依达拉奉凝胶的制备及体外透皮性能研究
依达拉奉的实验研究及临床应用进展
后 ，依达拉奉 和尼莫 地平 有 上调 Ｖ Ｇ Ｅ Ｆ表 达 的作 用 ，对脑 组织新生血管形 成具 有促 进作 用 ，可 能挽救 缺血 半 暗带 的
脑组织 ，减少梗死 区 ，有 助于缺血脑组织恢复 。
应 。金岗生等联合 应用依 达拉 奉 与 巴曲酶治 疗脑梗 死 ，二 者优 势互补 ，依达拉奉清除 自由基增 加神经 细胞生存 能力 ， 为巴 曲 酶 溶 栓 抗 栓 争 取 时 间 ，疗 效 显 著 高 于 单 用 巴 曲
４ ５ ４．
２ ２ 依达拉奉治疗急性脑 出血 ．
脑 出血 后脑损伤 的病理生
［］王万华 ，王洪洲 ，张炎，等．依 达拉奉和尼莫地平联合应用对脑缺血大 ２ 鼠脑组织血管 内皮生 长 因子表 达 的影 响 ［ ］ Ｊ ．临 床神 经病 学杂 志 ，２１ 十分复杂 ，炎 症反 应在其 中扮 演重要 角色 ，细 胞 间
（ＥＦ Ｖ Ｇ ）的表达进行 了实验研 究 。结 果显示 再脑 缺血 损伤
心坏死 区及周 围缺血半 暗带 组成 ，脑 梗死 去血 流再通 后 氧 与葡萄糖供 应 及脑 代 谢恢 复 ，脑 组 织损 伤理 应 得 到恢 复 ， 但超过再灌注时 间窗就 会产 生再灌 注损 伤 ： 自由基过 度形
［ ］陈宇箴 ，朱春雷 ，郑义亮 ，等．胰岛素联合依达 拉奉治疗实验性 蛛网膜 １ 下腔出血后脑血管 痉挛 的影 响 ［ ］ 临床 神 经病 学 杂志 ，２ ０ ，２ ：４ ３ Ｊ． ０ ９ ２ ４
—
死 后出血应用依 达拉奉亦 能有 效地 改善患 者 的神 经功 能损
害和 日常生活能力 。
［］李金星 ，赵海梅 ，朱贤立 ，等．弥漫性脑损 伤细胞外信号调 节激酶 Ｉ２ ３ ／
止痛凝胶膏剂体外透皮行为研究
止痛凝胶膏剂体外透皮行为研究该试验旨在测定止痛凝胶膏剂中有效成分的含量，研究其体外透皮吸收特性。
以阿魏酸和欧前胡素为指标，用甲醇提取止痛凝胶膏剂中有效成分，以HPLC 同时测定2种成分的含量。
采用改良的Franz 扩散池法，以裸鼠腹皮为体外模型，选择合适的接收液，测定接收液和皮中阿魏酸和欧前胡素的含量。
止痛凝胶膏剂中阿魏酸和欧前胡素的质量分数分别为455.10，371.66 μg·g-1。
以20%乙醇-磷酸盐缓冲液（pH=8）做接收液，止痛凝胶膏剂中阿魏酸和欧前胡素透皮速率分别为1.29，0.15 μg·h-1·cm-2，24 h的累积透过量分别为30.03，3.31 μg·cm-2，累积透过率分别为41.45%，5.60%，在皮中的滞留量分别为0.69，2.60 μg·cm-2，滞留率分别为0.95%，4.40%。
止痛凝胶膏剂中，阿魏酸的体外透皮行为接近零级过程，皮肤角质层是其主要限速因素；欧前胡素的体外透皮行为符合Higuchi 方程，渗透过程受药物释放和皮肤的限制。
标签：止痛凝胶膏剂；阿魏酸；欧前胡素；透皮吸收1 材料Agilent 1260高效液相色谱仪，Agilent 化学工作站（美国安捷伦公司）；Mettle 酸度计（德国）；KQ5200DA型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；赛多利斯BS 110S型电子分析天平（北京赛多利斯公司）；TK-12B透皮扩散试验仪（上海锴科技贸易有限公司）；组织匀浆器（德国IKA公司）；涡旋混合器（大龙兴创实验仪器有限公司）。
阿魏酸（批号110773-201012）、欧前胡素对照品（批号110826-201214）购于中国食品药品检定研究院；甲醇（MREDA公司，色谱纯）；冰醋酸（美国TEDIA 公司，分析纯）；聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯（吐温-80，北京益利精细化学品有限公司，分析纯）；聚乙二醇-400（西陇化工股份有限公司）；无水乙醇（北京化学试剂厂，分析纯）；娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团）；磷酸二氢钠、磷酸氢二钠（国药集团化学试剂有限公司）；其余试剂均为分析纯。
