鸡免疫球蛋白M(IgM)中文说明书 30
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—————————————————————————鸡免疫球蛋白M(IgM)定量检测试剂盒(ELISA)
使用说明书
仅供科研使用,不得用于医学诊断。
使用前仔细阅读本说明书。
用途:用于定量检测鸡血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白M(IgM)的含量。
工作原理
本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法(ELISA),测定样品中鸡免疫球蛋白M(IgM)的水平。向预先包被鸡免疫球蛋白M(IgM)抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的免疫球蛋白M(IgM)抗体,经过温育和洗涤,去除未结合的组分,然后再加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中鸡免疫球蛋白M(IgM)的浓度呈正相关。
试剂盒组成
30、15、7.25、3.62、1.81
需要而未提供的试剂和器材
1. 37℃恒温箱。
2.标准规格酶标仪。
3.精密移液器及一次性吸头
4.蒸馏水,
5.一次性试管
6.吸水纸
注意事项
1.从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标
包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
3.建议所有标准品、样本都做双份检测。
4.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5.为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。7.底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
操作程序
1.分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl;在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。轻轻晃动混匀,37℃温育60分钟。
2.弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
3.每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
4.取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
5.测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
6.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
操作程序总结:
检测范围:0.47-30ug/ml。规格:96T/盒
保存:2-8℃
有效期:6个月(2-8℃)。