进行含量测定， 计算单位时间内药物渗透量，同时计算单位面积 内药物累积渗透量 Q(μg·cm2)， 以单位面积累积渗 透量(Q)为纵坐标，时间(t)为横坐标作图，得药物 累积渗透曲线，对所得曲线进行回归，求出斜率， 即为药物的渗透速率 J(μg·cm2·h1)。采用 Excel 软件进行双样本 t 检验。 3 3.1 3.1.1 结果 方法学研究 专属性试验 皮肤浸出液(空白)、对照品、
以 6%含药量、10%月桂氮䓬酮、2%羧甲基纤维素 钠、不同型号的环糊精制备凝胶，考察不同型号 的环糊精对凝胶经皮渗透依达拉奉的影响，结果 见图 4。 β-环糊精制备的凝胶较 α-环糊精和 γ-环糊 精的累积渗透量大，并有显著性差异(P<0.05)。故 采用 β-环糊精制备凝胶。
图 4
β- 环糊精含量对依达拉奉经皮累积渗透量的影响
。据报道，脑缺血后氧自由基增多 ，故依达拉奉在临床上得到广泛的
是导致急性脑梗死患者脑损伤加重、病情进展的
[4-5]
。而目前市售依达拉奉注射液选用丙二醇
为溶剂，具有较强的溶血作用，为减少或避免注 射给药，有必要将依达拉奉制成经皮给药制剂。 1 1.1 材料 仪器与试剂 Waters 2695 高效液相色谱仪(2487 紫外检测 器，Empower 色谱工作站，美国 Waters 公司)； Mettler AE200 电子分析天平[梅特勒-托利多仪器 (上海)有限公司]；TG1650WS 高速台式离心机(湖 南赛特湘仪离心机仪器有限公司)；Valia-Chien 双 室渗透池(自制)；超级恒温循环仪(德国 HAAKE)。
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3.2.1
含药量对凝胶剂渗透的影响
以 10%月桂
3.2.3
环糊精型号和含量对凝胶剂渗透的影响
氮䓬酮、10% β-环糊精、2%羧甲基纤维素钠、不 同浓度依达拉奉制备凝胶，考察不同浓度依达拉 奉含量 (5% ， 6%， 6.5% ， 7%， 8%)对凝胶经皮渗 透依达拉奉的影响，结果见图 2。凝胶的累积渗透 量在一定范围内随含药量的增加而增大。含药量 为 5%，6.5%，7%时的累积渗透量与含药量为 8% 时相比，有极显著性差异(P<0.01)。而含药量 6% 与 8%相比，累积渗透量没有显著性差异，本着高 效节能原则，采用 6%依达拉奉制备凝胶。
Tel: (0576)88526226
E-mail: tzcsz@126.com
Chin J Mod Appl Pharm, 2016 June, Vol.33 No.6
中国现代应用药学 2016 年 6 月第 33 卷第 6 期
波长：229 nm；柱温：35 ℃；进样量：20 µL。 2 2.1 方法 凝胶的制备 依达拉奉加 β-环糊精充分研磨，加月桂氮䓬 酮适量，加羧甲基纤维素钠搅匀，加蒸馏水充分 溶胀搅匀使之成凝胶。 2.2 2.2.1 依达拉奉的体外经皮渗透试验 离体大鼠皮肤的制备 SD 大鼠处死后，电
体外经皮渗透样品按照“1.3”项下色谱条件测定， 皮肤浸出液杂质与依达拉奉分离度良好，依达拉 奉的出峰时间约为 3.0 min。色谱图见图 1。 3.1.2 标准曲线的制备
1
精密称取依达拉奉对照
品 112.2 mg，置 100 mL 量瓶中，用甲醇溶解至刻 度，制成 1 120 µg·mL 的对照储备液，加入皮肤 浸出液配制成浓度分别为 0.55，1.10，2.19，4.38， 8.77 ， 17.53 ， 35.06 ， 70.13 ， 140.25 µg·mL ，按 “1.3”项下色谱条件分析，以峰面积(Y)与相对应 的浓度(X)做回归曲线，得回归方程为 Y=46 885X
中国现代应用药学 2016 年 6 月第 33 卷第 6 期
1百度文库
3.2
处方筛选 经大量预实验后，当存在促进剂月桂氮䓬酮，
以及包合剂环糊精，羧甲基纤维素钠含量为 2% 时，制成的凝胶外观良好，而药物含量、促进剂 以及包合剂含量对药物的经皮渗透有较大影响， 所以有必要进行深入研究。
Chin J Mod Appl Pharm, 2016 June, Vol.33 No.6
依达拉奉凝胶的制备及体外透皮性能研究

徐红燕，陈赛贞*，徐利君，徐珊珊(台州市中心医院药剂科，浙江
摘要：目的
台州 318000)
考察依达拉奉凝胶体外经皮渗透性，筛选凝胶剂最佳处方。方法
采用 Valin-Chien 双室渗透扩散池，以大