论文范文：氨甲环酸柔性纳米脂质体凝胶的制作和体外释药分析
论文范文：氨甲环酸柔性纳米脂质体凝胶的制作和体外释药分析第一章绪论皮肤色素沉着是临床上皮肤科常见的病症之一，它是由于皮肤受到紫外线照射、炎症刺激等外源性因素和自身疾病引起的内源性因素使大量黑色素非正常聚集于皮肤的不同部位，在皮肤表面呈现出局部颜色变黑，如黑斑息肉综合征、特发性多发性斑状色素沉着、黄褐斑、雀斑、色斑及老年斑等[1]。
皮肤色素沉着类疾病尽管没有疼痛、瘙痒等痛苦，但由于黑色素沉着导致的皮肤肤色不均，进而影响到人们的日常生活。
随着社会的发展，抗色素沉着类疾病引起了人们的关注，从而出现了各式各样祛斑产品和治疗方法[5]。
氨甲环酸(TranexamicAcid，TA)作为一种蛋白酶抑制剂，抑制黑斑部位表皮细胞的机能，改善黑斑部位活性化因子群的活跃状态[6]，抑制黑色素的生产而被应用于治疗色素沉着等病症。
目前临床上使用TA 治疗色素沉着疾病多是口服或静脉注射给药，常引起胃肠道刺激等不良反应[7_8]。
经查阅文献的得知：TA作为经皮给药制剂的主要剂型是膏剂，然而因皮肤角质层这一主要的物理屏障，疗效不显著。
近年来，在新技术和新设备不断发展的情况下，关于经皮给药系统在促进药物透皮吸收的方法方面取得了很大的进步[9]。
微乳[iG]、固体脂质纳米粒[11]、脂质体[12]等新型药物载体可与角皮肤质层具有很高的融合性，从而将药物传递到皮肤内部来克服皮肤角质层屏障的影响。
柔性纳米脂质体(Flexible nano-liposomes，FNL)是在脂质体的类脂材料中加入胆酸钠、脱氧胆酸钠等表面活性剂，使其除具有普通脂质体经皮给药系统的优点如生物利用度高、皮肤亲和力好和安全无毒外，还具有高度的变形性、适宜的亲水性和渗透性[13]。
因此能够高效地穿透比自身小数倍的皮肤孔道。
此外，柔性纳米脂质体的结构类似于生物膜结构，与皮肤角质层具有很高的融合性，可以使药物尽可能多地在皮肤的表皮和真皮层内形成一个药物e库，而发挥其缓释效果，使药物能够在局部病变部位持久地起治疗作用。
一种依达拉奉的合成方法[发明专利]
![一种依达拉奉的合成方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/dfbb9d2ffbd6195f312b3169a45177232f60e4d0.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610888168.X(22)申请日 2016.10.11(71)申请人 华中师范大学地址 430079 湖北省武汉市洪山区珞瑜路152号华中师范大学(72)发明人 暴峰 严霜 张庆林 汪海 (74)专利代理机构 湖北武汉永嘉专利代理有限公司 42102代理人 唐万荣 徐晓琴(51)Int.Cl.C07D 231/26(2006.01)(54)发明名称一种依达拉奉的合成方法(57)摘要本发明属于化学合成领域，具体涉及一种依达拉奉的合成方法。
合成方法包括：(1)以苯胺为原料，经过重氮化、还原、酸析过程，得到盐酸苯肼；(2)将盐酸苯肼调节pH以后直接与乙酰乙酸乙酯进行缩环合反应，此过程不需要加入其它溶剂，即可得到产物依达拉奉。
本发明合成方法以成本更低的苯胺为起始原料，首先合成盐酸苯肼，然后直接用盐酸苯肼和乙酰乙酸乙酯在回流条件下进行缩环合反应合成依达拉奉，不用加入任何溶剂，减少了中间环节的大量排污，同时降低了原料成本。
本发明合成方法的原料简单，成本较低，且反应条件温和，反应几乎定量完成，所得的依达拉奉粗品的纯度较高，经过简单的重结晶即可符合药用标准，适合于工业化生产的需要。
权利要求书1页 说明书4页CN 106432083 A 2017.02.22C N 106432083A1.一种依达拉奉的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将盐酸溶液或稀硫酸溶液冰浴降温到0~5℃，保持搅拌的条件下向其中滴加苯胺溶液，滴加完以后，再向其中滴加亚硝酸钠溶液，保持温度在8~10℃，滴加时间为1h，全部滴加完毕以后保温搅拌反应一段时间，即得到重氮化产物；（2）将步骤（1）所得重氮化产物滴加到温度为80~85℃的亚硫酸氢钠或亚硫酸钠溶液中，滴加时间为0.5~1h；滴加完毕后，保温搅拌30min；然后加热回流反应一段时间，再向其中滴加盐酸溶液，酸析回流一段时间后，得到苯肼盐酸盐；（3）将步骤（2）所得反应液冷却到室温以后，用氨水调节pH到6，向其中滴加乙酰乙酸乙酯、并保持剧烈搅拌，控制滴加时间为1h，滴加完毕以后，升温回流，保持搅拌的条件下进行缩环合反应，反应结束后，停止加热，冷却抽滤，得到淡黄色依达拉奉粗品；（4）将步骤（3）所得依达拉奉粗品用无水乙醇进行重结晶、抽滤、干燥以后，得到的白色结晶粉末状固体即为依达拉奉。
依达拉奉类似物及其制备方法和应用[发明专利]
![依达拉奉类似物及其制备方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/01b0708d561252d381eb6e44.png)
专利名称：依达拉奉类似物及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：厉廷有,秦亚娟,郑礼平,倪罗璠,马腾飞,冯玲玲,樊鑫申请号：CN201911094216.8
申请日：20191111
公开号：CN110862349A
公开日：
20200306
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：依达拉奉类似物及其制备方法和应用，化合物符合下述结构通式：其中，R和R为甲基、甲氧基、乙基、异丙基、叔丁基或仲丁基。
本发明的化合物具有GABAA受体增强活性以及自由基清除活性，具有神经保护作用，本发明的化合物可作为卒中预防和治疗药物。
申请人：南京医科大学
地址：211166 江苏省南京市江宁区龙眠大道101号
国籍：CN
代理机构：南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：唐循文
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依达拉奉凝胶的制备及体外透皮性能研究
体外经皮渗透样品按照“1.3”项下色谱条件测定， 皮肤浸出液杂质与依达拉奉分离度良好，依达拉 奉的出峰时间约为 3.0 min。色谱图见图 1。 3.1.2 标准曲线的制备
1
精密称取依达拉奉对照
品 112.2 mg，置 100 mL 量瓶中，用甲醇溶解至刻 度，制成 1 120 µg·mL 的对照储备液，加入皮肤 浸出液配制成浓度分别为 0.55，1.10，2.19，4.38， 8.77 ， 17.53 ， 35.06 ， 70.13 ， 140.25 µg·mL ，按 “1.3”项下色谱条件分析，以峰面积(Y)与相对应 的浓度(X)做回归曲线，得回归方程为 Y=46 885X
3.1.3
回收率和精密度
制备高(70.13 µg·mL1)、
中 (8.77 µg·mL1) 、低 (1.10 µg·mL1)3 个浓度的 TMP 对照品溶液，按“1.3”项下色谱条件测定， 用浓度求算相对标准偏差，1 d 平行操作 5 次考察 日内精密度和回收率， 连续 5 d 考察日间精密度和 回收率， 结果日内 RSD≤1.78%(n=5)， 日间 RSD≤ 1.84%(n=5)，仪器精密度良好，结果见表 1。
·753·
3.2.1
含药量对凝胶剂渗透的影响
以 10%月桂
3.2.3
环糊精型号和含量对凝胶剂渗透的影响
氮䓬酮、10% β-环糊精、2%羧甲基纤维素钠、不 同浓度依达拉奉制备凝胶，考察不同浓度依达拉 奉含量 (5% ， 6%， 6.5% ， 7%， 8%)对凝胶经皮渗 透依达拉奉的影响，结果见图 2。凝胶的累积渗透 量在一定范围内随含药量的增加而增大。含药量 为 5%，6.5%，7%时的累积渗透量与含药量为 8% 时相比，有极显著性差异(P<0.01)。而含药量 6% 与 8%相比，累积渗透量没有显著性差异，本着高 效节能原则，采用 6%依达拉奉制备凝胶。