鼠离体皮肤为渗透屏障，以 HPLC 测定依达拉奉的浓度，考察含药量、月桂氮䓬酮用量、环糊精的型号和含量对依达拉 奉凝胶剂经皮渗透性的影响。结果 凝胶剂最佳处方为 6%依达拉奉、10%月桂氮䓬酮、10% β-环糊精、2%羧甲基纤维素 依 钠，依达拉奉 12 h 累积渗透量平均值为(501.95±27.59)μg·cm2，渗透速率平均值为(42.25±7.39)μg·cm2·h1。结论 达拉奉凝胶剂具有较好的经皮渗透特性，有望成为新的给药制剂。 关键词：依达拉奉；凝胶；环糊精；月桂氮䓬酮；经皮渗透 中图分类号：R944.15 文献标志码：B DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2016.06.017 文章编号：1007-7693(2016)06-0752-04
表1 Tab. 1
配制浓度 / μg·mL1 70.13 8.77 1.10
精密度和回收率测定结果( x s ，n=5) Results of precision and recovery( x s , n=5)
日内精密度 测定浓度 / μg·mL1 70.21±2.80 8.60±0.18 1.19±0.07 RSD/ % 1.78 1.05 0.12 回收率/ % 100.08 98.13 103.14 日间精密度 测定浓度 / μg·mL1 69.96±3.10 8.58±0.22 1.29±0.02 RSD/ 回收率/ % % 1.84 1.19 0.24 99.76 97.92 107.09
Preparation and in Vitro Permeation of Edaravone Gel XU Hongyan, CHEN Saizhen*, XU Lijun, XU Shanshan(Department of Pharmacy, Taizhou Central Hospital, Taizhou
图1 高效液相色谱图
A 空白皮肤浸出液； B 对照品溶液； C 体外经皮渗透； 1 杂质； 2依达拉奉。
Fig. 1
HPLC chromatograms
Ablank skin solution; Bblank skin solution spiked with edaravone reference solution; Cskin permeation solution sample; 1impurity; 2edaravone.
基金项目 ：浙江省医学会临床科研基金项目(2013ZYC-A133)；台州恩泽医疗中心(集团 )科研基金项目(14EZD1) 作者简介：徐红燕，女，硕士，药师 药师
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Tel: (0576)88526219
E-mail: rabbit_chinese@163.com
*
通信作者 ：陈赛贞，女，硕士，主任
318000, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To prepare edaravone transdermal gel and to study its permeation ability in vitro. METHODS The skin permeation ability was evaluated by Valian-Chien permeation cells with isolated rat skin. The concentration of edaravone in samples was determined by HPLC to study the effect of different drug content, laurocapram amount, type and content of the cyclodextrin. RESULTS The optimal form ulation was composed with 6% edaravone, 10% laurocapram, 10% β-cyclodextrin, and 2% sodium carboxymethyl cellulose. The accumulative permeation amount of the gel was (501.95±27.59)μg·cm2 in 12 h, and the permeation rate was (42.25±7.39)μg·cm2·h1. CONCLUSION Edaravone gel prepared in the study would be developed as a novel transdermal preparation. KEY WORDS: edaravone; gel; cyclodextrin; laurocapram; transdermal permeation