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配制浓度 / μg·mL1 70.13 8.77 1.10
精密度和回收率测定结果( x s ，n=5) Results of precision and recovery( x s , n=5)
日内精密度 测定浓度 / μg·mL1 70.21±2.80 8.60±0.18 1.19±0.07 RSD/ % 1.78 1.05 0.12 回收率/ % 100.08 98.13 103.14 日间精密度 测定浓度 / μg·mL1 69.96±3.10 8.58±0.22 1.29±0.02 RSD/ 回收率/ % % 1.84 1.19 0.24 99.76 97.92 107.09
14 496， R2=1(n=5)， 依达拉奉在 0.55~140.25 µg·mL1 内呈良好的线性关系。
动剃须刀剃毛，剥离背部皮肤，仔细剔除皮下脂 肪和黏连物，剪成适当的大小，20 ℃保存，使用 前自然解冻。 2.2.2 体外透皮试验 将解冻后的大鼠皮肤用生 理盐水浸润，滤纸吸干。绷于 Valian-Chien 双室渗 透池的 2 室之间，真皮层面向接受室，角质层面 涂上凝胶，外加一层保护膜，并用弹簧夹把双室 的双口固定，接受室中加入 4 mL 生理盐水。控制 渗透池夹层内水温在(32±0.5)℃， 池内放置星状搅 拌子 1 粒，电磁搅拌转速 500 r·min1。每隔 1 h 从 接受室吸取渗透液 1 mL，后将接受室内的液体吸 干，再补加生理盐水 4 mL，直至 12 h。将取得的 待测液以 10 000 r·min1 离心 5 min 后， HPLC 测定 依达拉奉含量。 2.3 数据处理 样品按照“1.3”项下色谱条件进行含量测定， 计算单位时间内药物渗透量，同时计算单位面积 内药物累积渗透量 Q(μg·cm2)， 以单位面积累积渗 透量(Q)为纵坐标，时间(t)为横坐标作图，得药物 累积渗透曲线，对所得曲线进行回归，求出斜率， 即为药物的渗透速率 J(μg·cm2·h1)。采用 Excel 软件进行双样本 t 检验。 3 3.1 3.1.1 结果 方法学研究 专属性试验 皮肤浸出液(空白)、对照品、
体外经皮渗透样品按照“1.3”项下色谱条件测定， 皮肤浸出液杂质与依达拉奉分离度良好，依达拉 奉的出峰时间约为 3.0 min。色谱图见图 1。 3.1.2 标准曲线的制备
1
精密称取依达拉奉对照
品 112.2 mg，置 100 mL 量瓶中，用甲醇溶解至刻 度，制成 1 120 µg·mL 的对照储备液，加入皮肤 浸出液配制成浓度分别为 0.55，1.10，2.19，4.38， 8.77 ， 17.53 ， 35.06 ， 70.13 ， 140.25 µg·mL ，按 “1.3”项下色谱条件分析，以峰面积(Y)与相对应 的浓度(X)做回归曲线，得回归方程为 Y=46 885X
Preparation and in Vitro Permeation of Edaravone Gel XU Hongyan, CHEN Saizhen*, XU Lijun, XU Shanshan(Department of Pharmacy, Taizhou Central Hospital, Taizhou
图1 高效液相色谱图
A 空白皮肤浸出液； B 对照品溶液； C 体外经皮渗透； 1 杂质； 2依达拉奉。
Fig. 1
HPLC chromatograms
Ablank skin solution; Bblank skin solution spiked with edaravone reference solution; Cskin permeation solution sample; 1impurity; 2edaravone.
3.L1)、
中 (8.77 µg·mL1) 、低 (1.10 µg·mL1)3 个浓度的 TMP 对照品溶液，按“1.3”项下色谱条件测定， 用浓度求算相对标准偏差，1 d 平行操作 5 次考察 日内精密度和回收率， 连续 5 d 考察日间精密度和 回收率， 结果日内 RSD≤1.78%(n=5)， 日间 RSD≤ 1.84%(n=5)，仪器精密度良好，结果见表 1。
318000, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To prepare edaravone transdermal gel and to study its permeation ability in vitro. METHODS The skin permeation ability was evaluated by Valian-Chien permeation cells with isolated rat skin. The concentration of edaravone in samples was determined by HPLC to study the effect of different drug content, laurocapram amount, type and content of the cyclodextrin. RESULTS The optimal form ulation was composed with 6% edaravone, 10% laurocapram, 10% β-cyclodextrin, and 2% sodium carboxymethyl cellulose. The accumulative permeation amount of the gel was (501.95±27.59)μg·cm2 in 12 h, and the permeation rate was (42.25±7.39)μg·cm2·h1. CONCLUSION Edaravone gel prepared in the study would be developed as a novel transdermal preparation. KEY WORDS: edaravone; gel; cyclodextrin; laurocapram; transdermal permeation
。据报道，脑缺血后氧自由基增多 ，故依达拉奉在临床上得到广泛的
是导致急性脑梗死患者脑损伤加重、病情进展的
[4-5]
。而目前市售依达拉奉注射液选用丙二醇
为溶剂，具有较强的溶血作用，为减少或避免注 射给药，有必要将依达拉奉制成经皮给药制剂。 1 1.1 材料 仪器与试剂 Waters 2695 高效液相色谱仪(2487 紫外检测 器，Empower 色谱工作站，美国 Waters 公司)； Mettler AE200 电子分析天平[梅特勒-托利多仪器 (上海)有限公司]；TG1650WS 高速台式离心机(湖 南赛特湘仪离心机仪器有限公司)；Valia-Chien 双 室渗透池(自制)；超级恒温循环仪(德国 HAAKE)。
中国现代应用药学 2016 年 6 月第 33 卷第 6 期
1
3.2
处方筛选 经大量预实验后，当存在促进剂月桂氮䓬酮，
以及包合剂环糊精，羧甲基纤维素钠含量为 2% 时，制成的凝胶外观良好，而药物含量、促进剂 以及包合剂含量对药物的经皮渗透有较大影响， 所以有必要进行深入研究。
Chin J Mod Appl Pharm, 2016 June, Vol.33 No.6
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3.2.1
含药量对凝胶剂渗透的影响
以 10%月桂
3.2.3
环糊精型号和含量对凝胶剂渗透的影响
氮䓬酮、10% β-环糊精、2%羧甲基纤维素钠、不 同浓度依达拉奉制备凝胶，考察不同浓度依达拉 奉含量 (5% ， 6%， 6.5% ， 7%， 8%)对凝胶经皮渗 透依达拉奉的影响，结果见图 2。凝胶的累积渗透 量在一定范围内随含药量的增加而增大。含药量 为 5%，6.5%，7%时的累积渗透量与含药量为 8% 时相比，有极显著性差异(P<0.01)。而含药量 6% 与 8%相比，累积渗透量没有显著性差异，本着高 效节能原则，采用 6%依达拉奉制备凝胶。
依达拉奉是一种新型的自由基清除剂和抗氧 化剂，能清除脑缺血周边和缺血再灌注部分产生 的大量羟自由基，从而抑制神经功能障碍 ，改善 神经功能 主要原因 应用
[6-8] [2-3] [1]
依达拉奉 (批号：BCBK6062V)、 α-环糊精 (批 号：F1417042)；β-环糊精(批号：B1427002)；γ环糊精(批号：I1324047)均购于阿拉丁试剂有限公 司；月桂氮䓬酮(国药集团化学试剂有限公司，批 号：20131115)；羧甲基纤维素钠(安徽山河药用辅 料股份限公司，批号：140314)；甲醇(色谱纯，美 国天地试剂有限公司，批号：14035052)；乙腈(色 谱纯，美国天地试剂有限公司，批号：14045024)； 其他试剂均为分析纯。 1.2 动物 健康 SD 大鼠 20 只，♂，体质量 250~300 g， 购自浙江省医学科学院实验动物中心，动物合格 证号：SCXK(浙)20140001。 1.3 色谱条件 色谱分析柱为 Waters symmetry C18(250 mm× 4.6 mm，5µm)；流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸溶液 -蒸馏水(40∶20∶40)；流速：1.0 mL·min1；检测
Tel: (0576)88526226
E-mail: tzcsz@
Chin J Mod Appl Pharm, 2016 June, Vol.33 No.6
中国现代应用药学 2016 年 6 月第 33 卷第 6 期
波长：229 nm；柱温：35 ℃；进样量：20 µL。 2 2.1 方法 凝胶的制备 依达拉奉加 β-环糊精充分研磨，加月桂氮䓬 酮适量，加羧甲基纤维素钠搅匀，加蒸馏水充分 溶胀搅匀使之成凝胶。 2.2 2.2.1 依达拉奉的体外经皮渗透试验 离体大鼠皮肤的制备 SD 大鼠处死后，电
以 6%含药量、10%月桂氮䓬酮、2%羧甲基纤维素 钠、不同型号的环糊精制备凝胶，考察不同型号 的环糊精对凝胶经皮渗透依达拉奉的影响，结果 见图 4。 β-环糊精制备的凝胶较 α-环糊精和 γ-环糊 精的累积渗透量大，并有显著性差异(P<0.05)。故 采用 β-环糊精制备凝胶。